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水稻OsRhoGDI2蛋白生物信息学分析及亚细胞定位研究 被引量：4
1
作者 彭威风 梁卫红 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期82-86,92,共6页
水稻OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的小G蛋白Rho家族成员OsRacD的互作蛋白的编码基因,为研究OsRhoGDI2和OsRacD的相互作用特点和调控机制,对OsRhoGDI2进行了生物信息学分析和亚细胞定位检测。通过生物信息学方法比较了二者编码蛋白... 水稻OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的小G蛋白Rho家族成员OsRacD的互作蛋白的编码基因,为研究OsRhoGDI2和OsRacD的相互作用特点和调控机制,对OsRhoGDI2进行了生物信息学分析和亚细胞定位检测。通过生物信息学方法比较了二者编码蛋白的理化性质、修饰位点和亚细胞定位特点,并进一步构建了受控于CaMV35S启动子的与绿色荧光蛋白融合表达的OsRhoGDI2基因的双元植物表达载体,采用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,通过荧光显微镜观察了融合蛋白在活细胞内分布特点。OsRhoGDI2和OsRacD具有一些相似的理化特性和翻译后修饰位点,在洋葱表皮细胞中,OsRhoGDI2主要分布在细胞质、细胞膜和细胞核。OsRhoGDI2与OsRacD在蛋白理化特性和胞内分布上存在一定的相关性,OsRhoGDI2蛋白可能在调控OsRacD的胞内分布和活性中发挥重要作用。 展开更多
关键词 osrhogdi2 蛋白互作 植物表达载体 亚细胞定位
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水稻OsRhoGDI2基因RNA干扰载体的构建
2
作者 彭威风 梁卫红 李莉 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期150-153,共4页
水稻OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的小G蛋白Rho家族成员OsRacD互作蛋白的编码基因,为了研究OsRhoGDI2与OsRacD的相互作用及其在水稻发育中的功能联系,本研究基于序列比对的提示,选择了OsRhoGDI2基因长度为285 bp的特异区段,分别以... 水稻OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的小G蛋白Rho家族成员OsRacD互作蛋白的编码基因,为了研究OsRhoGDI2与OsRacD的相互作用及其在水稻发育中的功能联系,本研究基于序列比对的提示,选择了OsRhoGDI2基因长度为285 bp的特异区段,分别以正向和反向插入中间载体pKANNIBAL中,并亚克隆到受控于CaMV 35S启动子的植物表达载体pART27上,获得了OsRhoGDI2基因的RNA干扰载体,为利用水稻转基因技术鉴定该基因在水稻发育中的功能,以及与OsRacD基因的功能联系奠定基础. 展开更多
关键词 水稻 osrhogdi2基因 RNA干扰载体
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CRISPR/Cas9技术编辑OsRhoGDI2基因导致水稻半矮化 被引量：5
3
作者 王凯婕 安文静 +6 位作者 刘亚菲 刘迪 冯连杰 王俊杰 黄俊骏 刘肖飞 梁卫红 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期707-715,共9页
OsRhoGDI2是通过酵母双杂交从水稻幼穗中分离的一个与Rho蛋白家族成员OsRacD相互作用蛋白的编码基因,但功能尚不明确。本研究利用CRISPR/Cas9技术创制水稻OsRhoGDI2基因敲除突变体。检测结果表明,转基因水稻T0代获得2种纯合突变体,T1代... OsRhoGDI2是通过酵母双杂交从水稻幼穗中分离的一个与Rho蛋白家族成员OsRacD相互作用蛋白的编码基因,但功能尚不明确。本研究利用CRISPR/Cas9技术创制水稻OsRhoGDI2基因敲除突变体。检测结果表明,转基因水稻T0代获得2种纯合突变体,T1代获得8种纯合突变体。序列分析显示,在敲除水稻中,该基因的编辑靶点附近发生了碱基的替换或缺失,预期生成丧失RhoGDI保守结构域的截短蛋白。表型比对分析发现,敲除水稻与对照相比,株高显著降低,统计学分析结果显示,敲除水稻株高降低源于第Ⅱ和第Ⅲ茎节的缩短,提示OsRhoGDI2基因可能与水稻株高控制相关。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9技术 水稻 osrhogdi2 株高
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OsRhoGDI2过表达转基因水稻的筛选鉴定及外源基因拷贝数的初步分析 被引量：1
4
作者 杜京尧 尚飞 +1 位作者 王高华 梁卫红 《江苏农业科学》 2019年第14期50-54,共5页
水稻RhoGDP解离抑制基因OsRhoGDI2是从幼穗中分离出的功能未知基因.为鉴定该基因的功能,笔者所在实验室前期构建了植物过表达载体pCAMBIA1302-OsRhoGDI2-GFP,并对水稻进行了遗传转化.对OsRhoGDI2过表达转基因水稻T2代进行筛选和鉴定,采... 水稻RhoGDP解离抑制基因OsRhoGDI2是从幼穗中分离出的功能未知基因.为鉴定该基因的功能,笔者所在实验室前期构建了植物过表达载体pCAMBIA1302-OsRhoGDI2-GFP,并对水稻进行了遗传转化.对OsRhoGDI2过表达转基因水稻T2代进行筛选和鉴定,采用PCR技术鉴定转基因植株,采用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测OsRhoGDI2在转基因水稻中的表达水平,结果显示,其中6个株系为过表达转基因植株,OsRhoGDI2表达水平上调1.69~13.35倍.为检测外源基因在转基因水稻中的拷贝数,分别以蔗糖磷酸合成酶基因SPS和潮霉素抗性基因HYG为内参基因和标记基因,采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术结合内参基因和标记基因的标准曲线进行分析,结果显示在所检测的6个转基因株系中,外源基因的拷贝数均为1,提示已经获得稳定遗传的OsRhoGDI2过表达转基因水稻,为后续OsRhoGDI2基因的功能研究奠定基础. 展开更多
关键词 osrhogdi2 转基因水稻 表达分析 拷贝数 外源基因
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水稻OsRacD与OsRhoGDI2基因共表达载体的构建
5
作者 石宏浩 靳萍 +1 位作者 王利娜 梁卫红 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期113-115,共3页
水稻OsRacD是从水稻幼穗中分离的Rho基因,OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的与OsRacD相互作用蛋白的编码基因,已有的研究表明OsRacD与OsRhoGDI2之间可能存在相互作用,并参与水稻育性调控过程.为了鉴定二者的相互作用,本研究构建了OsRac... 水稻OsRacD是从水稻幼穗中分离的Rho基因,OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的与OsRacD相互作用蛋白的编码基因,已有的研究表明OsRacD与OsRhoGDI2之间可能存在相互作用,并参与水稻育性调控过程.为了鉴定二者的相互作用,本研究构建了OsRacD与OsRhoGDI2基因共表达载体,为采用免疫共沉淀验证二者在体内的相互作用,解析OsRacD与OsRhoGDI2基因参与水稻育性控制的分子机制奠定了基础. 展开更多
关键词 水稻 OsRacD基因 osrhogdi2基因 共表达载体
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