旨在从牛发情周期第一卵泡波中最大卵泡ODF1(The largest follicle at onset of deviation)和第二大卵泡ODF2(The second largest follicle at onset of deviation)转录组水平上筛选卵泡发育差异表达基因。采集牛发情周期第一卵泡波ODF1...旨在从牛发情周期第一卵泡波中最大卵泡ODF1(The largest follicle at onset of deviation)和第二大卵泡ODF2(The second largest follicle at onset of deviation)转录组水平上筛选卵泡发育差异表达基因。采集牛发情周期第一卵泡波ODF1和ODF2,分别分离颗粒细胞并提取总RNA,构建RNA文库,通过Illumina平台对ODF1和ODF2测序;筛选出ODF1与ODF2两个转录本之间比值大于2的差异表达基因,并采用qRT-PCR对筛选出的基因在牛发情周期内第一卵泡波优势卵泡(Dominant follicles,DF)和从属卵泡(Subordinate follicles,SF)颗粒细胞中功能验证。共获得8个卵泡发育差异表达基因,其中7个基因筛选自ODF1/ODF2(BEX2、UBN1、SIK1、SPARCL1、LOC784256、LOC789231和LOC785462),1个筛选自ODF2/ODF1(SAFB2);qRT-PCR结果表明,BEX2、UBN1、LOC784256和LOC789231在DF中mRNA表达量极显著高于SF(P<0.01),SAFB2在SF中mRNA表达量极显著高于DF(P<0.01),SIK1和SPARCL1在SF中mRNA表达量显著高于DF(P<0.05),虽然LOC785462在SF中mRNA表达量高于DF,但差异不显著(P>0.05)。qRT-PCR检测BEX2、UBN1、LOC784256、LOC789231和SAFB2的结果与高通量测序中该基因在ODF1和ODF2的RPKM的差异趋势基本一致,而SIK1、SPARCL1和LOC785462不一致。展开更多
文摘旨在从牛发情周期第一卵泡波中最大卵泡ODF1(The largest follicle at onset of deviation)和第二大卵泡ODF2(The second largest follicle at onset of deviation)转录组水平上筛选卵泡发育差异表达基因。采集牛发情周期第一卵泡波ODF1和ODF2,分别分离颗粒细胞并提取总RNA,构建RNA文库,通过Illumina平台对ODF1和ODF2测序;筛选出ODF1与ODF2两个转录本之间比值大于2的差异表达基因,并采用qRT-PCR对筛选出的基因在牛发情周期内第一卵泡波优势卵泡(Dominant follicles,DF)和从属卵泡(Subordinate follicles,SF)颗粒细胞中功能验证。共获得8个卵泡发育差异表达基因,其中7个基因筛选自ODF1/ODF2(BEX2、UBN1、SIK1、SPARCL1、LOC784256、LOC789231和LOC785462),1个筛选自ODF2/ODF1(SAFB2);qRT-PCR结果表明,BEX2、UBN1、LOC784256和LOC789231在DF中mRNA表达量极显著高于SF(P<0.01),SAFB2在SF中mRNA表达量极显著高于DF(P<0.01),SIK1和SPARCL1在SF中mRNA表达量显著高于DF(P<0.05),虽然LOC785462在SF中mRNA表达量高于DF,但差异不显著(P>0.05)。qRT-PCR检测BEX2、UBN1、LOC784256、LOC789231和SAFB2的结果与高通量测序中该基因在ODF1和ODF2的RPKM的差异趋势基本一致,而SIK1、SPARCL1和LOC785462不一致。
