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绵羊痘病毒甘肃流行株糖蛋白基因ORF117的克隆及其原核表达 被引量:8
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作者 王晓霞 郑亚东 +5 位作者 骆学农 陈轶霞 李辉 侯俊玲 于三科 才学鹏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期337-341,共5页
以甘肃景泰疑似羊痘(SP)患病绵羊的皮肤组织中提取的总DNA为模板,经PCR扩增获得SP病毒(SPV)ORF117基因。测序后分析表明,该基因由591个核苷酸组成,编码196个氨基酸;将该基因克隆于pET32载体中,构建重组表达质粒pET-ORF117,用IPTG在不同... 以甘肃景泰疑似羊痘(SP)患病绵羊的皮肤组织中提取的总DNA为模板,经PCR扩增获得SP病毒(SPV)ORF117基因。测序后分析表明,该基因由591个核苷酸组成,编码196个氨基酸;将该基因克隆于pET32载体中,构建重组表达质粒pET-ORF117,用IPTG在不同条件下诱导表达,确定其最佳表达条件。SDS-PAGE电泳分析表明,表达的融合蛋白分子质量为42 ku,主要以包涵体的形式存在。在IPTG浓度为0.1 mM、温度为37℃、诱导6 h时表达量最大,约占菌体蛋白的30%。Western blot试验表明,融合蛋白可被羊痘阳性血清识别,这为研究其在新型疫苗和诊断的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊痘病毒 orf117基因 克隆 原核表达
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山羊痘病毒疫苗株ORF31/ORF117/ORF72编码蛋白的原核表达及抗原性分析 被引量:2
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作者 邵佳 闫丰超 +4 位作者 窦永喜 朱学亮 王秋霞 骆学农 许立华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期930-935,共6页
为了研究羊痘病毒蛋白的功能,将羊痘病毒的DNA结合核衣壳蛋白(ORF31)、融合蛋白(ORF117)、蛋白磷酸酶(ORF72)3个基因分别克隆至pET-30a(+)原核表达载体后,转化大肠杆菌细胞。重组表达菌经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋... 为了研究羊痘病毒蛋白的功能,将羊痘病毒的DNA结合核衣壳蛋白(ORF31)、融合蛋白(ORF117)、蛋白磷酸酶(ORF72)3个基因分别克隆至pET-30a(+)原核表达载体后,转化大肠杆菌细胞。重组表达菌经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得表达,且大部分以包涵体形式存在,ORF117和ORF72蛋白有少量可溶性蛋白。表达产物经镍柱纯化后进行Western-blot分析,ORF72蛋白能与山羊痘阳性血清反应,证明ORF72蛋白具有免疫反应原性,另外2种蛋白则无反应原性。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 DNA结合核衣壳蛋白(ORF31) 融合蛋白(orf117 蛋白磷酸酶(ORF72) 原核表达 抗原性分析
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斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(SpltMNPV Ⅱ)ORF117基因的结构和功能研究
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作者 刘兴健 江峰 +3 位作者 王石宝 李轶女 张志芳 胡小元 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期66-72,80,共8页
为了研究斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(Splt MNPVⅡ)中ORF117基因(编码GP117蛋白)的结构和功能,根据其核苷酸序列和氨基酸序列进行了生物信息学分析,以此为基础对该基因的启动子活性和转录时相进行分析,表达纯化了GP117蛋白的部分序列以... 为了研究斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(Splt MNPVⅡ)中ORF117基因(编码GP117蛋白)的结构和功能,根据其核苷酸序列和氨基酸序列进行了生物信息学分析,以此为基础对该基因的启动子活性和转录时相进行分析,表达纯化了GP117蛋白的部分序列以制备豚鼠来源多克隆抗体,并利用该抗体对ORF117基因的表达时相和GP117蛋白在细胞中的定位进行了分析。生物信息学分析表明该基因全长1 203 bp,编码400个氨基酸的蛋白质,预测分子量为45.5 k Da,等电点为5.06;启动子活性和转录时相分析结果表明ORF117是一个晚期表达的基因;原核表达抗原免疫制备的多克隆抗体效价可以达到1∶3 200,利用该抗体对其表达时相的分析进一步验证了ORF117为晚期表达基因,免疫荧光检测表明编码的蛋白多存在于细胞质中。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾 核型多角体病毒Ⅱ型 orf117 转录时相分析 表达时相分析
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羊痘病毒3个结构蛋白的克隆与抗原性分析 被引量:2
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作者 颜新敏 吴国华 +3 位作者 李健 朱海霞 朱彩珠 张强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期889-891,共3页
为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表... 为研究羊痘病毒结构蛋白的功能,本研究将羊痘病毒的ORF57、ORF95和ORF117分别克隆至pGEX4T-1原核表达载体后转染到大肠杆菌中。重组表达菌经1 mmol/L的IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果显示3个重组蛋白均在原核细胞中获得有效表达。表达产物经western blot分析,羊痘病毒特异性血清只能识别融合蛋白ORF57和ORF95,不能识别ORF117。本研究为重组诊断抗原的筛选和亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 ORF57 ORF95 orf117 原核表达 抗原性分析
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