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绵羊痘病毒甘肃流行株ORF121基因的克隆及序列分析 被引量:8
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作者 陈轶霞 才学鹏 +3 位作者 郑亚东 张冬峰 骆学农 乔自林 《畜牧与兽医》 北大核心 2009年第4期61-63,共3页
从甘肃景泰疑似羊痘绵羊的皮肤组织中提取基因组DNA,PCR扩增糖蛋白ORF121基因。序列分析表明,该基因由519个核苷酸组成,编码172个氨基酸,分子量为19.9 kua,序列中A+T含量占74.95%,G+C含量仅占25.05%。甘肃景泰株ORF121基因同绵羊痘病毒... 从甘肃景泰疑似羊痘绵羊的皮肤组织中提取基因组DNA,PCR扩增糖蛋白ORF121基因。序列分析表明,该基因由519个核苷酸组成,编码172个氨基酸,分子量为19.9 kua,序列中A+T含量占74.95%,G+C含量仅占25.05%。甘肃景泰株ORF121基因同绵羊痘病毒参考株之间的核苷酸同源性高达99%;与疙瘩皮肤病病毒和山羊痘病毒参考株之间的同源性分别为97%和95.6%。结构预测结果显示,ORF121蛋白具有两个N-糖基化位点和一个跨膜区,且具有极强的亲水性。以上结果表明,ORF121蛋白在不同的绵羊痘病毒流行株之间非常保守,具有潜在的疫苗或/和诊断价值。 展开更多
关键词 绵羊痘病毒 orf121 糖蛋白 序列分析
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绵羊痘病毒ORF121基因的序列分析及其B细胞表位预测 被引量:1
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作者 陈轶霞 乔自林 +4 位作者 刘俊林 王明明 陆会宁 郑亚东 陈智华 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第2期16-18,共3页
选取GenBank上4株不同绵羊痘毒株ORF121基因序列,采用DNASTAR软件对该基因序列进行同源性分析,并以B细胞表位分析参数及蛋白质二级结构分析数据,综合预测ORF121蛋白B细胞表位。结果表明:4株不同绵羊痘毒株ORF121基因核苷酸序列的同... 选取GenBank上4株不同绵羊痘毒株ORF121基因序列,采用DNASTAR软件对该基因序列进行同源性分析,并以B细胞表位分析参数及蛋白质二级结构分析数据,综合预测ORF121蛋白B细胞表位。结果表明:4株不同绵羊痘毒株ORF121基因核苷酸序列的同源性为99%;在ORF121蛋白的肽链中,35~46、76~82、160~167区段亲水性强,35~45、54~83、90~124、130~139、144~158和160~167区段柔韧性好,37~45、112~116、129~137和143~167区段抗原指数高,33~45、78~83和159~167区段表面可及性高,30~57和151~170区段可形成一定的空间构象。结果说明ORF121基因在不同的绵羊痘病毒流行株之间非常保守,ORF121蛋白35~45、160~167区段可能是B细胞表位优势区,具有潜在的疫苗或/和诊断价值。 展开更多
关键词 绵羊痘病毒 orf121 序列分析 B细胞表位
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家蚕核型多角体病毒orf121克隆以及非翻译区分析
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作者 郝碧芳 王猛 沈兴家 《西北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2011年第4期87-90,共4页
家蚕核型多角体病毒(BmNPV)orf121是Ac145的同源基因,同为杆状病毒11K基因家族,但其功能尚不明确.克隆了BmNPVorf121基因并对其侧翼序列以及转录时相进行分析.结果发现orf121与GenBank发表的T3株一致,orf121编码的蛋白N端含有一段疏水... 家蚕核型多角体病毒(BmNPV)orf121是Ac145的同源基因,同为杆状病毒11K基因家族,但其功能尚不明确.克隆了BmNPVorf121基因并对其侧翼序列以及转录时相进行分析.结果发现orf121与GenBank发表的T3株一致,orf121编码的蛋白N端含有一段疏水性很强的氨基酸,C端有一个几丁质结合域基序(C6基序);orf121的转录产物在病毒感染后6 h可以检测到,一直持续到病毒感染末期,推测orf121是一个早期基因;3 RACE分析显示在orf121终止密码子下游111个核苷酸处有一个AATAAA的加尾信号,5 RACE分析表明其转录起始位点位于起始密码子上游120 bp处. 展开更多
关键词 家蚕 核型多角体病毒 orf121 非翻译区
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Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF121蛋白的多克隆抗体制备及鉴定 被引量:7
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作者 余琳 吕利群 王浩 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1463-1471,共9页
针对CyHV-2病毒ORF121基因(GenBank:AFJ20543.1)进行原核表达系统的构建,将纯化重组蛋白作为抗原来免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,应用该抗体开展CyHV-2病毒诊断及其感染机制研究。以CyHV-2病毒感染细胞上清液为扩增模板,扩增ORF121基... 针对CyHV-2病毒ORF121基因(GenBank:AFJ20543.1)进行原核表达系统的构建,将纯化重组蛋白作为抗原来免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,应用该抗体开展CyHV-2病毒诊断及其感染机制研究。以CyHV-2病毒感染细胞上清液为扩增模板,扩增ORF121基因构建至pGEX-4T原核表达载体,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达rORF121重组蛋白,利用尿素纯化后免疫6周龄BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,CyHV-2病毒ORF121基因可在原核表达系统中高效表达目的重组蛋白rORF121,经SDS-PAGE分析大小约为60 ku,主要以不可溶的包涵体存在。利用尿素溶解rORF121蛋白免疫BALB/c小鼠获得抗ORF121蛋白的多克隆抗体,Western Blot实验显示,该抗体可特异性识别CyHV-2病毒感染RyuF-2细胞样品。研究表明,利用CyHV-2感染RyuF-2细胞后,本研究制备的抗ORF121蛋白的多克隆抗体能够通过间接免疫荧光实验特异性识别CyHV-2病毒感染的细胞样品。本研究制备的抗ORF121蛋白的多克隆抗体,能够为CyHV-2病毒诊断技术的构建以及深入开展CyHV-2病毒感染机制提供良好的技术基础。 展开更多
关键词 Ⅱ型鲤疱疹病毒 orf121 原核表达 多克隆抗体 间接免疫荧光检测
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山羊痘病毒疫苗株和野毒株ORF121基因比较分析 被引量:1
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作者 赵俊皓 张克山 +4 位作者 卢炳州 王文芳 郑海学 刘湘涛 胡永浩 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期648-652,共5页
山羊痘(goat pox,GP)是由山羊痘病毒(goat poxvirus,GPV)感染引起山羊的一种烈性传染病,弱毒疫苗接种是预防和控制GP的重要手段之一。ORF121是GPV编码和GPV转录、复制及细胞内包装相关的基因之一,在GPV突破宿主细胞免疫系统过程中扮演... 山羊痘(goat pox,GP)是由山羊痘病毒(goat poxvirus,GPV)感染引起山羊的一种烈性传染病,弱毒疫苗接种是预防和控制GP的重要手段之一。ORF121是GPV编码和GPV转录、复制及细胞内包装相关的基因之一,在GPV突破宿主细胞免疫系统过程中扮演重要角色。为比较分析GPV疫苗弱毒株和野毒株编码的ORF121基因特征,本研究扩增并测定了GPV疫苗株和野毒株的ORF121基因序列,比较分析了二者核酸水平和氨基酸水平的变异及其蛋白质二、三级结构差异。结果表明,GPV疫苗弱毒株和野毒株编码的ORF121基因核苷酸序列相似性为97.9%,氨基酸序列相似性为98.2%。本研究结果为揭示GPV异原宿主致弱的机制积累了资料。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 orf121基因 疫苗株 野毒株
原文传递
大黄鱼虹彩病毒ORF 121R蛋白的表达及亚细胞定位
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作者 吴彩霞 刘晓东 +6 位作者 池洪树 谢岸桦 陈秀霞 许斌福 郑在予 潘滢 龚晖 《福建农业学报》 北大核心 2025年第6期577-584,共8页
【目的】解析大黄鱼虹彩病毒(large yellow croaker iridovirus,LYCIV)开放阅读框(Open reading frame,ORF)121R蛋白的免疫原性与亚细胞定位,探究其在病毒致病机制中的潜在作用。【方法】以LYCIV ORF121R蛋白为研究对象,通过生物信息学... 【目的】解析大黄鱼虹彩病毒(large yellow croaker iridovirus,LYCIV)开放阅读框(Open reading frame,ORF)121R蛋白的免疫原性与亚细胞定位,探究其在病毒致病机制中的潜在作用。【方法】以LYCIV ORF121R蛋白为研究对象,通过生物信息学分析手段,进行同源蛋白之间的序列对比,并预测其亚细胞定位;将目的基因通过同源重组方法分别克隆至pET32a及pEGFP-N1载体中,构建重组质粒ORF 121R-His和ORF 121R-EGFP;诱导表达并纯化ORF121R-His重组蛋白,将其免疫小鼠制备多克隆抗体,并通过ELISA、Western-blotting和细胞间接免疫荧光等手段评估抗体效价及特异性;以ORF 121R-EGFP质粒转染EPC细胞后,利用激光共聚焦显微镜观察ORF121R-EGFP的亚细胞定位。【结果】LYCIV ORF 121R蛋白与传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)中具有高免疫原性的ORF 117R蛋白氨基酸序列一致性为79.96%,且预测定位于细胞质。orf121R全长1377 bp,将其分别克隆至pET32a及pEGFP-N1载体中,成功构建重组质粒ORF 121R-His和ORF 121REGFP。经亲和纯化获得可溶性ORF 121R-His重组蛋白,其分子量为72.6 kDa,用该重组蛋白制备的多克隆抗体效价为1∶128000,可特异性识别天然病毒蛋白;ORF 121R-EGFP在鲤上皮瘤(Epithelioma papulosum cyprini,EPC)细胞中呈现胞质特异性分布,荧光信号均匀富集于核周区域。【结论】LYCIV ORF 121R主要定位于细胞质中,该蛋白良好的免疫原性与特异性,使其成为潜在的疫苗候选抗原和诊断靶标,为开发针对LYCIV的特异性防控策略提供了新的可能性。 展开更多
关键词 大黄鱼虹彩病毒 ORF 121R蛋白 蛋白表达 亚细胞定位
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