期刊文献+
共找到7篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
HHV-8 ORF73C基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
1
作者 张心声 董辉 +3 位作者 许建红 张梅红 宋玮 齐眉 《山东医药》 CAS 北大核心 2006年第16期45-46,共2页
利用PCR技术获得人疱疹病毒8型(HHV-8)ORF 73C基因,克隆至pGEM T-easy载体,进一步克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建含HHV-8 ORF 73C基因的重组表达质粒pGEXORF 73;重组表达质粒pGEXORF 73在大肠杆菌中得到有效表达。
关键词 疱疹病毒8型 基因 orf73C 大肠杆菌
暂未订购
Establishment of an ELISA to Detect Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus Using Recombinant ORF73 被引量:8
2
作者 Xin-xing OUYANG Bi-shi FU +3 位作者 Bao-lin LI Yan ZENG Fan-hong XU Lin-ding WANG 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2010年第3期168-176,共9页
Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) is causally related to Kaposi's sarcoma (KS), primary effusion lymphoma (PEL) and a proportion of cases of multicentric Castleman's disease (MCD). The ORF73 p... Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) is causally related to Kaposi's sarcoma (KS), primary effusion lymphoma (PEL) and a proportion of cases of multicentric Castleman's disease (MCD). The ORF73 protein was cloned into pQE80L-orf73 and expressed in E.coli and purified. The expressed recombinant ORF73 was identified by sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). A protein of about 27 kDa was expressed as expected. Western Blotting showed that the purified recombinant ORF73 reacted with KSHV positive serum. The immunogenicity of the recombinant ORF73 was further analysed by ELISA and the optimal conditions were determined. The ORF73 ELISA was used to compare the KSHV seroprevalence between Hubei and Xinjiang Han people. The Han people in Xinjiang have significantly higher KSHV seroprevalence than their counterparts in Hubei (6.7% vs 2.9%, P = 0.005). 展开更多
关键词 Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) orf73 ELISA HUBEI Xinjiang SEROPREVALENCE
在线阅读 下载PDF
缺失ORF73或ORF214基因对重组鸡痘病毒免疫应答的影响
3
作者 王彦红 陈素娟 +4 位作者 刘武杰 仇旭升 董丽 彭大新 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期512-516,共5页
【目的】旨在研究鸡痘病毒ORF73和ORF214编码蛋白是否具有IL-18结合蛋白的功能,以及ORF73或ORF214基因缺失后对重组病毒诱导免疫应答的影响。【方法】以缺失ORF73或ORF214基因并表达H5亚型AIVHA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rF... 【目的】旨在研究鸡痘病毒ORF73和ORF214编码蛋白是否具有IL-18结合蛋白的功能,以及ORF73或ORF214基因缺失后对重组病毒诱导免疫应答的影响。【方法】以缺失ORF73或ORF214基因并表达H5亚型AIVHA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rFPVLP-△214LRH5A)作为研究对象,以未缺失ORF73或ORF214基因而表达H5亚型AIVHA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-12LSH5A)作为对照,检测重组病毒体外诱导SPF鸡脾细胞和外周血淋巴细胞产生IFN情况,同时检测重组病毒免疫SPF鸡后诱导的体液免疫、CD4+/CD8+比值、外周血淋巴细胞的增殖能力和H5亚型AIV强毒攻击后的免疫保护效力。【结果】rFPVLP-△73LRH5A和rFPVLP-△214LRH5A体外诱导脾细胞产生的IFN量显著高于rFPVLP-12LSH5A,而免疫10d后的CD4+/CD8+比值显著低于rFPVLP-12LSH5A;3种重组鸡痘病毒诱导外周血淋巴细胞增殖的能力没有明显差异;3种重组病毒在SPF鸡均产生针对H5亚型AIV的HI抗体,免疫14d后rFPVLP-△214LRH5A组诱生的HI抗体水平显著低于rFPVLP-12LSH5A组的抗体,但3组在免疫21d后HPAIV的致死性攻击时,均100%被保护。【结论】鸡痘病毒ORF73和ORF214编码蛋白具有IL-18结合蛋白抑制IFN产生的功能,虽然缺失株和亲本株重组鸡痘病毒在细胞和体液免疫应答存在一定差异,但在SPF鸡均能诱导产生良好的免疫保护。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 orf73 ORF214 免疫应答
原文传递
卡波济肉瘤相关疱疹病毒潜伏相关核抗原编码基因的克隆及表达 被引量:1
4
作者 黄丽 卢春 曾怡 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期292-296,共5页
目的:分离卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)潜伏相关核心抗原(LANA)羧基端基因(ORF73C),并在大肠杆菌中克隆和表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5′端分别引入BamH I和EcoR I酶切位点,提取稳定状态的BCBL-1细胞的总DNA作模板,通过PCR扩... 目的:分离卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)潜伏相关核心抗原(LANA)羧基端基因(ORF73C),并在大肠杆菌中克隆和表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5′端分别引入BamH I和EcoR I酶切位点,提取稳定状态的BCBL-1细胞的总DNA作模板,通过PCR扩增KSHV ORF73C,PCR产物经双酶切后按正确的读码框克隆进原核表达质粒pGEX-6p-1中,并转化大肠杆菌感受态细胞BL21,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果:经核酸序列测定及分析,分离、克隆的ORF73C基因与基因数据库中登记的ORF73基因的羧基端的621bp的序列有99%同源性。经IPTG诱导的重组质粒转化菌体SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳显示有大小约为46ku的融合蛋白表达。结论:初步表明ORF73C基因在大肠杆菌中获得正确表达。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 潜伏相关核抗原(LANA) orf73C 原核表达
暂未订购
人疱疹病毒8型感染的间接ELISA检测方法的建立
5
作者 仇岩 朱海峰 张心声 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2008年第8期747-750,755,共5页
目的建立人疱疹病毒8型(HHV-8)感染的间接ELISA检测方法,并初步探讨其应用价值。方法利用PCR技术获得HHV-8 ORF73C基因,插入到原核表达载体pGEX-6P-1中,在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导蛋白表达;以纯化的GST-ORF73C融合蛋白为包被抗原,利... 目的建立人疱疹病毒8型(HHV-8)感染的间接ELISA检测方法,并初步探讨其应用价值。方法利用PCR技术获得HHV-8 ORF73C基因,插入到原核表达载体pGEX-6P-1中,在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导蛋白表达;以纯化的GST-ORF73C融合蛋白为包被抗原,利用方阵滴定法确定包被抗原和抗血清的最适工作浓度,并通过阻断试验、交叉试验、特异性试验、重复性试验及与Chou等建立的K8.1合成多肽-ELISA检测方法进行试验比较等评价其效果。结果SDS-PAGE及Western-blot检测结果显示,目的基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,且表达产物能被KS阳性血清[HIV(+)/KS(+)血清]特异性识别;方阵滴定试验显示:包被抗原的最佳浓度为1.5μg/mL,血清抗体的最佳稀释度为1∶80;阻断试验、交叉试验、特异性试验、重复性试验等表明该方法特异性强、重复性好;对86份HIV(+)/KS(-)血清样品进行检测的结果显示,该方法与Chou等建立的K8.1合成多肽-ELISA检测方法的符合率为98.8%。结论GST-ORF73C-ELISA检测方法具有良好的特异性和重复性,可用于HHV-8感染的血清学检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 人疱疹病毒8型 orf73C基因 酶联免疫吸附测定
暂未订购
HHV-8潜伏期相关核抗原的研究进展
6
作者 李振飞 普雄明 《中国麻风皮肤病杂志》 2010年第2期112-114,共3页
人类疱疹病毒8(HHV-8)又称为Kaposi肉瘤相关疱疹病毒,与Kaposi肉瘤相关疾病关系密切。HHV-8潜伏期相关核抗原(LANA)是HHV-8的开放阅读框架73(ORF73)编码的一种病毒衣壳蛋白,潜伏感染状态病毒稳定表达LANA,它在病毒基因整合到宿主基因组... 人类疱疹病毒8(HHV-8)又称为Kaposi肉瘤相关疱疹病毒,与Kaposi肉瘤相关疾病关系密切。HHV-8潜伏期相关核抗原(LANA)是HHV-8的开放阅读框架73(ORF73)编码的一种病毒衣壳蛋白,潜伏感染状态病毒稳定表达LANA,它在病毒基因整合到宿主基因组的过程中起重要作用,且因其较好的表达稳定性和特异性常用来检测HHV-8的感染状态。特别是对其在Kaposi肉瘤发病中的作用研究文献较多。 展开更多
关键词 人类疱疹病毒8型 orf73 LANA
暂未订购
人类8型疱疹病毒开放读码框_(73C)基因原核表达、纯化及鉴定研究
7
作者 何方平 王星 +6 位作者 林仁勇 卢晓梅 冯晓辉 张亚楼 张跃新 何斌 温浩 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期382-384,共3页
目的构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)基因开放读码框(ORF)_(73C)重组原核表达质粒并诱导表达,获得HHV-8潜伏态相关核抗原重组蛋白,并对其免疫活性进行初步鉴定。方法软件设计引物,分别在引物两端添加特异的酶切位点,以pGEM-Teasy/ORF_(73)... 目的构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)基因开放读码框(ORF)_(73C)重组原核表达质粒并诱导表达,获得HHV-8潜伏态相关核抗原重组蛋白,并对其免疫活性进行初步鉴定。方法软件设计引物,分别在引物两端添加特异的酶切位点,以pGEM-Teasy/ORF_(73)质粒为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增ORF_(73C)基因序列,克隆入原核表达载体pET-28a(+),构建原核表达质粒pET28a- ORF_(73C);转化E.coli DH_(5α),经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性,转入E.coli BL21(DE3),并诱导表达,以多聚组氨酸亲合层析柱纯化,凝胶蛋白电泳、Western印迹方法行表达蛋白的分析和抗原特异性免疫鉴定。结果测序结果表明构建的pET28a-ORF_(73C)原核表达质粒连接正确,插入的ORF_(73C)基因片段为453 bp。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表明ORF_(73C)基因成功表达,在相对分子质量20000处有表达条带;Western印迹分析显示重组蛋白能被卡波济肉瘤患者阳性血清识别,具有良好的抗原性。结论成功构建了pET28a-ORF_(73C)原核表达质粒,获得的纯化HHV-8潜伏态相关核抗原蛋白与卡波济肉瘤患者血清具有特异性识别,显示其作为检测抗原的可能,但其敏感性和特异性则有待进一步的验证。 展开更多
关键词 疱疹病毒8型 开放阅读框架 基因表达
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部