甘蔗NAD(P)H脱氢酶复合体O亚基基因克隆及其与甘蔗花叶病毒VPg互作 被引量：7

1

作者 翟玉山 赵贺 +8 位作者 张海 邓宇晴 程光远 杨宗桃 王彤 彭磊 徐倩 董萌 徐景升 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1478-1487,共10页

NAD(P)H脱氢酶(NDH)复合体介导循环电子传递,对于维持叶绿体高效的光合作用具有重要作用。甘蔗(Saccharum spp. hybrid)中NDH复合体应答及参与甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)的侵染尚未见报道。本研究克隆了甘蔗NDH复合体的... NAD(P)H脱氢酶(NDH)复合体介导循环电子传递,对于维持叶绿体高效的光合作用具有重要作用。甘蔗(Saccharum spp. hybrid)中NDH复合体应答及参与甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)的侵染尚未见报道。本研究克隆了甘蔗NDH复合体的O亚基,命名为ScNdhO,其开放读码框(open reading frame,ORF)长度为471 bp,编码长度为156 aa的蛋白。生物信息学分析表明,ScNdhO为稳定的亲水性蛋白,不存在信号肽,无跨膜结构域;蛋白二级结构元件多为无规则卷曲,具有典型的NDH复合体O亚基结构域;系统进化树分析表明,该蛋白属于NDH复合体O亚基蛋白家族。实时荧光定量 PCR分析发现,ScNdhO基因的表达具有明显的组织特异性,在成熟甘蔗叶片中的表达量最高,在茎中的表达量最低,在根中几乎不表达;ScNdhO基因在SCMV侵染早期上调表达,后期下调表达。亚细胞定位分析表明,ScNdhO定位于叶绿体。酵母双杂交(yeast two hybrid,Y2H)和双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)实验表明,ScNdhO与SCMV-VPg互作。推测ScNdhO被SCMV选择性利用,可能参与SCMV基因组复制及花叶病症状的产生。 展开更多

关键词 甘蔗 SCMV 叶绿体 NAD(P)H脱氢酶复合体 o亚基

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热补针法对风寒湿阻型类风湿关节炎患者血浆中能量代谢相关基因Atp 5O、Atp 6V1B2表达的影响 被引量：19

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作者 杜小正 王金海 +5 位作者 张星华 田杰祥 秦晓光 方晓丽 田亮 袁博 《针刺研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期303-307,333,共6页

目的:观察热补针法对风寒湿阻型类风湿关节炎(RA)患者中医证候积分及血浆中能量代谢相关基因ATP合成酶亚单位O(Atp 5O)、溶酶体V1亚单位B 2(Atp 6V1B2)表达的影响,探讨热补针法"取热"的分子生物学机制。方法:将符合纳入标准... 目的:观察热补针法对风寒湿阻型类风湿关节炎(RA)患者中医证候积分及血浆中能量代谢相关基因ATP合成酶亚单位O(Atp 5O)、溶酶体V1亚单位B 2(Atp 6V1B2)表达的影响,探讨热补针法"取热"的分子生物学机制。方法:将符合纳入标准的60例风寒湿阻型RA患者随机分为热补针法组、对照组,每组30例。两组均取关元、气海、足三里和关节局部腧穴,热补针法组施以热补针法,对照组施以平补平泻法,1次/d,连续5次为1个疗程,共治疗2个疗程。同时招募30名健康体检者作为正常对照组。观察患者治疗前后中医证候积分变化,RT-PCR法检测正常人及患者外周血中Atp 5O、Atp 6V1B2 mRNA的表达。结果:治疗后两组患者中医证候积分均较治疗前明显降低(P<0.05),热补针法组证候积分降低较对照组明显(P<0.05)。治疗前RA患者外周血中Atp 5O、Atp 6V1B2 mRNA表达均较正常人降低(P<0.05);治疗后两组患者Atp 5O、Atp 6V1B2 mRNA表达均较治疗前明显上调(P<0.05),且热补针法组的上调明显高于对照组(P<0.05),两组患者Atp 5O、Atp 6V1B2 mRNA表达与正常对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:热补针法上调血浆中能量代谢相关基因Atp 5O、Atp 6V1B2的表达是改善风寒湿阻型RA患者症状和"取热"的分子机制之一。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 手针 热补针法 ATP合成酶亚单位o 溶酶体V1亚单位B2

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O型FMDV复合多表位在毕赤酵母中的表达与鉴定

3

作者 胡博 李昌 +9 位作者 王浩然 鲁会军 李霄 朱战波 杜寿文 叶明 袭莹 韩佳丽 王婧 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1634-1637,1641,共5页

将O型FMDV复合多表位CTB-TEpi与FMDV结构基因P1-2A(P1/2A)连入毕赤酵母表达载体pPIC9K,经SacⅠ线性化后,利用电转化法整合到毕赤酵母(Pichia pastoris)基因组中。通过G418浓度梯度筛选得到高拷贝阳性转化子GS115/P1/2A-CTB-TEpi。经甲... 将O型FMDV复合多表位CTB-TEpi与FMDV结构基因P1-2A(P1/2A)连入毕赤酵母表达载体pPIC9K,经SacⅠ线性化后,利用电转化法整合到毕赤酵母(Pichia pastoris)基因组中。通过G418浓度梯度筛选得到高拷贝阳性转化子GS115/P1/2A-CTB-TEpi。经甲醇诱导表达后,目的蛋白在毕赤酵母中获得成功表达,并在FMDV自裂解片段2A的作用下裂解为P1/2A和CTB-TEpi 2个片段,相对分子质量分别为81 800和39 400,占上清液中可溶蛋白的比例为25%。Western blotting分析表明,表达蛋白的2部分均可被抗O型FMDV的血清所识别,而且含有CTB片段的CTB-TEpi条带可以被兔抗霍乱毒素血清识别,证明表达的蛋白具有抗原活性,为进一步研究O型FMDV复合多表位亚单位疫苗的免疫效果打下了基础。 展开更多

关键词 o型口蹄疫病毒 毕赤酵母 亚单位疫苗

原文传递

大肠杆菌O_(157):H_7 Stx2毒素B亚单位基因的克隆、序列分析及表达载体的构建

4

作者 曾明 许文香 王斌 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期16-17,22,共3页

目的　克隆出血性大肠杆菌O157:H7的Stx2毒素B亚单位基因 ,进行序列分析并构建表达载体。方法　利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157:H7染色体基因组中扩增出Stx2毒素B亚单位基因 ,并连接至质粒载体上 ,进行序列测定和分析 ,亚克隆构建表... 目的　克隆出血性大肠杆菌O157:H7的Stx2毒素B亚单位基因 ,进行序列分析并构建表达载体。方法　利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157:H7染色体基因组中扩增出Stx2毒素B亚单位基因 ,并连接至质粒载体上 ,进行序列测定和分析 ,亚克隆构建表达载体 ,经SDS PAGE电泳分析目的蛋白表达量。结果　所克隆的基因序列与Genbank上基因序列高度同源 ,所表达目的蛋白约占宿主菌蛋白的 2 0 %。 展开更多

关键词 大肠杆菌 o157:H7Stx2 毒素 B亚单位 基因 克隆 序列

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利用霍乱毒素B亚单位展示猪O型口蹄疫病毒VP1蛋白主要抗原表位 被引量：4

5

作者 李图帅 陈瑾 +5 位作者 乔绪稳 汪浩 张元鹏 侯继波 郑其升 胡元亮 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期601-607,共7页

为探讨以霍乱毒素B亚单位为载体制备口蹄疫亚单位疫苗的可行性,利用E.coli表达CTB-GHloop嵌合基因,用SDS-PAGE分析目的基因的表达及表达产物的可溶性,利用神经节苷脂(GM1)为抗原鉴定重组蛋白五聚体的形成。将目的蛋白浓度调整为200μg/... 为探讨以霍乱毒素B亚单位为载体制备口蹄疫亚单位疫苗的可行性,利用E.coli表达CTB-GHloop嵌合基因,用SDS-PAGE分析目的基因的表达及表达产物的可溶性,利用神经节苷脂(GM1)为抗原鉴定重组蛋白五聚体的形成。将目的蛋白浓度调整为200μg/ml,以白油佐剂乳化制备疫苗,免疫健康仔猪,免疫后利用ELISA测定特异性抗体水平,评价免疫后体液免疫反应,利用淋巴细胞增殖实验评价细胞免疫水平。结果表明嵌合基因在E.coli中获得高效表达,重组蛋白可溶,并能够形成五聚体;Western-blot结果显示重组蛋白能够与口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清发生反应;以每头仔猪200μg免疫,试验猪产生较高的抗体水平与细胞免疫反应。 展开更多

关键词 重组霍乱毒素B亚单位 猪o型口蹄疫病毒 GHloop抗原表位 亚单位疫苗

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霍乱CT-B和LPS-O双价抗原工程菌苗株的构建

6

作者 于秀琴 马清钧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期289-294,共6页

作者将霍乱弧菌O抗原及毒素B亚单位基因片段,经DNA体外重组技术,得到了能表达双价抗原的工程菌株1046(pMG305)。经GM1-ELISA分析表明该菌株能够表达特异的霍乱CT-B抗原,且能分泌到胞外,通过菌体凝集,全细胞O抗原酶联分析和血凝抑制试验... 作者将霍乱弧菌O抗原及毒素B亚单位基因片段,经DNA体外重组技术,得到了能表达双价抗原的工程菌株1046(pMG305)。经GM1-ELISA分析表明该菌株能够表达特异的霍乱CT-B抗原,且能分泌到胞外,通过菌体凝集,全细胞O抗原酶联分析和血凝抑制试验表明在1046(pMG305)菌体表面表达了霍乱的O抗原,它的脂多糖O抗原通过SDS-PAGE电泳分析,显示它表达了霍乱LPS的特征区带。小鼠腹腔免疫后用霍乱弧菌毒株攻击表明,有良好的保护作用,因此1046(pMG305)可望成为霍乱活疫苗的候选株。 展开更多

关键词 毒素B亚单位 霍乱弧菌 脂多糖o抗原 菌苗

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猪瘟E2亚单位疫苗和猪口蹄疫O型/A型二价灭活疫苗联合免疫的临床评价 被引量：4

7

作者 王遵宝 李俊辉 +7 位作者 刘宏杰 曹辉 赵毅 王元 候玉珍 何国文 高扬毅 贺笋 《中国猪业》 2020年第1期68-73,共6页

在非洲猪瘟成为常态化的背景下,疫苗的联合使用可有效优化、重构猪群的免疫程序,在保证防控重大疫病的前提下,减少猪群免疫负担和应激,降低免疫苗时感染非洲猪瘟的风险。为此,本研究用猪瘟E2亚单位疫苗和猪口蹄疫O型/A型二价灭活疫苗在... 在非洲猪瘟成为常态化的背景下,疫苗的联合使用可有效优化、重构猪群的免疫程序,在保证防控重大疫病的前提下,减少猪群免疫负担和应激,降低免疫苗时感染非洲猪瘟的风险。为此,本研究用猪瘟E2亚单位疫苗和猪口蹄疫O型/A型二价灭活疫苗在实验室进行混合,测试了其物理性状,并在田间进行了安全性、有效性的临床研究。研究结果表明,2种疫苗按不同比例混合后呈剂型与占比较大的疫苗剂型相同,黏度、通针性均优于猪瘟E2亚单位疫苗,在2~8℃保存7天后,疫苗均一、稳定,未见分层,离心后无水相析出;采用间隔免疫、同步分点注射、同步混合注射的方式免疫试验猪均未引起免疫副反应,同步混合注射的免疫效果优于其他试验组,但各组间差异不显著(P>0.05),未见免疫干扰现象。本研究证实猪瘟E2亚单位疫苗和猪口蹄疫O型/A型二价灭活疫苗可同步混合免疫,不仅安全有效,而且降低了猪群免疫负担和兽医免疫劳动强度,适合在临床中大面积推广应用。 展开更多

关键词 猪瘟 口蹄疫 E2亚单位疫苗 o/A二价疫苗 临床评价

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新疆不同地区加工专用花生营养成分比较 被引量：1

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作者 罗舒舒 张雨 +3 位作者 张甜甜 代蕾 高建宇 王强 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2024年第2期19-28,共10页

花生生长条件和环境不同导致其品质出现差异,分析不同来源花生原料的品质有利于优化原料的选择,为花生产品加工利用提供参考。新疆南、北疆和东疆均有种植花生,但适合新疆不同地区种植的加工专用品种较少,采集新疆不同地区和内地3个省份... 花生生长条件和环境不同导致其品质出现差异,分析不同来源花生原料的品质有利于优化原料的选择,为花生产品加工利用提供参考。新疆南、北疆和东疆均有种植花生,但适合新疆不同地区种植的加工专用品种较少,采集新疆不同地区和内地3个省份的32个样品,对含油量、蛋白质、蔗糖、油酸/亚油酸(O/L)、蛋白亚基、氨基酸等6个指标进行测定、分析比较。结果表明,同一花生品种在不同地区种植后的营养成分含量存在一定差异,整体而言,新疆花生的含油量、蛋白质、蔗糖等指标在不同程度上优于内地,进一步分析得出花生在吐鲁番的含油量、O/L、伴花生球蛋白、总氨基酸含量最高,最高值为55.71%、35.11、37.39%、28.23 g/100 g,在阿拉尔的蛋白质、花生球蛋白含量最高,最高值为22.67 g/100 g、63.28%,在和田的蔗糖、23.5 ku亚基含量最高,为5.07 g/100 g、20.48%,在三坪的37.5 ku亚基含量最高(9.31%)。新疆不同地区不同品种花生的营养成分研究为新疆花生产业区域布局提供参考,为企业选择优质原料、建立原料基地提供依据。 展开更多

关键词 花生 营养成分 含油量 蛋白质 蔗糖 油酸/亚油酸(o/L) 蛋白亚基 氨基酸

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重叠延伸PCR法合成EV71 VP1-LTB融合基因及其原核表达 被引量：2

9

作者 李江 马永平 +2 位作者 李世彬 贺志良 姜柯安 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2011年第5期385-389,共5页

目的用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得人肠道病毒71型vp1与大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位(ltb)的融合基因,构建EV71 VP1-LTB融合表达质粒并在原核系统表达。方法设计14对引物通过重叠延伸PCR技术合成vp1基因,以ETEC(44815)... 目的用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得人肠道病毒71型vp1与大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位(ltb)的融合基因,构建EV71 VP1-LTB融合表达质粒并在原核系统表达。方法设计14对引物通过重叠延伸PCR技术合成vp1基因,以ETEC(44815)质粒DNA为模板,PCR扩增ltb基因,将vp1基因与ltb基因连接并测序,连接产物插入原核表达质粒pBEX,构建重组质粒pBEX-VP1-LTB,转化E.coliB1221(DE3)进行表达,SDS-PAGE及W estern blotting分析其表达。电转法将重组质粒转入双歧杆菌。结果合成的vp1基因全长891 bp,测序结果与预期相符,重组表达质粒pBEX-VP1-LTB经PCR及双酶切鉴定,表明构建正确;目的蛋白在E.coliBL21(DE3)中获得了表达,Western bloting分析结果表明该蛋白具有与EV71 VP1抗体的反应原性;电转法成功将重组质粒转入双歧杆菌。结论应用重叠延伸PCR技术成功构建了EV71 VP1-LTB融合表达质粒,并在E.coliBL21(DE3)中获得有生物学功能的VP1表达产物,重组质粒双歧杆菌转化及VP1-LTB融合蛋白的表达研究,为研制EV71分子内佐剂疫苗打下了基础。 展开更多

关键词 人类肠道病毒71型vp1 大肠埃希菌不耐热毒素B亚单位 融合表达 重叠延伸PCR

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以霍乱毒素B亚单位为载体的甲型副伤寒多糖结合疫苗理化及生物学特性 被引量：1

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作者 胡玥 梁昊宇 +4 位作者 周富昌 李颖茵 董思国 曾明 王斌 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第8期833-836,840,共5页

目的制备甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A,SPA)O特异多糖(O-specific polysaccharide,OSP)-霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)结合疫苗,并初步探讨其理化及生物学特性。方法 SPA OSP多糖原液(简称OSP多糖)经溴化... 目的制备甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A,SPA)O特异多糖(O-specific polysaccharide,OSP)-霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)结合疫苗,并初步探讨其理化及生物学特性。方法 SPA OSP多糖原液(简称OSP多糖)经溴化氰活化,己二酰肼(ADH)衍化,在碳二亚胺(EDAC)作用下与CTB偶联,结合物经Sepharose4FF柱纯化,获得多糖-蛋白结合物,对其理化指标、血清特异性、免疫原性及血清体外杀菌力进行检测。结果制备的SPA OSP-CTB结合物(简称OSP-CTB结合物)衍化度为(2. 63±0. 13)%、多糖回收率为(74±0. 2)%;鉴别试验显示OSP-CTB结合物与SPA O诊断血清、CTB抗体均有阳性沉淀线产生;免疫小鼠血清中OSP-CTB结合物抗体滴度显著增长,阳转率达100%,血清体外杀菌抗体滴度为1∶64。结论用溴化氰活化多糖制备的SPA OSP-CTB结合物具有良好免疫原性,可进一步进行疫苗研发。 展开更多

关键词 甲型副伤寒沙门菌 o特异多糖 霍乱毒素B亚单位 结合疫苗 免疫原性

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宋内痢疾菌无毒株S7表达霍乱弧菌O抗原及霍乱毒素B亚单位工程菌的构建 被引量：2

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作者 王叙亭 王秉瑞 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期225-229,共5页

以宋内氏痢疾菌无毒株S7作为受体,将含有编码霍乱弧菌O抗原及霍乱毒素B亚单位基因的质粒转移入其中,构建成重组菌株S7COB。质粒电泳图谱显示重组株中存在被转移的外源质粒。重组株的生化特性和毒力表型与受体相同。菌体凝集和全菌体酶... 以宋内氏痢疾菌无毒株S7作为受体,将含有编码霍乱弧菌O抗原及霍乱毒素B亚单位基因的质粒转移入其中,构建成重组菌株S7COB。质粒电泳图谱显示重组株中存在被转移的外源质粒。重组株的生化特性和毒力表型与受体相同。菌体凝集和全菌体酶联免疫吸附试验(ELISA)证明在重组株的菌体表面同时表达了霍乱弧菌和宋内氏痢疾菌的O抗原。GM1-ELISA表明该重组株能在细胞内表达霍乱毒素B亚单位。以5亿、10亿的重组株免疫LIBP品系小鼠,免疫小鼠对宋内氏毒株S63攻击的保护率为70％～100％,对霍乱弧菌毒株569B攻击的保护率为30％～54％。 展开更多

关键词 宋内氏疾病菌 多价菌苗受体 霍乱弧菌 抗原

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