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血浆Septin9和C9orf50 DNA甲基化联合常规肿瘤标志物检测在结直肠癌诊断中的价值研究
1
作者 杨静 高国生 +3 位作者 曹跃鹏 吕定丰 应琪明 傅晓梅 《浙江医学》 2026年第6期604-609,615,共7页
目的探讨血浆Septin9与C9orf50 DNA甲基化联合常规肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)在结直肠癌(CRC)诊断中的临床价值。方法回顾性收集2022年1月至2024年1月宁波大学附属第一医院收治的163例经病理检查确诊的CRC患者(CRC... 目的探讨血浆Septin9与C9orf50 DNA甲基化联合常规肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)在结直肠癌(CRC)诊断中的临床价值。方法回顾性收集2022年1月至2024年1月宁波大学附属第一医院收治的163例经病理检查确诊的CRC患者(CRC组)、结直肠良性息肉患者78例(良性息肉组)和健康体检者50名(正常对照组)。检测3组对象血浆Septin9与C9orf50 DNA甲基化水平及CEA、CA19-9水平,评估其单项及联合检测对CRC的诊断效能,并分析DNA甲基化水平与患者病理特征的关联。结果CRC组的CEA水平及阳性率、CA19-9水平均高于正常对照组和良性息肉组(均P<0.05),而3组对象CA19-9阳性率比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。CRC组Septin9与C9orf50 DNA甲基化阳性率均显著高于对照组,Ct值均显著低于对照组(均P<0.001)。ROC曲线分析发现,Septin9与C9orf50单独诊断CRC的AUC分别为0.792和0.811,均优于CEA(0.681)与CA19-9(0.642)。联合检测方面,Septin9+C9orf50联合诊断CRC的AUC达0.875,CEA+CA19-9为0.691;4项指标联合检测诊断效能最佳(AUC为0.890,灵敏度为0.718,特异度为0.980)。此外,DNA甲基化阳性率在低分化、有转移、脉管癌栓、神经侵犯及临床分期或肿瘤出芽级别较高患者中均显著升高(均P<0.05);年龄≥65岁及肿瘤浸润至浆膜周围者Septin9 DNA甲基化阳性率均显著升高(均P<0.05)。结论血浆Septin9与C9orf50 DNA甲基化联合CEA和CA19-9检测可在一定程度上显著提升CRC的诊断准确性,Septin9与C9orf50 DNA甲基化水平与肿瘤侵袭性有一定的相关性,具有良好的临床应用前景。 展开更多
关键词 结直肠癌 Septin9 DNA甲基化 C9orf50 DNA甲基化 联合诊断
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HHV-8 ORF50启动子区序列分离、鉴定及在293细胞中启动活性分析 被引量：3
2
作者 卢春 黄丽 +1 位作者 曾怡 徐亚林 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期523-526,共4页
目的:分离和鉴定人类疱疹病毒8型(HHV-8)ORF50基因上游启动子区序列,评价其在293细胞中启动活性。方法:以佛波酯(TPA)刺激的BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增HHV-8 ORF50启动子区序列,克隆进pGL-3基本载体中虫荧光素酶(Luciferase)报告基... 目的:分离和鉴定人类疱疹病毒8型(HHV-8)ORF50基因上游启动子区序列,评价其在293细胞中启动活性。方法:以佛波酯(TPA)刺激的BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增HHV-8 ORF50启动子区序列,克隆进pGL-3基本载体中虫荧光素酶(Luciferase)报告基因上游多克隆位点,分别构建含正反双向ORF50启动子重组报告质粒,并分别转染293细胞,作Lu-ciferase活性检测,计算相对Luciferase活性单位(RLU)。结果:①克隆的HHV-8 ORF50启动子区序列长655碱基(bp),含多个潜在推测AP1、SP1和ERE等转录因子结合序列;②ORF50启动子与正常pGL-3基本载体相比,其RLU增加了26.3倍;③TPA刺激后ORF50启动子与刺激前相比启动活性增加了4.1倍。结论:HHV-8 ORF50启动子区序列在293细胞中具有较强的启动活性;TPA可以作为一有效的阳性对照刺激物用于进一步鉴定ORF50启动子特性。 展开更多
关键词 人类疱疹病毒8型 orf50启动子 启动子活性
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卡波西肉瘤中HHV-8 ORF50启动子基因甲基化的研究 被引量：1
3
作者 吴曹英 张德志 +1 位作者 邹云敏 普雄明 《现代肿瘤医学》 CAS 2013年第7期1434-1436,共3页
目的:探讨人类疱疹病毒8型(HHV-8)ORF50启动子区在经典型卡波西肉瘤(经典型KS)与艾滋相关型卡波西肉瘤(AIDS-KS)中甲基化状态的差异。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)检测经典型KS与AIDS-KS的甲基化状态,分析检测结果。结果:37例经典型KS... 目的:探讨人类疱疹病毒8型(HHV-8)ORF50启动子区在经典型卡波西肉瘤(经典型KS)与艾滋相关型卡波西肉瘤(AIDS-KS)中甲基化状态的差异。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)检测经典型KS与AIDS-KS的甲基化状态,分析检测结果。结果:37例经典型KS中14例发生甲基化,甲基化阳性率为38%;18例AIDS-KS中5例发生甲基化,甲基化阳性率为28%。两者甲基化状态的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:经典型KS与AIDS-KS中HHV-8 ORF50启动子的甲基化状态无明显的差异,HHV-8ORF50启动子的甲基化状态可能与HIV感染无关。 展开更多
关键词 卡波西肉瘤 人类疱疹病毒8型 orf50 甲基化特异性PCR
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HSV-1作用于KSHV ORF50启动子区中特异性应答位点序列的初寻 被引量：2
4
作者 程伟 郝婷婷 +5 位作者 王子盾 朱小飞 冯宁翰 华立新 秦娣 卢春 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期595-600,共6页
目的:构建卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)ORF50启动子系列截短序列克隆,初步寻找HSV-1作用于KSHV ORF50启动子区中特异性应答位点序列。方法:以KSHV基因组为模板,PCR扩增KSHVORF50启动子系列... 目的:构建卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)ORF50启动子系列截短序列克隆,初步寻找HSV-1作用于KSHV ORF50启动子区中特异性应答位点序列。方法:以KSHV基因组为模板,PCR扩增KSHVORF50启动子系列截短序列,克隆至含有虫荧光素酶(Luciferase)报告基因的基本载体pGL-3中,构建含ORF50启动子系列截短序列的重组Luciferase报告质粒。系列重组报告质粒经酶切鉴定和序列测定分析后,分别转染单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染后的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),进行Luciferase活性检测,计算并比较相对Luciferase活性单位(Relative luciferase activity unit,RLU)。结果:成功分离、克隆KSHV ORF50启动子系列截短序列;HSV-1感染随后转染重组质粒p50-95、p50-46和p50-17与转染p50-1500、p50-750、p50-375及p50-185相比,Vero细胞中Luciferase活性显著下降。结论:成功构建了含KSHV ORF50启动子系列截短序列的重组Luciferase报告质粒;HSV-1所对应的、能够主导ORF50启动子活性的最小顺式调控区位于-185 bp和-95 bp之间。 展开更多
关键词 KSHV HSV-1 orf50启动子 虫荧光素酶
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人类疱疹病毒8型ORF50基因截短片段和vIL-6全长基因的克隆、表达及表达产物的纯化 被引量：1
5
作者 徐静 朱晓蕾 +1 位作者 秦娣 卢春 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期303-307,共5页
目的:克隆人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)ORF50截短基因和编码病毒IL-6(vIL-6)全长基因,将其置于大肠杆菌中作融合表达,并纯化融合表达的vIL-6。方法:分别以本实验室先前构建的重组质粒pcDNA3.1+ORF50和pcD-NA3.1+vIL-6为... 目的:克隆人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)ORF50截短基因和编码病毒IL-6(vIL-6)全长基因,将其置于大肠杆菌中作融合表达,并纯化融合表达的vIL-6。方法:分别以本实验室先前构建的重组质粒pcDNA3.1+ORF50和pcD-NA3.1+vIL-6为模板,PCR扩增目的基因片段,克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建含HHV-8ORF50截短基因的重组原核表达质粒pORF50-C1,pORF50-C2,pORF50-C3和含vIL-6全长基因的重组原核表达质粒pvIL-6。重组质粒经酶切鉴定和核酸序列测定正确后转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。用glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化vIL-6表达产物。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western blot检测GST融合蛋白的表达和纯化情况。结果:核酸序列分析的结果表明,克隆的序列与基因数据库中已登记的HHV-8相应序列呈现100%同源;IPTG诱导后的菌体,经SDS-PAGE,显示有相应大小的融合表达蛋白产生。Western blot亦在预期的位置检测到特异性条带。结论:在E.coli中获得了正确表达的HHV-8ORF50基因3个截短片段和vIL-6全长基因,并成功纯化了vIL-6融合蛋白。 展开更多
关键词 人类疱疹病毒8型 orf50截短基因 vIL-6全长基因 原核表达 亲和层析
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血浆C9orf50基因甲基化检测对结直肠癌诊断价值的研究 被引量：2
6
作者 冯晨曦 赵国栋 费素娟 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2022年第9期1027-1032,共6页
目的探讨并比较血浆C9orf50基因甲基化与多种血清肿瘤标志物在结直肠癌临床诊断中的价值。方法选取2020年9月至2021年4月于徐州医科大学附属医院就诊的行结直肠镜检查的患者116例,结直肠癌患者均行结直肠癌根治术,根据病理结果分为三组... 目的探讨并比较血浆C9orf50基因甲基化与多种血清肿瘤标志物在结直肠癌临床诊断中的价值。方法选取2020年9月至2021年4月于徐州医科大学附属医院就诊的行结直肠镜检查的患者116例,结直肠癌患者均行结直肠癌根治术,根据病理结果分为三组:结直肠癌组48例,结直肠息肉组27例,肠镜检查未见异常者作为健康对照组41例,比较三组患者血浆C9orf50基因甲基化、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、糖类抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)、糖类抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9,CA19-9)的水平,通过χ^(2)检验或Fisher检验比较三组患者各项指标的阳性检出率及结直肠癌患者血浆C9orf50基因甲基化阳性率与其临床病理特征的关系,利用ROC曲线评价血浆C9orf50基因甲基化、CEA、CA125、CA19-9对结直肠癌的诊断价值。结果结直肠癌患者血浆C9orf50基因甲基化Ct值明显低于结直肠息肉组和健康对照组(P<0.001);在结直肠癌组患者中,血浆C9orf50基因甲基化的阳性检出率为66.67%,高于CEA(39.58%)、CA125(4.17%)、CA19-9(18.75%)中的任一指标及三项肿瘤标志物联合检测的阳性率(52.08%),当四项指标联合检测时,阳性检出率可提高至81.25%;血浆C9orf50基因甲基化的检出率不受患者的年龄、性别、肿瘤位置、淋巴结转移、远处转移、临床分期等因素的影响(P>0.05),仅与肿瘤的浸润深度有相关性(P<0.05)。利用ROC曲线评估各指标对结直肠癌的诊断价值,结果显示,血浆C9orf50基因甲基化检测对结直肠癌的诊断价值优于CEA、CA125、CA19-9任一单一指标及三项肿瘤标志物联合检测。结论血浆C9orf50基因甲基化检测对结直肠癌的诊断价值优于上述三项肿瘤标志物,可能成为结直肠癌临床筛查的一项新型血液学指标。 展开更多
关键词 结直肠癌 DNA甲基化 C9orf50基因 血清肿瘤标志物 诊断
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