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水稻铵转运蛋白基因OsAMT1;4和OsAMT5的特征分析、功能和表达 被引量:14
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作者 邓若磊 谷俊涛 +3 位作者 路文静 徐海荣 曹云飞 肖凯 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2395-2402,共8页
【目的】阐明水稻铵转运蛋白基因OsAMT1;4和OsAMT5的编码蛋白特征、功能和表达。【方法】采用生物信息学技术,揭示目的基因的编码蛋白特征;通过铵离子吸收缺陷的酵母突变体功能互补技术,鉴定上述基因编码蛋白的功能;采用RT-PCR技术,研... 【目的】阐明水稻铵转运蛋白基因OsAMT1;4和OsAMT5的编码蛋白特征、功能和表达。【方法】采用生物信息学技术,揭示目的基因的编码蛋白特征;通过铵离子吸收缺陷的酵母突变体功能互补技术,鉴定上述基因编码蛋白的功能;采用RT-PCR技术,研究基因的表达特征。【结果】OsAMT1;4和OsAMT5的编码阅读框为1497bp和1377bp,分别编码498和458个氨基酸残基。OsAMT1;4和OsAMT5均具有11个跨膜域,分别归属与AMT1和AMT2亚家族。OsAMT1;4和OsAMT5均具有使NH4+吸收缺陷的酵母突变体重新恢复吸收NH4+的能力。OsAMT5在叶中特异表达,随NH4+浓度增加表达增强;在不同NH4+浓度和时间处理中,根、叶均未检测到OsAMT1;4的转录本。【结论】OsAMT1;4和OsAMT5在水稻中具有吸收或转运NH4+的功能。OsAMT5为叶特异表达,OsAMT1;4的表达受到NH4+因子外其他因素的调节。 展开更多
关键词 铵转运蛋白 osamt1 4 osamt5 异源互补 基因功能 基因表达
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水稻NH_4^+转运蛋白基因OsAMT1.1~1.3,OsAMT3.1和OsAMT4.1表达部位及表达特性初析 被引量:8
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作者 赵首萍 施卫明 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期460-464,共5页
以水稻为材料,对水稻NH4+离子转运蛋白基因OsAMT1.1、OsAMT1.2、OsAMT1.3、OsAMT3.1和OsAMT4.1的表达部位进行了初步的定性研究,并首次将荧光定量PCR技术应用于植物营养研究中,检测了水稻根中OsAMT1.1、OsAMT1.2、OsAMT1.3和OsAMT4.1在... 以水稻为材料,对水稻NH4+离子转运蛋白基因OsAMT1.1、OsAMT1.2、OsAMT1.3、OsAMT3.1和OsAMT4.1的表达部位进行了初步的定性研究,并首次将荧光定量PCR技术应用于植物营养研究中,检测了水稻根中OsAMT1.1、OsAMT1.2、OsAMT1.3和OsAMT4.1在N饥饿48h以后,又转移到1mmol/LNH4+或1mmol/LNO3-中2h后的表达量变化。结果表明,在当时的实验条件下,OsAMT3.1主要在地上部表达,因此推测可能对于根系吸收NH4+没有多大作用;OsAMT1.1、OsAMT1.2、OsAMT1.3和OsAMT4.1在植株根部和地上部都有表达;经过48h的N饥饿处理以后,在检测的4个基因当中,根中表达量最高的是OsAMT1.1,显著高于OsAMT1.2、OsAMT1.3和OsAMT4.1,由此认为,对根中NH4+吸收的贡献也是OsAMT1.1最大;OsAMT1.2、OsAMT1.3和OsAMT4.1表达量在N饥饿48h以后,不论是NH4+或NO3-的加入都显著抑制这3个基因的表达。荧光定量PCR方法的应用可以精确检测到基因表达量的微小变化,尽管没有显著的变化,但从表达量上来讲,OsAMT1.1表达量在加N后有下降的迹象,而且OsAMT1.1、OsAMT1.2和OsAMT4.1受NH4+的抑制效果稍强于NO3-;而OsAMT1.3受NO3-的抑制作用稍强一点,这些都是半定量PCR和Northern杂交所检测不到的。 展开更多
关键词 水稻 osamt 荧光定量PCR
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利用重叠PCR技术对OsAMT1.2进行定点突变 被引量:2
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作者 李宝珍 李素梅 +1 位作者 施卫明 苏彦华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期69-72,共4页
铵是植物吸收利用的主要氮源之一,而铵转运蛋白对铵的吸收、转运和代谢方面有重要的作用。为了深入研究水稻铵转运蛋白的结构功能特性,利用重叠PCR技术对OsAMT1.2蛋白质序列中保守的253 aa和257 aa的苯丙氨酸(F)和丝氨酸(S)分别突变为... 铵是植物吸收利用的主要氮源之一,而铵转运蛋白对铵的吸收、转运和代谢方面有重要的作用。为了深入研究水稻铵转运蛋白的结构功能特性,利用重叠PCR技术对OsAMT1.2蛋白质序列中保守的253 aa和257 aa的苯丙氨酸(F)和丝氨酸(S)分别突变为丙氨酸,成功获得了相应的2个点突变基因。因此,重叠PCR技术是一种简单有效的进行体外基因重组和突变的方法,对于研究高等植物功能基因的结构功能特性具有重要的意义。 展开更多
关键词 水稻 铵转运蛋白 osamt1.2 点突变 重叠PCR
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水稻吸铵基因OsAMT1.2和OsAMT3.3在不同生育期中的表达量差异及其在酵母细胞中吸铵功能初析 被引量:4
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作者 曹玉 李素梅 +1 位作者 施卫明 苏彦华 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期612-619,共8页
本文利用定量PCR技术分析了OsAMT1.2和OsAMT3.3在水稻根中的表达水平,并应用铵吸收功能缺陷型酵母突变体分析OsAMT1.2和OsAMT3.3对NH4+的转运功能及影响基因功能异源表达的可能因素。结果表明,OsAMT1.2和OsAMT3.3在分蘖期的表达水平较... 本文利用定量PCR技术分析了OsAMT1.2和OsAMT3.3在水稻根中的表达水平,并应用铵吸收功能缺陷型酵母突变体分析OsAMT1.2和OsAMT3.3对NH4+的转运功能及影响基因功能异源表达的可能因素。结果表明,OsAMT1.2和OsAMT3.3在分蘖期的表达水平较苗期高;苗期OsAMT1.2与OsAMT3.3的转录水平差异不显著,但分蘖期OsAMT1.2的表达水平快速升高,较苗期提高了5倍,而OsAMT3.3的表达量只提高了一倍,导致两者的表达水平存在显著差异。缺N处理2天两基因均有被诱导增强表达的趋势,其中苗期的增加幅度明显高于分蘖期。当外源供给1mmol/LNH4+,OsAMT1.2在铵吸收功能缺陷型酵母突变体上仅表现部分功能,而OsAMT3.3则不能实现吸铵功能互补。以AtAMT1.1为对照,分析OsAMT1.2在酵母中的表达水平,结果表明异源系统中OsAMT1.2的相对表达量仅有AtAMT1.1的50%。本文的结果说明,外源基因在酵母异源系统中的异源表达,除了与基因产物本身的功能有关,还取决于宿主酵母细胞对其表达水平的调控,因而表现出受内源机制调控的特征。 展开更多
关键词 osamt REAL-TIME RT-PCR 酵母异源表达系统
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水稻OsAMT1;1过表达提升氮肥减施情境下的氮素利用效率 被引量:3
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作者 陈天祥 杨顺瑛 苏彦华 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1176-1186,共11页
水稻铵转运蛋白AMT1;1是根系获取土壤氮素(铵态氮)的重要组分,同时参与氮素向地上部的转运。针对稻田施氮过量导致的环境风险和氮素利用效率趋缓的现状,亟需探究既能减少氮肥投入又能维持现有生产水平的调控策略。本研究利用OsAMT1;1基... 水稻铵转运蛋白AMT1;1是根系获取土壤氮素(铵态氮)的重要组分,同时参与氮素向地上部的转运。针对稻田施氮过量导致的环境风险和氮素利用效率趋缓的现状,亟需探究既能减少氮肥投入又能维持现有生产水平的调控策略。本研究利用OsAMT1;1基因过表达水稻材料,设置氮缺乏(LN,不施氮)、减氮(MN,N 200kg/hm^(2))和过量施氮(HN,N350kg/hm^(2))3个氮水平的田间试验,用以评估OsAMT1;1基因过表达株系在关键生育期的氮素生产特性。结果表明:相比野生型,OsAMT1;1基因过表达在LN条件下能够明显改善水稻植株和剑叶的氮素营养状态,有利于植株生物量的积累和产量形成;在MN条件下,能够促进植株在齐穗期至完熟期的生长速率和生物量积累,其灌浆期的单株和剑叶含氮量分别增加19.84%和24.30%、光合速率(Pn)和气孔导度(Gs)分别增加40.71%和19.39%,千粒重和产量分别增加10.26%和17.86%,同时氮肥吸收效率(REN)显著提升,氮素生理效率(PEN)和氮肥农学效率(AEN)稍有提升但并不显著;在HN条件下,其灌浆期的植株含氮量增加24.38%、植株生物量和Pn趋于饱和,REN显著提高,PEN和AEN显著降低。可见,与过量施氮(当前施氮习惯)相比,OsAMT1;1基因过表达株系在减少氮肥投入时更有利于协同植株高氮的内部环境实现相当的产量水平,提高水稻氮素利用效率。 展开更多
关键词 氮素利用效率 调控策略 osamt1 1过表达 过量施氮 产量形成
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水稻铵转运蛋白基因OsAMT1;2的启动子分析 被引量:3
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作者 李素梅 施卫明 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期455-461,共7页
AMT是介导植物铵态氮高亲和吸收的跨膜蛋白,已报道编码AMT蛋白的大部分基因的表达依赖外界氮水平和环境的调控,但调控的机制目前尚不清楚。水稻的Os AMT1;2基因在氮缺乏条件下强烈诱导表达,因此,本研究从水稻基因组DNA中PCR克隆Os AMT1;... AMT是介导植物铵态氮高亲和吸收的跨膜蛋白,已报道编码AMT蛋白的大部分基因的表达依赖外界氮水平和环境的调控,但调控的机制目前尚不清楚。水稻的Os AMT1;2基因在氮缺乏条件下强烈诱导表达,因此,本研究从水稻基因组DNA中PCR克隆Os AMT1;2基因上游1 940 bp的启动子序列,采用软件和试验分析Os AMT1;2启动子存在的顺式调控元件与外界氮调控的相关性。软件预测结果表明,启动子区域内除含有TATA-box和CAAT-box外,同时含有多种非生物胁迫、生物胁迫、激素响应和光响应相关的顺式作用元件,如Box-w1、MBS、Me JA、TATC和ERE应答元件。将Os AMT1;2启动子的5′端顺序删除获得5个不同缺失片段分别与GUS报告基因融合构成表达载体,通过农杆菌介导转入水稻成熟胚诱导的愈伤组织中获得转基因水稻,T1代植株水平上的GUS活性分析表明,最短启动子片段(–211 bp)能够启动GUS表达,但是GUS活性较低,对缺氮效应也不显著;中等长度启动子片段(–763 bp)的GUS活性提高,受缺氮诱导显著,且缺氮诱导不再随启动子长度增加而显著增强,说明应答氮响应的顺式作用元件位于–211 bp和–763 bp之间,非生物胁迫和激素相关的顺式作用元件多在这个区域内,是否与氮的调控存在相关性有待后续进一步证明。 展开更多
关键词 铵转运蛋白AMT osamt1 2启动子 顺式作用元件 GUS组织化学染色
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RNAi沉默水稻铵转运体OsAMT1表达的生长效应 被引量:1
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作者 李素梅 施卫明 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期1201-1206,共6页
OsAMT1是水稻中负责铵态氮高亲和吸收的基因家族,包括OsAMT1;1~OsAMT1;3 3个基因,已有的研究对其基因表达特征以及调控进行了大量的分析。OsAMT1;1表达水平最高,OsAMT1;2受氮水平诱导最为显著。因此,本研究选取OsAMT1序列上高度同源的区... OsAMT1是水稻中负责铵态氮高亲和吸收的基因家族,包括OsAMT1;1~OsAMT1;3 3个基因,已有的研究对其基因表达特征以及调控进行了大量的分析。OsAMT1;1表达水平最高,OsAMT1;2受氮水平诱导最为显著。因此,本研究选取OsAMT1序列上高度同源的区域,利用反向遗传学的RNAi技术构建再生OsAMT1家族3个基因共干扰沉默的转基因植株,分析OsAMT1基因表达水平降低引起的植株生长和氮累积量的变化。结果表明,依据OsAMT1同源序列构建的转基因水稻幼苗在低氮条件下基因的表达水平下降了28%~60%,幼苗生长受到明显的抑制,氮累积量也受到显著抑制,说明OsAMT1在水稻的高亲和吸收铵态氮中占有重要地位。 展开更多
关键词 osamt1 RNAI 表达水平 生物量 氮累积量
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OsAMT1.1 Expression by Nitrate-Inducible Promoter of OsNAR2.1 Increases Nitrogen Use Efficiency and Rice Yield
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作者 JIANG Hongzhen WANG Yamei +7 位作者 LAI Liuru LIU Xintong MIAO Changjian LIU Ruifang LI Xiaoyun TAN Jinfang GAO Zhenyu CHEN Jingguang 《Rice science》 SCIE CSCD 2023年第3期222-234,I0038,共14页
Nitrate(NO_(3)^(-))and ammonium(NH_(4)^(+))are two main inorganic nitrogen(N)sources during crop growth.Here,we enhanced the expression of OsAMT1.1,which encodes a NH_(4)^(+)transporter,using the NO_(3)^(-)-inducible ... Nitrate(NO_(3)^(-))and ammonium(NH_(4)^(+))are two main inorganic nitrogen(N)sources during crop growth.Here,we enhanced the expression of OsAMT1.1,which encodes a NH_(4)^(+)transporter,using the NO_(3)^(-)-inducible promoter of OsNAR2.1 and an ubiquitin promoter in transgenic rice plants.Under field condition of 120 kg/hm2 N,agronomic N use efficiency,N recovery efficiency and N transport efficiency,and grain yield of the pOsNAR2.1:OsAMT1.1 transgenic lines were increased compared with those of the wild type(WT)and the pUbi:OsAMT1.1 transgenic plants.Under 2.0 mmol/L NO_(3)^(-)+0.5 mmol/L NH_(4)^(+)and 0.5 mmol/L NO_(3)^(-)+2.0 mmol/L NH_(4)^(+)conditions of hydroponic culture,compared with the WT,both biomass and total N content were increased in the pOsNAR2.1:OsAMT1.1 transgenic lines.However,biomass was significantly reduced in pUbi:OsAMT1.1 transgenic plants under 0.5 mmol/L NO_(3)^(-)+2.0 mmol/L NH_(4)^(+)condition.The lines expressing pOsNAR2.1:OsAMT1.1 exhibited increased OsAMT1.1 expression and 15NH_(4)^(+)influx in roots under both 2.0 mmol/L NO_(3)^(-)+0.5 mmol/L NH_(4)^(+)and 0.5 mmol/L NO_(3)^(-)+2.0 mmol/L NH_(4)^(+)conditions.Our study showed that expression of OsAMT1.1 can be promoted when driven by the OsNAR2.1 promoter,especially under high-level nitrate condition,leading to enhancement of NH_(4)^(+)uptake,N use efficiency and grain yield. 展开更多
关键词 osamt1.1 OsNAR2.1 promoter nitrogen use efficiency YIELD RICE
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