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人冠状病毒OC43对主蛋白酶抑制剂FB2001的耐药性
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作者 陈露 尚卫娟 +3 位作者 张磊砢 肖庚富 刘文 张宇旻 《微生物学通报》 北大核心 2025年第6期2828-2843,共16页
【背景】人冠状病毒OC43(human coronavirus OC43,HCoV-OC43)属β冠状病毒,其感染会对免疫低下的老人和幼儿的健康带来严重威胁。FB2001作为已进入临床试验的抗冠状病毒主蛋白酶3CLpro抑制剂,前期研究表明其对HCoV-OC43也具有良好的抗... 【背景】人冠状病毒OC43(human coronavirus OC43,HCoV-OC43)属β冠状病毒,其感染会对免疫低下的老人和幼儿的健康带来严重威胁。FB2001作为已进入临床试验的抗冠状病毒主蛋白酶3CLpro抑制剂,前期研究表明其对HCoV-OC43也具有良好的抗病毒活性,但HCoV-OC43对FB2001的耐药特征有待阐明。【目的】研究HCoV-OC433CLpro对FB2001产生的耐药突变位点及耐药机制,发现冠状病毒对3CLpro抑制剂耐药的共性特征,对广谱抗冠状病毒3CLpro小分子药物的开发和优化改造具有重要意义。【方法】通过在体外进行药物压力下连续传代实验获得具有明显耐药表型的HCoV-OC43耐药适应株,二代测序(next generation sequencing,NGS)发现病毒3CLpro上存在多个突变位点,然后构建HCoV-OC433CLpro Flip GFP活细胞酶活系统验证耐药突变特征,最后通过Alphafold 3和DiffDock人工智能平台获得突变蛋白-小分子的结合模式,分析耐药机制并通过生长竞争试验研究耐药适应株的生长适应性变化。【结果】耐药适应株3CLpro出现D65G、L165V、I300T、D65G+L165V氨基酸突变,这些突变均会导致3CLpro在HEK-293T细胞中对FB2001的敏感性降低,其中L165V造成的耐药特征最显著;3CLpro^(L165V)-FB2001复合物结构预测显示,突变后第165位的Val侧链残基改变3CLpro活性中心S1位局部构象,导致蛋白酶与FB2001的P1位亲和力下降;生长竞争试验结果表明,耐药适应株在与HCoV-OC43野生株的生长竞争中不具有生长竞争优势。【结论】本研究提示冠状病毒主蛋白酶对P1位为γ-内酰胺环的拟肽抑制剂具有耐药共性机制。 展开更多
关键词 人冠状病毒oc43 主蛋白酶3CLpro FB2001 耐药机制
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广谱抗病毒药物吐根碱抑制HCoV-OC43的转录组分析 被引量:1
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作者 李涵 张高倩 +9 位作者 吴长城 张钟贤 牛军伟 霍恕婷 叶飞 邓瑶 黄保英 赵莉 沈晓玲 谭文杰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期458-468,共11页
本研究旨在探索吐根碱对人冠状病毒OC43(Human coronavirus OC43, HCoV-OC43)的作用时相和抗病毒机制。首先,在MRC-5细胞上建立了HCoV-OC43病毒的体外感染复制动力学曲线,测定了药物的EC_(50)和CC_(50)。结果表明吐根碱能够在感染早期... 本研究旨在探索吐根碱对人冠状病毒OC43(Human coronavirus OC43, HCoV-OC43)的作用时相和抗病毒机制。首先,在MRC-5细胞上建立了HCoV-OC43病毒的体外感染复制动力学曲线,测定了药物的EC_(50)和CC_(50)。结果表明吐根碱能够在感染早期有效地抑制HCoV-OC43病毒在MRC-5细胞中的复制。通过转录组分析,发现HCoV-OC43感染和吐根碱处理均导致宿主基因表达的紊乱,并且两者共同激活了抗病毒通路。吐根碱可能通过激活OASL、Mx1和IFIT2等抗病毒基因来增强宿主对病毒的抵抗能力。此外,吐根碱还可能通过抑制TMEM41B表达而进一步影响病毒复制过程。这些研究结果为深入探究吐根碱作为抗冠状病毒药物的机制和潜在靶点提供了重要线索。 展开更多
关键词 吐根碱 HCoV-oc43 抗病毒作用 转录组学 基因表达紊乱
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散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E和OC43感染致小鼠肺炎的作用机制研究 被引量:1
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作者 张敬升 高双荣 +7 位作者 庞博 刘莉娜 徐英莉 曹姗 陈梦苹 张宇 赵荣华 崔晓兰 《中国药物警戒》 2024年第1期51-54,88,共5页
目的考察散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43毒株感染小鼠致肺炎模型的作用机制。方法根据不同毒株将实验分批进行,每批实验动物按体重随机分成7组:正常组、病毒感染组、磷酸氯喹片组、连花清瘟颗粒组、散寒化湿颗粒(给药组)3个剂... 目的考察散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43毒株感染小鼠致肺炎模型的作用机制。方法根据不同毒株将实验分批进行,每批实验动物按体重随机分成7组:正常组、病毒感染组、磷酸氯喹片组、连花清瘟颗粒组、散寒化湿颗粒(给药组)3个剂量组,高剂量为11 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药52.8 g·kg^(-1)·d^(-1))、中剂量为5.5 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药26.4 g·kg^(-1)·d^(-1))、低剂量为2.75 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药13.2 g·kg^(-1)·d^(-1))。使用人冠状病毒229E和OC43感染小鼠,建立肺炎模型。通过检测肺指数和肺部病理变化等指标评价散寒化湿颗粒对冠状病毒肺炎小鼠的药理作用。结果散寒化湿颗粒在高、中、低3个剂量组均能有效降低小鼠的肺指数,并减轻肺组织的病理损伤。结论散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43感染致小鼠肺炎均具有治疗作用。 展开更多
关键词 散寒化湿颗粒 人冠状病毒229E 人冠状病毒oc43 小鼠 肺炎 肺指数 病理变化
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百里香药茶对人冠状病毒OC43体内外增殖的影响
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作者 田纪祥 张彤彤 +10 位作者 常雨宁 谢佩芳 董书维 赵晓昂 王云 赵春晖 吴宏伟 张阿梅 李海舟 夏雪山 张华敏 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第23期81-89,共9页
目的:探究百里香药茶(BLX)对人冠状病毒OC43(HCoV-OC43)的体内外抗病毒活性及作用机制。方法:通过超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)分析BLX化学成分,利用HCoV-OC43细胞模型检测BLX的体外毒性及其对该病毒的抑制作用,采用时间差异给药法检... 目的:探究百里香药茶(BLX)对人冠状病毒OC43(HCoV-OC43)的体内外抗病毒活性及作用机制。方法:通过超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)分析BLX化学成分,利用HCoV-OC43细胞模型检测BLX的体外毒性及其对该病毒的抑制作用,采用时间差异给药法检测药物作用阶段,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测病毒基因拷贝数,利用HCoV-OC43小鼠模型检测BLX的体内毒性及其对小鼠体质量和生存周期变化的影响,通过免疫组化技术检测脑和肺组织中病毒蛋白表达。结果:从BLX中鉴定出11种化合物;在HCoV-OC43感染的HRT-18细胞中,BLX的半数毒性浓度(CC50)为(13859.56±319)mg·L^(-1),半数抑制浓度(IC50)为(1439.09±200)mg·L^(-1),其选择指数范围为8.26~11.44。与病毒组比较,BLX在1500、1000、500 mg·L^(-1)剂量下均可明显抑制病毒复制(P<0.05,P<0.01),该药物在病毒复制早期即可发挥抗病毒作用,且对病毒吸附过程的干扰大于对病毒入胞过程的干扰(P<0.05)。在HCoV-OC43感染的小鼠模型中,BLX在1200、600 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量下可缓解被感染小鼠的症状、延长生存期并降低死亡率,有效抑制脑组织中(P<0.01)和肺组织(P<0.01)中病毒核衣壳mRNA表达水平;BLX在1200mg·kg^(-1)剂量下可抑制脑组织(P<0.01)和肺组织(P<0.01)中病毒核衣壳蛋白的表达。结论:BLX含有多种具有抗病毒活性的化学成分,可在体内外抑制HCoV-OC43复制,该药物可能通过干扰病毒吸附等方式发挥其抗病毒活性。该研究为冠状病毒感染治疗提供了候选药物,为BLX的进一步开发应用提供了理论参考。 展开更多
关键词 百里香药茶 人冠状病毒oc43(HCoV-oc43) 抗病毒活性 细胞模型 小鼠模型
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人冠状病毒OC43感染性克隆的构建 被引量:1
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作者 唐晴 王蓓 +3 位作者 朱英霞 杜作苑 雷晓波 黄鹤 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第1期1-5,共5页
目的:构建携带绿色荧光报告基因的人冠状病毒OC43感染性克隆。方法:设计带有绿色荧光蛋白的人冠状病毒OC43感染性克隆基因组序列,分段合成后利用融合聚合酶链式反应等方法得到8个亚基因组片段,通过酵母转化关联重组技术获得重组质粒,转... 目的:构建携带绿色荧光报告基因的人冠状病毒OC43感染性克隆。方法:设计带有绿色荧光蛋白的人冠状病毒OC43感染性克隆基因组序列,分段合成后利用融合聚合酶链式反应等方法得到8个亚基因组片段,通过酵母转化关联重组技术获得重组质粒,转染HEK-293T细胞进行病毒拯救,收获转染细胞培养上清感染靶细胞分析病毒拯救情况。结果:获得人冠状病毒OC43感染性克隆重组质粒,将该质粒转染细胞后成功获得携带绿色荧光蛋白报告基因的人冠状病毒OC43重组病毒。结论:成功构建了人冠状病毒OC43感染性克隆并获得重组病毒,为针对冠状病毒的基础和应用研究提供了有效工具。 展开更多
关键词 人冠状病毒oc43 感染性克隆 反向遗传学
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HCoV-OC43逃避人树突状细胞免疫清除机制的初步研究
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作者 杨权 庹玖玲 +5 位作者 黄旭斌 罗洪娇 周凯 张甜 曹开源 徐霖 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期488-493,共6页
目的:了解人冠状病毒OC43(Human coronavirus OC43,HCoV-OC43)逃避人树突状细胞(Dendritic cell,DC)免疫监视作用的初步机制。方法:利用HCoV-OC43阳性病人的标本感染BSC-1细胞分离OC43病毒,相差显微镜观察细胞病变(Cytopathic effect,CP... 目的:了解人冠状病毒OC43(Human coronavirus OC43,HCoV-OC43)逃避人树突状细胞(Dendritic cell,DC)免疫监视作用的初步机制。方法:利用HCoV-OC43阳性病人的标本感染BSC-1细胞分离OC43病毒,相差显微镜观察细胞病变(Cytopathic effect,CPE),实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)进行鉴定;利用人细胞因子GM-CSF和IL-4联合体外诱导DC分化,于诱导7 d后用HCoV-OC43病毒感染DC。采用透射电镜观察DC感染后的形态,Real-time PCR检测DC功能相关细胞因子的表达水平;流式细胞术检测DC比例及其功能相关共刺激分子的表达。结果:成功建立HCoV-OC43体外感染DC的体系。HCoV-OC43能感染DC并刺激其产生免疫应答,但培养上清中不能检测到病毒核酸;HCoV-OC43感染会导致DC细胞表达IFN-α、IFN-β、CCL3和CCL5的量显著下调,但其共刺激分子HLA-DR、CD1c和CD86的表达不受抑制。结论:HCoVOC43可感染人DC细胞并刺激其产生免疫应答,但不能产生活的子代病毒;HCoV-OC43可通过抑制宿主DC细胞IFN-α等相关炎症因子和趋化因子的分泌,来实现免疫逃逸。 展开更多
关键词 人冠状病毒oc43 人树突状细胞 细胞因子 免疫逃逸
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用RT-PCR法鉴定人冠状病毒SARS、229E和OC43
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作者 邹丽容 李晖 +1 位作者 柯昌文 黄平 《中国卫生检验杂志》 CAS 2006年第5期513-515,553,共4页
目的:建立两种简单、快速和特异性的RT-PCR法鉴定SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43。方法:用DNA Star和Prem ier 5.0软件设计SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43及其它冠状病毒针对保守区Pol1b基因的一对通用引物和分别针对M基因的3对引物... 目的:建立两种简单、快速和特异性的RT-PCR法鉴定SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43。方法:用DNA Star和Prem ier 5.0软件设计SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43及其它冠状病毒针对保守区Pol1b基因的一对通用引物和分别针对M基因的3对引物,然后通过对扩增片断测序、限制性酶切方法和根据扩增片断的长度进行鉴定。结果:两种方法均能扩增到与预期目标一致的片断,特异性和灵敏度高,能快速区分3种病毒。结论:这些方法将为了解冠状病毒在呼吸道感染中的作用提供一个有利的工具。 展开更多
关键词 SAILS冠状病毒 冠状病毒229E 冠状病毒OCA3 逆转录聚合酶链式反应
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严重急性呼吸道感染病例中人冠状病毒OC43基因特征分析 被引量:4
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作者 孙凯旋 崔爱利 +2 位作者 何佩 许文波 张荣波 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期236-245,共10页
人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)是导致人呼吸道感染的重要病原之一。为了从分子水平上探讨严重急性呼吸道感染(Severe acute respiratory infection,SARI)病例中HCoV-OC43的基因特征,本研究应用实时荧光定量(Real-time)PCR方法对2... 人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)是导致人呼吸道感染的重要病原之一。为了从分子水平上探讨严重急性呼吸道感染(Severe acute respiratory infection,SARI)病例中HCoV-OC43的基因特征,本研究应用实时荧光定量(Real-time)PCR方法对2019年河南省374份SARI病例样本进行HCoV-OC43核酸筛查,并对核酸检测阳性样本进行棘突蛋白(Spike,S)、RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)和核衣壳蛋白(Nucleocapsid,N)三个靶基因扩增和序列测定。结合从GenBank数据库筛选的国内外42条代表序列和本研究所获得的S、RdRp和N三个靶基因全长序列构建基因亲缘性关系树,对本研究所获得的HCoV-OC43样本进行基因型别鉴定和基因特征分析,并对HCoV-OC43重要抗原S蛋白进行氨基酸位点变异分析。结果显示:在374份SARI病例样本中共检测出15份HCoV-OC43核酸阳性样本(15/374,4.01%),并在4份临床样本中获得S、RdRp和N基因全长序列。通过构建基因亲缘性关系树,结果显示有3株属于G基因型,1株属于H基因型。S蛋白氨基酸位点变异分析结果提示,2019年G基因型流行株(包括本研究的3株和美国株USA/MN306041/SC0810/2019)有特异性的3个氨基酸位点变异:L272P、P516S和S902A。2019年H基因型流行株(包括本研究的1株和美国株USA/MN306043/SC0841/2019)特异的氨基酸位点变异为N484D。本研究通过对2019年河南省流行的HCoV-OC43进行基因型别鉴定与基因特征分析,为我国HCoV-OC43的分子变异变迁研究提供了基线数据。 展开更多
关键词 人冠状病毒oc43(HCoV-oc43) 基因型别 基因特征
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人冠状病毒OC43易感细胞系的高效筛选 被引量:1
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作者 申梁 朱娜 +4 位作者 牛军伟 黄保英 刘高山 牛培华 谭文杰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期307-312,共6页
为了筛选获得可用于人冠状病毒OC43(Human coronavirus OC43,HCoV-OC43)分离与研究的细胞系,本研究利用表达海肾荧光素酶基因的重组HCoV-OC43(rOC43-ns2DelRluc)对28种常见真核细胞系进行了易感性高效筛选研究,进一步利用亲本病毒HCoV-O... 为了筛选获得可用于人冠状病毒OC43(Human coronavirus OC43,HCoV-OC43)分离与研究的细胞系,本研究利用表达海肾荧光素酶基因的重组HCoV-OC43(rOC43-ns2DelRluc)对28种常见真核细胞系进行了易感性高效筛选研究,进一步利用亲本病毒HCoV-OC43-WT进行了细胞病变效应的观察,并采用荧光定量PCR进行复制动力学分析。实验结果显示:18种细胞对HCoV-OC43易感,HCoV-OC43在其中5种细胞中表现出较强的复制能力,包括BHK-21、293T、Huh7.0、RD等常见贴壁细胞。复制高峰在第5d出现,但HCoV-OC43感染的细胞系在6d内均未观察到典型细胞病变效应。本研究为今后HCoV-OC43的复制规律、致病机制的研究以及筛选广谱抗冠状病毒药物的提供了参考细胞系。 展开更多
关键词 人冠状病毒oc43 易感性 复制 致细胞病变效应 细胞系
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基于转录组学探讨阿比朵尔对HCoV-OC43感染诱导神经营养因子信号通路活化的影响
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作者 陈琪敏 周红霞 +4 位作者 谢佩芳 李润峰 杨子峰 邱敏珊 沈利汉 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第6期81-89,共9页
目的采用转录组学技术分析阿比多尔(arbidol,ARB)对HCoV-OC43感染引起宿主信号通路活化的影响,并探讨ARB抗炎活性与其作用于神经营养因子信号通路的关系。方法用OC43感染HRT-18细胞,并以ARB进行干预。感染96 h后提取总RNA,进行转录组学... 目的采用转录组学技术分析阿比多尔(arbidol,ARB)对HCoV-OC43感染引起宿主信号通路活化的影响,并探讨ARB抗炎活性与其作用于神经营养因子信号通路的关系。方法用OC43感染HRT-18细胞,并以ARB进行干预。感染96 h后提取总RNA,进行转录组学分析,获得差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),开展基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,筛选出ARB可能作用的生物学过程及相关信号通路。进一步利用RT-qPCR方法验证ARB干预对神经营养因子信号通路关键分子表达的抑制作用。结果与病毒感染组相比,高、中和低剂量(6、2和0.67μg/mL)ARB干预分别显示出9459、4186和1744个DEGs。GO分析显示,ARB主要干预的生物学过程是共翻译蛋白膜靶向,作用的细胞组成为粘着斑和细胞-底物间连接,影响的分子功能为钙粘蛋白结合。KEGG分析发现,与冠状病毒感染相关的细胞凋亡信号通路和神经营养因子信号通路有明显富集,其中ARB对神经营养因子信号通路中的MAPK、PI3K和NF-κB通路分子有显著抑制作用。RT-qPCR检测显示,ARB对PIK3CA、AKT、TRAF-6、Bax、p38和c-JUN等分子的mRNA表达具有明显抑制作用。结论本研究提示了ARB应用于治疗冠状病毒感染引起神经炎症的可能性。 展开更多
关键词 转录组学 阿比多尔 HCoV-oc43 神经营养因子信号通路
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人冠状病毒OC43、HKU1的研究进展 被引量:1
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作者 聂丽娜 肖敏敏 《医学理论与实践》 2022年第7期1107-1109,共3页
冠状病毒是引起人呼吸道感染的常见病原体,2019年底的新型冠状病毒的大流行引起了人们对冠状病毒的高度关注,本文就人冠状病毒(HCoV)OC43、HKU1的发现、基因组结构、流行情况、与疾病的关系以及实验室检测方法等进行综述。
关键词 冠状病毒 oc43 HKU1
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Prevalence and Seroprevalence of Non-SARS Human Coronaviruses 229E and OC43 in East Tyrol/Austria
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作者 Sonnleitner Stefanie Sonnleitner Sissy +1 位作者 Eva Hinterbichler Gernot Walder 《Journal of Biosciences and Medicines》 2023年第7期125-139,共15页
The recent SARS-CoV-2 pandemic renewed interest in other previously discovered human coronaviruses—the non-severe acute respiratory syndrome human coronavirus (non-SARS hCoVs) and this study is a starting point for a... The recent SARS-CoV-2 pandemic renewed interest in other previously discovered human coronaviruses—the non-severe acute respiratory syndrome human coronavirus (non-SARS hCoVs) and this study is a starting point for a closer investigation of those. With the pandemic behind us we believe it to be important to also examine the current and past respiratory pathogen landscape in the patient population in our care. Therefore, 954 nasopharyngeal swabs of patients with respiratory diseases collected between October 2018 and March 2020 were tested against the pathogens Mycoplasma pneumoniae, Bordetella pertussis, Influenza A and virus, Human metapneumovirus, respiratory syncytial virus, Parainfluenza virus, human Adenovirus and Polyoma virus BK/JC. Swabs negative against these pathogens were further tested for OC43 and 229E by RT-qPCR. Human coronaviruses 229E and OC43 were proven as the causative agents in a considerable number of cases, confirmed by PCR. Overall, our results show that those two non-SARS hCoVs were responsible for 13.9% (11 of 79) of infections with flu-like symptoms of unknown etiology in the study area. In the subsequent seroprevalence study, it was shown that the seroprevalence rate of IgG antibodies against 229E and OC43 was over 50%, indicating that a big part of the population in our study area has been in contact with these non-SARS-CoVs and has built the specific humoral immune response accordingly. 展开更多
关键词 NonSARS Human Coronavirus hCoV hCoV oc43 hCoV 229E Respiratory Pathogens
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不同种属细胞系感染HCoV-OC43VR1558株的病变效应与复制动力学
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作者 吴依依 刘冠雅 +5 位作者 高尚卿 刘士元 孙洁伟 王梦微 黄保英 谭文杰 《微生物学报》 北大核心 2025年第7期3136-3149,共14页
【目的】探讨HCoV-OC43VR1558株在不同种属细胞系中的致细胞病变效应与病毒复制增殖特征。【方法】选择来自人源(MRC-5、HRT-18、Huh7、Huh7.5、RD、HeLa)、非人灵长动物(LLC-MK2、Vero)和啮齿类动物(17Cl-1、Mv.1Lu、BHK-21、BHK-21-AP... 【目的】探讨HCoV-OC43VR1558株在不同种属细胞系中的致细胞病变效应与病毒复制增殖特征。【方法】选择来自人源(MRC-5、HRT-18、Huh7、Huh7.5、RD、HeLa)、非人灵长动物(LLC-MK2、Vero)和啮齿类动物(17Cl-1、Mv.1Lu、BHK-21、BHK-21-APN、Neuro2a)的13种细胞系,将HCoV-OC43VR1558株感染上述细胞系,分别于感染后连续观察细胞病变效应(cytopathic effects,CPE),同时每天收集病毒感染的细胞与上清,通过实时定量逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription quantitative real-time PCR,RT-qPCR)监测病毒RNA核酸拷贝数变化,通过病毒半数组织培养感染剂量(tissue culture infectious dose 50%,TCID_(50))测定具有感染能力的活病毒载量,绘制病毒复制动力学曲线。【结果】HCoV-OC43VR1558株感染上述不同种属来源的13种细胞系后均能观察到CPE,主要表现为细胞聚集、皱缩、变圆与脱落等特征;其中,MRC-5、Mv.1Lu、HeLa及17CI-14株细胞CPE出现较快,感染后72h内即可观察到明显的细胞病变,其他细胞直至感染后120h才能观察到明显的CPE,且HRT-18与Huh7.5的CPE最轻。RT-qPCR结果表明,病毒感染后的24h内核酸拷贝数上升最为明显,但达到高峰期的时间与核酸拷贝数不同;其中,感染Huh7.5细胞后24h达到高峰(107copies/mL);感染17Cl-1、BHK-21-APN、Mv.1Lu、BHK-21细胞后48h到达高峰(10^(7)-10^(9)copies/mL);感染MRC-5、LLC-MK2、Neuro2a、Vero细胞后72 h达到复制高峰(10^(6)-10^(9)copies/mL);而感染HRT-18、HeLa、Huh7以及RD细胞后的病毒拷贝数在96 h后才达到高峰(10^(8)-10^(9)copies/mL)。TCID_(50)检测结果显示,病毒感染24 h内快速增殖,但达到高峰期的时间与滴度不同;感染BHK-21-APN细胞后48h达高峰(2.68×10^(7)TCID_(50)/mL);BHK-21、Neuro 2a在感染后72h达峰值(10^(6)-10^(7)TCID_(50)/mL),而MRC-5、17Cl-1、HeLa、Huh7、Huh7.5、Mv.1Lu、LLC-MK2及RD细胞于感染后96h达到滴度峰值(10^(6)-10^(8)TCID_(50)/mL),Vero细胞至感染后120h到达峰值(10^(5)TCID_(50)/mL),而HRT-18细胞则在感染后144h达到峰值(10^(8)TCID_(50)/mL)。【结论】HCoV-OC43VR1558株具有较广泛的细胞感染谱,病毒感染不同种属来源13株细胞系后均能在24h内快速复制增殖,但达到高峰期的时间不同。最高感染滴度可达到10^(8)TCID_(50)/mL(在MRC-5和HRT-18细胞)。该研究为深入开展人冠状病毒OC43的复制特征、感染致病机制研究及抗病毒药物筛选评价提供参考。 展开更多
关键词 人冠状病毒oc43 VR1558株 细胞病变效应 核酸拷贝数 半数组织培养感染剂
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High-Voltage Low-Frequency Electric Field Exposure as an Antiviral Strategy: Effects on Viral Infectivity and Host Cell Viability
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作者 Vladimir Kriman 《Advances in Infectious Diseases》 2024年第4期702-711,共10页
This study explores the antiviral properties of high-voltage low-frequency electric field exposure on the replication of human viruses, including Herpes Simplex Virus type 1 (HSV-1), Human Coronavirus OC43 (HCoV OC43)... This study explores the antiviral properties of high-voltage low-frequency electric field exposure on the replication of human viruses, including Herpes Simplex Virus type 1 (HSV-1), Human Coronavirus OC43 (HCoV OC43), and Influenza A virus (A H1N1). Using the HealectricsTM device (model S02), which operates by applying high-voltage direct current (30 - 50 kV) with a polarity change frequency of ~0.2 Hz, we investigated the impact on viral infectivity and host cell viability. Virus cultures were exposed to electric fields during different stages: virion adsorption (0 - 1 hour), intracellular replication (1 - 8 hours), and both stages. Viral infectivity was assessed through titration, and cytotoxic effects were evaluated using MTT assays. Electric field exposure significantly reduced viral infectivity, particularly during the combined sorption and replication stages, with up to a 90% decrease in viral activity. Among the viruses tested, HCoV OC43 showed the least sensitivity, with a reduction in viral activity by a factor of 5. Comparisons revealed statistically significant reductions for influenza and herpes viruses, and a trend towards significance for HCoV OC43. The electric field treatment did not significantly affect the viability of Vero and MDCK cells, indicating the method’s safety. Our findings suggest that high-voltage low-frequency electric fields can effectively reduce viral infectivity and may serve as a potential therapeutic and preventive measure against a wide range of membrane-bound viruses, including SARS-CoV-2. 展开更多
关键词 High-Voltage Therapy Cell Viability Viral Infectivity Herpes Simplex Virus Type 1 (HSV-1) Human Coronavirus oc43 (HCoV oc43) Influenza A Virus (A H1N1)
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冠状病毒检测新方法及其在其他病原体检测中的应用前景
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作者 王芝敏 郑铃 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第5期F002-F002,448,F003,共3页
冠状病毒与人和动物的许多疾病有关。迄今至少已发现了13个种属多个抗原表型的冠状病毒,其中人冠状病毒包括HCoV OC43和HCoV 229E两个抗原型,是引起人类上呼吸道感染的重要病原体。2003年严重急性呼吸系统综合症(Severe Acute Respira... 冠状病毒与人和动物的许多疾病有关。迄今至少已发现了13个种属多个抗原表型的冠状病毒,其中人冠状病毒包括HCoV OC43和HCoV 229E两个抗原型,是引起人类上呼吸道感染的重要病原体。2003年严重急性呼吸系统综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)在中国和世界上其他国家爆发流行,其病原体SARS相关冠状病毒(SARS-CoV)作为新的病毒亚种引起了社会的广泛关注。 展开更多
关键词 病原体检测 检测新方法 冠状病毒(SARS-CoV) 严重急性呼吸系统综合症 SYNDROME 上呼吸道感染 人冠状病毒 2003年 Acute SARS) 抗原表型 oc43 爆发流行 多疾病 与人和 抗原型
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氯喹抗新型冠状病毒的研究进展 被引量:2
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作者 韩丽珠 边原 +6 位作者 肖洪涛 童荣生 闫峻峰 陈岷 舒永全 杨勇 尹琪楠 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2021年第2期222-227,共6页
氯喹是一种廉价、高效、作用持久的抗疟药,亦是一个广泛的抗病毒药物。氯喹在体外和/或体内对HCoV-229E、SARS-CoV、HCoV-OC43、MERS-CoV均具有明显的抗病毒活性。最新研究表明:氯喹对SARS-CoV-2感染的细胞同样具有很强的作用,目前大量... 氯喹是一种廉价、高效、作用持久的抗疟药,亦是一个广泛的抗病毒药物。氯喹在体外和/或体内对HCoV-229E、SARS-CoV、HCoV-OC43、MERS-CoV均具有明显的抗病毒活性。最新研究表明:氯喹对SARS-CoV-2感染的细胞同样具有很强的作用,目前大量开展的临床试验也在不断证实氯喹的体内抗病毒活性。现对氯喹的抗人冠状病毒作用的研究进展进行综述,以期为氯喹抗新型冠状病毒肺炎的研究和应用提供参考。 展开更多
关键词 氯喹 HCoV-229E SARS-COV HCoV-oc43 MERS-CoV SARS-CoV-2 新型冠状病毒肺炎 抗病毒
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六重荧光RT-PCR快速检测A、B型流感等呼吸道病毒方法的建立 被引量:1
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作者 连昌虎 唐屹君 刘涛 《热带医学杂志》 CAS 2017年第7期872-876,共5页
目的利用六重荧光RT-PCR法建立起一种快速检测A、B型流感病毒/人偏肺病毒/NL63型、HKU1型和OC43型冠状病毒的方法。方法根据A、B型流感病毒/人偏肺病毒/NL63型、HKU1型和OC43型冠状病毒的保守序列,设计相应的引物和Taqman探针,利用一步... 目的利用六重荧光RT-PCR法建立起一种快速检测A、B型流感病毒/人偏肺病毒/NL63型、HKU1型和OC43型冠状病毒的方法。方法根据A、B型流感病毒/人偏肺病毒/NL63型、HKU1型和OC43型冠状病毒的保守序列,设计相应的引物和Taqman探针,利用一步法RT-PCR试剂盒优化反应体系后,采用十倍稀释体外转录RNA检验建立体系的灵敏度和重复性,并建立相对定量的标准曲线;利用具有多种相似临床症状的呼吸道病毒检验建立体系的特异性。结果 A、B型流感病毒/人偏肺病毒/NL63型、HKU1型和OC43型冠状病毒的检测灵敏度为100 copies/μL,标准曲线的相关系数都在99%以上,重复性良好,特异性实验未发现有非特异性扩增。结论本研究建立的六重荧光RT-PCR技术可以快速、准确地检测A、B型流感病毒/人偏肺病毒/NL63型、HKU1型和OC43型冠状病毒等六种呼吸道病毒。 展开更多
关键词 流感病毒A 流感病毒B 偏肺病毒 冠状病毒NL63 冠状病毒HKU1 冠状病毒oc43 六重荧光RT-PCR
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SARS-CoV、HCoV-229E和OC43核衣壳蛋白的克隆表达及抗原相关性分析 被引量:4
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作者 车小燕 廖志勇 +7 位作者 王压娣 丘立文 温坤 潘玉先 徐华 梅亚波 郝卫 丁彦青 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期711-715,共5页
目的克隆表达SARS冠状病毒(SARS-CoV)和人冠状病毒(HCoV-229E、HCoV-OC43)核衣壳(N)蛋白,并对其重组蛋白的抗原相关性进行探讨。方法RT-PCR扩增SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43的N基因全长序列,克隆到原核表达载体pQE30,IPTG诱导表达重... 目的克隆表达SARS冠状病毒(SARS-CoV)和人冠状病毒(HCoV-229E、HCoV-OC43)核衣壳(N)蛋白,并对其重组蛋白的抗原相关性进行探讨。方法RT-PCR扩增SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43的N基因全长序列,克隆到原核表达载体pQE30,IPTG诱导表达重组蛋白,用Westernblot和免疫荧光鉴定。结果获得SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43His-N融合蛋白的相对分子质量(Mr)分别约为47×103、44×103、50×103,与相应预测值相符,Westernblot和免疫荧光证实,3种融合蛋白仅与相应的免疫血清特异性结合,3种蛋白的抗原性相互间无交叉反应。结论获得具有免疫原性的SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43的核衣壳融合蛋白,其3种N蛋白抗原性在免疫动物血清中不存在交叉反应。 展开更多
关键词 冠状病毒 核衣壳蛋白 抗原性 冠状病毒(SARS-CoV) HCoV-229E 核衣壳蛋白 抗原相关性 克隆表达 相关性分析 oc43 Western RT-PCR扩增
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携带绿色荧光蛋白报告基因的HCoV-OC43感染性克隆的构建与病毒拯救 被引量:2
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作者 杨扬 申梁 +3 位作者 陆柔剑 王惠娟 王文玲 谭文杰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期256-262,共7页
目的:探索利用HCoV-OC43感染性克隆表达外源基因的可行性及插入区域。方法在HCoV-OC43全长感染性克隆pBAC-OC43 FL的基础上,利用融合PCR和酶切连接等方法,成功构建了在3个不同位置插入绿色荧光蛋白报告基因( GFP替换 NS2基因或NS12.9... 目的:探索利用HCoV-OC43感染性克隆表达外源基因的可行性及插入区域。方法在HCoV-OC43全长感染性克隆pBAC-OC43 FL的基础上,利用融合PCR和酶切连接等方法,成功构建了在3个不同位置插入绿色荧光蛋白报告基因( GFP替换 NS2基因或NS12.9基因以及插入N基因后)的重组质粒,利用反向遗传学操作技术进行病毒拯救,通过免疫荧光、Western blot和病毒感染等试验对重组病毒进行鉴定分析。结果 GFP替换NS2或NS12.9基因的感染性克隆可以成功拯救出重组病毒(OC43-GFPΔNS2和OC43-GFPΔNS12.9),其中OC43-GFPΔNS2在感染BHK-21细胞后能够观察到GFP基因的高效表达,OC43-GFPΔNS12.9在感染细胞后仅有少量GFP基因的表达,而GFP插入N基因后的感染性克隆未能拯救出病毒。结论 NS2基因可以作为HCoV-OC43感染性克隆表达外源基因的插入位点,并且外源基因插入至该位点可获得稳定高效表达,为进一步研究HCoV-OC43的复制规律及研发基于HCoV-OC43的冠状病毒载体提供了参考依据。 展开更多
关键词 人冠状病毒oc43 感染性克隆 病毒拯救 绿色荧光蛋白 病毒载体
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冠状病毒OC43与加拿大SARS样疾病爆发 被引量:3
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作者 赵志晶 庄辉 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期887-888,共2页
关键词 冠状病毒 oc43 加拿大 SARS样疾病 严重急性呼吸综合症
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