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大鼠胚胎原代海马神经元两种转染方法的比较 被引量：6
1
作者 郑红云 李艳 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期689-692,共4页
目的:原代海马神经元是原代细胞中比较难转染的细胞,为了得到比较高的转染效率,通过比较Li-pofectamine2000转染法和大鼠神经元核电转法(rat neuron nucleofector kit)转染效率及转染前后细胞的存活率,来探讨Nucleofector Kit核电转法... 目的:原代海马神经元是原代细胞中比较难转染的细胞,为了得到比较高的转染效率,通过比较Li-pofectamine2000转染法和大鼠神经元核电转法(rat neuron nucleofector kit)转染效率及转染前后细胞的存活率,来探讨Nucleofector Kit核电转法的高效性。方法:选取胚胎18 d(E18)大鼠的海马神经元进行原代培养,获取海马神经元单细胞悬液后,于种植前和种植24 h后分别采用Nucleofector Kit和Lipofectamine 2000转染红色荧光蛋白(red fluorescence protein,DsRed)质粒。神经元转染48 h后分别采用轴突标记物Tau-1进行免疫荧光染色鉴定神经元。神经元的存活率采用台盼兰进行检测。结果:Lipofectamine2000的基因转染率仅为5.34%,而大鼠神经元Nucleofector Kit的转染率为44.54%,后者为前者的8.34倍。Lipofectamine2000转染细胞前后的存活率分别为98.56%和91.44%,而Nucleofector Kit组分别为98.26%和74.02%。结论:大鼠神经元核电转法能高效稳定的转染原代海马神经元。 展开更多
关键词 海马神经元 转染 Lipofectamine2000 nucleofector KIT 红色荧光蛋白 大鼠
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电转系统介导的荧光素酶稳定表达PANC-1细胞的构建及其生物发光成像检测 被引量：1
2
作者 屠珏 黄宇 +2 位作者 凌云 齐月寒 陈民利 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第7期786-793,共8页
在构建稳定表达荧光素酶的人胰腺癌PANC-1细胞的基础上,建立适合活体成像研究的胰腺癌动物模型,为深入研究胰腺癌发病机制打下基础。该研究运用Lonza NucleofectorTM核转染系统将携带有荧光素酶基因(firefly luciferase,luc)的质粒(GV2... 在构建稳定表达荧光素酶的人胰腺癌PANC-1细胞的基础上,建立适合活体成像研究的胰腺癌动物模型,为深入研究胰腺癌发病机制打下基础。该研究运用Lonza NucleofectorTM核转染系统将携带有荧光素酶基因(firefly luciferase,luc)的质粒(GV258)稳定转染PANC-1细胞,利用嘌呤霉素筛选出能稳定表达荧光素酶的细胞株PANC-1-LUC,并应用活体成像系统对其体内外生物发光进行检测。进一步构建PANC-1-LUC裸鼠皮下移植瘤,同样方法接种慢病毒载体构建的PANC-1-luc细胞作为对照,观察成瘤率、瘤体积,检测生物发光强度。体内外生物发光检测结果均显示,光通量值与细胞数之间呈显著的直线相关(P<0.01)。PANC-1-LUC细胞皮下接种裸鼠,1周成瘤率即达80%以上,瘤体积可达平均100 mm3。观察6周,裸鼠皮下肿瘤生长符合Gompertzian曲线。每周的生物发光检测结果均显示,PANC-1-LUC移植瘤的光强度与瘤体积有显著的线性关系(P<0.05)。以上结果说明,该文所构建的PANC-1-LUC细胞株能够稳定、长期地表达荧光素酶,更适合构建活体成像研究的裸鼠胰腺癌模型。 展开更多
关键词 nucleofector核转染系统 荧光素酶 PANC-1细胞 生物发光
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树突状细胞抗原负载方法探讨 被引量：1
3
作者 郭文菁 杨美香 +2 位作者 祁澜 曲迅 孔北华 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期26-27,共2页
目的探讨树突状细胞(DC)抗原负载方法。方法体外诱导培养外周血单核细胞来源的DC,分别用脂质体和Nucleo-fector转染试剂盒体外负载抗原,比较2种负载方法转染效率以及对DC表型的影响。结果Nucleofector转染方法能够显著的提高转染效率,2... 目的探讨树突状细胞(DC)抗原负载方法。方法体外诱导培养外周血单核细胞来源的DC,分别用脂质体和Nucleo-fector转染试剂盒体外负载抗原,比较2种负载方法转染效率以及对DC表型的影响。结果Nucleofector转染方法能够显著的提高转染效率,2种转染方法对DC细胞的表型无显著影响。结论Nucleofector转染是一种有效的DC抗原体外负载方法,为抗原修饰的DC细胞疫苗的改进提供了新的途径。 展开更多
关键词 树突状细胞 抗原负载 脂质体 nucleofector
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pEGFP/A_2M(FP_6)重组质粒转染小鼠胚胎神经干细胞的实验研究 被引量：1
4
作者 武强 李露斯 +6 位作者 范文辉 黎红华 崔敏 吴非 徐志鹏 濮捷 杨梅 《神经损伤与功能重建》 2011年第1期19-23,共5页
目的:观察携带pEGFP/A2M(FP6)重组质粒的神经干细胞(NSCs)的生物学特性。方法:培养NSCs,采用Nucleofector转染方法将pEGFP/A2M(FP6)重组质粒转染至NSCs,利用其携带的绿色荧光和RT-PCR观察其转染情况,免疫组织化学法检测A2M(FP6)蛋白表... 目的:观察携带pEGFP/A2M(FP6)重组质粒的神经干细胞(NSCs)的生物学特性。方法:培养NSCs,采用Nucleofector转染方法将pEGFP/A2M(FP6)重组质粒转染至NSCs,利用其携带的绿色荧光和RT-PCR观察其转染情况,免疫组织化学法检测A2M(FP6)蛋白表达。结果:Nucleofector转染方法可成功高效地将pEGFP/A2M(FP6)重组质粒转染至NSCs,且对NSCs的增殖、分化无明显影响,转染细胞出现A2M(FP6)的表达。结论:携带pEGFP/A2M(FP6)质粒的NSCs仍具有增殖、分化特性,并具有合成A2M(FP6)的能力。 展开更多
关键词 pEGFP/A2M(FP6) nucleofector转染 神经干细胞
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