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OsBP-5与OsEBP-89两蛋白之间相互作用区域的确定 被引量:1
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作者 朱英 洪孟民 王宗阳 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2003年第5期425-430,共6页
OsBP 5 (MYC类转录因子 )与OsEBP 89(AP2 /EREBP类转录因子 )两个蛋白之间可以相互作用 ,并能协同调控水稻waxy基因的表达。将OsBP 5与OsEBP 89cDNA的不同限制性片段分别克隆到酵母双杂交系统的载体上 ,利用酵母双杂交的方法确定了OsEBP... OsBP 5 (MYC类转录因子 )与OsEBP 89(AP2 /EREBP类转录因子 )两个蛋白之间可以相互作用 ,并能协同调控水稻waxy基因的表达。将OsBP 5与OsEBP 89cDNA的不同限制性片段分别克隆到酵母双杂交系统的载体上 ,利用酵母双杂交的方法确定了OsEBP 89中与OsBP 5相互作用的区域位于AP2 /EREBP保守域的RAYD元件内 ;OsBP 5中与OsEBP 89相互作用的区域则有两个区段 ,它们分别位于Pro68与Val171之间和Leu2 84与Gly3 3 5之间 ,而不是位于HLH保守域内。酵母系统中的实验还表明 ,OsEBP 89的 3′端部分氨基酸在一定程度上防碍了它与OsBP 展开更多
关键词 osbp-5 OsEBP-89 酵母双杂交 蛋白-蛋白相互作用
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重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6(E)对耐顺铂卵巢癌细胞增殖与侵袭转移的影响 被引量:1
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作者 尹书琴 康佳丽 +2 位作者 袁金 杨英 帅蓉 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2016年第8期673-679,共7页
目的观察重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6(E)对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞株SKOV3/DDP增殖及侵袭转移的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SKOV3/DDP细胞经融合蛋白处理后的增殖抑制率及采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后融合蛋白对... 目的观察重组性融合蛋白TAT-OSBP-MKK6(E)对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞株SKOV3/DDP增殖及侵袭转移的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SKOV3/DDP细胞经融合蛋白处理后的增殖抑制率及采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后融合蛋白对DDP敏感性的影响,单丹磺酰尸胺染色法检测融合蛋白诱导的自噬情况,QPCR和Western blotting检测SKOV3/DDP细胞Beclin 1的表达情况,Transwell体外迁移和重组基底侵袭实验研究融合蛋白对SKOV3/DDP细胞的侵袭和迁移能力。结果 DDP对SKOV3/DDP细胞的半数抑制浓度(IC_(50))为(37.62±2.63)μg/ml,10、20、40μg/ml融合蛋白作用后,DDP的IC_(50)分别降低至(17.07±0.88)、(11.08±0.57)和(1.96±0.31)μg/ml(P<0.001);以3-MA抑制细胞自噬,可阻断融合蛋白诱导SKOV3/DDP细胞对DDP的敏感性;SKOV3/DDP自噬情况的比较:融合蛋白组、融合蛋白+3-MA组的荧光强度分别为824±107、459±128,均高于对照组的306±143,差异有统计学意义(P<0.05)。Beclin 1 mRNA和蛋白的表达水平随融合蛋白的浓度增加(10、20、40μg/ml),其表达水平升高,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、DDP组、融合蛋白组和DDP+融合蛋白组中SKOV3/DDP细胞的Beclin 1蛋白表达亦不同,差异有统计学意义(P<0.05),其中DDP+融合蛋白组蛋白表达量最高,为0.876±0.023,其次为融合蛋白组的0.564±0.021。融合蛋白能明显抑制SKOV3/DDP细胞的侵袭和迁移能力,DDP+融合蛋白组和融合蛋白组分别与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),DDP组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论融合蛋白可抑制SKOV3/DDP细胞的增殖、侵袭和转移,可能与诱导自噬及上调Beclin 1的表达有关。 展开更多
关键词 卵巢癌 重组性融合蛋白TAT-osbp-MKK6(E) 细胞自噬 侵袭 迁移 细胞耐药
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水稻转录因子OsBP-73靶基因的初步筛选
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作者 刘淑敏 王宗阳 蔡秀玲 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期456-462,共7页
OsBP-73是用酵母单杂交系统,以水稻蜡质基因(Wx)的顺式作用元件为诱饵,从水稻cDNA表达文库中筛选获得的转录因子。本文以OsBP-73基因为例介绍了用"下拉"(pull-down)方法筛选转录因子靶基因的一般步骤。将含有该基因DNA结合功... OsBP-73是用酵母单杂交系统,以水稻蜡质基因(Wx)的顺式作用元件为诱饵,从水稻cDNA表达文库中筛选获得的转录因子。本文以OsBP-73基因为例介绍了用"下拉"(pull-down)方法筛选转录因子靶基因的一般步骤。将含有该基因DNA结合功能域的cDNA片段构建到原核表达载体上,并在大肠杆菌中诱导表达获得其蛋白p73。用纯化后的p73蛋白通过"下拉"实验对OsBP-73靶基因进行初步筛选,获得了22个阳性克隆,为进一步研究转录因子OsBP-73参与的水稻转录调控网络提供依据。 展开更多
关键词 osbp-73 靶基因 “下拉”实验
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The kinase OsSK41/OsGSK5 negatively regulates amylose content in rice endosperm by affecting the interaction between OsEBP89 and OsBP5 被引量:1
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作者 Zejun Hu Fuan Niu +14 位作者 Peiwen Yan Kai Wang Lixia Zhang Ying Yan Yu Zhu Shiqing Dong Fuying Ma Dengyong Lan Siwen Liu Xiaoyun Xin Ying Wang Jinshui Yang Liming Cao Shujun Wu Xiaojin Luo 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2023年第7期1782-1793,共12页
Amylose content(AC) is the main factor determining the palatability, viscosity, transparency, and digestibility of rice(Oryza sativa)grains. AC in rice grains is mainly controlled by different alleles of the Waxy(Wx) ... Amylose content(AC) is the main factor determining the palatability, viscosity, transparency, and digestibility of rice(Oryza sativa)grains. AC in rice grains is mainly controlled by different alleles of the Waxy(Wx) gene. The AP2/EREBP transcription factor OsEBP89 interacts with the MYC-like protein OsBP5 to synergistically regulate the expression of Wx.Here, we determined that the GLYCOGEN SYNTHASE KINASE 5(OsGSK5, also named SHAGGY-like kinase 41 [OsSK41]) inhibits the transcriptional activation activity of OsEBP89 in rice grains during amylose biosynthesis. The loss of OsSK41 function enhanced Wx expression and increased AC in rice grains. By contrast, the loss of function of OsEBP89 reduced Wx expression and decreased AC in rice grains. OsSK41 interacts with OsEBP89 and phosphorylates four of its sites(Thr-28,Thr-30, Ser-238, and Thr-257), which makes OsEBP89 unstable and attenuates its interaction with OsBP5. Wx promoter activity was relatively weak when regulated by the phosphomimicvariantOsEBP89E–OsBP5but relatively strong when regulated by the nonphosphorylatable variant OsEBP89A–OsBP5.Therefore, OsSK41-mediated phosphorylation of OsEBP89 represents an additional layer of complexity in the regulation of amylose biosynthesis during rice grain development. In addition, our findings provide four possible sites for regulating rice grain AC via precise gene editing. 展开更多
关键词 AP2/EREBP transcription factor endosperm amylose content GSK3-like family protein MYC-like protein OsSK41/OsGSK5 OsEBP89 osbp5 rice grain
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新型人上皮性卵巢癌细胞HO8910靶向输送系统的构建及其生物学活性的鉴定 被引量:5
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作者 廖花 康佳丽 +3 位作者 蒋文燕 王小霞 钟嘉莉 周聪 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2014年第10期865-870,共6页
目的构建新型人卵巢癌HO8910细胞株靶向输送系统TAT-OSBP-EGFP,并对其靶向输送特性和体外活性进行研究鉴定。方法采用PGEX-6P-3质粒分别构建TAT-EGFP、OSBP-EGFP和TAT-OSBP-EGFP表达载体,重组质粒转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达... 目的构建新型人卵巢癌HO8910细胞株靶向输送系统TAT-OSBP-EGFP,并对其靶向输送特性和体外活性进行研究鉴定。方法采用PGEX-6P-3质粒分别构建TAT-EGFP、OSBP-EGFP和TAT-OSBP-EGFP表达载体,重组质粒转化BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达和GST SefinoseTMResin柱亲和层析纯化后,采用SDS-PAGE和Western blotting鉴定。流式细胞术分析不同浓度(0、1、5、10μmol/L)TAT-EGFP、OSBP-EGFP和TAT-OSBP-EGFP融合蛋白处理HO8910细胞2h后的细胞穿膜率,细胞免疫荧光法检测3种融合蛋白对HO8910的输送特性(以人结肠癌Lo Vo细胞作对比),CCK-8法检测0、1、5、10、15、40、60、80、100μmol/L TAT-OSBP-EGFP处理HO8910细胞2h后的细胞活性。结果成功构建TAT-OSBP-EGFP原核表达载体,并获得可溶性融合蛋白。与TAT-EGFP相比,当浓度为10μmol/L时,TAT-OSBP-EGFP处理后HO8910细胞的穿膜率无明显升高(P>0.05);但当浓度为1、5μmol/L时,TAT-OSBP-EGFP处理后HO8910细胞的穿膜率升高,差异有统计学意义(P<0.01)。经TAT-OSBP-EGFP蛋白处理,HO8910细胞内荧光强度高于Lo Vo细胞;经TAT-EGFP蛋白处理,HO8910细胞内绿色荧光强度与Lo Vo细胞相似;经OSBP-EGFP蛋白处理,两种细胞内未见明显的绿色荧光。不同浓度TAT-OSBP-EGEP对HO8910细胞活性无影响(P>0.05)。结论成功构建针对人卵巢癌HO8910细胞株的靶向输送系统,为下一步肿瘤靶向药物输送载体的构建并发挥肿瘤的靶向杀灭作用打下了良好的基础。 展开更多
关键词 TAT-osbp-EGFP 融合蛋白 卵巢癌 靶向输送系统
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氧化固醇结合蛋白结构、功能与应用 被引量:4
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作者 邱尚昆 韩继忠 曾斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期818-825,共8页
氧化固醇结合蛋白(oxysterol binding protein,OSBP)是存在于真核细胞内的一类参与脂质代谢的非囊泡运输蛋白质,在哺乳动物中被称为氧化固醇结合蛋白相关蛋白质(oxysterol binding protein-related proteins,ORPs),而在酵母中被称为氧... 氧化固醇结合蛋白(oxysterol binding protein,OSBP)是存在于真核细胞内的一类参与脂质代谢的非囊泡运输蛋白质,在哺乳动物中被称为氧化固醇结合蛋白相关蛋白质(oxysterol binding protein-related proteins,ORPs),而在酵母中被称为氧化固醇结合蛋白同源物质(oxysterol-binding protein homologues,OSH)。近年来人们对氧化固醇结合蛋白的研究不断深入,特别是对其同源蛋白质(例如,ORP5/8、Osh3/4、ORP4L等)的结构功能差异和其在信号转导中的作用的相关研究,以及在生物医药方面的应用更成为了本领域的热点。本文综述了关于OSBP及其同源蛋白质结构和功能的相关研究,指出了该领域存在的一些关键问题。与此同时,对OSH和ORPs在细胞内的膜接触位点(membrane contact sites,MCS)进行对比,以及对今后OSBP的研究方向做了展望。 展开更多
关键词 氧化固醇结合蛋白(osbp) 同源蛋白质 结构 功能 膜接触位点
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细胞内胆固醇运输 被引量:4
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作者 黄勋 《生命的化学》 CAS CSCD 2014年第3期346-353,共8页
作为生物膜的重要成分,细胞内不同膜上胆固醇含量的高低直接影响生物膜的生物物理特性和细胞信号的传递,与细胞正常的生理功能密切相关。外源内吞的胆固醇和内源合成的胆固醇通过囊泡介导和非囊泡介导的胆固醇运输途径在不同细胞膜之间... 作为生物膜的重要成分,细胞内不同膜上胆固醇含量的高低直接影响生物膜的生物物理特性和细胞信号的传递,与细胞正常的生理功能密切相关。外源内吞的胆固醇和内源合成的胆固醇通过囊泡介导和非囊泡介导的胆固醇运输途径在不同细胞膜之间转运,从而维持了不同细胞器上胆固醇的浓度梯度。一系列胆固醇结合和转运蛋白在细胞内胆固醇的运输中发挥了重要作用。本文旨在总结细胞内胆固醇运输途径与参与胆固醇运输的重要分子及相关作用机制。 展开更多
关键词 囊泡介导运输 非囊泡介导运输 NPC1 NPC2 ORP osbp START
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氧固醇及其结合蛋白相关蛋白在癌症中的作用
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作者 武官敏 王欢 +2 位作者 金晔 梁健 韩晓菲 《生理科学进展》 CAS 北大核心 2020年第6期459-464,共6页
氧固醇是在人体内形成或摄入饮食中的胆固醇的氧化衍生物,是当前分子流行病学和肿瘤学探索的目标之一。氧固醇具有多种功能,能够调节肝脏X受体(liver X receptor,LXR)、氧固醇结合蛋白(oxysterol binding protein,OSBP)及其相关蛋白(oxy... 氧固醇是在人体内形成或摄入饮食中的胆固醇的氧化衍生物,是当前分子流行病学和肿瘤学探索的目标之一。氧固醇具有多种功能,能够调节肝脏X受体(liver X receptor,LXR)、氧固醇结合蛋白(oxysterol binding protein,OSBP)及其相关蛋白(oxysterol binding protein-related proteins,ORPs)等受体的活性,进而参与胆固醇代谢、调节酶活性、介导细胞内信号传导途径。现有的证据表明,氧固醇及其结合蛋白与包括癌症在内的许多人类疾病有关,但氧固醇家族成员功能复杂,其在不同癌症病理发展中的作用尚未有定论。针对这一问题,本文总结了氧固醇家族及其OSBP/ORPs在主要癌症中的作用,为进一步研究氧固醇分子及其受体在癌症进展中的机理和针对性的诊断治疗提供基础。 展开更多
关键词 氧固醇 osbp/ORPs 癌症
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Sterol-binding proteins and endosomal cholesterol transport
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作者 Ximing DU Hongyuan YANG 《Frontiers in Biology》 CSCD 2011年第3期190-196,共7页
Endosomal compartments sort and deliver exogenous lipoprotein-derived cholesterol to the endoplasmic reticulum for regulating cellular cholesterol homeostasis.A large number of studies have focused on the removal of e... Endosomal compartments sort and deliver exogenous lipoprotein-derived cholesterol to the endoplasmic reticulum for regulating cellular cholesterol homeostasis.A large number of studies have focused on the removal of endosomal cholesterol,since its accumulation leads to devastating human diseases.Recent studies suggest that cytoplasmic sterol-binding proteins may be involved in endosomal cholesterol transport.In particular,endosome/lysosome-localized or-associated cholesterol-binding proteins may serve as key mediators of cholesterol removal in a non-vesicular manner.Further characterization of these cholesterol-binding proteins will shed light on the molecular mechanisms that regulate endosomal cholesterol sorting. 展开更多
关键词 NPC1 NPC2 osbp/ORP StAR protein endosomal cholesterol transport
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