目的O-GlcNAc糖基化(O-linked beta-N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)和Yes相关蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)是否会发生糖基化、在结直肠癌中的表达情况及发挥作用的机制都尚未得到充分阐明。本研究旨在借助癌症基因组图谱(the c...目的O-GlcNAc糖基化(O-linked beta-N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)和Yes相关蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)是否会发生糖基化、在结直肠癌中的表达情况及发挥作用的机制都尚未得到充分阐明。本研究旨在借助癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库、组织标本和细胞系探究O-GlcNAc糖基化和YAP1糖基化在结直肠中所发挥的作用。方法采用免疫组化法检测O-GlcNAc和OGT蛋白(O-linked-N-acetylglucosamine transferase,OGT)在结直肠组织和癌旁组织中的表达情况;运用qPCR检测结直肠组织和癌旁组织中OGT mRNA表达水平;借助在线分析TCGA数据库,了解OGT的表达情况及其对预后产生的影响;通过Western Blot检测OSMI-1对O-GlcNAc糖基化的抑制作用;采用CCK-8和Transwell检测,在抑制O-GlcNAc糖基化后,观察肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化;借助数据库分析YAP1的表达情况及其O-GlcNAc糖基化位点,并经质谱分析确定YAP1是否发生O-GlcNAc糖基化修饰;运用Co-IP和免疫荧光实验验证YAP1和OGT之间的结合关系;采用qPCR和免疫荧光明确抑制O-GlcNAc糖基化后YAP1表达位置的改变以及下游效应基因表达的改变情况。结果研究发现,OGT蛋白和mRNA在结直肠组织中的表达水平明显升高,但对患者的预后并无明显影响;OSMI-1能够抑制肠癌细胞的O-GlcNAc糖基化,并且抑制细胞增殖、侵袭与迁移能力;YAP1可与OGT结合并发生O-GlcNAc糖基化,当抑制O-GlcNAc糖基化后,YAP1入核数量减少,转录活性降低。结论在结直肠癌中,O-GlcNAc糖基化水平呈现升高趋势,OGT和YAP1结合,使YAP1发生O-GlcNAc糖基化修饰,促进其转录活性。展开更多
文摘目的O-GlcNAc糖基化(O-linked beta-N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)和Yes相关蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)是否会发生糖基化、在结直肠癌中的表达情况及发挥作用的机制都尚未得到充分阐明。本研究旨在借助癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库、组织标本和细胞系探究O-GlcNAc糖基化和YAP1糖基化在结直肠中所发挥的作用。方法采用免疫组化法检测O-GlcNAc和OGT蛋白(O-linked-N-acetylglucosamine transferase,OGT)在结直肠组织和癌旁组织中的表达情况;运用qPCR检测结直肠组织和癌旁组织中OGT mRNA表达水平;借助在线分析TCGA数据库,了解OGT的表达情况及其对预后产生的影响;通过Western Blot检测OSMI-1对O-GlcNAc糖基化的抑制作用;采用CCK-8和Transwell检测,在抑制O-GlcNAc糖基化后,观察肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化;借助数据库分析YAP1的表达情况及其O-GlcNAc糖基化位点,并经质谱分析确定YAP1是否发生O-GlcNAc糖基化修饰;运用Co-IP和免疫荧光实验验证YAP1和OGT之间的结合关系;采用qPCR和免疫荧光明确抑制O-GlcNAc糖基化后YAP1表达位置的改变以及下游效应基因表达的改变情况。结果研究发现,OGT蛋白和mRNA在结直肠组织中的表达水平明显升高,但对患者的预后并无明显影响;OSMI-1能够抑制肠癌细胞的O-GlcNAc糖基化,并且抑制细胞增殖、侵袭与迁移能力;YAP1可与OGT结合并发生O-GlcNAc糖基化,当抑制O-GlcNAc糖基化后,YAP1入核数量减少,转录活性降低。结论在结直肠癌中,O-GlcNAc糖基化水平呈现升高趋势,OGT和YAP1结合,使YAP1发生O-GlcNAc糖基化修饰,促进其转录活性。
