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肠道源和口唇源羊口疮病毒ORF128基因的比较分析
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作者 樊月圆 刘泽武 +6 位作者 袁嘉芮 张瑞雪 陈媛媛 周冬雪 段宁 四朗玉珍 富国文 《动物医学进展》 北大核心 2025年第7期1-10,共10页
分析羊口疮病毒(ORFV)肠道源和口唇源锚蛋白ORF128基因和蛋白的差异,为进一步研究该病毒的致病机制奠定基础。对肠道源和口唇源ORFV的ORF128基因PCR扩增后克隆测序,用生物信息学软件对其序列及编码蛋白的二级结构、磷酸化位点和跨膜结... 分析羊口疮病毒(ORFV)肠道源和口唇源锚蛋白ORF128基因和蛋白的差异,为进一步研究该病毒的致病机制奠定基础。对肠道源和口唇源ORFV的ORF128基因PCR扩增后克隆测序,用生物信息学软件对其序列及编码蛋白的二级结构、磷酸化位点和跨膜结构域进行预测和分析。结果表明,肠道源和口唇源ORFV的ORF128基因长度均为1506 bp,编码501个氨基酸;肠道源和口唇源ORF128基因核苷酸序列同源性为98.30%,氨基酸序列同源性为98.40%,存在8个氨基酸突变。氨基酸组成显示,肠道源和口唇源ORF128蛋白丙氨酸含量最高。蛋白质理化性质分析显示,口唇源ORF128蛋白不稳定系数为38.72,提示该蛋白可能为稳定蛋白;肠道源ORF128蛋白不稳定系数为41.33,提示该蛋白可能为不稳定蛋白。蛋白质磷酸化位点分析显示,口唇源ORF128蛋白含有33个潜在的磷酸化位点,肠道源ORF128蛋白含有35个潜在的磷酸化位点。说明ORFV肠道源和口唇源的ORF128基因存在差异,结果可为进一步研究羊口疮病毒致病机制提供参考。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 orf128基因 克隆 生物信息学分析
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ORF1p通过调控AJUBA表达促进食管鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的研究
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作者 杨帆 黎江洋 +5 位作者 代晓燕 肖何 彭杨 童雪玲 戴楠 李梦侠 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第13期1429-1443,共15页
目的探讨长散在核元件-1(long interspersed nuclear element-1,LINE-1)编码的开放阅读框1蛋白(open reading frame 1 protein,ORF1p)对食管鳞状细胞癌细胞(以下简称食管鳞癌细胞)增殖、迁移及侵袭的影响及其潜在分子机制。方法①Wester... 目的探讨长散在核元件-1(long interspersed nuclear element-1,LINE-1)编码的开放阅读框1蛋白(open reading frame 1 protein,ORF1p)对食管鳞状细胞癌细胞(以下简称食管鳞癌细胞)增殖、迁移及侵袭的影响及其潜在分子机制。方法①Western blot实验检测ORF1p在食管正常鳞状上皮细胞和食管鳞癌细胞中的表达差异。②免疫组化实验检测ORF1p在食管鳞状细胞癌和配对正常组织中的表达情况。③细胞水平敲低及过表达ORF1p,细胞功能实验研究ORF1p对食管鳞癌细胞恶性生物学行为的影响。④裸鼠成瘤实验验证ORF1p对食管鳞癌细胞体内成瘤的影响。⑤转录组测序分析结合细胞功能回复实验,筛选受ORF1p调控的下游靶点。结果①Western blot实验显示ORF1p在食管鳞癌细胞中均高于正常食管鳞状上皮细胞(P<0.05)。②免疫组化染色实验证实ORF1p在食管鳞状细胞癌组织中明显上调(P<0.0001)。③细胞功能实验及裸鼠成瘤实验显示,ORF1p明显促进食管鳞癌细胞的增殖、迁移、侵袭和体内成瘤能力(P<0.05)。④细胞功能回复实验证实ORF1p通过调控AJUBA表达促进食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。结论ORF1p在食管鳞状细胞癌中显著上调,ORF1p通过调控AJUBA表达促进食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 LINE-1 orf1p 食管鳞癌细胞 增殖 AJUBA
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广西南宁猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株ORF5和NSP2基因的遗传变异分析 被引量:2
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作者 李瑞雪 李承辉 +6 位作者 陈俭 李健 南世发 王瑛春 卢德章 肖书奇 殷玉鹏 《病毒学报》 北大核心 2025年第1期173-183,共11页
本文旨在监测广西南宁猪场猪繁殖与呼吸综合征病病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行情况。采集2022年广西壮族自治区南宁市4个不同规模化猪场的9322份血清样品、1348份睾丸液、402份精液样品、308... 本文旨在监测广西南宁猪场猪繁殖与呼吸综合征病病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行情况。采集2022年广西壮族自治区南宁市4个不同规模化猪场的9322份血清样品、1348份睾丸液、402份精液样品、3083份唾液样品和787份环境样品,使用qRT-PCR方法对样品中的病原进行检测,同时扩增PRRSV阳性样品的ORF5和NSP2基因;测序后利用DNAStar软件进行遗传进化分析、氨基酸序列比对分析,并对ORF5基因的N-糖基化位点进行预测。从PRRSV阳性样品中成功获得23条ORF5基因序列和18条NSP2基因序列,基于ORF5基因遗传进化分析属于PRRSV美洲型,其中NADC30-like毒株13株,NADC34-like毒株9株,VR2332-Like毒株1株。对ORF5氨基酸进行多序列比对显示,23株毒株无插入或缺失,但都存在位点突变。基于NSP2基因遗传进化分析显示为PRRSV美洲型,对NSP2氨基酸进行多序列比对显示,18株PRRSV存在1+19个氨基酸的缺失,与NADC30毒株NSP2氨基酸对应位置缺失模式一致。结果表明,该地区猪场主要流行NADC30-Like和NADC34-Like毒株,PRRSV不同流行毒株存在一定的遗传差异,本研究为广西PRRS防控和疫苗选用提供了科学依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸障碍综合征 orf5 NSP2 遗传进化分析
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2022—2023年广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5和Nsp2基因的遗传变异分析 被引量:1
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作者 彭家为 李康 +5 位作者 张歆明 吴寿堂 王爽云 刘燕玲 张乐宜 宋长绪 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期86-94,102,共10页
为了初步了解我国广东省猪场中猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行特点和遗传变异情况,试验于2022年2月份——2023年10月份采集广东省11个地区(广州市、肇庆市、河源市、江门市... 为了初步了解我国广东省猪场中猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行特点和遗传变异情况,试验于2022年2月份——2023年10月份采集广东省11个地区(广州市、肇庆市、河源市、江门市、茂名市、云浮市、韶关市、清远市、珠海市、湛江市、汕头市)27家猪场共241份疑似患猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)病猪的肺脏组织和血液样本并采用RT-PCR方法进行PRRSV检测,根据检测结果选取不同地区猪场的10份阳性样本病毒核酸对ORF5和Nsp2基因进行测序及序列遗传变异分析。结果表明:241份肺脏组织和血液样本的总阳性率为21.99%;不同地区阳性率在9.90%~42.86%之间,其中阳性率最高的地区为广州市,最低的地区为云浮市;肺脏组织样本阳性率为14.28%,血液样本阳性率为24.32%。从基于PRRSV ORF5基因构建的遗传进化树中可见,选取的10株PRRSV毒株中有1株(GDZH)位于以JXA1和CH-1a为代表的Lineage8.7亚群分支上,有5株(GDJM、GDKP、GDHY、GDMM、GDST)位于以NADC30为代表的Lineage1亚群分支上,有4株(GDGZ、GDGZ-2、GDZJ、GDGY)位于Lineage3亚群分支上。选取的10株PRRSV毒株ORF5基因之间的核苷酸序列相似性为80.1%~99.3%,其中GDGZ、GDZJ、GDGY和GDGZ-2的ORF5基因与Lineage3亚群毒株QYYZ(登录号为JQ308798.1)的核苷酸序列相似性最高,分别为90.2%、89.4%、93.7%、90.0%;GDJM、GDKP、GDHY、GDST和GDMM的ORF5基因与Lineage1亚群毒株NADC30(登录号为MH500776.1)的核苷酸序列相似性最高,分别为91.0%、92.2%、90.8%、85.7%、91.7%,GDZH的ORF5基因与Lineage8.7亚群高致病性毒株JXA1(登录号为EF11244.5)的核苷酸序列相似性最高,为96.2%。从基于PRRSV Nsp2基因构建的遗传进化树中可见,选取的10株PRRSV毒株中有5株(GDZH、GDGZ、GDGZ-2、GDZJ、GDGY)位于以JXA1和CH-1a为代表的Lineage8.7亚群分支上,有5株(GDJM、GDHY、GDST、GDMM、GDKP)位于以NADC30为代表的Lineage1亚群分支上。选取的10株PRRSV毒株Nsp2基因之间的核苷酸序列相似性为31.6%~96.6%。其中GDZH、GDGZ、GDGZ-2、GDZJ和GDGY的Nsp2基因与Lineage8.7亚群高致病性毒株JXA1(登录号为EF11244.5)的核苷酸序列相似性最高,分别为97.1%、98.1%、96.8%、91.3%、94.2%,GDJM、GDKP、GDST、GDMM、GDHY的Nsp2基因与Lineage1亚群毒株NADC30(登录号为MH500776.1)的核苷酸序列相似性最高,分别为67.6%、83.6%、82.2%、82.8%、80.3%。说明广东省猪场中流行的PRRSV毒株呈现多样性,Lineage3、Lineage1和Lineage8.7为主要流行的亚群。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 NSP2基因 遗传变异 广东省
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大黄鱼虹彩病毒ORF 121R蛋白的表达及亚细胞定位
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作者 吴彩霞 刘晓东 +6 位作者 池洪树 谢岸桦 陈秀霞 许斌福 郑在予 潘滢 龚晖 《福建农业学报》 北大核心 2025年第6期577-584,共8页
【目的】解析大黄鱼虹彩病毒(large yellow croaker iridovirus,LYCIV)开放阅读框(Open reading frame,ORF)121R蛋白的免疫原性与亚细胞定位,探究其在病毒致病机制中的潜在作用。【方法】以LYCIV ORF121R蛋白为研究对象,通过生物信息学... 【目的】解析大黄鱼虹彩病毒(large yellow croaker iridovirus,LYCIV)开放阅读框(Open reading frame,ORF)121R蛋白的免疫原性与亚细胞定位,探究其在病毒致病机制中的潜在作用。【方法】以LYCIV ORF121R蛋白为研究对象,通过生物信息学分析手段,进行同源蛋白之间的序列对比,并预测其亚细胞定位;将目的基因通过同源重组方法分别克隆至pET32a及pEGFP-N1载体中,构建重组质粒ORF 121R-His和ORF 121R-EGFP;诱导表达并纯化ORF121R-His重组蛋白,将其免疫小鼠制备多克隆抗体,并通过ELISA、Western-blotting和细胞间接免疫荧光等手段评估抗体效价及特异性;以ORF 121R-EGFP质粒转染EPC细胞后,利用激光共聚焦显微镜观察ORF121R-EGFP的亚细胞定位。【结果】LYCIV ORF 121R蛋白与传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)中具有高免疫原性的ORF 117R蛋白氨基酸序列一致性为79.96%,且预测定位于细胞质。orf121R全长1377 bp,将其分别克隆至pET32a及pEGFP-N1载体中,成功构建重组质粒ORF 121R-His和ORF 121REGFP。经亲和纯化获得可溶性ORF 121R-His重组蛋白,其分子量为72.6 kDa,用该重组蛋白制备的多克隆抗体效价为1∶128000,可特异性识别天然病毒蛋白;ORF 121R-EGFP在鲤上皮瘤(Epithelioma papulosum cyprini,EPC)细胞中呈现胞质特异性分布,荧光信号均匀富集于核周区域。【结论】LYCIV ORF 121R主要定位于细胞质中,该蛋白良好的免疫原性与特异性,使其成为潜在的疫苗候选抗原和诊断靶标,为开发针对LYCIV的特异性防控策略提供了新的可能性。 展开更多
关键词 大黄鱼虹彩病毒 orf 121R蛋白 蛋白表达 亚细胞定位
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2020-2023年福建省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查及ORF5基因变异分析
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作者 黄文琳 于慧 +5 位作者 蓝欣 杨圆 陈洪博 范克伟 魏春华 刘建奎 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期9-16,共8页
为了研究2020-2023年福建省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行和变异规律,采用荧光定量RT-PCR方法,对福建不同地区收集的240份疑似PRRSV的组织样品和血清进行PRRSV-1和PRRSV-2检测,对阳性样品采用RT-PCR方法扩增PRRSV ORF5基因,应用... 为了研究2020-2023年福建省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行和变异规律,采用荧光定量RT-PCR方法,对福建不同地区收集的240份疑似PRRSV的组织样品和血清进行PRRSV-1和PRRSV-2检测,对阳性样品采用RT-PCR方法扩增PRRSV ORF5基因,应用分子生物学软件进行同源性和遗传变异分析。结果显示,福建省PRRSV总体阳性率为18.8%(45/240),其中PRRSV-2的阳性率为16.3%(39/240),PRRSV-1的阳性率为2.5%(6/240)。经RT-PCR成功扩增35个PRRSV-2 ORF5基因和3个PRRSV-1 ORF5基因。序列比对分析表明,35个PRRSV-2 ORF5基因核苷酸同源性为81.3%~99.8%,与代表毒株VR2332、NADC30、NADC34、QYYZ和JXA1的核苷酸同源性为80.9%~99.3%。3个PRRSV-1 ORF5基因核苷酸同源性为82.8%~98.5%,与代表毒株LV、Amervac PRRS、FJQEU14、FJEU13等的核苷酸序列同源性为81.5%~99.7%。遗传进化分析表明,福建省PRRSV-2可分为Lineage1、Lineage3和Lineage8,其中Lineage1占比最高,为68.6%(24/35,18株为NADC30-like毒株,6株为NADC34-like毒株),PRRSV-1均属于SubtypeⅠ。氨基酸分析表明,PRRSV-1 GP5蛋白氨基酸变异主要集中于信号肽区域(aa 1-33)和2个胞外域(aa 33-67和aa 89-109);PRRSV-2 GP5蛋白氨基酸变异主要集中于信号肽区域(aa 1-25)、aa 27-36区域和抗原表位C(aa 52-62)。综上表明,PRRSV-1和PRRSV-2同时在福建省流行,NADC30-like PRRSV-2为优势流行毒株且呈现遗传多样性,NADC34-like PRRSV-2和PRRSV-1可能已在福建省潜在流行。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5基因 序列分析 遗传进化分析 NADC34
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山羊痘病毒锚蛋白ORF141.2对NF-κB信号通路的调控作用研究
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作者 杨云凤 常慧慧 +7 位作者 冯秋媛 田峥 邵晓龙 罗逸青 郭小腊 陈国华 景志忠 陈轶霞 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1045-1055,共11页
痘病毒编码多种能够操控宿主先天免疫反应的蛋白。研究表明,鼠痘病毒编码的锚蛋白通过与Skp1互作抑制NF-κB通路。山羊痘病毒编码的锚蛋白ORF141.2与鼠痘病毒编码的锚蛋白存在类似的结构,其对NF-κB信号通路的调控作用还未见报道。为了... 痘病毒编码多种能够操控宿主先天免疫反应的蛋白。研究表明,鼠痘病毒编码的锚蛋白通过与Skp1互作抑制NF-κB通路。山羊痘病毒编码的锚蛋白ORF141.2与鼠痘病毒编码的锚蛋白存在类似的结构,其对NF-κB信号通路的调控作用还未见报道。为了明确ORF141.2对NF-κB信号通路的调控作用,本研究采用双荧光素酶报告系统检测了ORF141.2对NF-κB转录活性的影响;通过Western bloting技术和间接免疫荧光试验检测了ORF141.2对NF-κB通路关键因子的影响及ORF141.2与Skp1的共定位情况;最后采用Co-IP技术验证了ORF141.2与Skp1是否互作。结果表明,锚蛋白ORF141.2可以抑制NF-κB的转录活性;锚蛋白ORF141.2不影响IKKα和IκBα的磷酸化,但阻止p-IκBα的降解和p65的入核;锚蛋白ORF141.2与Skp1共定位于细胞质中,存在互作关系。锚蛋白ORF141.2通过与Skp1互作调控p-IκBα的降解和p65的入核,从而调控NF-κB信号通路。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 锚蛋白 orf141.2 NF-ΚB Skp1
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基于ORF2蛋白的山羊星状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用
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作者 于皓同 马永杰 +4 位作者 王凯茸 丁雨欣 张淑霞 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2025年第3期17-22,共6页
为了建立山羊星状病毒(Caprine astrovirus)的血清抗体检测方法,从经RT-PCR检测星状病毒阳性的腹泻羊粪便中克隆山羊星状病毒ORF2基因并构建表达载体,用原核表达技术制备重组ORF2蛋白,重组蛋白纯化复性后作为包被抗原,建立山羊星状病毒... 为了建立山羊星状病毒(Caprine astrovirus)的血清抗体检测方法,从经RT-PCR检测星状病毒阳性的腹泻羊粪便中克隆山羊星状病毒ORF2基因并构建表达载体,用原核表达技术制备重组ORF2蛋白,重组蛋白纯化复性后作为包被抗原,建立山羊星状病毒血清抗体间接ELISA检测方法,并对临床收集的山羊血清样本进行检测。结果显示,ORF2重组蛋白大小为42 ku,Western blot证明其具有良好的反应原性;ELISA检测方法最佳工作条件为6μg/mL抗原包被酶标板,一抗血清稀释倍数为1∶100,酶标二抗稀释倍数为1∶5000,阴阳临界值为0.327。用该方法对山羊流产衣原体、立克次体、山羊支原体山羊肺炎亚种及伪结核棒状杆菌的阳性血清进行检测,结果均为阴性;当阳性血清稀释至1024倍时检测结果仍为山羊星状病毒抗体阳性;批内、批间变异系数均小于10%。用该方法对陕西省部分羊场收集到的288份血清样本进行检测,山羊星状病毒抗体阳性率为59.03%。建立了一种检测山羊星状病毒抗体的间接ELISA检测方法,为山羊星状病毒感染的诊断和流行病学调查提供了技术支持。 展开更多
关键词 山羊星状病毒 orf2蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验
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C12orf65基因变异致联合氧化磷酸化缺陷症7型1例并文献复习
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作者 陈晓轶 朱永杰 +4 位作者 邓劼 马燕丽 索军芳 王媛 马远宁 《中国当代儿科杂志》 北大核心 2025年第2期205-211,共7页
目的探讨C12orf65基因变异相关联合氧化磷酸化缺陷症7型(combined oxidative phosphorylation deficiency type 7,COXPD7)的临床特征及基因变异特点,提高对该病的认识。方法以郑州大学附属儿童医院神经内科2021年诊断的1例COXPD7患儿及... 目的探讨C12orf65基因变异相关联合氧化磷酸化缺陷症7型(combined oxidative phosphorylation deficiency type 7,COXPD7)的临床特征及基因变异特点,提高对该病的认识。方法以郑州大学附属儿童医院神经内科2021年诊断的1例COXPD7患儿及文献报道的10例患者为研究对象,对其基因型和临床表型进行分析。结果共纳入11例COXPD7患者,均为C12orf65基因变异,9例为纯合变异,2例为复合杂合变异。起病年龄为生后1 d至2岁,临床均表现为视神经萎缩、智力运动发育落后,8例存在眼外肌麻痹,5例存在痉挛性瘫痪。头颅磁共振成像检查示11例均存在视神经萎缩,10例有脑干异常信号,3例脑干磁共振波谱分析成像可见乳酸峰。结论C12orf65基因相关的COXPD7为纯合或复合杂合变异所致,其主要临床表现为视神经萎缩和智力运动发育落后,部分患者存在痉挛性瘫痪、眼外肌麻痹,头颅影像学可见双侧基底节、脑干对称性异常信号,脑干磁共振波谱分析成像可见乳酸峰。 展开更多
关键词 联合氧化磷酸化缺陷症7型 LEIGH综合征 C12orf65基因 线粒体病 儿童
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LSDV-ORF143基因缺失重组病毒毒株的构建及其生物学特性分析
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作者 李家琪 柯群华 +6 位作者 黄伟涛 任善会 姚凯慎 李苗苗 马小琴 孙跃峰 殷相平 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1056-1066,共11页
牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)引起的牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease,LSD)是一种牛全身性感染疫病,对养牛产业的健康发展造成了严重威胁。本研究旨在通过构建缺失ORF143基因重组LSDV毒株,并进行其生物学特性分... 牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)引起的牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease,LSD)是一种牛全身性感染疫病,对养牛产业的健康发展造成了严重威胁。本研究旨在通过构建缺失ORF143基因重组LSDV毒株,并进行其生物学特性分析,为LSDV致弱毒株的筛选及弱毒疫苗研发提供候选毒株。首先,利用同源重组技术,构建pUC19T-LSDV-ΔORF143-EGFP转移载体,再将此转移载体转染至Vero细胞并感染LSDV,利用有限稀释与单细胞亚克隆方法筛选出纯合的以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为标识物的ORF143基因缺失重组LSDV(rLSDV-ΔORF143-EGFP)。对该重组病毒的生长曲线、滴度和遗传稳定性等进行分析。PCR扩增与重组病毒测序结果表明该rLSDV-ΔORF143-EGFP毒株已纯化成功,且至少20代内可稳定遗传;生长曲线结果表明该重组毒株增殖能力低于野生型LSDV毒株(LSDV-WT)。本研究成功构建并纯化出重组病毒rLSDV-ΔORF143-EGFP,为LSDV弱毒疫苗研究提供候选毒株,为LSD新型疫苗研究提供理论基础。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病病毒 orf143基因 重组病毒 生物学特性
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2019年~2023年我国PRRSV ORF5基因遗传变异和密码子使用偏好性分析
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作者 翁成桢 李鸿喜 +6 位作者 黄欣欣 章蓓雯 唐歆 曹翀 唐静晖 李晓冰 陈洪博 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第3期221-230,共10页
为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况、遗传演化特征和密码子使用偏好性等,本研究从GenBank中下载2019年~2023年我国1194条PRRSV ORF5基因,采用MEGA6.0中的NJ法对上述ORF5基因和国内外26条PRRSV参考株ORF5基因构建进化... 为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况、遗传演化特征和密码子使用偏好性等,本研究从GenBank中下载2019年~2023年我国1194条PRRSV ORF5基因,采用MEGA6.0中的NJ法对上述ORF5基因和国内外26条PRRSV参考株ORF5基因构建进化树鉴定PRRSV的基因型。通过MEGA6.0中K2P模型计算相同及不同基因型PRRSV ORF5(后仅称为ORF5基因)基因核苷酸和氨基酸序列的遗传距离。采用DnaSP v5软件分析不同基因型ORF5基因的平均差异位点数、核苷酸多态性、交换频率和基因间遗传变异等分析ORF5基因的迁移。采用RDP4和SimPlot分析不同基因型ORF5基因的重组事件。采用CodonW分析不同基因型ORF5基因编码区的碱基组成,评估该基因编码区密码子使用的偏好性及影响因素。基因型鉴定结果显示,2019年~2023年我国谱系L1 PRRSV占比最高为70.4%,谱系L5最少为3.3%,基因Ⅰ型中的1亚型为2.3%。遗传距离计算结果显示,我国流行的基因Ⅱ型谱系L1、L3内ORF5基因核苷酸和氨基酸序列的遗传距离均大于其他谱系与基因Ⅰ型,且不同基因型ORF5基因核苷酸和氨基酸序列的遗传距离均大于相同基因型。迁移分析结果显示,不同基因型间ORF5基因的遗传分化程度大,但交换及传递频率较低,其中谱系L1、L3 ORF5基因比其他谱系的遗传多样性更广泛,更易发生变异。重组分析结果显示,共检测到7个发生重组的ORF5基因,且均为谱系L1、L3和L8之间的重组。密码子使用偏好性结果显示,同义密码子第3位碱基A3s含量在不同基因型ORF5基因间均最低,C3s含量在不同基因型ORF5基因间均最高。谱系L5和L8 ORF5基因的GC含量均高于50%,谱系L1、L3和1亚型ORF5基因的GC含量均低于50%,相对同义密码子使用度RSCU分析结果显示,不同基因型ORF5基因高表达密码子第3位以G/C为主,低表达密码子第3位以A/U为主;密码子偏好性的影响因素分析结果显示,不同基因型ORF5基因编码区的有效密码子数ENC在58~61(ENC>40),且均在ENC曲线上。上述结果表明,表明不同基因型ORF5基因间同义密码子第3位碱基偏好于C,很少偏好于A,且ORF5基因密码子偏好于GC,其密码子偏好性仅受突变压力影响,且使用偏好性较低。本研究为我国的PRRSV的流行病学调查和PRRS的防控提供参考依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 orf5 基因重组 遗传多样性 密码子
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天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株ORF5基因的克隆及遗传变异分析
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作者 李文忠 荣新利 +4 位作者 刘野 吴庆东 张乐 孙英峰 于海 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期156-164,共9页
为了解天津地区猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的流行和遗传变异情况,收集2021-2022年天津地区养殖场209份临床疑似发病猪的组织进行检测及ORF5遗传变异分析。结果显示:PRRSV阳性样品总检出率为37.3%(78/209),并从阳性样本中选择15... 为了解天津地区猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的流行和遗传变异情况,收集2021-2022年天津地区养殖场209份临床疑似发病猪的组织进行检测及ORF5遗传变异分析。结果显示:PRRSV阳性样品总检出率为37.3%(78/209),并从阳性样本中选择15个不同地区来源具有代表性样品进行ORF5基因克隆序列。序列及遗传进化分析显示:该15株PRRSV毒株均属于美洲型,其中8条PRRSV毒株的ORF5基因与以HuN4为代表的类HP-PRRSV毒株同源性较高,核苷酸序列与推导氨基酸序列的同源性分别为89.4%~97.3%和80.6%~95.5%,而与NADC30、VR2332、NADC34等毒株的同源性较低,分别为77.1%~87.1%和77.1%~86.6%;6条PRRSV毒株的ORF5基因与以NADC30为代表的类NADC30毒株同源性最高,核苷酸序列与推导氨基酸序列的同源性分别为91.9%-92.7%和91.5%-93.0%,而与HuN4、VR2332、NADC34等毒株的同源性较低,分别为83.6%-87.8%和79.6%~86.6%;1条PRRSV毒株的ORF5基因与以NADC34为代表的类NADC34毒株同源性最高,核苷酸序列与推导氨基酸序列的同源性为96.4%和95.5%,而与NADC30、HuN4、VR2332等毒株的同源性为86.7%~89.9%和86.6%~92.0%。结果表明,2021-2022年天津地区以类HP-PRRSV、类NADC30 PRRSV为主要流行毒株,同时出现类NADC34毒株的流行,存在明显的遗传多样性。研究结果可为天津地区PRRS的防控提供理论依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 orf5基因 序列分析 遗传变异 同源性分析
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ORF138 causes abnormal lipid metabolism in the tapetum that leads to Ogu cytoplasmic male sterility in Brassica napus 被引量:1
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作者 Xiaoyu Ge Junlin Chen +7 位作者 Ouqi Li Min Zou Baolong Tao Lun Zhao Jing Wen Bin Yi Jinxing Tu Jinxiong Shen 《Journal of Integrative Agriculture》 2025年第6期2080-2095,共16页
Mutations and rearrangements of mitochondrial genes cause plant cytoplasmic male sterility. It is a significant way to utilize hybrid vigor to enhance crop yield. Ogu cytoplasmic male sterility(CMS) is a natural cytop... Mutations and rearrangements of mitochondrial genes cause plant cytoplasmic male sterility. It is a significant way to utilize hybrid vigor to enhance crop yield. Ogu cytoplasmic male sterility(CMS) is a natural cytoplasmic male sterility type discovered in radishes, being successfully transferred to rapeseed and cruciferous vegetables. However, current studies lack depth in exploring the molecular mechanisms of its male sterility. This study confirmed that orf138 is the causal gene for Ogu CMS through the genetic transformation in Arabidopsis. Transcriptome analysis of aborted anthers in different stages suggested that differentially expressed genes(DEGs) are mainly enriched in pathways such as glycerophospholipid metabolism and arginine and proline metabolism. It reveals that key genes involved in lipid metabolism pathways are significantly down-regulated in the sterile line(OguA), including BnaGPAT1, localized within the tapetum mitochondrial and endoplasmic reticulum. This could lead to changes in the metabolism of substances like acylglycerols within the tapetum, causing disruptions in lipid metabolism. This is consistent with morphological and subcellular structural changes in the tapetum and microspore cells, as observed in the transmission electron microscopy. This abnormal lipid metabolism may trigger specific reactive oxygen species(ROS) accumulation in an oxidative stress response, ultimately leading to an aborted microspore. Our study based on transcriptome has deepened our understanding of the molecular mechanisms in Ogu CMS. 展开更多
关键词 orf138 cytoplasmic male sterility MITOCHONDRIA TAPETUM Ros
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Chromosome 8 Open Reading Frame 76(C8orf76)Co-Expressed with Cyclin-Dependent Kinase 4(CDK4)as a Prognostic Indicator of Colorectal Cancer
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作者 Shang Guo Chengcheng Liu +3 位作者 Zifeng Zhao Zhongxin Li Xia Jiang Zengren Zhao 《Biomedical and Environmental Sciences》 2025年第8期977-987,I0001,I0002,共13页
Objective To explore the correlation between chromosome 8 open reading frame 76(C8orf76)and cyclin-dependent kinase 4(CDK4)and the potential predictive effect of C8orf76 and CDK4 on the prognosis of colorectal cancer(... Objective To explore the correlation between chromosome 8 open reading frame 76(C8orf76)and cyclin-dependent kinase 4(CDK4)and the potential predictive effect of C8orf76 and CDK4 on the prognosis of colorectal cancer(CRC).Methods We constructed a protein-protein interaction network of C8orf76-related genes and analyzed the prognostic signatures of C8orf76 and CDK4.Clinicopathological features of C8orf76 and CDK4 were visualized using a nomogram.Results C8orf76 and CDK4 levels were positively correlated in two independent human CRC cohorts(n=83 and n=597).A consistent positive correlation was observed between C8orf76 and CDK4 expression in the CRC cell lines.The nomogram included prognostic genes(C8orf76 and CDK4)and pathological N and M stages.The concordance index(C-index)in our cohort was 0.776,which suggests that the ability of the indicators to predict the overall survival of patients with CRC in our cohort was strong.Conclusion We found that C8orf76 was positively correlated with CDK4 in both the cohorts as well as in CRC cell lines.Therefore,C8orf76 and CDK4 can be used as potential biomarkers to predict the prognosis of CRC. 展开更多
关键词 C8orf76 CDK4 Colorectal cancer NOMOGRAM Prognosis signature
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猪细环病毒2型ORF1蛋白的生物信息学分析
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作者 黄敏 《畜牧业环境》 2025年第5期69-70,共2页
为揭示猪细环病毒2型(TTSuV-2型)ORF1蛋白的特性,研究通过生物信息学分析该蛋白的亲水性、胞质定位及多表位特征。结果发现,ORF1蛋白由635个氨基酸组成,分子量约为75.04 kDa,等电点为10.09,属于不稳定亲水性蛋白,不稳定系数为66.40,GRAV... 为揭示猪细环病毒2型(TTSuV-2型)ORF1蛋白的特性,研究通过生物信息学分析该蛋白的亲水性、胞质定位及多表位特征。结果发现,ORF1蛋白由635个氨基酸组成,分子量约为75.04 kDa,等电点为10.09,属于不稳定亲水性蛋白,不稳定系数为66.40,GRAVY值为-0.783;二级结构预测显示,ORF1蛋白以无规则卷曲(50.08%)为主,含23.46%α-螺旋和19.53%延伸链,无跨膜结构域及信号肽;亚细胞定位分析表明,该蛋白主要位于细胞质,含65个磷酸化位点和2个N-糖基化位点;抗原表位预测显示,共鉴定出17个B细胞优势表位。研究结果为TTSuV-2型亚单位疫苗的研发提供了理论依据。 展开更多
关键词 TTSuV orf1 生物信息学 亲水性 亚单位疫苗
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生殖调控基因C3ORF20的功能调节因子鉴定
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作者 杜士月 石柳柳 +4 位作者 赵小英 刘永富 胡长清 郑宏涛 陈瑞 《湖北医药学院学报》 2025年第3期253-259,271,共8页
目的:鉴定男性生殖功能相关的开放阅读框基因编码蛋白C3ORF20的调节因子,并探究其生殖调控功能。方法:通过人体组织样本RNA-seq数据和人睾丸样本scRNA-seq数据分析C3ORF20的时空表达;生物信息学分析C3ORF20的互作蛋白并构建PPI网络;KEGG... 目的:鉴定男性生殖功能相关的开放阅读框基因编码蛋白C3ORF20的调节因子,并探究其生殖调控功能。方法:通过人体组织样本RNA-seq数据和人睾丸样本scRNA-seq数据分析C3ORF20的时空表达;生物信息学分析C3ORF20的互作蛋白并构建PPI网络;KEGG/GO分析互作蛋白参与的信号通路及分子事件;scRNA-seq分析及RT-PCR实验验证BIRC6与C3ORF20的时空共表达;Co-IP和GST-pull down检测蛋白相互作用及精细互作区段;泛素化实验和免疫共沉淀实验检测BIRC6对C3ORF20蛋白稳定性的影响。结果:C3ORF20 mRNA在早期和中期圆形精子细胞中表达;C3ORF20与凋亡抑制蛋白家族成员BIRC6存在相互作用;BIRC6通过其泛素结合酶结构域UBC与C3ORF20蛋白的FAM194结构域相互作用;BIRC6蛋白泛素化C3ORF20并导致其不稳定。结论:BIRC6是C3ORF20蛋白的一个功能调节因子,其通过泛素化途径调节C3ORF20蛋白的稳定性,进而影响其生殖调控功能。 展开更多
关键词 C3orf20 BIRC6 精细胞 泛素化 精子功能
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C11ORF94基因缺陷导致精卵融合失败的机制研究
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作者 王文静 《生物化工》 2025年第1期33-37,共5页
目的:配子的受精、融合是个体发育的起点,其中精子-卵子细胞膜融合是受精过程中关键步骤之一。本研究旨在利用敲除小鼠探寻精卵融合的潜在机制。方法:利用CRISPR/Cas9系统敲除睾丸特异高表达基因C11ORF94,观察敲除小鼠生育情况及体外受... 目的:配子的受精、融合是个体发育的起点,其中精子-卵子细胞膜融合是受精过程中关键步骤之一。本研究旨在利用敲除小鼠探寻精卵融合的潜在机制。方法:利用CRISPR/Cas9系统敲除睾丸特异高表达基因C11ORF94,观察敲除小鼠生育情况及体外受精情况。利用HEK293T-卵母细胞结合实验及精子-卵母细胞融合实验观察C11ORF94蛋白对精卵结合与融合的影响。针对睾丸组织进行体外Pull-down和质谱分析以筛选C11ORF94的互作蛋白。结果:C11ORF94基因敲除小鼠严重不育并表现精卵融合障碍,卵胞浆内单精子注射可挽救该表型。针对C11ORF94互作蛋白的聚类分析表明C11ORF94参与细胞分泌途径以及小GTP酶信号转导通路。结论:实验证实,C11ORF94通过影响分泌途径来影响精子与卵子的融合能力。此外,卵胞浆内单精子注射可挽救该基因缺陷的表型。 展开更多
关键词 C11orf94 基因敲除 精卵融合障碍
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水痘-带状疱疹病毒-ORF7蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证
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作者 王梦涵 侯安奇 +3 位作者 谭仕明 董翔 李爽 张夫坤 《中国生物制品学杂志》 2025年第6期731-737,745,共8页
目的 建立一种针对水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)-ORF7蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证,以用于水痘减毒活疫苗Oka-7S株研究工艺中各阶段样品ORF7抗原的检测。方法 用重组pET-28a-ORF7质粒诱导表达VZV-ORF7... 目的 建立一种针对水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)-ORF7蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证,以用于水痘减毒活疫苗Oka-7S株研究工艺中各阶段样品ORF7抗原的检测。方法 用重组pET-28a-ORF7质粒诱导表达VZV-ORF7原核蛋白,经Ni^(2+)亲和层析柱进行纯化;以ORF7原核蛋白为免疫原,采用小鼠杂交瘤融合技术,筛选单抗杂交瘤细胞株,制备单抗,间接ELISA法检测抗体效价,Western blot法鉴定抗体特异性;叠加ELISA试验分析单抗抗原表位,经抗体配对筛选建立VZV-ORF7抗原的双抗体夹心ELISA检测方法,对方法的灵敏度、特异性和重复性进行验证;用建立的方法检测3批VZV Oka-7S株收获物。结果 共获得4株稳定分泌抗VZVORF7的杂交瘤细胞株,分别命名为M2B5、M2G5、8C2和1C4,细胞培养上清效价均为10~4~10~5,腹水效价均为10~6~10~7;纯化的单抗在还原和非还原状态纯度均约为97%。4株单抗均可与VZV全病毒蛋白和纯化的ORF7原核蛋白发生特异性结合;确定M2G5为捕获抗体,M2B5-HRP为酶标抗体,二者最佳工作浓度分别为4μg/mL和1∶8 000;确定临界值为A_(450)=0.111,A_(450)≥0.111判定为阳性,<0.111判定为阴性。本方法标准曲线范围为3.9~250 ng/mL,拟合方式为四参数,标准曲线方程y=(0.049 5-2.24)/(1+x/97.8)^(1.27)+2.24,相关系数(R^(2))为0.999,最低检测限为2.2 ng/mL;与四价流感病毒裂解疫苗、腮腺炎病毒、麻疹病毒均无交叉反应;批间及批内CV均<10%。3批VZV Oka-7S株检测结果均为阴性,符合率为100%。结论 建立的VZV-ORF7双抗体夹心ELISA法灵敏度高,特异性好,重复性高,适用于VZV-ORF7蛋白以及VZV Oka和Oka-7S株的快速检测。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 orf7蛋白 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验
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PRRSV HNHK3-2021毒株的ORF5和ORF7序列分析 被引量:2
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作者 范悦轩 马佳镁 +5 位作者 黄春媛 郑佳馨 陈素贞 张艳 刘光亮 曹宗喜 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1292-1300,共9页
【目的】研究海南猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV的流行病学特征和遗传变异规律。【方法】采集海南省海口市及周边地区样品,分离出PRRSV HNHK3-2021毒株,并测定NSP2基因以及ORF5和ORF7基因序列,采用Lasergene 7.1进行序列比对分析,用MEGA-... 【目的】研究海南猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV的流行病学特征和遗传变异规律。【方法】采集海南省海口市及周边地区样品,分离出PRRSV HNHK3-2021毒株,并测定NSP2基因以及ORF5和ORF7基因序列,采用Lasergene 7.1进行序列比对分析,用MEGA-X进行遗传演化分析。【结果】分离出的PRRSV HNHK3-2021株为美洲型毒株,PRRSV HNHK3-2021株和EF112447 HEB1、EU109503 GD、EU624117 XH-GD的ORF5和ORF7的核苷酸相似性较高,分别为99.2%~99.3%和99.5%~100%,推导氨基酸相似性为99%~99.5%和100%;PRRSV HNHK3-2021株和EU864232 SHB、AY262352_HB-2(sh)2002、AY656990 Abst-1、AY032626 CH-1a、EU807840 CH-1R的ORF5和ORF7的核苷酸相似性为87.1%~96.4%和91.4%~97.3%,推导氨基酸的相似性为86.6%~93%和91.9%~97.6%;PRRSV HNHK3-2021株和JN654459 NADC30、KP860909 FJZ03、MH068878 SD17-38、AY881994 FJ-1的ORF5和ORF7的核苷酸相似性为85.4%~87.1%和89%~91.4%。氨基酸的相似性为86.1%~87.1%和89.5%~91.9%。【结论】RRSV HNHK3-2021毒株和EU624117 XH-GD具有最近的遗传距离。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 遗传进化 orf5 orf7
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密码子优化和信号肽对猪圆环病毒ORF2基因在毕赤酵母表达中的影响
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作者 张春玲 王瑞阳 +5 位作者 钱忠辉 赵本进 张俊平 葛宇燕 张子悦 丁卫星 《上海农业学报》 2024年第4期81-85,共5页
为了在毕赤酵母中高效表达PCV2ORF2基因,对PCV2ORF2基因编码的187个氨基酸密码子进行毕赤酵母偏爱性优化,利用两步PCR全化学合成优化后的ORF2基因。将优化前后的PCV2ORF2基因片段插入毕赤酵母表达载体pPICZα-C,构建重组质粒pPICZα-C-O... 为了在毕赤酵母中高效表达PCV2ORF2基因,对PCV2ORF2基因编码的187个氨基酸密码子进行毕赤酵母偏爱性优化,利用两步PCR全化学合成优化后的ORF2基因。将优化前后的PCV2ORF2基因片段插入毕赤酵母表达载体pPICZα-C,构建重组质粒pPICZα-C-ORF2和p PICZα-C-ORF2op。将线性化的重组质粒电转化毕赤酵母GS115,并筛选Zeocin抗性重组子。同时,也研究了信号肽对PCV2ORF2表达效率的影响。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,只有经密码子优化且去除ORF2基因自身信号肽的重组子能够分泌表达PCV2 ORF2蛋白,目的蛋白分子质量约为30 ku,表达的重组ORF2蛋白可被PCV2阳性血清识别,具有生物学活性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒orf2基因 密码子优化 稀有密码子 自身信号肽 毕赤酵母
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