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鳗鲡疱疹病毒ORF95基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：6
1
作者 李友娟 葛均青 +1 位作者 宋铁英 林天龙 《福建农业学报》 CAS 2012年第8期787-791,共5页
鳗鲡疱疹病毒(Anguillae herpesvirus,AngHV)是淡水鳗鲡的主要病毒性疾病病原之一。根据鳗鲡疱疹病毒(AngHV-1)的基因组序列(GenBank:NC-013668)设计引物,扩增鳗鲡疱疹病毒福建株(AngHV-FJ)ORF95基因的开放阅读框序列,克隆至pMD19-T载体... 鳗鲡疱疹病毒(Anguillae herpesvirus,AngHV)是淡水鳗鲡的主要病毒性疾病病原之一。根据鳗鲡疱疹病毒(AngHV-1)的基因组序列(GenBank:NC-013668)设计引物,扩增鳗鲡疱疹病毒福建株(AngHV-FJ)ORF95基因的开放阅读框序列,克隆至pMD19-T载体;经限制性内切酶酶切和测序鉴定,进一步将其克隆至原核表达载体pET-32a,构建了表达质粒32a-ORF95,将其转化表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导,实现了ORF95在大肠杆菌中的高效表达。在0.1mmol.L-1 IPTG、23℃诱导14h的条件下,可溶性ORF95蛋白的表达量较高,经镍柱纯化获得了高纯度的融合蛋白。 展开更多
关键词 鳗鲡疱疹病毒 orf95 基因克隆 原核表达
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羊痘野毒感染与弱毒免疫iELISA鉴别诊断方法的建立 被引量：4
2
作者 李慧霞 朱学亮 +4 位作者 刘振勇 窦永喜 李辉 骆学农 才学鹏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期701-706,共6页
为建立一种方便、灵敏、有效的检测羊痘野毒感染的iELISA方法,以山羊痘病毒基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF95和ORF103基因的完整ORF,连接至克隆载体pMD18-T。测序正确后,将两基因片段分别与表达载体pET-30a(+)连接,构建原核表达载体pET... 为建立一种方便、灵敏、有效的检测羊痘野毒感染的iELISA方法,以山羊痘病毒基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF95和ORF103基因的完整ORF,连接至克隆载体pMD18-T。测序正确后,将两基因片段分别与表达载体pET-30a(+)连接,构建原核表达载体pET-95和pET-103,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析后,用纯化的两种重组蛋白进行iELISA方法研究。结果显示,ORF95和ORF103大小分别为483bp和570bp,重组菌经1mmol/L IPTG诱导5h后,分别在30ku和35ku处有高水平的融合表达,且均以包涵体形式存在。两种目的蛋白以10ng+20ng混合作为包被抗原时,该iELISA方法检测羊痘自然感染血清、弱毒疫苗免疫羊血清和阴性血清的D450nm有明显差异,且与口蹄疫病毒、小反刍兽疫病毒、羊口疮病毒无交叉反应。因此,该方法能有效排除羊痘弱毒疫苗免疫造成的干扰,可特异性检测羊痘野毒感染的血清样品。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 绵羊痘病毒 orf95基因 ORF103基因 间接酶联免疫吸附试验
原文传递
羊痘病毒3个结构蛋白的克隆与抗原性分析 被引量：2
3
作者 颜新敏 吴国华 +3 位作者 李健 朱海霞 朱彩珠 张强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期889-891,共3页
为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表... 为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表达产物经western blot分析,羊痘病毒特异性血清只能识别融合蛋白ORF57和ORF95,不能识别ORF117。本研究为重组诊断抗原的筛选和亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 ORF57 orf95 ORF117 原核表达 抗原性分析
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