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水痘-带状疱疹病毒-ORF7蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证
1
作者 王梦涵 侯安奇 +3 位作者 谭仕明 董翔 李爽 张夫坤 《中国生物制品学杂志》 2025年第6期731-737,745,共8页
目的 建立一种针对水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)-ORF7蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证,以用于水痘减毒活疫苗Oka-7S株研究工艺中各阶段样品ORF7抗原的检测。方法 用重组pET-28a-ORF7质粒诱导表达VZV-ORF7... 目的 建立一种针对水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)-ORF7蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证,以用于水痘减毒活疫苗Oka-7S株研究工艺中各阶段样品ORF7抗原的检测。方法 用重组pET-28a-ORF7质粒诱导表达VZV-ORF7原核蛋白,经Ni^(2+)亲和层析柱进行纯化;以ORF7原核蛋白为免疫原,采用小鼠杂交瘤融合技术,筛选单抗杂交瘤细胞株,制备单抗,间接ELISA法检测抗体效价,Western blot法鉴定抗体特异性;叠加ELISA试验分析单抗抗原表位,经抗体配对筛选建立VZV-ORF7抗原的双抗体夹心ELISA检测方法,对方法的灵敏度、特异性和重复性进行验证;用建立的方法检测3批VZV Oka-7S株收获物。结果 共获得4株稳定分泌抗VZVORF7的杂交瘤细胞株,分别命名为M2B5、M2G5、8C2和1C4,细胞培养上清效价均为10~4~10~5,腹水效价均为10~6~10~7;纯化的单抗在还原和非还原状态纯度均约为97%。4株单抗均可与VZV全病毒蛋白和纯化的ORF7原核蛋白发生特异性结合;确定M2G5为捕获抗体,M2B5-HRP为酶标抗体,二者最佳工作浓度分别为4μg/mL和1∶8 000;确定临界值为A_(450)=0.111,A_(450)≥0.111判定为阳性,<0.111判定为阴性。本方法标准曲线范围为3.9~250 ng/mL,拟合方式为四参数,标准曲线方程y=(0.049 5-2.24)/(1+x/97.8)^(1.27)+2.24,相关系数(R^(2))为0.999,最低检测限为2.2 ng/mL;与四价流感病毒裂解疫苗、腮腺炎病毒、麻疹病毒均无交叉反应;批间及批内CV均<10%。3批VZV Oka-7S株检测结果均为阴性,符合率为100%。结论 建立的VZV-ORF7双抗体夹心ELISA法灵敏度高,特异性好,重复性高,适用于VZV-ORF7蛋白以及VZV Oka和Oka-7S株的快速检测。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 orf7蛋白 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验
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PRRSV HNHK3-2021毒株的ORF5和ORF7序列分析 被引量：2
2
作者 范悦轩 马佳镁 +5 位作者 黄春媛 郑佳馨 陈素贞 张艳 刘光亮 曹宗喜 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1292-1300,共9页
【目的】研究海南猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV的流行病学特征和遗传变异规律。【方法】采集海南省海口市及周边地区样品,分离出PRRSV HNHK3-2021毒株,并测定NSP2基因以及ORF5和ORF7基因序列,采用Lasergene 7.1进行序列比对分析,用MEGA-... 【目的】研究海南猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV的流行病学特征和遗传变异规律。【方法】采集海南省海口市及周边地区样品,分离出PRRSV HNHK3-2021毒株,并测定NSP2基因以及ORF5和ORF7基因序列,采用Lasergene 7.1进行序列比对分析,用MEGA-X进行遗传演化分析。【结果】分离出的PRRSV HNHK3-2021株为美洲型毒株,PRRSV HNHK3-2021株和EF112447 HEB1、EU109503 GD、EU624117 XH-GD的ORF5和ORF7的核苷酸相似性较高,分别为99.2%~99.3%和99.5%~100%,推导氨基酸相似性为99%~99.5%和100%;PRRSV HNHK3-2021株和EU864232 SHB、AY262352_HB-2(sh)2002、AY656990 Abst-1、AY032626 CH-1a、EU807840 CH-1R的ORF5和ORF7的核苷酸相似性为87.1%~96.4%和91.4%~97.3%,推导氨基酸的相似性为86.6%~93%和91.9%~97.6%;PRRSV HNHK3-2021株和JN654459 NADC30、KP860909 FJZ03、MH068878 SD17-38、AY881994 FJ-1的ORF5和ORF7的核苷酸相似性为85.4%~87.1%和89%~91.4%。氨基酸的相似性为86.1%~87.1%和89.5%~91.9%。【结论】RRSV HNHK3-2021毒株和EU624117 XH-GD具有最近的遗传距离。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 遗传进化 ORF5 orf7
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基于ORF7基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-RAA检测方法的建立 被引量：1
3
作者 于娜 马佳镁 +6 位作者 张紫薇 黄春媛 范悦轩 郑佳馨 张艳 刘光亮 曹宗喜 《动物医学进展》 北大核心 2024年第8期117-119,共3页
根据GenBank公布的ORF7基因保守序列设计了特异性引物,建立了PRRSVORF7基因反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)荧光法快速检测方法。结果表明,RT-RAA荧光法在42℃、20min内即可检测到PRRSV特异性扩增曲线,最低检测浓度为9.9×10^(6)... 根据GenBank公布的ORF7基因保守序列设计了特异性引物,建立了PRRSVORF7基因反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)荧光法快速检测方法。结果表明,RT-RAA荧光法在42℃、20min内即可检测到PRRSV特异性扩增曲线,最低检测浓度为9.9×10^(6)copies/μL;与PRVBartha-K61、PCV、CSFV、PRRSVGD、PRRSVXH-GD、PRRSVGM2、PRRSVCH-1a病毒均无交叉反应。分别对157份样品进行荧光RT-RAA法与PCR方法的检测进行比对,结果显示,荧光RT-RAA法敏感性为94.0%,特异性为100%。建立的PRRSV荧光RT-RAA法操作简便,特异性强,灵敏度高。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf7基因 反转录-重组酶介导等温扩增 特异性 灵敏度
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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因实时荧光定量PCR检测方法的建立
4
作者 安乐乐 罗迅 +2 位作者 杨宣叶 胡欣妍 赵永清 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期1681-1688,共8页
为建立一种快速、高效检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的实时荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank公布的中国流行PRRSV病毒株基因序列,制备包含PRRSV ORF7基因的重组质粒标准品,同时,针对PRRSV保守区域ORF7基因序列设计特异性引物和探... 为建立一种快速、高效检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的实时荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank公布的中国流行PRRSV病毒株基因序列,制备包含PRRSV ORF7基因的重组质粒标准品,同时,针对PRRSV保守区域ORF7基因序列设计特异性引物和探针,并优化引物和探针终浓度,建立PRRSV Taq Man实时荧光定量PCR检测方法。以质粒标准品为模板构建检测方法线性模型,评估灵敏度、重复性和特异性,并在疑似临床样品中初步应用。本研究建立的PRRSV Taq Man荧光定量PCR检测方法线性关系良好,线性决定系数为0.9975;病毒载量检测限度为1μL 3.32×10^(1)拷贝;变异系数在组内和组间重复中均小于1.500%;仅与PRRSV发生特异性反应,未与其他病毒发生交叉反应。临床样品qPCR检测阳性率为36.92%,高于PCR检测阳性率(26.15%),阳性符合率为100%。基于PRRSV ORF7基因构建的Taq Man荧光定量PCR检测方法线性关系良好、灵敏度高、重复性好、特异性强,可快速、高效检测临床样品PRRSV,为PRRSV早期诊断、及时防控和流行病学调查提供了科学的技术支撑。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 orf7基因 Taq Man实时荧光定量PCR 早期诊断
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SARS-CoV-2 ORF7a通过靶向IKKβ激活NF-κB信号通路促进细胞炎症因子释放
5
作者 牟露敏 龙启舟 +3 位作者 邓东青 程金芝 聂映 吴家红 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期714-719,共6页
目的:探究SARS-CoV-2辅助蛋白ORF7a介导NF-κB激活,进而诱导炎症因子产生的分子机制。方法:双荧光素酶报告基因试验检测ORF7a对NF-κB激活的影响,qRT-PCR检测ORF7a对细胞中炎症因子表达的影响,Western blot、核质分离及免疫荧光技术检测... 目的:探究SARS-CoV-2辅助蛋白ORF7a介导NF-κB激活,进而诱导炎症因子产生的分子机制。方法:双荧光素酶报告基因试验检测ORF7a对NF-κB激活的影响,qRT-PCR检测ORF7a对细胞中炎症因子表达的影响,Western blot、核质分离及免疫荧光技术检测ORF7a蛋白对p65磷酸化及入核的影响,免疫共沉淀及免疫荧光技术检测ORF7a的作用靶标蛋白。结果:报告基因试验表明ORF7a显著激活NF-κB启动子活性,并呈剂量依赖性(P<0.001),而对AP-1报告基因的激活无明显影响。ORF7a显著上调细胞因子TNF-α、IL-β及IL-8 mRNA表达(P<0.05)。Western blot结果显示ORF7a显著增强p65蛋白磷酸化(P<0.05)及p65的入核(P<0.01)。免疫共沉淀实验发现ORF7a与NF-κB信号通路分子IKKβ蛋白存在相互作用,免疫荧光实验也证实ORF7a与IKKβ具有共定位。结论:SARS-CoV-2 ORF7a通过靶向IKKβ激活NF-κB信号通路,进而促进细胞中炎症因子的释放。 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 orf7a NF-ΚB信号通路 炎症因子
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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆及其在毕赤酵母中表达 被引量：8
6
作者 黄小波 钱洪喜 +2 位作者 曹三杰 文心田 马小平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1137-1141,共5页
用RT-PCR扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重庆分离株C14-2的ORF7基因(384bp),构建克隆质粒pMD19-T-ORF7,经EcoRⅠ/NotⅠ双酶切回收ORF7基因插入酵母表达载体pPIC9K,构建了重组表达质粒pPIC9K-ORF7,进行PCR鉴定和双酶切鉴定。鉴定的pP... 用RT-PCR扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重庆分离株C14-2的ORF7基因(384bp),构建克隆质粒pMD19-T-ORF7,经EcoRⅠ/NotⅠ双酶切回收ORF7基因插入酵母表达载体pPIC9K,构建了重组表达质粒pPIC9K-ORF7,进行PCR鉴定和双酶切鉴定。鉴定的pPIC9K-ORF7经SacⅠ线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,筛选获得阳性重组菌GS115(pPIC9K-ORF7),再经G-418/YPD筛选获得高拷贝重组菌,重组子经表型鉴定为Mut+。重组菌GS115(pPIC9K-ORF7)经甲醇诱导表达,在96h表达的N蛋白量最大,N蛋白经SDS-PAGE鉴定大小约为15 000;Western blot表明N蛋白能与美洲型PRRSV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应活性。本研究为开展PRRSV ORF7基因在毕赤酵母中表达及应用奠定基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf7基因 毕赤酵母
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猪传染性胃肠炎病毒ORF7蛋白在ST细胞中定位及其对病毒复制影响的研究 被引量：5
7
作者 何雷 董玲娟 +6 位作者 张彦明 宋嘉兴 郁川 余祖华 张春杰 丁轲 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期543-548,共6页
为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)ORF7蛋白的亚细胞定位及其在TGEV复制中的作用。本研究通过RT-PCR扩增TGEV ORF7基因,将其与真核表达载体pEGFP-C1和pEGFP-N1相连接,构建表达载体pGFP-ORF7(GFP融合在TGEV ORF7的-NH2端)和pORF7-GFP(GFP... 为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)ORF7蛋白的亚细胞定位及其在TGEV复制中的作用。本研究通过RT-PCR扩增TGEV ORF7基因,将其与真核表达载体pEGFP-C1和pEGFP-N1相连接,构建表达载体pGFP-ORF7(GFP融合在TGEV ORF7的-NH2端)和pORF7-GFP(GFP融合在ORF7的-COOH端)。分别将这两个质粒转染至ST细胞,western blot检测融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP的表达。通过生物信息学分析和激光共聚焦确定TGEV ORF7蛋白的亚细胞定位。在此基础上,通过细胞病变观察和荧光定量PCR检测TGEV ORF7蛋白对TGEV复制的影响。结果显示,本研究正确构建了真核表达载体pGFP-ORF7和pORF7-GFP,western blot检测结果表明融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP均正确表达,TGEV ORF7蛋白大小约为9 ku;结合生物信息学分析和激光共聚焦共定位结果显示TGEV ORF7特异性的定位于ST细胞的内质网中,其定位和其N端的信号肽序列有关;荧光定量PCR检测结果显示,过表达ORF7蛋白后TGEV mRNA转录水平降低99%,表明ORF7蛋白参与调控TGEV的复制。本研究为TGEV ORF7蛋白功能的研究提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 orf7蛋白 亚细胞定位 过表达 病毒复制
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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的遗传变异分析 被引量：8
8
作者 鲁韦韦 姜平 +2 位作者 唐泰山 李玉峰 张常印 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期26-30,共5页
从GenBank中随机选取25株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的全基因序列进行同源性分析并构建了基因进化树,同时对PRRSV ORF7基因序列进行遗传变异分析,发现PRRSV美洲株之间或欧洲株之间的ORF7基因相对保守,但美洲株和欧洲株的ORF7基因的... 从GenBank中随机选取25株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的全基因序列进行同源性分析并构建了基因进化树,同时对PRRSV ORF7基因序列进行遗传变异分析,发现PRRSV美洲株之间或欧洲株之间的ORF7基因相对保守,但美洲株和欧洲株的ORF7基因的核苷酸及氨基酸同源性较低。说明建立的针对N蛋白的多种检测方法在高致病性PRRSV肆虐的现今仍具有实用性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf7基因 基因进化树
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广西地区2004-2010年猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5及ORF7基因的遗传变异分析 被引量：4
9
作者 许瑞胜 施开创 +3 位作者 赵日浪 胡杰 莫胜兰 刘棋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1117-1123,共7页
为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子遗传进化情况,对2004-2010年间广西的PRRSV阳性病料进行了ORF5、ORF7基因扩增和序列分析。结果显示,所获得的毒株均属于美洲型毒株,其ORF5基因间的氨基酸序列同源性为89.6%～... 为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子遗传进化情况,对2004-2010年间广西的PRRSV阳性病料进行了ORF5、ORF7基因扩增和序列分析。结果显示,所获得的毒株均属于美洲型毒株,其ORF5基因间的氨基酸序列同源性为89.6%～99.5%,与VR-2332、Ch-1a、JXA1株的氨基酸序列同源性分别为84.6%～91%、89.6%～95.5%和93%～99%,而与LV的同源性为54.7%～56.7%;ORF7基因间的氨基酸序列同源性为87.1%～99.2%,与VR-2332、Ch-1a、JXA1株的氨基酸序列同源性分别为91.1%～96%、91.9%～96%和89.5%～99.2%,而与LV的同源性为55.6%～58.1%。基于ORF5和ORF7基因核苷酸序列绘制的遗传进化树,可将所有PRRSV分离株分为4个亚群,广西地区的毒株分布在以CH-1a为代表的Ⅱ亚群、以HB-1为代表的Ⅲ亚群和以JXA1为代表的Ⅳ亚群,以Ⅳ亚群为主。表明当前广西PRRSV流行毒株以美洲型Ⅳ亚群为优势基因亚群,并且各毒株间的ORF5和ORF7基因序列存在一定差异,但没有明显的地域特征。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 遗传变异 ORF5基因 orf7基因
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欧洲型PRRSV RT-PCR检测方法的建立及ORF7基因序列比较 被引量：15
10
作者 张战峰 李肖梁 +2 位作者 张莹 查云侠 方维焕 《动物医学进展》 CSCD 2007年第5期26-29,共4页
根据PRRSV（LV株）ORF7基因设计一对引物，建立了欧洲型PRRSV的RT-PCR检测方法。通过对50份组织病料检测及其ORF7基因序列分析，结果表明，有4份组织病料扩增出欧洲型PRRSV576bp特异性片段，阳性率为8％，其ORF7基因序列和氨基酸推导序... 根据PRRSV（LV株）ORF7基因设计一对引物，建立了欧洲型PRRSV的RT-PCR检测方法。通过对50份组织病料检测及其ORF7基因序列分析，结果表明，有4份组织病料扩增出欧洲型PRRSV576bp特异性片段，阳性率为8％，其ORF7基因序列和氨基酸推导序列与欧洲型PRRSV弱毒疫苗株（AMER-VAC-PRRS）的同源性分别在99．0％～99．7％和98．5％～100％之间，而与标准毒株（LV）的同源性分别在95．9％～96．6％和96．99，6～97．7%之间。表明该PT-PCR体系适合组织病料中欧洲型PRRSV的直接检测，同时也证实了欧洲型PRRSV在我国的存在，并且与疫苗株之间具有较高的同源性。 展开更多
关键词 欧洲型猪繁殖与呼吸综合征 逆转录-聚合酶链反应 orf7基因
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5株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7全长基因的克隆及序列分析 被引量：4
11
作者 贾怀杰 景志忠 +6 位作者 房永祥 王晓霞 陈国华 李克斌 窦永喜 瞿惠玲 杨孝朴 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第8期561-566,共6页
目的通过测定5株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF7基因序列,结合GenBank登录的国内外PRRSV分离株核苷酸序列,分析PRRSV核衣壳蛋白（N蛋白）的遗传变异情况。方法根据GenBank公布的PRRSV ATCCVR-2332株全基因组核苷酸序列,设计合成1... 目的通过测定5株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF7基因序列,结合GenBank登录的国内外PRRSV分离株核苷酸序列,分析PRRSV核衣壳蛋白（N蛋白）的遗传变异情况。方法根据GenBank公布的PRRSV ATCCVR-2332株全基因组核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增出3株PRRSV甘肃流行株（命名为GSZY、GSBY、GSZY株）、1株陕西流行株（命名为Shanxi株）和1株PRRSV江西分离株（命名为Jingxi株）的ORF7全长基因,克隆到pGEM-T Easy载体,然后分别测定插入的核苷酸序列。应用DNAStar序列分析软件对所测ORF7基因核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与不同来源的13个PRRSV毒株进行同源性比较。结果5株PRRSV ORF7基因与以ATCC VR-2332为代表的早期引发PRRS的美洲型毒株的核苷酸序列间的同源性为91.9%～94.3%,与国内其他PRRSV分离株的同源性为98.7%～99.7%,与欧洲型代表株LV的同源性为57.7%～58.2%。结论美洲型PRRSV N蛋白氨基酸发生了变异,但国内毒株相对保守。 展开更多
关键词 PRRSV 地方毒株 orf7 基因克隆 变异分析
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PRRSV安徽分离株NSP2和ORF7基因的克隆与序列分析 被引量：4
12
作者 姚雪静 占松鹤 +3 位作者 朱良强 祁克宗 王非 王爱萍 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第5期58-63,共6页
2008年从安徽两个发病猪场采集疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,在Marc-145细胞上盲传4代～5代,发现明显细胞病变,各分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(HS08株和ZJ08株)。用RT-PCR扩增这两个分离毒株的NSP2和ORF7基因,进行克隆和序列分析。... 2008年从安徽两个发病猪场采集疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,在Marc-145细胞上盲传4代～5代,发现明显细胞病变,各分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(HS08株和ZJ08株)。用RT-PCR扩增这两个分离毒株的NSP2和ORF7基因,进行克隆和序列分析。结果表明,这两个分离毒株核苷酸同源性高于99.0%;在NSP2基因上,这两个分离毒株均发生30个氨基酸的不连续缺失,它们与CH-1a株之间核苷酸同源性分别为80.7%和80.2%;在ORF7基因上,与2007年国内高致病性猪蓝耳病毒株HuN4核苷酸同源性较高,分别为98.4%和99.5%,且ORF7基因均存在K46→R46,H109→Q109,V117→A117氨基酸突变。这些信息显示这两个安徽分离株属美洲型毒株,具有高致病性特征,与国内高致病性毒株位于同一基因群。 展开更多
关键词 PRRSV NSP2基因 orf7基因 克隆 序列分析
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猪生殖和呼吸综合征病毒B_(13)株ORF7基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达 被引量：21
13
作者 赵耘 罗长宝 +4 位作者 陈茹 林志雄 李树根 陈博文 刘尚高 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期75-80,共6页
利用单管RT PCR方法扩增猪生殖和呼吸综合征病毒 (PRRSV)分离株B13 株包括ORF7基因的片段 ,并对其序列进行了测定 ,结果PRRSV分离株B13 ORF7基因长度为 384bp ,编码 12 8个氨基酸组成的 15kD蛋白。与已发表的PRRSVLV株、VR 2 332株进行... 利用单管RT PCR方法扩增猪生殖和呼吸综合征病毒 (PRRSV)分离株B13 株包括ORF7基因的片段 ,并对其序列进行了测定 ,结果PRRSV分离株B13 ORF7基因长度为 384bp ,编码 12 8个氨基酸组成的 15kD蛋白。与已发表的PRRSVLV株、VR 2 332株进行同源性比较 ,发现核苷酸同源性分别为 99 2 %、5 9 4% ;氨基酸同源性分别为98 4%、5 4 7%。表明PRRSV分离株B13 在基因结构上可能与LV株同属于欧洲亚群。同时构建了重组转移载体质粒 pAcGHLT B ORF7,用该重组转移载体质粒与线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV SVI-G)基因组DNA(baculogoldlinearizedbaculovirusDNA)共转染草地夜蛾 (Spodoptcrafrugiperda ,Sf9)细胞 ,得到重组病毒AcMNPV OCC- GST 6xHis ORF7。在感染了重组病毒的Sf9细胞中检测到分子量为 46kD的ORF7基因的GST融合蛋白表达产物 ,能被猪抗PRRSVB13 株多克隆血清所特异识别。 展开更多
关键词 猪生殖和呼吸综合征病毒 PRRSV orf7基因 测序 杆状病毒表达载体 表达
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福建地区猪繁殖与呼吸综合征ORF7基因遗传变异分析 被引量：4
14
作者 刘建奎 魏春华 +2 位作者 戴爱玲 李晓华 杨小燕 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第10期17-19,23,共4页
为了解福建地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行毒株的分子生物学特性与变异规律,收集了福建省不同地区的12株PRRSV,并对其ORF7基因进行遗传变异分析。结果表明,福建地区存在欧洲型PRRS和美洲型PRRS,10株为美洲型PRRSV,与VR-2332、... 为了解福建地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行毒株的分子生物学特性与变异规律,收集了福建省不同地区的12株PRRSV,并对其ORF7基因进行遗传变异分析。结果表明,福建地区存在欧洲型PRRS和美洲型PRRS,10株为美洲型PRRSV,与VR-2332、JXA1等美洲型参考毒株的氨基酸的同源性为89.5%-100%,与欧洲代表毒株LV的氨基酸的同源性分别为59.5%-63.6%。而FJ-11、FJ-12 2株分离株为欧洲型PRRSV,与欧洲代表毒株LV的氨基酸的同源性分别为91.4%、92.2%,而与VR-2332、CH-1a等美洲参考毒株的氨基酸的同源性为60.3%-64.5%。美洲型PRRSV ORF7编码N蛋白氨基酸虽然发生了变异,但相对保守。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf7基因 遗传变异
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猪源冠状病毒ORF3和ORF7的克隆及特性分析 被引量：3
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作者 李建强 柳纪省 +5 位作者 程杰 兰喜 胡永浩 吴润 殷相平 李宝玉 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第6期1-7,共7页
参照GenBank中Purdue株全序列对TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)TS株的ORF3和ORF7各设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增分别获得了1 487 bp和516 bp大小的两个片段,与预期结果大小相符.TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3a核苷酸... 参照GenBank中Purdue株全序列对TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)TS株的ORF3和ORF7各设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增分别获得了1 487 bp和516 bp大小的两个片段,与预期结果大小相符.TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3a核苷酸序列同源性分别为99.1%、93.0%、95.9%、94.4%,相应的氨基酸同源性分别为97.3%、87.8%、93.2%、91.8%,TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3b核苷酸序列同源性分别为99.5%、98.5%、97.0%、97.8%,相应氨基酸的同源性分别为98.4%、96.3%、94.3%、95.8%,而TS株与PRCVIA1894株的ORF3b核苷酸和氨基酸同源性分别为96.6%和93.9%.TS株ORF7没有发生缺失且和其他毒株有很高的同源性.结果表明:TGEV非结构蛋白高变区在ORF3a第192个碱基至终止密码子之间,TGEV和PRCV在编码ORF3b氨基酸的数量和RNA酶结合位点上有一定的差异. 展开更多
关键词 猪源冠状病毒 传染性胃肠炎病毒 ORF3 orf7 克隆
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猪繁殖和呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆与序列分析 被引量：2
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作者 吴国平 刘冰心 +2 位作者 郭川 曹敏杰 苏文金 《集美大学学报（自然科学版）》 CAS 2006年第3期217-222,共6页
根据猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)已发表的核苷酸序列,设计了1对特异性引物P1/P2,用RT-PCR扩增了PRRSV福建毒株FJ-1和FJ-2的全长核衣壳蛋白基因(ORF7),将扩增产物连接到pUCm-T载体并转化大肠杆菌DH10B,提取阳性重组质粒进行序列测定... 根据猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)已发表的核苷酸序列,设计了1对特异性引物P1/P2,用RT-PCR扩增了PRRSV福建毒株FJ-1和FJ-2的全长核衣壳蛋白基因(ORF7),将扩增产物连接到pUCm-T载体并转化大肠杆菌DH10B,提取阳性重组质粒进行序列测定与分析.结果表明:FJ-1和FJ-2毒株ORF7基因均为372 bp,编码123个氨基酸,与美洲型参考毒株VR-2332及欧洲型参考毒株LV的核苷酸同源性分别为95.16%,94.35%和61.40%,60.65%,其推导的氨基酸同源性分别为95.93%,95.12%和56.49%,55.73%.研究表明,福建流行的FJ-1和FJ-2属于美洲型PRRSV毒株. 展开更多
关键词 PRRSV 福建毒株 orf7 序列分析
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两株高致病性PRRSV ORF6和ORF7基因克隆及序列分析 被引量：5
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作者 时建立 李俊 +3 位作者 徐绍建 赵鸿雁 张秀美 王金宝 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第1期39-43,共5页
应用RT—PCR方法从实验室分离的两株高致病性PRRSV SX、ZQ株中扩增出ORF6和ORF7，将其分别克隆、测序。用DNAStar软件分析所测序列，并与VR-2332株、LV株、周边国家及国内分离株进行核苷酸和推导氨基酸同源性比较，并绘制系统进化树，结... 应用RT—PCR方法从实验室分离的两株高致病性PRRSV SX、ZQ株中扩增出ORF6和ORF7，将其分别克隆、测序。用DNAStar软件分析所测序列，并与VR-2332株、LV株、周边国家及国内分离株进行核苷酸和推导氨基酸同源性比较，并绘制系统进化树，结果ORF6、ORF7核苷酸与北美洲型的同源性为91．1％～100％，与欧洲型的同源性为66．2％～70．7％，推导氨基酸与北美洲型的同源性为91．2％～100％，与欧洲型的同源性为62．3％～82．3％。证明新分离到的PRRSVSX株、ZQ株仍属北美洲型。SX株ORF6、ORF7核苷酸与国内新分离到的高致病性PRRSV JXA1株同源性分别为99．8％、100％；ZQ株ORF6、ORF7核苷酸与国内新分离到的高致病性PRRSV JXA1株同源性分别为99．6％、99．7％。 展开更多
关键词 高致病性PRRSV ORF6 orf7 克隆 序列分析
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PRRSV云南A06株ORF5和ORF7基因的克隆与序列分析 被引量：2
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作者 曾少灵 林庆燕 +8 位作者 花群义 张彩虹 阮周曦 杨俊兴 孙洁 秦智锋 曹琛福 陈兵 吕建强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第3期12-17,共6页
设计2对引物分别扩增PRRSV的ORF5和ORF7基因,对从云南某猪场分离到的毒株A06进行RT-PCR检测,得到2条特异性扩增带,克隆至pMD18-T载体并测序。将A06株的ORF5和ORF7基因及其推断氨基酸序列分别与PRRSV欧洲型代表株LV、美洲型代表株VR2332... 设计2对引物分别扩增PRRSV的ORF5和ORF7基因,对从云南某猪场分离到的毒株A06进行RT-PCR检测,得到2条特异性扩增带,克隆至pMD18-T载体并测序。将A06株的ORF5和ORF7基因及其推断氨基酸序列分别与PRRSV欧洲型代表株LV、美洲型代表株VR2332和7株中国分离的美洲型毒株相应基因进行核苷酸和氨基酸序列比对分析。结果显示,A06株属于美洲型,其ORF5和ORF7基因及推断氨基酸与我国2006年分离的4株HP-PRRSV代表株的相似性高达98%～99%,与欧洲型代表株LV的相似性只有56%～64%。分别构建了以上毒株ORF5和ORF7基因的亲缘关系图谱,反映了A06株ORF5和ORF7基因的进化位置,完成2个基因的遗传变异分析。 展开更多
关键词 PRRSV ORF5基因 orf7基因 亲缘关系图谱
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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因原核表达载体的构建及序列分析 被引量：3
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作者 张永富 马国文 +4 位作者 刘月焕 刘永宏 李明刚 张秋雨 刘锋 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第12期25-27,30,共4页
根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计合成一对引物,应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因(N基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF7重组质粒转化DH5a宿主菌... 根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计合成一对引物,应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因(N基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF7重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF7基因序列进行分析。结果表明,ORF7基因的原核表达载体构建成功。ORF7基因序列与美洲型的ORF7基因核苷酸同源性为92.8%～99.7%,与LV株的相应基因核苷酸同源性为65.3%;推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为92.0%～99.2%,与LV株的同源性为65.3%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。本研究为N蛋白的进一步研究和制备诊断性抗原奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf7基N 原核表达载体
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猪繁殖与呼吸综合征病毒S-1株ORF5和ORF7基因的克隆及变异分析 被引量：2
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作者 张春玲 张婉华 +5 位作者 臧克伟 王英 蒋凤英 邹勇 李春华 何锡忠 《上海农业学报》 CSCD 2008年第2期40-45,共6页
PRRSV S-1株经Marc-145复苏后,通过RT-PCR扩增了ORF5和ORF7基因。利用酶切位点将2个基因分别连接到原核表达载体PET-32C中,筛选阳性克隆送测序,序列分析表明:PRRSV S-1株ORF5基因变异性较高,与VR-2332毒株和CH-1 a毒株的同源性分别是:... PRRSV S-1株经Marc-145复苏后,通过RT-PCR扩增了ORF5和ORF7基因。利用酶切位点将2个基因分别连接到原核表达载体PET-32C中,筛选阳性克隆送测序,序列分析表明:PRRSV S-1株ORF5基因变异性较高,与VR-2332毒株和CH-1 a毒株的同源性分别是:核苷酸同源性为91%和89%,氨基酸同源性是87%和85%;ORF7基因相对保守,核苷酸的同源性分别是97%和94%,氨基酸的同源性分别是95%和93%。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 orf7基因 变异分析
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