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siRNA干扰对鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF57基因表达的影响 被引量:2
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作者 金李萍 潘晓艺 +7 位作者 蔺凌云 姚嘉赟 曹铮 尹文林 赖迎迢 陶家发 刘忆瀚 沈锦玉 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期537-544,共8页
研究通过在异育银鲫脊髓细胞系(Spinal cord tissue cell lines of Carassius auratus gibelio,CSC)中对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)ORF57进行RNA干扰,以探究其对CyHV-2病毒复制的影响。首先,以FAM标记的异育银鲫β-... 研究通过在异育银鲫脊髓细胞系(Spinal cord tissue cell lines of Carassius auratus gibelio,CSC)中对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)ORF57进行RNA干扰,以探究其对CyHV-2病毒复制的影响。首先,以FAM标记的异育银鲫β-actin的siRNA进行CSC细胞转染条件的优化,再将针对CyHV-2 ORF57基因设计的3条siRNA,转染CSC细胞,并进行病毒感染,评估siRNA对病毒复制和致细胞病变的影响。转染条件优化结果显示,在siRNA浓度为80 nmol/L,转染液维持24h后更换维持液,β-actin基因表达量最低且观察到的荧光点数量最多。而ORF57-siRNAs干扰结果显示,ORF57-siRNA-2组表现出了较强的抑制效果,在接毒48h时,ORF57-siRNA-2处理组的ORF57基因表达量降到相对于Mock组的33.55%(P<0.01),并且各ORF57-siRNA组都表现出了延缓CyHV-2致细胞病变的时间和强度,抑制时间可达120h。TCID_(50)结果显示,不同组的ORF57-siRNAs均能降低病毒滴度,其中ORF57-siRNA-2将病毒原液TCID_(50)108.487/mL下降至106.776/mL。研究结果表明,干扰ORF57的表达可大大降低CyHV-2的致细胞病变力和复制率,ORF57在CyHV-2复制与致细胞病变中起重要作用。本研究为CyHV-2基于siRNA技术的抗病毒治疗和弱毒株的改造提供了借鉴。 展开更多
关键词 鲤疱疹病毒Ⅱ型 RNA干扰 orf57 小干扰RNA 异育银鲫脊髓细胞系 TCID_(50)
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羊痘病毒3个结构蛋白的克隆与抗原性分析 被引量:2
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作者 颜新敏 吴国华 +3 位作者 李健 朱海霞 朱彩珠 张强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期889-891,共3页
为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表... 为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表达产物经western blot分析,羊痘病毒特异性血清只能识别融合蛋白ORF57和ORF95,不能识别ORF117。本研究为重组诊断抗原的筛选和亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 orf57 ORF95 ORF117 原核表达 抗原性分析
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Towards Better Understanding of KSHV Life Cycle: from Transcription and Posttranscriptional Regulations to Pathogenesis 被引量:4
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作者 Lijun Yan Vladimir Majerciak +1 位作者 Zhi-Ming Zheng Ke Lan 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2019年第2期135-161,共27页
Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus(KSHV), also known as human herpesvirus-8(HHV-8), is etiologically linked to the development of Kaposi’s sarcoma, primary effusion lymphoma, and multicentric Castleman’s disea... Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus(KSHV), also known as human herpesvirus-8(HHV-8), is etiologically linked to the development of Kaposi’s sarcoma, primary effusion lymphoma, and multicentric Castleman’s disease. These malignancies often occur in immunosuppressed individuals, making KSHV infection-associated diseases an increasing global health concern with persistence of the AIDS epidemic. KSHV exhibits biphasic life cycles between latent and lytic infection and extensive transcriptional and posttranscriptional regulation of gene expression. As a member of the herpesvirus family, KSHV has evolved many strategies to evade the host immune response, which help the virus establish a successful lifelong infection. In this review, we summarize the current research status on the biology of latent and lytic viral infection, the regulation of viral life cycles and the related pathogenesis. 展开更多
关键词 Kaposi's sarcoma-associated HERPESVIRUS (KSHV) Human HERPESVIRUS 8 (HHV-8)- TRANSCRIPTION Posttranscriptonal regulation orf57
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人源抗菌肽AP-57的原核表达与纯化 被引量:1
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作者 马先君 杨梅佳 仝爱平 《科学技术与工程》 北大核心 2016年第23期248-252,共5页
构建AP-57/C10orf99重组表达载体,并在BL21中进行重组蛋白的表达。经纯化获得高纯度的AP-57,从而为其功能性研究提供基础。通过合成AP-57基因序列,连接入p ET32质粒中与Trx标签和His标签融合,转化进DH5α,经筛选、鉴定为阳性克隆菌落中... 构建AP-57/C10orf99重组表达载体,并在BL21中进行重组蛋白的表达。经纯化获得高纯度的AP-57,从而为其功能性研究提供基础。通过合成AP-57基因序列,连接入p ET32质粒中与Trx标签和His标签融合,转化进DH5α,经筛选、鉴定为阳性克隆菌落中提取的质粒转入基因工程化BL21中进行表达。通过优化表达条件如温度、诱导时间和诱导剂(IPTG)浓度来提高重组蛋白表达量。最后,通过亲和层析浓缩获得融合蛋白,去标签和阳离子交换层析、脱盐步骤获得纯的AP-57蛋白。结果是成功构建了AP-57的诱导表达和纯化体系:当菌液OD为0.6~0.8时,用0.5 mmol/LIPTG,25℃,诱导培养6 h;通过纯化后获得的样品经质谱和SDS-PAGE鉴定为AP-57且含一个链内二硫键。实验建立了一条完整的AP-57制备工艺,为后续其功能性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 AP-57/C10orf99 原核表达 蛋白纯化
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