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洋葱假单胞菌G63脂肪酶基因及其伴侣基因的克隆和同源高效表达 被引量:6
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作者 杨江科 郭道义 闫云君 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期175-179,共5页
从油污土壤中筛选到一株脂肪酶活性较高的洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)G63。运用PCR的方法从该菌株中克隆了脂肪酶基因(lip A)及其伴侣基因(lipB)。该脂肪酶基因开放式阅读框(ORF)为1092bp,编码364个氨基酸残基。经KpnI... 从油污土壤中筛选到一株脂肪酶活性较高的洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)G63。运用PCR的方法从该菌株中克隆了脂肪酶基因(lip A)及其伴侣基因(lipB)。该脂肪酶基因开放式阅读框(ORF)为1092bp,编码364个氨基酸残基。经KpnI/HindiⅢ酶切,将其克隆到广泛宿主质粒pBBR1Tp载体上,构建成质粒pBBR1-lipAB。通过三亲杂交,在辅助质粒pRK2013的帮助下,转入原宿主菌P.cepaciaG63中,构建成洳A基因同源高效表达的基因工程菌。该菌株在连续转接5次,培养45h后质粒保持率为82.6%,适用于规模化发酵生产。摇床发酵表明,工程菌在60h时酶活达到150.63U/mL,较原始菌株提高3.6倍。 展开更多
关键词 脂肪酶基因 克隆 高效表达 p.cepacia G63
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