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粟负泥虫成虫触角转录组及OBPs基因家族分析 被引量：2
1
作者 刘佳 曹艺轩 +5 位作者 白辉 王永芳 马继芳 刘磊 董志平 李志勇 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1400-1412,共13页
粟负泥虫(Oulema tristis)是谷子上的重要害虫,对谷子的产量和品质均构成了严重威胁。气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)作为昆虫嗅觉识别系统中与气味分子结合的重要蛋白,在成虫定位寄主植物及交配行为中发挥着重要作用。... 粟负泥虫(Oulema tristis)是谷子上的重要害虫,对谷子的产量和品质均构成了严重威胁。气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)作为昆虫嗅觉识别系统中与气味分子结合的重要蛋白,在成虫定位寄主植物及交配行为中发挥着重要作用。本研究通过转录组测序,构建了粟负泥虫成虫触角转录组数据库,挖掘粟负泥虫成虫触角中潜在的OBPs基因家族,并对其编码蛋白的理化性质、保守基序、系统发育及表达量进行了分析。结果表明,本研究得到了一个准确性高、拼接完整度好且功能注释较好的高质量的触角转录组数据库。共鉴定出32个OtriOBPs基因,其编码92~184个氨基酸,蛋白分子的质量为10.07~21.19 kDa。不同分支上OtriOBPs的Motif组成有所差异,但位于同一个分支上的OtriOBPs具有相同的Motif组成。32个OtriOBPs在整个进化树上分布,且相对集中,与光肩星天牛(Anoplophora glabripennis)、灭字脊虎天牛(Xylotrechus quadripes)和苹果小吉丁(Agrilus mali)存在多个直系同源基因对。筛选到了12个在成虫触角中高表达的基因,其中,OtriOBP9基因的相对表达量最高,在雄虫触角中的表达量显著高于雌虫的,可能与雄虫寻找配偶有关,实时定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)的结果与转录组数据一致。本研究为进一步探究粟负泥虫OBPs的功能奠定基础,同时也为后续开发基于嗅觉行为调控的绿色防控技术提供重要的理论依据。 展开更多
关键词 粟负泥虫 触角 转录组测序 气味结合蛋白(obps) 生物信息学分析
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柑橘大实蝇Bmin Minus OBP1和Bmin Plus OBP1的克隆、原核表达及其配体结合特性 被引量：2
2
作者 汪志雄 许冬 +6 位作者 田晓丽 万鹏 夏根 宋旭荣 王福莲 桂连友 张国辉 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第24期4894-4906,共13页
【目的】分析柑橘大实蝇Minus-C OBP(BminMinusOBP1)和Plus-C OBP(BminPlusOBP1)的分子特征及其异源表达蛋白的配体结合特性,为揭示非Classic OBP在柑橘大实蝇嗅觉识别中的作用提供参考。【方法】基于实验室前期构建的柑橘大实蝇转录组... 【目的】分析柑橘大实蝇Minus-C OBP(BminMinusOBP1)和Plus-C OBP(BminPlusOBP1)的分子特征及其异源表达蛋白的配体结合特性,为揭示非Classic OBP在柑橘大实蝇嗅觉识别中的作用提供参考。【方法】基于实验室前期构建的柑橘大实蝇转录组数据,分析、鉴定和克隆BminMinusOBP1和BminPlusOBP1;利用生物信息学软件和RT-qPCR技术分别对BminMinusOBP1和BminPlusOBP1的序列特征和组织表达模式进行分析;构建重组表达载体pET32a/BminMinusOBP1和pET32a/BminPlusOBP1,将重组表达载体转入原核细胞BL21(DE3)中进行异源表达;以1-NPN为荧光探针通过竞争结合实验检测细菌表达的BminMinusOBP1和BminPlusOBP1蛋白对12种寄主植物挥发物组分的结合能力。【结果】序列分析表明,BminMinusOBP1开放阅读框全长426 bp,编码141个氨基酸残基,在其氨基端有一段16个氨基酸残基组成的信号肽。其成熟蛋白预测分子量为14.39 kDa,等电点为4.86。序列中存在Minus-C OBP典型特征,即4个保守半胱氨酸残基。BminPlusOBP1开放阅读框为765 bp,编码254个氨基酸残基,其氨基端的18个氨基酸残基为信号肽序列。其成熟蛋白预测分子量为27.29 kDa,等电点为5.75。序列中包含Plus-C OBP特有的保守半胱氨酸残基和脯氨酸残基。组织表达模式结果显示,BminMinusOBP1和BminPlusOBP1在主要嗅觉器官触角中的表达量并不高,而在去除触角的头部组织中表达量较高。荧光竞争结合实验显示,BminMinusOBP1和BminPlusOBP1均表现出较宽的配体结合谱。BminMinusOBP1可以结合供试12种气味中的8种,分别为丁香酚甲醚、芳樟醇、乙偶姻、α-蒎烯、水杨酸甲酯、苯甲醛、1-辛醇和柠檬醛,Ki值介于9.02—22.13μmol·L^(-1);BminPlusOBP1可结合供试的全部12种气味配体,Ki值介于7.40—16.74μmol·L^(-1)。【结论】BminMinusOBP1对芳樟醇、乙偶姻、柠檬醛等7种寄主植物挥发物组分表现出中、高强度的亲和力;BminPlusOBP1对丁香酚甲醚、覆盆子酮、苯乙酸甲酯等12种寄主植物挥发物组分表现出中、高强度的亲和力。这些信息可为全面了解柑橘大实蝇气味结合蛋白家族各成员的功能特征提供重要参考。 展开更多
关键词 柑橘大实蝇 气味结合蛋白 原核表达 寄主挥发物 嗅觉识别机制
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中华蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表达及组织表达谱 被引量：13
3
作者 吉挺 沈芳 +3 位作者 梁勤 吴黎明 刘振国 罗岳雄 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期897-904,共8页
【目的】气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)参与气味分子的识别,在蜜蜂嗅觉中扮演重要的角色。本研究旨在克隆中华蜜蜂Apis cerana cerana OBP3基因,以制备多克隆抗体。【方法】运用RT-PCR技术从中华蜜蜂头部总RNA中扩增O... 【目的】气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)参与气味分子的识别,在蜜蜂嗅觉中扮演重要的角色。本研究旨在克隆中华蜜蜂Apis cerana cerana OBP3基因,以制备多克隆抗体。【方法】运用RT-PCR技术从中华蜜蜂头部总RNA中扩增OBP3基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-28a并转入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中诱导表达获得融合蛋白质,融合蛋白质经纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western Blot检测抗体的效价和特异性,并采用荧光定量PCR检测OBP3基因在中蜂不同组织中的表达。【结果】克隆得到了中华蜜蜂OBP3基因AccOBP3(GenBank登录号KJ026357),大小为444 bp。SDS-PAGE结果显示融合蛋白成功表达。制备的多克隆抗体效价高于1∶40 000,且具有很高的特异性。荧光定量PCR结果表明,AccOBP3基因在腿部和触角中显著高表达(P<0.01),胸部中次之(P<0.01),头部和腹部中显著低表达,后两者表达量差异不显著(P>0.05)。【结论】OBP3基因在中蜂触角有高转录活性。本研究实现了中蜂OBP3基因的原核表达,并制备了兔抗中蜂OBP3多克隆抗体,为深入研究中蜂OBP3基因的功能奠定基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 obp3基因 基因克隆 原核表达 组织表达谱 抗体制备
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中华蜜蜂及意大利蜜蜂气味结合蛋白OBP12的基因克隆与差异表达分析 被引量：8
4
作者 杜亚丽 冯宇佳 +5 位作者 马卫华 邰苗苗 李新宇 苏文婷 赵慧婷 姜玉锁 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期517-529,共13页
【目的】克隆获得中华蜜蜂Apis cerana cerana(简称中蜂)和意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称意蜂)的气味结合蛋白基因OBP12序列,并对两蜂种的蛋白结构进行预测,明确该基因在两蜂种不同组织和发育阶段的表达差异。【方法】分别... 【目的】克隆获得中华蜜蜂Apis cerana cerana(简称中蜂)和意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称意蜂)的气味结合蛋白基因OBP12序列,并对两蜂种的蛋白结构进行预测,明确该基因在两蜂种不同组织和发育阶段的表达差异。【方法】分别以中蜂和意蜂的触角cDNA为模板,采用RT-PCR技术扩增和克隆获得OBP12cDNA全长序列,并利用生物信息学软件对其编码蛋白的理化特性、结构特征和系统进化进行分析;采用qRT-PCR技术对OBP12在中华蜜蜂和意大利蜜蜂不同发育阶段(1、5、10、15、20、25、30日龄)各组织(触角、头、胸、腹、足和翅)中mRNA的表达情况进行比较分析。【结果】成功获得了AcerOBP12和AmelOBP12的完整开放阅读框ORF序列,全长均为453bp,共编码150个氨基酸,预测分子量分别为17.76 ku、17.42 ku;N-末端均有一段含22个氨基酸的信号肽,无跨膜结构;均含有6个保守的半胱氨酸位点,属于Classical OBP亚家族。两蛋白均包含6个α螺旋,且由Cys组成的3个二硫键连接在一起。系统进化树分析表明,中华蜜蜂AcerOBP12首先与意大利蜜蜂AmelOBP12聚在一起,再与同为膜翅目的回条蜂HlabPBPGp-9-like、印度跳蚁HsalPBPGp-9-like、阿根廷蚁LhumPBPGp-9-like和小火蚁WaurPBPGp-9-like聚为一类。荧光定量PCR结果显示,OBP12在中、意蜂不同发育阶段各组织中均有表达,且触角中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01);其他组织中,翅膀和足的表达量相对较高,头、胸和腹中呈微量表达。此外,OBP12在意蜂不同发育阶段各组织的表达量均高于中蜂。【结论】AcerOBP12和AmelOBP12均属于Classical OBP亚家族,推测其为信息素气味结合蛋白PBP。组织表达谱结果暗示,OBP12除广泛参与嗅觉相关行为之外,还可能参与味觉识别过程。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 意大利蜜蜂 obp12 基因克隆 生物信息学分析 时空表达
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家蚕蛹和成虫期GOBP/PBP亚家族基因簇基因定位与表达分析 被引量：8
5
作者 张升祥 张瑶 +4 位作者 徐世清 王更先 胡增娟 赵春晓 崔为正 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1069-1076,共8页
昆虫的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫与外界环境化学信息交流过程中起着重要作用,对昆虫觅食、求偶、繁殖具有重要意义。普通气味结合蛋白/性信息素结合蛋白(general odorant binding protein/pheromone binding p... 昆虫的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫与外界环境化学信息交流过程中起着重要作用,对昆虫觅食、求偶、繁殖具有重要意义。普通气味结合蛋白/性信息素结合蛋白(general odorant binding protein/pheromone binding protein,GOBP/PBP)是鳞翅目昆虫OBP家族的一个重要单系群。为进一步明确家蚕Bombyx moriGOBP/PBP基因的结构、表达及功能,本研究利用染色体定位及半定量表达分析方法对其进行了分析。染色体定位分析显示,这些基因以基因簇的形式存在于第19染色体的nscaf3052上,基因结构相似,转录方向一致,表明这些基因可能由同源基因复制产生,并具有类似功能。对家蚕蛹和成虫不同发育阶段的雌、雄虫多种组织中进行表达分析发现,这些基因的表达在不同发育时期和不同组织间差异明显(P<0.05),相对表达量均以触角中为最高,其他非嗅觉组织中也多有表达,性别间差异不大,说明了该基因簇基因除了具有嗅觉相关的功能外,很可能具有其他尚未被发现的功能。 展开更多
关键词 家蚕 气味结合蛋白 PBP1-Gobp2亚家族 基因簇 表达分析 染色体定位
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绿盲蝽气味结合蛋白AlucOBP8的结合特性分析 被引量：6
6
作者 朱晓强 丁玉骁 +3 位作者 刘航玮 周延乐 张永军 郭予元 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期821-829,共9页
气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)是参与昆虫嗅觉感知过程的一类重要蛋白,其功能之一是结合运输外界气味分子通过淋巴液到达神经元树突。本文克隆了一个绿盲蝽Apolygus lucorum(Meyer-Dür)气味结合蛋白Aluc OBP8(Gen B... 气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)是参与昆虫嗅觉感知过程的一类重要蛋白,其功能之一是结合运输外界气味分子通过淋巴液到达神经元树突。本文克隆了一个绿盲蝽Apolygus lucorum(Meyer-Dür)气味结合蛋白Aluc OBP8(Gen Bank登录号JQ675725)并进行了原核重组表达。组织表达谱分析表明,Aluc OBP8基因主要在雌雄成虫触角表达。采用荧光竞争结合试验,研究了重组蛋白Aluc OBP8与7种性信息素类似物和33种植物挥发物的结合能力。结果显示,7种性信息素类似物均不能与Aluc OBP8有效结合,而植物挥发物中只有葎草烯(α-caryophyllene)和十二醛(dodecyl aldehyde)与Aluc OBP8表现出较强的结合,结合常数分别为8.74和9.99μmol/L。绿盲蝽雌雄成虫对这两种化合物的趋向结果表明,十二醛对绿盲蝽雄成虫具有显著的驱避作用。初步推断Aluc OBP8为普通气味结合蛋白并参与寄主普通挥发气味的识别过程。 展开更多
关键词 绿盲蝽 Aluc obp8 植物挥发物 竞争结合试验 趋向选择
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麦长管蚜OBP7基因的RNA干扰 被引量：3
7
作者 杨爽 尹姣 +2 位作者 曹雅忠 樊东 李克斌 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期104-109,共6页
OBP是蚜虫嗅觉功能中的一类重要分泌蛋白,能选择性地结合气味分子并进行信号转导。本试验使用显微注射法将麦长管蚜OBP7的小干扰RNA(siRNA)导入麦长管蚜体内,通过qRT-PCR检测OBP7mRNA相对表达量的变化情况。结果发现在siRNA浓度0.32μg/... OBP是蚜虫嗅觉功能中的一类重要分泌蛋白,能选择性地结合气味分子并进行信号转导。本试验使用显微注射法将麦长管蚜OBP7的小干扰RNA(siRNA)导入麦长管蚜体内,通过qRT-PCR检测OBP7mRNA相对表达量的变化情况。结果发现在siRNA浓度0.32μg/μL,注射量23nL,注射后24h,麦长管蚜成蚜的mRNA相对表达量降低到37.1%,证明了显微注射方式进行RNA干扰的可行性。在注射23nL的siRNA-467,经过36h后,麦长管蚜出现了对EβF趋性行为的改变(P<0.05),表明OBP7蛋白在麦蚜对EβF的识别过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 麦长管蚜 obp7 RNA干扰 荧光定量PCR
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中华蜜蜂OBP17基因CDS序列及其表达与抗螨性状的相关性 被引量：3
8
作者 殷玲 吉挺 +1 位作者 李冠华 牛德芳 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第11期45-48,共4页
OBP17是蜜蜂气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)家族中的成员,参与气味分子的识别,对嗅觉起重要作用。蜜蜂的抗螨性状与嗅觉密切相关,为研究蜜蜂OBP17基因的功能及其与抗螨性状的相关性,以中华蜜蜂头部组织c DNA为模板,PCR... OBP17是蜜蜂气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)家族中的成员,参与气味分子的识别,对嗅觉起重要作用。蜜蜂的抗螨性状与嗅觉密切相关,为研究蜜蜂OBP17基因的功能及其与抗螨性状的相关性,以中华蜜蜂头部组织c DNA为模板,PCR扩增OBP17基因完整CDS序列,利用生物信息学方法分析CDS序列及其编码的氨基酸序列,利用RT-PCR方法检测OBP17基因在不同抗螨性状的中华蜜蜂头部组织中的相对表达量。结果表明,OBP17基因CDS全长为408 bp,编码135个氨基酸的分泌性蛋白,无跨膜螺旋,是比较保守的基因;RT-PCR检测结果显示,在蜂螨胁迫下的中华蜜蜂头部组织中,OBP17基因的表达量显著高于未受胁迫的抗性群体及受到同等蜂螨胁迫的敏感性群体。中华蜜蜂OBP17基因的表达变化与蜂螨感染过程相关,说明OBP17基因在中华蜜蜂的抗螨行为中起重要作用。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 obp17 克隆 生物信息学 狄斯瓦螨
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中华蜜蜂OBP18 CDs序列及表达与抗螨性状相关性分析 被引量：2
9
作者 殷玲 吉挺 +1 位作者 李冠华 牛德芳 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期2820-2824,共5页
OBP18是蜜蜂气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)家族中的成员,参与气味分子的识别,对嗅觉起着重要的作用。为研究蜜蜂OBP18基因功能及与抗螨性状的相关性,本研究以中华蜜蜂头部组织c DNA为模板,PCR扩增OBP18基因完整CDS序列... OBP18是蜜蜂气味结合蛋白质(odorant binding proteins,OBPs)家族中的成员,参与气味分子的识别,对嗅觉起着重要的作用。为研究蜜蜂OBP18基因功能及与抗螨性状的相关性,本研究以中华蜜蜂头部组织c DNA为模板,PCR扩增OBP18基因完整CDS序列,利用生物信息学方法分析其CDS序列及其编码的氨基酸序列,用RT-PCR方法检测OBP18基因在不同抗螨性状的中华蜜蜂头部组织中的相对表达量。结果表明:OBP18基因CDS全长为399 bp,编码132个氨基酸的分泌性蛋白,无跨膜螺旋,是比较保守的基因;RT-PCR检测在螨虫胁迫下的蜂螨抗性中华蜜蜂头部组织中OBP18基因表达量显著高于未受胁迫的抗性群体,及受到同等蜂螨胁迫的敏感性群体,显示中华蜜蜂OBP18基因的表达变化与蜂螨感染过程相关,提示OBP18基因在中华蜜蜂的抗螨行为中起着重要作用。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 obp18 克隆 生物信息学 狄斯瓦螨
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蜜蜂属气味结合蛋白OBP5基因的进化 被引量：1
10
作者 曹联飞 胡福良 《中国蜂业》 2012年第Z3期17-20,共4页
气味结合蛋白对于昆虫检测和辨别环境中的化学信息具有重要作用。本研究克隆了中国自然分布的5种蜜蜂的气味结合蛋白OBP5基因序列。结合下载的西方蜜蜂的有关序列,分析了OBP5基因在蜜蜂属中的进化情况。结果表明:OBP5基因在蜜蜂属中较... 气味结合蛋白对于昆虫检测和辨别环境中的化学信息具有重要作用。本研究克隆了中国自然分布的5种蜜蜂的气味结合蛋白OBP5基因序列。结合下载的西方蜜蜂的有关序列,分析了OBP5基因在蜜蜂属中的进化情况。结果表明:OBP5基因在蜜蜂属中较为保守;东方蜜蜂和西方蜜蜂OBP5基因氨基酸序列的差异可能与两者所处地理环境不同有关。 展开更多
关键词 蜜蜂属 气味结合蛋白 obp5 系统进化
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用OBPES通用骨架系统开发硫化铜矿可选性预测专家系统
11
作者 罗首章 李松仁 陈松乔 《中南工业大学学报》 CSCD 北大核心 1999年第6期585-588,共4页
分析了硫化铜矿的特点，收集基础数据、基础资料和有关知识，建立了该类矿石的数据库和知识库，并将其组装到矿石可选性预测专家系统（ＯＢＰＥＳ） 的通用骨架系统中，构造成硫化铜矿矿石可选性预测专家系统．实践证明，专家系统的预... 分析了硫化铜矿的特点，收集基础数据、基础资料和有关知识，建立了该类矿石的数据库和知识库，并将其组装到矿石可选性预测专家系统（ＯＢＰＥＳ） 的通用骨架系统中，构造成硫化铜矿矿石可选性预测专家系统．实践证明，专家系统的预测结果是令人满意的，通用骨架系统是成功的，它大大提高了不同类型矿石可选性预测专家系统的建造效率． 展开更多
关键词 专家系统 矿石 可选性预测 知识库 铜矿 obpES
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柑橘大实蝇气味结合蛋白基因BminOBP25的克隆、原核表达及组织表达分析 被引量：7
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作者 司品法 周琼 崔中翌 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期537-545,共9页
【目的】昆虫的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)与嗅觉识别密切相关,在触角感受器淋巴液内运输外界的脂溶性气味分子顺利到达嗅觉受体过程中起着关键的作用。本研究对柑橘大实蝇Bactrocera minax的气味结合蛋白基因进行了... 【目的】昆虫的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)与嗅觉识别密切相关,在触角感受器淋巴液内运输外界的脂溶性气味分子顺利到达嗅觉受体过程中起着关键的作用。本研究对柑橘大实蝇Bactrocera minax的气味结合蛋白基因进行了克隆和表达分析,旨在更好地了解气味结合蛋白在柑橘大实蝇嗅觉识别中的作用及为进一步研究柑橘大实蝇嗅觉传递的分子机制奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术克隆柑橘大实蝇的气味结合蛋白基因,并进行生物信息学分析;构建重组表达载体p ET28a(+)-Bmin OBP25,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中,SDS-PAGE及Western blotting鉴定重组表达蛋白;采用荧光定量PCR检测该基因在柑橘大实蝇成虫不同组织中的表达。【结果】克隆获得柑橘大实蝇气味结合蛋白基因的c DNA全长序列,命名为Bmin OBP25(Gen Bank登录号:MH181875)。测序结果表明,Bmin OBP25开放阅读框全长447 bp,编码148个氨基酸,预测分子量为17.5 k D,编码序列具有OBPs典型的6个保守半胱氨酸和6个α螺旋区域特征。在IPTG诱导下目标蛋白以6×His标签融合蛋白的形式在宿主菌中得到稳定表达。荧光定量PCR分析表明,Bmin OBP25 mRNA在成虫触角、头(去除触角)、胸、腹、足、翅和产卵器中均有表达,其中在触角、头(去除触角)、足和产卵器中表达量较高。【结论】Bmin OBP25在柑橘大实蝇成虫触角、头、足和产卵器中具有高转录活性,提示该基因在非嗅觉组织中可能也具有生理功能,特别是可能在昆虫的取食与产卵地选择过程中起重要作用,其功能还需深入研究。本研究实现了Bmin OBP25基因的原核表达,为深入研究Bmin OBP25基因的功能奠定基础。 展开更多
关键词 柑橘大实蝇 Bminobp25 气味结合蛋白 基因克隆 组织表达分析 荧光定量PCR
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桔小实蝇气味结合蛋白BdorOBP2的cDNA克隆、组织表达及配基结合特性 被引量：21
13
作者 陈玲 李红亮 +4 位作者 周宇翔 赵磊 张林雅 倪翠侠 商晗武 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期612-621,共10页
为了研究桔小实蝇Bactrocera dorsalis气味结合蛋白(odorant-binding proteins,OBPs)参与其嗅觉识别过程中的功能及其与植物气味的结合特性,本研究克隆了桔小实蝇的一个气味结合蛋白基因,命名为BdorOBP2(GenBank登录号为KC773766),并对... 为了研究桔小实蝇Bactrocera dorsalis气味结合蛋白(odorant-binding proteins,OBPs)参与其嗅觉识别过程中的功能及其与植物气味的结合特性,本研究克隆了桔小实蝇的一个气味结合蛋白基因,命名为BdorOBP2(GenBank登录号为KC773766),并对该基因进行了原核表达。BdorOBP2开放阅读框长447bp,编码148个氨基酸,具有典型的6个半胱氨酸位点。定量PCR结果显示,桔小实蝇BdorOBP2在不同组织中均有表达,其中头部中的表达量最高,翅中表达量最低(为头部表达量的63%±6%)。构建了BdorOBP2原核表达载体,诱导并获得了重组BdorOBP2并进行了亲和层析纯化。最后以N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)为荧光探针,利用荧光竞争结合实验测定了重组BdorOBP2与7种主要寄主水果气味物质的结合能力,发现其对多数酯类和醛类化合物亲合力较强,亲合力最强的气味物质为反-2-己烯醛和β-紫罗兰酮,结合常数KD分别为9.96和15.37μmol/L。本研究结果可为高效地开发和设计桔小实蝇的嗅觉引诱剂配方提供一定的理论依据和参考。 展开更多
关键词 桔小实蝇 气味结合蛋白 组织表达谱 原核表达 荧光竞争结合实验
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白纹伊蚊气味结合蛋白基因OBP68的克隆鉴定及其在蚊不同发育时期表达分析 被引量：2
14
作者 赵大川 郑学礼 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第3期251-254,共4页
目的克隆鉴定白纹伊蚊气味结合蛋白基因OBP68,了解该基因在白纹伊蚊不同发育时期表达量的差异。方法提取幼虫、蛹、雄蚊、未吸血雌蚊总RNA,用RT-PCR扩增OBP68基因特异片段,克隆于pMD 18-T载体并测序鉴定;用半定量RT-PCR分析白纹伊蚊不... 目的克隆鉴定白纹伊蚊气味结合蛋白基因OBP68,了解该基因在白纹伊蚊不同发育时期表达量的差异。方法提取幼虫、蛹、雄蚊、未吸血雌蚊总RNA,用RT-PCR扩增OBP68基因特异片段,克隆于pMD 18-T载体并测序鉴定;用半定量RT-PCR分析白纹伊蚊不同发育时期OBP68基因mRNA表达量差异。结果从白纹伊蚊扩增出OBP68基因,测序分析克隆白纹伊蚊OBP68基因序列与GenBank注册号FJ04086.1的白纹伊蚊OBP68基因同源性99%,与埃及伊蚊的OBP68基因的同源性为71%。白纹伊蚊OBP68基因在白纹伊蚊发育不同时期皆有表达,以幼虫阶段表达较弱,蛹、雄蚊、雌蚊表达量增高,且后3个时期表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论从白纹伊蚊成功扩增出OBP68基因,该基因在白纹伊蚊不同发育时期均有表达。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 气味结合蛋白 obp68基因 鉴定 表达
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小菜蛾气味结合蛋白OBP2基因的克隆、表达谱及其结合特性分析 被引量：9
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作者 程小娟 蔡立君 +3 位作者 郑丽双 覃江梅 黄宇萍 尤民生 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期365-376,共12页
【目的】气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫寄主定位、产卵地选择等行为中发挥重要作用,克隆与鉴定小菜蛾Plutella xylostella OBP基因、明确其与配体化合物的结合特性有助于阐明小菜蛾嗅觉识别的分子机制。【方法】利... 【目的】气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫寄主定位、产卵地选择等行为中发挥重要作用,克隆与鉴定小菜蛾Plutella xylostella OBP基因、明确其与配体化合物的结合特性有助于阐明小菜蛾嗅觉识别的分子机制。【方法】利用PCR技术克隆小菜蛾OBP2,对获得的编码序列全长进行信号肽及跨膜区域预测,用DNAMAN与其他昆虫的OBP2进行多序列比对,采用MEGA5.0邻接法(neighbor-joining method,NJ)构建进化树。通过实时定量PCR(qRT-PCR)分析Pxyl OBP2在小菜蛾不同发育阶段和不同组织中的表达模式。构建原核表达载体p ET28aPxyl OBP2,进行原核表达及蛋白纯化。利用荧光竞争结合实验对Pxyl OBP2蛋白与39种配基化合物的结合特性进行分析。【结果】成功获得小菜蛾OBP2基因Pxyl OBP2(Gen Bank登录号:KT070562)的编码序列全长,其完整开放阅读框大小为546 bp,编码182个氨基酸,具有气味结合蛋白典型的6个保守半胱氨酸结合位点。荧光定量PCR结果表明,发育表达模式显示,Pxyl OBP2在未交配雄性成虫中的表达量均明显高于雌性成虫和已交配雄虫;组织表达模式显示,Pxyl OBP2在足中的表达量高于其他组织。经预测成熟蛋白大小为22.24 k Da,等电点5.69。SDS-PAGE结果显示融合蛋白成功表达。荧光竞争结合实验对3种性信息素和36种植物挥发物结合发现,Pxyl OBP2与性信息素Z-11-16:Ald可以结合,解离常数48.951μmol/L;可以和11种寄主植物挥发物有效结合,其中,与芳樟醇、正壬醇结合能力最强,解离常数分别为4.733和6.861μmol/L。【结论】本研究明确了Pxyl OBP2的核苷酸、氨基酸序列,并根据qRT-PCR和荧光竞争结合实验结果,推断Pxyl OBP2与小菜蛾雄虫寻求配偶有关,且寄主挥发物芳樟醇、正壬醇起协同促进作用。 展开更多
关键词 小菜蛾 气味结合蛋白 气味 基因表达 QRT-PCR 荧光竞争结合
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松墨天牛OBP基因MaltOBP2和MaltOBP6的克隆、序列分析及组织表达谱和原核表达研究 被引量：15
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作者 钱凯 冯波 +3 位作者 巫诩亮 劳冲 沈幼莲 杜永均 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期496-506,共11页
【目的】本研究旨在探索松墨天牛Monochamus alternatus Hope在嗅觉识别寄主植物过程中扮演重要角色的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)的结构及功能。【方法】利用生物信息学方法对得到的Malt OBP2和Malt OBP6基因序列和... 【目的】本研究旨在探索松墨天牛Monochamus alternatus Hope在嗅觉识别寄主植物过程中扮演重要角色的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)的结构及功能。【方法】利用生物信息学方法对得到的Malt OBP2和Malt OBP6基因序列和蛋白结构进行分析,并通过实时荧光定量PCR分析Malt OBP2和Malt OBP6在松墨天牛雄虫不同组织和时空中的表达差异,利用p ET32a(+)原核表达载体对Malt OBP2和Malt OBP6进行了诱导蛋白表达。【结果】本研究得到两个松墨天牛气味结合蛋白基因——Malt OBP2(Gen Bank登录号:KP120891)和Malt OBP6(Gen Bank登录号:KP120892),ORF长度分别为402 bp和408 bp,翻译的氨基酸序列均含有4个保守的半胱氨酸位点,表明得到的两个OBP基因的编码蛋白均属于Minus-C OBP亚家族;推导的两个OBP蛋白均有6个α螺旋区域,且α螺旋区域在两个蛋白的位置非常相似,但是两个OBP蛋白推测的配体结合位点和位点极性却完全不同。组织表达模式表明,Malt OBP2和Malt OBP6在成虫头部、触角、下颚(唇)须、腹部末端和足中均有表达,表达程度不一,但都在头部显著表达,触角中的表达量相比其他组织中较低或只是持平。发育表达结果表明,Malt OBP2在蛹触角中的表达量最高,而Malt OBP6在幼虫头部的表达量最高。本研究成功构建了原核表达载体p ET32aMalt OBP2和p ET32a-Malt OBP6,并进行了OBP蛋白诱导表达,低温(16℃和20℃)条件利于蛋白表达在上清液中,延长诱导表达时间(12 h)可以增加蛋白的表达量。【结论】本研究从松墨天牛体内得到了Minus-C OBP蛋白亚家族的两个基因Malt OBP2和Malt OBP6,通过配体结合位点推测它们具有不同的生理功能;通过组织表达谱结果推测这两个OBP基因在松墨天牛中的功能不仅仅局限于嗅觉识别,或还有味觉感受、化学感受等其他生理功能。本研究结果为两个OBP蛋白的结构和功能研究奠定了基础,为探索松墨天牛的化学感受机制提供了条件。 展开更多
关键词 松墨天牛 气味结合蛋白 基因克隆 组织表达谱 蛋白结构 原核表达
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烟粉虱MED隐种气味结合蛋白基因BtabOBP2和BtabOBP4的cDNA克隆及原核表达 被引量：4
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作者 谢红艳 万鲁长 +3 位作者 黄春燕 刘国霞 Jean-Francois Picimbon 宫志远 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期752-761,共10页
采用RT-PCR和RACE技术成功克隆烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)基因BtabOBP2和BtabOBP4的cDNA全长。BtabOBP2(Gen Bank登录号:AIS71883)和BtabOBP4(Gen Bank登录号:AIS71884)的cDNA序列全长... 采用RT-PCR和RACE技术成功克隆烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)基因BtabOBP2和BtabOBP4的cDNA全长。BtabOBP2(Gen Bank登录号:AIS71883)和BtabOBP4(Gen Bank登录号:AIS71884)的cDNA序列全长分别为1107 bp和874 bp,完整开放阅读框(ORF)分别为744 bp和429 bp,分别编码247和142氨基酸,BtabOBP4有6个保守的半胱氨酸,属于典型OBP,而BtabOBP2除了具有典型OBP的6个半胱氨酸,增加了3个保守的半胱氨酸,属于Plus-C OBP。将得到的BtabOBP2和BtabOBP4重组到原核表达载体pET30a(+),转化入BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,用IPTG诱导融合蛋白表达。采用亲和层析和凝胶过滤层析纯化融合蛋白,并进行Western blot分析。结果显示,BtabOBP2和BtabOBP4融合蛋白在大肠杆菌中均有可溶性表达,Western blot结果证实所表达的融合蛋白确实为目的蛋白。BtabOBP2融合蛋白在SDS-PAGE中的表观分子量比预测的分子量大了6.53 k Da,用重组肠激酶切掉6×His标签后,目的蛋白的表观分子量与预测分子量相近,偏差降低,说明6×His标签是造成融合蛋白表观分子量偏差的原因。本研究明确了烟粉虱气味结合蛋白基因BtabOBP2和BtabOBP4的核苷酸、氨基酸序列特征,并成功进行了原核表达和纯化,为进一步研究这两个OBP基因的分子结构和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 烟粉虱 气味结合蛋白 基因克隆 原核表达 纯化
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中华蜜蜂气味结合蛋白AcerOBP7的表达及结合特性 被引量：2
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作者 赵慧婷 彭竹 +4 位作者 姜玉锁 赵淑果 黄丽 杜亚丽 郭丽娜 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期613-624,共12页
【目的】中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)是我国本土蜂种,也是重要的传粉昆虫和经济昆虫。气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)是蜜蜂嗅觉感知中的关键蛋白。在前人对中蜂AcerOBP7基因序列特征分析的基础上,本研究进一步... 【目的】中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)是我国本土蜂种,也是重要的传粉昆虫和经济昆虫。气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)是蜜蜂嗅觉感知中的关键蛋白。在前人对中蜂AcerOBP7基因序列特征分析的基础上,本研究进一步对其表达特性及与气味物质的结合能力进行探究,为揭示气味结合蛋白在中蜂嗅觉系统中的作用提供基础数据。【方法】采用qRT-PCR检测AcerOBP7在工蜂不同组织和发育阶段的表达特性;通过原核表达系统获得AcerOBP7融合蛋白,使用Ni-NTA柱进行蛋白纯化;采用荧光竞争结合法,以1-NPN(N-phenyl-1-naphthylamine)为荧光探针,测定AcerOBP7与信息素及植物挥发物的结合能力;设计并合成dsAcerOBP7,采用饲喂法对该基因进行沉默,通过qRT-PCR测定沉默效率;结合RNAi,利用EAG检测并比较对照组与干扰组中蜜蜂触角对待测物质反应值的差异。【结果】qRT-PCR结果显示,AcerOBP7 mRNA在工蜂触角中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01),且在20日龄时表达量最高,在1日龄时表达量最低。成功构建了pET28a/AcerOBP7表达载体,通过大肠杆菌原核表达系统获得了高纯度的重组蛋白。与37种配体分子的荧光竞争结合试验表明,AcerOBP7与9-ODA、1-壬醇结合能力最强,Ki值均为1.85μmol·L^(-1),其次与(+)-柠檬烯、1-辛烯-3-醇、芳樟醇、反式肉桂酸乙酯、桉树脑、(+)-3-蒈烯及壬醛有较强的结合活性,Ki值分别为1.87、2.66、2.72、3.05、3.88、4.14和4.40μmol·L^(-1),与所选择的幼虫信息素均无结合能力。使用饲喂dsRNA的方法成功干扰了AcerOBP7的表达,干扰效率最高可达70.63%。干扰后的EAG试验表明,中蜂触角对所测气味物质的反应强度均有所下降,其中1-辛烯-3-醇、壬醛、桉树脑和9-ODA的EAG相对值显著降低(P<0.05)。【结论】AcerOBP7在中蜂采集蜂触角中高表达,重组蛋白能与多种气味分子结合,表明AcerOBP7是一种广谱型结合蛋白,推测其可能在工蜂采集和哺育蜂王的行为中发挥着重要作用。另外,1-辛烯-3-醇、壬醛、桉树脑和9-ODA可能是AcerOBP7结合特异性较高的配体物质。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 气味结合蛋白 表达模式 蛋白纯化 结合特性
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GENERAL STRUCTURE OF OBPES SHELL SYSTEM 被引量：1
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作者 Li, Songren Luo, Shouzhang Chen, Songqiao 《中国有色金属学会会刊：英文版》 EI CSCD 1997年第2期16-20,共5页
ＧＥＮＥＲＡＬＳＴＲＵＣＴＵＲＥＯＦＯＢＰＥＳＳＨＥＬＬＳＹＳＴＥＭ①ＬｉＳｏｎｇｒｅｎ，ＬｕｏＳｈｏｕｚｈａｎｇ，ＣｈｅｎＳｏｎｇｑｉａｏＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｎｅｒａｌＥｎｇｉｎｅｒｉｎｇ，ＣｅｎｔｒａｌＳ... ＧＥＮＥＲＡＬＳＴＲＵＣＴＵＲＥＯＦＯＢＰＥＳＳＨＥＬＬＳＹＳＴＥＭ①ＬｉＳｏｎｇｒｅｎ，ＬｕｏＳｈｏｕｚｈａｎｇ，ＣｈｅｎＳｏｎｇｑｉａｏＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｎｅｒａｌＥｎｇｉｎｅｒｉｎｇ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴ... 展开更多
关键词 obpES SHELL SYSTEM KNOWLEDGE BASE KNOWLEDGE learning INFERENCE ENGINE
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基于回收的海洋塑料(OBP),Lavergne与科莱恩携手开发适用于电子产品的无卤阻燃聚酯化合物 被引量：1
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作者 童之渝 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期232-232,共1页
Lavergne与科莱恩密切合作,开发再生聚酯级的无卤阻燃产品,在本例中是从海洋废弃物中回收聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)。首款新型阻燃化合物Lavergne VYPETTMOBPFR具有30%玻璃纤维增强,UL 94 V-0阻燃等级,厚度0. 8mm,适用于众多电子电气(E... Lavergne与科莱恩密切合作,开发再生聚酯级的无卤阻燃产品,在本例中是从海洋废弃物中回收聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)。首款新型阻燃化合物Lavergne VYPETTMOBPFR具有30%玻璃纤维增强,UL 94 V-0阻燃等级,厚度0. 8mm,适用于众多电子电气(E&E)塑料应用。 展开更多
关键词 科莱恩 Lavergne obp 化合物 无卤阻燃
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