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基于EC-OPRF的匿踪查询方案
1
作者 周搏洋 林圣琳 +4 位作者 陈思远 黄欣茹 茹志强 赖春江 郭叶 《软件导刊》 2025年第12期190-196,共7页
匿踪查询(PIR)技术旨在确保参与方隐私信息不泄露的前提下,实现安全信息检索。针对现有匿踪查询方案在大规模数据场景下计算开销大和查询效率低的问题,提出一种基于椭圆曲线不经意伪随机函数(EC-OPRF)的匿踪查询方案。该方案将查询过程... 匿踪查询(PIR)技术旨在确保参与方隐私信息不泄露的前提下,实现安全信息检索。针对现有匿踪查询方案在大规模数据场景下计算开销大和查询效率低的问题,提出一种基于椭圆曲线不经意伪随机函数(EC-OPRF)的匿踪查询方案。该方案将查询过程分为离线预处理和在线查询两个阶段。在离线阶段,通过进行数据索引的加密、传输和比对,且基于分布式存储技术对数据进行离线优化,有效减轻了在线阶段的查询负担;在线阶段,通过对称加密算法保障了双方数据的隐私安全,且得益于离线预处理优化,使得在线查询时间常数化,在计算开销降低的同时提升了查询效率。实验结果表明,在该方案中,对百万量级记录的单次查询仅需毫秒级别的在线耗时,与现有方案相比,查询效率提升了95%以上。同时,该方案允许百亿量级记录的匿踪查询,充分满足了现实应用的需求。 展开更多
关键词 匿踪查询 EC-oprf 椭圆曲线 不经意伪随机函数 隐私计算
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铜绿假单胞菌重组Bb-OprF疫苗构建及鉴定 被引量:8
2
作者 朱佑明 罗永艾 李文桂 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期303-306,共4页
目的构建和鉴定铜绿假单胞菌重组双歧杆菌(rBb)-OprF疫苗。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株提取总RNA为模板,自行设计引物,RT-PCR扩增获得OprF抗原编码基因,经酶切、连接定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒... 目的构建和鉴定铜绿假单胞菌重组双歧杆菌(rBb)-OprF疫苗。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株提取总RNA为模板,自行设计引物,RT-PCR扩增获得OprF抗原编码基因,经酶切、连接定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprF。转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,抽提质粒行酶切电泳和测序验证后,电穿孔转化到Bb中,构建铜绿假单胞菌rBb-OprF疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果 RT-PCR扩增出1 016bp的OprF编码基因;重组质粒经双酶切鉴定,切出4 947bp的载体片段和10 16bp的目的基因片段;以rBb抽提质粒为模板进行PCR扩增可得到1 016bp的oprF基因片段。结论成功构建了铜绿假单胞菌rBb-OprF疫苗,为该疫苗的进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 oprf 疫苗
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铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF的构建及其表达 被引量:5
3
作者 朱佑明 罗永艾 李文桂 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第6期420-423,共4页
目的构建并鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株总RNA为模板,自行设计引物,采用RT-PCR方法扩增OprF抗原编码基因,经酶切、连接后定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌... 目的构建并鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株总RNA为模板,自行设计引物,采用RT-PCR方法扩增OprF抗原编码基因,经酶切、连接后定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprF,转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定。结果 RT-PCR扩增出1 016 bp的OprF编码基因;重组质粒经双酶切和测序鉴定证实OprF基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析表达产物分子质量单位约为61 ku,与预期结果一致,表达的蛋白质占菌体总蛋白的16%;Western blot鉴定重组蛋白能被Pa外膜粗抗原免疫小鼠血清识别。结论成功构建了铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF,该质粒在E.coliBL21(DE3)中高效融合表达,表达的融合蛋白具有抗原特异性。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 oprf 大肠埃希菌 表达
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铜绿假单胞菌重组Bb-OprF疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的研究 被引量:8
4
作者 朱佑明 罗永艾 李文桂 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期217-221,共5页
目的研究铜绿假单胞菌重组双歧杆菌(rBb)-OprF疫苗免疫小鼠,PAO1株攻击后产生的细胞免疫应答。方法将rBb-OprF疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜和口服灌胃4种途径免疫Balb/c小鼠,免疫后8周用5×106CFU的PAO1株攻击,攻击1... 目的研究铜绿假单胞菌重组双歧杆菌(rBb)-OprF疫苗免疫小鼠,PAO1株攻击后产生的细胞免疫应答。方法将rBb-OprF疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜和口服灌胃4种途径免疫Balb/c小鼠,免疫后8周用5×106CFU的PAO1株攻击,攻击1周后杀鼠取脾,MTT法检测特异性脾淋巴细胞增殖,流式细胞术检测脾CD4+T和CD8+T细胞比率,用ELISA法检测脾细胞培养上清IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10的水平。结果脾T淋巴细胞增殖明显;脾细胞CD4+和CD8+T细胞亚群显著增加;脾细胞培养上清IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10的水平显著升高,其中IFN-γ最为显著。结论铜绿假单胞菌rBb-OprF疫苗可诱导小鼠产生混合型的Th1和Th2免疫应答。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 重组Bb-oprf疫苗 免疫
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载体介导的铜绿假单胞菌OprF疫苗的研制现状 被引量:5
5
作者 李文桂 陈雅棠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第5期476-479,共4页
铜绿假单胞菌是一种院内感染的常见致病菌,采用疫苗防治该菌是当前研究的热点领域之一。OprF蛋白是一种有效的疫苗候选分子,本文综述了腺病毒、流感病毒、烟草花叶病毒、豇豆花叶病毒、鼠伤寒沙门氏菌、野兔热弗朗西斯菌、两歧双歧杆菌... 铜绿假单胞菌是一种院内感染的常见致病菌,采用疫苗防治该菌是当前研究的热点领域之一。OprF蛋白是一种有效的疫苗候选分子,本文综述了腺病毒、流感病毒、烟草花叶病毒、豇豆花叶病毒、鼠伤寒沙门氏菌、野兔热弗朗西斯菌、两歧双歧杆菌和乳酸乳球菌等载体介导的铜绿假单胞菌OprF疫苗的研制现状。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 oprf蛋白 疫苗 综述
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铜绿假单胞菌OprF疫苗的研究进展 被引量:2
6
作者 李文桂 陈雅棠 《热带医学杂志》 CAS 2016年第11期1468-1472,共5页
铜绿假单胞菌是一种院内感染的常见致病菌,采用疫苗防治该菌是当前研究的热点之一。Opr F蛋白是一种有效的疫苗候选分子,本文综述了Opr F蛋白疫苗、合成肽疫苗、DNA疫苗、多表位核酸疫苗、树突状细胞疫苗、重组Ad Z-Opr F疫苗以及重组Bb... 铜绿假单胞菌是一种院内感染的常见致病菌,采用疫苗防治该菌是当前研究的热点之一。Opr F蛋白是一种有效的疫苗候选分子,本文综述了Opr F蛋白疫苗、合成肽疫苗、DNA疫苗、多表位核酸疫苗、树突状细胞疫苗、重组Ad Z-Opr F疫苗以及重组Bb-Opr F疫苗的研究进展。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 oprf蛋白 疫苗
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绿脓杆菌外膜蛋白OprF的生物信息学分析 被引量:8
7
作者 刘祥 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期343-348,共6页
[目的]利用生物信息学方法预测绿脓杆菌外膜蛋白OprF的理化性质、高级结构和细胞表位。[方法]采用在线软件预测OprF蛋白的理化性质;Signal P 4.1软件预测OprF信号肽序列;利用TMHMM软件预测ACFA蛋白跨膜结构;SOPMA服务器预测蛋白的二级结... [目的]利用生物信息学方法预测绿脓杆菌外膜蛋白OprF的理化性质、高级结构和细胞表位。[方法]采用在线软件预测OprF蛋白的理化性质;Signal P 4.1软件预测OprF信号肽序列;利用TMHMM软件预测ACFA蛋白跨膜结构;SOPMA服务器预测蛋白的二级结构;Swiss-Model程序预测OprF三维结构;综合ABCpred与Bepi Pred方案预测OprF的B细胞表位;运用神经网络法预测OprF的CTL表位;使用MHC-Ⅱ类分子结合肽程序预测OprF的Th细胞表位。[结果]OprF为亲水性蛋白;1~24位氨基酸为信号肽序列;存在多个酶切位点;无跨膜结构并定位于细胞膜外;二级结构中含无规则卷曲34.36%、α-螺旋31.90%、β-转角11.66%、β-片层22.09%;并可能存在3个B细胞表位、2个CTL表位、4个Th细胞表位。[结论]系统分析了OprF蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构、二级与三级结构,以及B、T细胞抗原表位。 展开更多
关键词 绿脓杆菌 oprf蛋白 细胞表位 蛋白结构 预测
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重组绿脓杆菌外膜蛋白OprF的表达、纯化及多克隆抗体制备与鉴定
8
作者 陈春琳 刘祥 俱雄 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期213-218,共6页
绿脓杆菌外膜蛋白Opr F可有效激活机体的免疫机制对抗细菌的感染,在疫苗上有很好的应用前景。采用分子克隆方法获得绿脓杆菌外膜蛋白Opr F表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得Opr F蛋白,免疫小鼠制备Opr F蛋白多克隆... 绿脓杆菌外膜蛋白Opr F可有效激活机体的免疫机制对抗细菌的感染,在疫苗上有很好的应用前景。采用分子克隆方法获得绿脓杆菌外膜蛋白Opr F表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得Opr F蛋白,免疫小鼠制备Opr F蛋白多克隆抗体。ELISA法表明,Opr F抗血清滴度达1∶12 800倍,Western blotting证实抗血清具有很好的特异性。通过DNAMAN软件对Opr F序列同源性分析发现其C端在不同细菌间存在较高同源性;采用MEGA软件对Opr F的系统发生分析发现假单胞菌属细菌的亲缘关系高于其它属细菌。 展开更多
关键词 oprf蛋白 多克隆抗体 酶联试验 Western BLOTTING 系统发生分析
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铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF和OprH基因扩增、融合、克隆及原核表达 被引量:3
9
作者 张万山 陈燕 曹郁生 《江西医学院学报》 2004年第2期5-9,共5页
目的 在大肠杆菌中串联表达铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF和OprH ,获得重组融合蛋白OprF/H ,为抗铜绿假单胞菌的疫苗研究打下基础。方法 从铜绿假单胞菌中提取基因组DNA ,设计PCR引物扩增出OprF和OprH基因 ,扩增片段经过酶切、连接和PCR... 目的 在大肠杆菌中串联表达铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF和OprH ,获得重组融合蛋白OprF/H ,为抗铜绿假单胞菌的疫苗研究打下基础。方法 从铜绿假单胞菌中提取基因组DNA ,设计PCR引物扩增出OprF和OprH基因 ,扩增片段经过酶切、连接和PCR扩增后 ,割胶回收PCR产物并将其克隆至克隆质粒 ,测序后构建表达质粒pGEX F/H ,并转化大肠杆菌BL2 1。结果 重组表达质粒经IPTG诱导后表达融合外膜蛋白OprF/H。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 oprf OprH 融合表达
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铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗诱导的保护力及细胞免疫应答 被引量:3
10
作者 梁诚诚 李文桂 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第11期1282-1285,共4页
目的研究铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗免疫及PA01株攻击小鼠后,其诱导产生的保护力及细胞免疫应答。方法将21只BALB/c小鼠随机分为3组,分别为疫苗组、空载体对照组和Bb对照组,取5×10^8菌落形成单位(CFU)疫苗经口灌胃,每周3... 目的研究铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗免疫及PA01株攻击小鼠后,其诱导产生的保护力及细胞免疫应答。方法将21只BALB/c小鼠随机分为3组,分别为疫苗组、空载体对照组和Bb对照组,取5×10^8菌落形成单位(CFU)疫苗经口灌胃,每周3次,连续3周。初次免疫后4周用5×10^7 CFU的PA01株进行滴鼻攻击。攻击后2 d杀鼠,取肺,计数肺细菌负荷;取脾,制备脾细胞悬液,MTT法检测脾细胞增殖情况,流式细胞术检测脾CD4^+、CD8^+ T细胞亚群变化和脾细胞凋亡。结果与两个对照组的肺细菌菌落数(7.37±0.89)×10^8 CFU和(7.42±0.80)×10^8 CFU相比,免疫小鼠的菌落数量(0.27±0.02)×10^8 CFU减少;疫苗组的脾细胞增殖活性增强;CD4^+ T细胞比例增加;脾细胞凋亡率降低。结论铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗可诱导小鼠产生一定的保护力和有效的细胞免疫应答。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 重组Bb(pGEX-oprf-I)疫苗 免疫
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铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗诱导的保护力及体液免疫应答 被引量:3
11
作者 梁诚诚 李文桂 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第5期586-589,共4页
目的观察铜绿假单胞菌重组两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum,Bb)(pGEX-OprF-I)疫苗免疫及PA01株攻击小鼠后诱导的保护力和体液免疫应答情况。方法将21只小鼠随机分为疫苗组、空载体对照组和Bb对照组,每组7只。将5×10~8CFU疫... 目的观察铜绿假单胞菌重组两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum,Bb)(pGEX-OprF-I)疫苗免疫及PA01株攻击小鼠后诱导的保护力和体液免疫应答情况。方法将21只小鼠随机分为疫苗组、空载体对照组和Bb对照组,每组7只。将5×10~8CFU疫苗灌胃接种,每日1次,每周连续3 d,共3周。初次接种后4周取5×10~7CFU的PA01株进行滴鼻攻击。攻击后2周杀鼠,取肺组织计数细菌负荷,分别于免疫前、初免后4周和攻击后2周采集小鼠静脉血,常规ELISA法检测血清IgG及其亚类、IgE和IgA抗体水平。结果疫苗组、空载体对照组和Bb对照组的肺细菌菌落数分别为(7.43±0.03)Ig CFU/g、(8.86±0.05)Ig CFU/g和(8.87±0.05)Ig CFU/g,疫苗组的菌落数明显低于其余两个对照组(P<0.01)。与免疫前相比,疫苗组的血清IgG及其亚类水平在初次接种后4周均升高,在攻击后2周达更高水平(P<0.01),且高于相同时间点的空载体和Bb对照组抗体水平(P<0.01)。所有组均未检测出IgE和IgA。结论铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗可诱导小鼠产生较好的保护力及体液免疫应答。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 两歧双歧杆菌 oprf-I融合蛋白 疫苗 保护力 体液免疫
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铜绿假单胞菌OprF/I融合蛋白疫苗研制现状 被引量:2
12
作者 梁诚诚 李文桂 《生物技术通讯》 CAS 2019年第1期115-121,共7页
铜绿假单胞菌是一种革兰阴性非发酵和需氧的机会性致病菌,是医院获得性感染的常见病原体。铜绿假单胞菌治疗面临巨大挑战,研制疫苗是防治铜绿假单胞菌感染的有效替代方法。融合外膜蛋白OprF/I是一种保护性抗疫苗以及重组沙门菌疫苗的研... 铜绿假单胞菌是一种革兰阴性非发酵和需氧的机会性致病菌,是医院获得性感染的常见病原体。铜绿假单胞菌治疗面临巨大挑战,研制疫苗是防治铜绿假单胞菌感染的有效替代方法。融合外膜蛋白OprF/I是一种保护性抗疫苗以及重组沙门菌疫苗的研制现状进行综述。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 外膜蛋白 oprf/I融合蛋白 疫苗
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铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-Ⅰ)疫苗免疫及PA01株攻击小鼠后诱导脾细胞因子基因变化的研究
13
作者 梁诚诚 李文桂 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第4期434-437,457,共5页
目的观察铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-Ⅰ)疫苗免疫及PA01株攻击小鼠后诱导的保护力及脾细胞因子INF-γ、IL-12、IL-4、IL-17和Treg的变化。方法将BALB/c小鼠随机分为疫苗组、空载体对照组和Bb对照组,每组7只。取5×10^8 CFU疫苗... 目的观察铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-Ⅰ)疫苗免疫及PA01株攻击小鼠后诱导的保护力及脾细胞因子INF-γ、IL-12、IL-4、IL-17和Treg的变化。方法将BALB/c小鼠随机分为疫苗组、空载体对照组和Bb对照组,每组7只。取5×10^8 CFU疫苗每日灌胃1次,每周连续3d,共3周。初次接种后4周用5×10^7 CFU/10μl的PA01株进行滴鼻攻击。攻击后2周杀鼠,取肺计数细菌负荷,取脾制备脾细胞悬液,经PaAg刺激培养,PCR扩增脾细胞的INF-γ、IL-12、IL-4、IL-17和Treg基因。结果疫苗组肺细菌菌落数为(0.27±0.02)×10^8 CFU,空载体组为(7.37±0.89)×10^8 CFU,Bb对照组为(7.42±0.80)×10^8 CFU,差异有统计学意义(P<0.01);疫苗组脾细胞扩增出399bp的INF-γ基因片段、300bp的IL-12基因片段、359bp的IL-4基因片段、380bp的IL-17基因片段和250bp的Foxp3基因片段,两对照组扩增均阴性。结论重组Bb(pGEX-OprF-Ⅰ)疫苗可诱导小鼠脾细胞产生多种类型的细胞因子,参与抗Pa感染的免疫应答。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 重组Bb(pGEX-oprf-Ⅰ)疫苗 细胞因子
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OprF核酸免疫预防小鼠慢性肺感染
14
作者 马超 《生物制品快讯》 2002年第7期23-24,共2页
关键词 oprf核酸免疫 预防 小鼠 慢性肺感染
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铜绿假单胞菌胶体金免疫层析试纸的制备 被引量:1
15
作者 曹家敏 朱艳芳 +3 位作者 华明明 刘书君 杨波 胡征 《生物技术》 2025年第1期95-101,共7页
[目的]筛选一对抗OprF蛋白单克隆抗体,制备快速检测铜绿假单胞菌的胶体金免疫层析试纸。[方法]将重组OprF蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,通过间接ELISA检测、BLI技术以及Western Blot鉴定抗体的特异性及结合力,以双抗体夹心法制备胶体金... [目的]筛选一对抗OprF蛋白单克隆抗体,制备快速检测铜绿假单胞菌的胶体金免疫层析试纸。[方法]将重组OprF蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,通过间接ELISA检测、BLI技术以及Western Blot鉴定抗体的特异性及结合力,以双抗体夹心法制备胶体金免疫层析试纸,对其灵敏度、特异性、稳定性进行分析测试。[结果]筛选出2株高亲和力抗体,均能特异性识别OprF蛋白,所制备胶体金免疫层析试纸检测铜绿假单胞菌的检出限达到2.5×10^(3) CFU/mL;试纸检测特异性强,与呼吸道常见病原菌如肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、肺炎支原体、嗜肺军团菌、卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、唾液链球菌、化脓链球菌均无交叉反应;试纸稳定性高,室温下保存1年仍具有良好的稳定性。[结论]所研制的免疫层析试纸在15 min内对铜绿假单胞菌快速检测,灵敏度为2.5×10^(3) CFU/mL,对呼吸道常见的10种病原体均无交叉反应,且在室温可稳定保存1年,满足临床应用的相关要求。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 外膜蛋白oprf 单克隆抗体 生物膜干涉技术 胶体金免疫层析试纸 灵敏度 特异性 稳定性
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乳酸乳球菌NICE系统食品级分泌表达载体pRNV48的构建及铜绿假单胞菌融合外膜蛋白的表达 被引量:2
16
作者 徐波 曹郁生 +1 位作者 陈燕 郭兴华 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期745-752,共8页
乳酸菌NICE系统是目前较理想的可控制蛋白质生产的食品级诱导表达系统,而乳酸菌分泌表达异源蛋白比细胞质表达更优越。本研究将以pVE5524为模板PCR扩增的1.5 kbSPUsp45-NucA-CWAM6-t1t2基因克隆到食品级细胞内诱导表达载体pRNA48上,构... 乳酸菌NICE系统是目前较理想的可控制蛋白质生产的食品级诱导表达系统,而乳酸菌分泌表达异源蛋白比细胞质表达更优越。本研究将以pVE5524为模板PCR扩增的1.5 kbSPUsp45-NucA-CWAM6-t1t2基因克隆到食品级细胞内诱导表达载体pRNA48上,构建成食品级细胞壁锚定表达载体pRNV48,与宿主菌L.lactisNZ9000共同构成乳酸乳球菌食品级细胞壁锚定诱导表达系统。为检测该系统的功能,将铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因OprF/H克隆进pRNV48中,并检测了OprF/H的表达量和免疫原性。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 食品级载体 NICE系统 oprf/H
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铜绿假单胞菌快速检测胶体金免疫层析试纸的制备 被引量:6
17
作者 张世凯 朱辉煌 +2 位作者 李家吉 王毅 胡征 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期941-946,954,共7页
目的 研制快速、准确检测铜绿假单胞菌(P.aeruginosa,Pa)的胶体金免疫层析试纸。方法 采用生物信息学对铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF进行分析后,化学合成抗原决定簇丰富、种内同源性高的基因序列,连接至pET-28a(+)载体,构建表达载体pET-28a... 目的 研制快速、准确检测铜绿假单胞菌(P.aeruginosa,Pa)的胶体金免疫层析试纸。方法 采用生物信息学对铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF进行分析后,化学合成抗原决定簇丰富、种内同源性高的基因序列,连接至pET-28a(+)载体,构建表达载体pET-28a-OprF,转入E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经Ni SepharoseTM6 Fast Flow纯化。将纯化的重组OprF蛋白免疫2只雌性BALB/c小鼠,共免疫3~4次,首次免疫为背部皮下多点注射,后续免疫为腹腔注射。通过动物细胞融合技术筛选单克隆抗体,利用单克隆抗体、双抗夹心免疫层析技术制备铜绿假单胞菌快速检测胶体金免疫层析试纸,并评价其特异性、灵敏度及稳定性。结果 获得2株可配对的单克隆抗体Pa-1#和Pa-2#,抗体效价均达到1∶409 600,均可特异性识别OprF。制备的胶体金免疫层析试纸检测灵敏度为1.0×106CFU/mL,与9种常见的呼吸道病原菌无交叉反应,且稳定性较好。结论 制备的胶体金免疫层析试纸可在15 min内快速检测铜绿假单胞菌,特异性强,且具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 外膜蛋白oprf 单克隆抗体 胶体金免疫层析试纸
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DC靶向适配体修饰的载铜绿假单胞菌DNA疫苗递送系统的构建及体外评价 被引量:4
18
作者 黄仕琴 石敏 +2 位作者 何颖娜 岳瀚勋 余娴 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期743-752,共10页
构建了一种DC靶向适配体修饰的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)DNA疫苗递送系统。采用乙醇注入法制备阳离子脂质体,静电吸附法制备载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Lip-pOprF-VP22),探讨不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-pOprF-VP22... 构建了一种DC靶向适配体修饰的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)DNA疫苗递送系统。采用乙醇注入法制备阳离子脂质体,静电吸附法制备载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Lip-pOprF-VP22),探讨不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-pOprF-VP22对pVAX1-OprF-VP22的包封效果、对DC2.4的细胞毒性及转染率,筛选最佳质量比的Lip-pOprF-VP22测定其粒径及Zeta电位;后插法制备DC靶向适配体修饰的载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Apt-Lip-pOprF-VP22),检测其转染DC2.4后OprF蛋白的表达量及对小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)成熟的影响。结果表明,Lip-pOprF-VP22随着DOTAP/pDNA质量比增加包封率逐渐增加,当质量比为5∶1时即能很好的包封pVAX1-OprF-VP22;当Lip-pOprF-VP22作用于DC2.4 24 h或48 h后,不同质量比的Lip-pOprF-VP22对DC2.4的存活率均在80%以上;当DOTAP/pDNA质量比由2∶1增加到10∶1,转染率表现为先增加、后降低的趋势,其中DOTAP/pDNA质量比为4∶1、5∶1时转染率相对较高;当DOTAP/pDNA质量比为5∶1时,Lip-pOprF-VP22粒径为(171.67±1.27)nm,Zeta电位为(11.30±0.57)mV;Apt-Lip-pOprF-VP22转染DC2.4后可表达更多OprF蛋白且可明显促进BMDCs的成熟。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 DNA疫苗 DC靶向 适配体 oprf
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铜绿假单胞菌多表位核酸疫苗的构建及其生物学作用的研究 被引量:6
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作者 陈建国 苏兆亮 +5 位作者 柳迎昭 王胜军 彭素芳 李雅贞 邵启祥 许化溪 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2008年第6期484-486,490,共4页
目的:构建铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)多表位-MyD88基因疫苗并对其免疫原性进行研究。方法:将PA外膜蛋白F(OprF)的三个中和性B细胞表位及一个外源通用T细胞表位串联,采用重叠PCR方法合成DNA,并在此序列前插入组织型纤溶酶... 目的:构建铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)多表位-MyD88基因疫苗并对其免疫原性进行研究。方法:将PA外膜蛋白F(OprF)的三个中和性B细胞表位及一个外源通用T细胞表位串联,采用重叠PCR方法合成DNA,并在此序列前插入组织型纤溶酶原(tPA)的信号肽基因,将此获得的片段与MyD88基因分别克隆入pIRES载体构建重组质粒pIRES-tPA-OprF:MyD88,并将该质粒免疫Balb/c小鼠,采用ELISA法测定特异性抗体水平。气管内接种PA,进行肺组织匀浆PA细菌计数。结果:成功构建真核表达质粒pIRES-tPA-OprF:MyD88,用该质粒免疫小鼠,能刺激机体产生高度特异性抗体,气管接种PA后,免疫组小鼠肺匀浆细菌计数明显低于其他对照组。结论:成功构建了重组有MyD88基因的PA表位核酸疫苗,接种小鼠后可诱导特异性免疫应答,产生较好的抗铜绿假单胞菌感染的免疫保护作用。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 外膜蛋白F MYD88 表位疫苗 免疫原性
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