为研发同时预防和控制猪圆环病毒2d基因型(PCV2d)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的疫苗,将PCV2dORF2基因克隆到含有绿色荧光蛋白(EGFP)基因的PRV转移质粒pG中BamHⅠ位点,获得重组质粒pG-PCV2d-EGFP。运用转染试剂ZLip2000将其与PRV变异株3基因...为研发同时预防和控制猪圆环病毒2d基因型(PCV2d)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的疫苗,将PCV2dORF2基因克隆到含有绿色荧光蛋白(EGFP)基因的PRV转移质粒pG中BamHⅠ位点,获得重组质粒pG-PCV2d-EGFP。运用转染试剂ZLip2000将其与PRV变异株3基因缺失毒株gE^(-)/g^(-)/TK^(-)PRV NY DNA转入ST细胞中,经绿色荧光蚀斑纯化,得到表达EGFP的重组病毒rPRV-PCV2d-EGFP。采用CRISPR/Cas9基因双敲除质粒敲除重组病毒中EGFP基因,经蚀斑纯化,拯救出不表达EGFP的重组病毒rPRV-PCV2d。重组病毒rPRV-PCV2d与亲本株gE^(-)/g^(-)/TK^(-)PRV NY具有相近的遗传稳定性,且能够表达PCV2d衣壳(Cap)蛋白。在6周龄小鼠免疫试验中,与商品化PCV2灭活疫苗相比,rPRV-PCV2d刺激小鼠机体诱导了更高的PCV2特异性抗体,且用PCV2d强毒株攻毒后,rPRV-PCV2d显著降低了小鼠心脏、肝脏、脾脏等组织中PCV2d载量。此外,rPRV-PCV2d在小鼠体内激发PRV特异性免疫应答,并能阻止PRV强毒对小鼠的侵袭。表明rPRV-PCV2d具有良好的免疫原性。展开更多
文摘为研发同时预防和控制猪圆环病毒2d基因型(PCV2d)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的疫苗,将PCV2dORF2基因克隆到含有绿色荧光蛋白(EGFP)基因的PRV转移质粒pG中BamHⅠ位点,获得重组质粒pG-PCV2d-EGFP。运用转染试剂ZLip2000将其与PRV变异株3基因缺失毒株gE^(-)/g^(-)/TK^(-)PRV NY DNA转入ST细胞中,经绿色荧光蚀斑纯化,得到表达EGFP的重组病毒rPRV-PCV2d-EGFP。采用CRISPR/Cas9基因双敲除质粒敲除重组病毒中EGFP基因,经蚀斑纯化,拯救出不表达EGFP的重组病毒rPRV-PCV2d。重组病毒rPRV-PCV2d与亲本株gE^(-)/g^(-)/TK^(-)PRV NY具有相近的遗传稳定性,且能够表达PCV2d衣壳(Cap)蛋白。在6周龄小鼠免疫试验中,与商品化PCV2灭活疫苗相比,rPRV-PCV2d刺激小鼠机体诱导了更高的PCV2特异性抗体,且用PCV2d强毒株攻毒后,rPRV-PCV2d显著降低了小鼠心脏、肝脏、脾脏等组织中PCV2d载量。此外,rPRV-PCV2d在小鼠体内激发PRV特异性免疫应答,并能阻止PRV强毒对小鼠的侵袭。表明rPRV-PCV2d具有良好的免疫原性。
