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牛结节性皮肤病病毒ORF002蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 张亚岭 景伟 +7 位作者 赵妍 何小兵 房永祥 苏洋 李小明 张慧 景志忠 陈国华 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5817-5825,共9页
本研究旨在建立一种基于牛结节性皮肤病病毒(LSDV)ORF002蛋白的间接ELISA抗体检测方法。通过构建重组质粒pET-30a(+)-ORF002并诱导表达,获得相对分子质量约为13 ku的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot验证后的ORF002蛋白为包被抗原,建立LSD... 本研究旨在建立一种基于牛结节性皮肤病病毒(LSDV)ORF002蛋白的间接ELISA抗体检测方法。通过构建重组质粒pET-30a(+)-ORF002并诱导表达,获得相对分子质量约为13 ku的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot验证后的ORF002蛋白为包被抗原,建立LSDV间接ELISA抗体检测方法并进行条件优化。优化后的间接ELISA条件为:抗原包被浓度2.5μg·mL^(-1),血清稀释度1∶100,二抗稀释度1∶120000。结果判定标准为待检样品OD_(450 nm)值≥标准阳性值×20.34%为阳性,反之为阴性。重复性试验变异系数<10%,与多种病毒阳性血清无交叉反应。该方法具有良好的敏感性、特异性及重复性,适用于LSD感染临床血清样品检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病 orf002 原核表达 间接ELISA
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