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Recent advances and perspectives of nucleic acid detection for coronavirus 被引量:34
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作者 Minzhe Shen Ying Zhou +4 位作者 Jiawei Ye Abdu Ahmed Abdullah AL-maskri Yu Kang Su Zeng Sheng Cai 《Journal of Pharmaceutical Analysis》 SCIE CAS CSCD 2020年第2期97-101,共5页
The recent pneumonia outbreak caused by a novel coronavirus(SARS-CoV-2)is posing a great threat to global public health.Therefore,rapid and accurate identification of pathogenic viruses plays a vital role in selecting... The recent pneumonia outbreak caused by a novel coronavirus(SARS-CoV-2)is posing a great threat to global public health.Therefore,rapid and accurate identification of pathogenic viruses plays a vital role in selecting appropriate treatments,saving people's lives and preventing epidemics.It is important to establish a quick standard diagnostic test for the detection of the infectious disease(COVID-19)to prevent subsequent secondary spread.Polymerase chain reaction(PCR)is regarded as a gold standard test for the molecular diagnosis of viral and bacterial infections with high sensitivity and specificity.Isothermal nucleic acid amplification is considered to be a highly promising candidate method due to its fundamental advantage in quick procedure time at constant temperature without thermocycler opera-tion.A variety of improved or new approaches also have been developed.This review summarizes the currently available detection methods for coronavirus nucleic acid.It is anticipated that this will assist researchers and clinicians in developing better techniques for timely and effective detection of coro-navirus infection. 展开更多
关键词 CORONAVIRUS nucleic acid detection PCR-Based methods Isothermal nucleic acid amplification-based methods Microarray-based methods
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适配体识别-纳米金光学传感器检测卡那霉素
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作者 张亚莉 赵亚嫔 +3 位作者 马雨涵 王英姿 王思琦 哈婧 《化学研究与应用》 北大核心 2025年第7期1956-1962,共7页
本文建立了一种高选择性的、以纳米金为探针结合适配体识别来检测卡那霉素的分光光度方法。采用溶剂热合成法,通过氯金酸和柠檬酸三钠制备了纳米金;基于纳米金变色直接检测了卡那霉素,其间考查了多种不同因素的影响,同时选择土霉素、氨... 本文建立了一种高选择性的、以纳米金为探针结合适配体识别来检测卡那霉素的分光光度方法。采用溶剂热合成法,通过氯金酸和柠檬酸三钠制备了纳米金;基于纳米金变色直接检测了卡那霉素,其间考查了多种不同因素的影响,同时选择土霉素、氨苄西林、硫酸新霉素、四环素和氯霉素等五种抗生素开展选择性实验,结果表明仅依靠纳米金变色直接检测卡那霉素,其选择性具有一定的局限性。结合卡那霉素核酸适配体,当卡那霉素存在时,适配体和卡那霉素结合,加入一定浓度的NaCl会破坏纳米金溶液的稳定性,使纳米金发生聚集,进而导致溶液由红色变为蓝色。若不存在卡那霉素,溶液依然保持红色。经考察,在0.1mol/L NaCl存在下的条件下,该方法展现出良好的线性和选择性,线性范围处于4.0~18nmol/L之间,线性方程为y=44.396x+0.3392,相关系数R^(2)=0.9934,检出限为3S/k=3.44nmol/L。 展开更多
关键词 纳米金 卡那霉素 分光光度法 核酸适配体
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两种松材线虫检测方法的结果比较 被引量:1
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作者 俞禄珍 崔金璐 田沂民 《植物检疫》 2025年第3期46-49,共4页
松材线虫病是由松材线虫引起的一种具有毁灭性的森林病害。松材线虫的准确鉴定是控制病害扩散蔓延的关键之一。长期以来,松材线虫的鉴定以分离线虫、鉴定线虫为主要方法。近年来,直接对木片中的松材线虫进行核酸检测的方法有报道。但关... 松材线虫病是由松材线虫引起的一种具有毁灭性的森林病害。松材线虫的准确鉴定是控制病害扩散蔓延的关键之一。长期以来,松材线虫的鉴定以分离线虫、鉴定线虫为主要方法。近年来,直接对木片中的松材线虫进行核酸检测的方法有报道。但关于这两种方法的比较研究未见报道。本研究对市售某公司直接对木片中的松材线虫进行核酸检测的方法开展试验,并与传统方法的检测结果进行比较。结果表明,相比传统方法,直接对木片中的松材线虫进行核酸检测的方法耗时在30 min以内,其检测时长远远低于传统方法。直接对木片中的松材线虫进行核酸检测的方法存在“核酸阳性”而传统方法却“分离不到线虫”的现象,建议对于核酸筛查阳性的,需进一步用常规线虫分离方法验证。 展开更多
关键词 松材线虫 贝尔曼漏斗法 核酸检测
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咽拭子7项呼吸道病原体核酸双扩增法在儿童急性上呼吸道感染诊断中的应用价值 被引量:1
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作者 周永清 王江荷 +4 位作者 林亨演 杨凯琪 饶楠 王曼 褚红娟 《实用临床医药杂志》 2025年第3期114-117,共4页
目的比较不同检测方法诊断儿童急性呼吸道感染病原体的价值。方法纳入862例急性呼吸道感染患儿,应用双扩增法及自建核酸检测系统对患儿的咽拭子样本进行7种常见的呼吸道病原体的核酸检测。对于2种方法检测结果不一致的样本,通过巢式聚... 目的比较不同检测方法诊断儿童急性呼吸道感染病原体的价值。方法纳入862例急性呼吸道感染患儿,应用双扩增法及自建核酸检测系统对患儿的咽拭子样本进行7种常见的呼吸道病原体的核酸检测。对于2种方法检测结果不一致的样本,通过巢式聚合酶链反应(PCR)进行检测。结果双扩增法阳性检出率为57.75%,高于自建核酸检测系统的30.14%,复合感染检出率为10.14%,高于自建核酸检测系统1.97%,差异有统计学意义(P<0.05)。双扩增法灵敏度为91.63%,高于自建核酸检测系统72.61%,特异性为92.31%,高于自建核酸检测系统75.62%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论双扩增法可同时完成7种呼吸道病原体的核糖核酸检测,敏感性高,特异性强,具有较高的临床应用价值。 展开更多
关键词 咽拭子 呼吸道病原体 双扩增法 自建核酸检测系统
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单管闭管多重PCR检测技术的发展
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作者 胡婷婷 张云龙 邹秉杰 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第8期1115-1126,共12页
核酸检测技术因快速、灵敏和特异等特点,在病原体检测等领域广泛应用。因疾病相关的核酸标志物众多,多重核酸检测需求渐增。多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)可对多种靶标同时扩增,但扩增后分析过程存在开管易污染和... 核酸检测技术因快速、灵敏和特异等特点,在病原体检测等领域广泛应用。因疾病相关的核酸标志物众多,多重核酸检测需求渐增。多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)可对多种靶标同时扩增,但扩增后分析过程存在开管易污染和技术要求高等问题。随着检测技术的不断进步,一系列简便和可靠且无需开管处理的单管多重PCR检测技术相继出现。常见的技术有基于荧光探针的单管闭管多重PCR检测方法,主要利用不同荧光标记对多种靶标进行区分,与不同的特异性酶切反应结合,能够实现肿瘤罕见突变的多重检测以及单核苷酸特异性分型。此外,基于熔解温度差异的单色熔解曲线分析方法,在单个荧光通道内实现了多靶标并行检测,若在多个荧光通道内进行则称为多色熔解曲线分析方法,可将检测靶标数量提升至数十种,显著突破了荧光通道数量对检测重数的限制。同时,利用荧光标记进行不同组合的荧光编码方法,也为单管闭管多重PCR检测提供了新的思路,包括编码同一靶标对应的不同荧光标记产生信号的先后顺序、利用2种荧光标记组合识别特定靶标、控制不同靶标荧光信号幅度等方式,也能够提高检测重数。本文从原理、应用及方法优缺点等多个维度出发,对近年来单管闭管多重PCR检测技术的研究进展进行概括并展望,为此后的科研探索与应用提供有价值的参考。 展开更多
关键词 核酸检测 多重核酸检测 聚合酶链式反应 单管反应 检测方法
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核酸适配体在乳及乳制品中乳铁蛋白检测的应用
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作者 杨雨昕 方暘 +4 位作者 程健博 倪艳 赵婉怡 孙娜娜 徐秦峰 《中国乳品工业》 北大核心 2025年第10期44-51,共8页
乳铁蛋白是一种铁结合糖蛋白,具有抗菌、抗病毒、抗炎等多种生理活性。现有乳铁蛋白检测方法存在样品预处理繁琐、仪器要求高、耗时长等问题。近年来,核酸适配体作为“化学抗体”,被广泛应用于乳铁蛋白检测领域。文章综述了基于核酸适... 乳铁蛋白是一种铁结合糖蛋白,具有抗菌、抗病毒、抗炎等多种生理活性。现有乳铁蛋白检测方法存在样品预处理繁琐、仪器要求高、耗时长等问题。近年来,核酸适配体作为“化学抗体”,被广泛应用于乳铁蛋白检测领域。文章综述了基于核酸适配体的乳铁蛋白检测新方法及在乳铁蛋白检测中的应用,概述了乳铁蛋白适配体体外筛选及相互结合作用机制,其中静电、氢键和疏水相互作用是维持乳铁蛋白和适配体复合物的主要作用力,总结了采用核酸适配体进行样品前处理,在建立电泳、比色、荧光、电化学等快速乳铁蛋白检测方法等方面的研究进展,为乳铁蛋白快速检测技术及产品开发提供参考。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 核酸适配体 筛选 快速检测方法
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一种犬细小病毒可视化LAMP检测方法的建立
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作者 张明亮 王尧 +8 位作者 马圣明 蒋志惠 唐亚杰 于常鸿 马赞扬 史森霖 张闻慧 吴银荣 翁少亭 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期51-58,共8页
为了建立一种敏感、稳定、快速的犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)可视化检测方法,试验以羟基萘酚蓝(hydroxynaphthol blue,HNB)为指示剂,基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,通过优化反应条件(引... 为了建立一种敏感、稳定、快速的犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)可视化检测方法,试验以羟基萘酚蓝(hydroxynaphthol blue,HNB)为指示剂,基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,通过优化反应条件(引物组合、内外引物浓度比、HNB终浓度、孵育温度和时间)建立一种CPV可视化LAMP检测方法,对该方法进行特异性、敏感性和重复性检测,并采用该方法对20份疑似CPV感染的临床样本进行检测。结果表明:筛选到的引物组合为CPV3-FIP/BIP(内引物)、CPV3-F3/B3(外引物)、CPV3-FLP/BLP(Loop引物),内外引物浓度比为16∶1,HNB终浓度为0.32 mmol/L,孵育温度为45℃,孵育时间为30 min。用该方法同时检测CPV、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)、犬冠状病毒(Canine coronavirus,CCV)、犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus,CPIV)核酸,仅CPV呈阳性,CDV、CCV、CPIV均呈阴性;该方法最低检测限为1×10^(0)copies/μL,且相同浓度质粒样品3次重复的显色程度基本一致。采用该方法检测20份临床样本,结果均呈阳性,与实时荧光定量PCR方法的符合率为100%。说明本研究建立的方法在45℃条件下扩增30 min即可完成对CPV的可视化检测,具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,在临床中具有一定的应用潜力。 展开更多
关键词 犬细小病毒 核酸检测 检测方法 环介导等温扩增技术 可视化 羟基萘酚蓝
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裂谷热病毒RT-RAA-CRISPR/Cas12a核酸可视化检测方法的建立
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作者 牛莉娟 黄培 +5 位作者 靳凯凯 张子莫 武晓瑄 李媛媛 王化磊 张海丽 《实验动物科学》 2025年第5期34-42,共9页
目的针对裂谷热病毒(RVFV),建立快速可视化检测方法,为RVFV早期诊断、实验动物健康监测及疫情防控提供技术支持。方法分析RVFV S基因保守序列,设计并筛选特异性反转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)引物与CRISPR/Cas12a系统的gRNA,建立RT-R... 目的针对裂谷热病毒(RVFV),建立快速可视化检测方法,为RVFV早期诊断、实验动物健康监测及疫情防控提供技术支持。方法分析RVFV S基因保守序列,设计并筛选特异性反转录重组酶介导等温扩增(RT-RAA)引物与CRISPR/Cas12a系统的gRNA,建立RT-RAA-CRISPR/Cas12a核酸可视化检测方法;优化CRISPR/Cas12a反应体系,每个浓度设置3个平行,随后优化RT-RAA反应条件,以提高方法的检测性能;随后评价该方法的敏感性及特异性。所有实验结果均经3次重复实验验证。结果针对RVFV S基因,建立了RT-RAA-CRISPR/Cas12a核酸可视化检测方法;通过条件优化实验确定,当Cas12a蛋白工作浓度为0.053μmol/L、gRNA工作浓度为0.075μmol/L,在39℃条件下完成30 min等温扩增、随后于37℃进行20 min检测反应时,该方法的检测性能最佳;敏感性实验结果显示,该方法可稳定检出浓度低至0.5 copies/μL的RVFV S基因重组质粒,具有高敏感性;特异性实验表明,该方法与尼帕病毒RNA、拉沙病毒重组质粒(N基因)、埃博拉病毒RNA、新布尼亚病毒RNA无交叉反应,具有强特异性。结论本研究成功建立了RVFV RT-RAA-CRISPR/Cas12a核酸可视化检测方法,该方法具有敏感性高、操作简单等优势,有望应用于基层实验室,为RVFV早期检测提供技术支持,助力疫苗研发及疫情防控。 展开更多
关键词 裂谷热病毒 反转录重组酶介导等温扩增 CRISPR/Cas12a 核酸可视化检测
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核酸检测试剂冻干技术及其评价方法研究进展
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作者 刘莹莹 李若薇 王艺霏 《生物技术进展》 2025年第5期804-811,共8页
核酸检测在疾病诊断、治疗指导、及时防控以及科学研究与公共卫生监测等多个领域扮演着至关重要的角色。然而,传统的液体试剂在储存和运输过程中面临诸多挑战,如稳定性差、灵敏度下降等问题。随着冻干技术的进步,其在核酸检测试剂中的... 核酸检测在疾病诊断、治疗指导、及时防控以及科学研究与公共卫生监测等多个领域扮演着至关重要的角色。然而,传统的液体试剂在储存和运输过程中面临诸多挑战,如稳定性差、灵敏度下降等问题。随着冻干技术的进步,其在核酸检测试剂中的应用取得了显著成效。综述了冻干技术在核酸检测试剂中的应用进展,重点探讨了冻干保护剂的选择与浓度优化、冻干条件对试剂性能的影响、冻干后试剂形貌调控以及冻干试剂检测性能与稳定性的评价方法,旨在为后续相关研究提供科学指导,推动冻干技术在临床诊断、疾病预防和生物科学研究中的应用。 展开更多
关键词 核酸检测 冻干技术 冻干保护剂 评价方法
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多重核酸检测与传统细菌培养方法的比较
10
作者 王晓翠 高海月 +1 位作者 官文姣 周明志 《首都食品与医药》 2025年第19期80-82,共3页
目的对比分析6种呼吸道病原菌核酸检测与传统细菌培养方法对实际病原体检测的实际效果。方法选取存在呼吸道感染患者的痰液样本(样本纳入例数:100例;纳入时间:2025年1月-2025年4月),均进行6种呼吸道病原菌核酸检测(PCR检测)和传统细菌... 目的对比分析6种呼吸道病原菌核酸检测与传统细菌培养方法对实际病原体检测的实际效果。方法选取存在呼吸道感染患者的痰液样本(样本纳入例数:100例;纳入时间:2025年1月-2025年4月),均进行6种呼吸道病原菌核酸检测(PCR检测)和传统细菌培养方法检测痰液样本中的细菌。结果多重核酸检测的细菌检出结果相较于传统细菌培养方法的检出结果检出数更高(P<0.05)。结论多重核酸检测方式的细菌检出率更高,相较于传统细菌培养方法检测效果更优,可为后续诊疗提供有效数据支持。 展开更多
关键词 多重核酸检测 传统细菌培养方法 比较
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利用细胞化学染色方法和原位杂交技术探讨红细胞中核酸物质表达及定位情况
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作者 孙莉萍 曹腾宇 +1 位作者 段翠密 于洋 《临床输血与检验》 2025年第3期325-329,共5页
目的探索红细胞中核酸物质的表达及定位情况。方法首先,选取健康人红细胞作为实验样本(A549有核细胞系为对照),利用细胞化学染色方法和原位杂交技术,对其中DNA和RNA进行相关检测,明确红细胞中核酸物质的表达情况。其次,提取红细胞微囊泡... 目的探索红细胞中核酸物质的表达及定位情况。方法首先,选取健康人红细胞作为实验样本(A549有核细胞系为对照),利用细胞化学染色方法和原位杂交技术,对其中DNA和RNA进行相关检测,明确红细胞中核酸物质的表达情况。其次,提取红细胞微囊泡(microvesicle,MV),并将其与吞噬能力强的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7共培养,利用原位杂交染色方法检测受体细胞RAW264.7中红细胞特异性miRNA(miR-451a)的定位情况。结果红细胞中存在核酸物质(DNA和RNA),并且红细胞中存在高表达量的miR-451a,提示红细胞中的miR-451a可能通过MV进入受体细胞。结论利用细胞化学染色方法和原位杂交技术可以检测到红细胞中存在核酸物质。 展开更多
关键词 红细胞 核酸物质 miR-451a 细胞化学染色 原位杂交技术
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大理地区呼吸道病原菌核酸检测结果分析
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作者 段福慧 李思颖 +1 位作者 杨锡彤 王光明 《右江医学》 2025年第4期305-309,共5页
目的 分析大理地区下呼吸道感染病原菌分布情况,为临床诊断下呼吸道感染提供依据,指导临床合理使用抗菌药物。方法 统计大理大学第一附属医院2021年11月至2023年2月大理地区居民的呼吸道病原菌送检标本5039例,采用恒温核酸扩增芯片法(LA... 目的 分析大理地区下呼吸道感染病原菌分布情况,为临床诊断下呼吸道感染提供依据,指导临床合理使用抗菌药物。方法 统计大理大学第一附属医院2021年11月至2023年2月大理地区居民的呼吸道病原菌送检标本5039例,采用恒温核酸扩增芯片法(LAMP)检测呼吸道病原菌,分析病原菌的分布情况。结果 总阳性检出率为45.68%(2302/5039),其中排前5位的依次是流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、肺炎支原体、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌;感染类型主要是以单一病原菌感染为主,前3位分别为流感嗜血杆菌、肺炎支原体、肺炎链球菌;成人总阳性检出率(43.03%)明显低于儿童的阳性检出率(72.11%)。男性病原菌检出率高于女性阳性检出率,差异有统计学意义(χ^(2)=6.483,P=0.011)。结论 LAMP可快速准确检测出呼吸道感染的病原体,在大理地区下呼吸道感染病原菌分布最广的是流感嗜血杆菌,男性感染总阳性率大于女性,儿童阳性检出率高于成人,感染类型以单一病原菌感染为主。 展开更多
关键词 下呼吸道感染 恒温核酸扩增芯片法 病原菌分布 合理用药
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实时荧光核酸恒温扩增技术检测宫颈解脲支原体的应用价值
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作者 朱寅 宁玉梅 《健康研究》 2025年第1期101-106,共6页
目的对比实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT)和聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)在解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)感染治疗后的检测效果差异,为探寻随访中实时评估疗效的检测... 目的对比实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT)和聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)在解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)感染治疗后的检测效果差异,为探寻随访中实时评估疗效的检测方法以避免过度治疗提供参考。方法分别在患者初检和治疗后停药2周及以下、停药2周以上复诊时,采用液体培养法、PCR法、SAT法检测UU,记录3种方法的结果报告时间;以液体培养法为标准,计算PCR法、SAT法的灵敏度、特异度、假阳性率,用配对设计四格表资料卡方检验(McNemar)比较PCR和SAT 2种检测方法与液体培养法检测UU的阳性率,绘制受试者工作曲线并计算出曲线下面积(area under curve,AUC)以评估PCR法与SAT法的检测效果差异。结果除去样本保存和运输时间,从样本接收到报告结果,液体培养法耗时约45 h,PCR法耗时约11 h,SAT法耗时约6 h。治疗后随访4周,停药2周及以下时,PCR法检测UU的灵敏度为87.5%(7/8),特异度为38.5%(5/13),假阳性率61.5%(8/13),AUC为0.630(95%CI:0.386~0.873),与液体培养法的结果比较,差异有统计学意义(χ^(2)=4.00,P=0.039);SAT法的检测灵敏度为87.5%(7/8),特异度为84.6%(11/13),假阳性率为15.4%(2/13),AUC为0.861(95%CI:0.682~1.000),与液体培养法的结果差异无统计学意义(χ^(2)=0.000,P=1.000)。治疗前筛查和停药2周以上时,PCR和SAT检测UU的结果与液体培养法的结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论与PCR相比,SAT报告时间短,复查时假阳性率更低,因此SAT兼顾快速和准确,更适合治疗后停药时间≤2周的患者复查。 展开更多
关键词 解脲支原体 液体培养法 实时荧光核酸恒温扩增检测技术 聚合酶链反应 实时评估
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不同核酸提取方法在恶性疟原虫实时荧光定量PCR检测中的效果 被引量:2
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作者 董小蓉 孙凌聪 周晓蓉 《热带医学杂志》 CAS 2024年第4期490-493,508,共5页
目的比较不同核酸提取方法在恶性疟原虫荧光定量PCR检测中的扩增效果,为实验室的不同需求选择不同方法和试剂盒提供依据。方法以健康人群抗凝血对恶性疟血样标本按照1∶10、1∶100、1∶1000、1∶10000、1∶100000、1∶1000000进行倍比稀... 目的比较不同核酸提取方法在恶性疟原虫荧光定量PCR检测中的扩增效果,为实验室的不同需求选择不同方法和试剂盒提供依据。方法以健康人群抗凝血对恶性疟血样标本按照1∶10、1∶100、1∶1000、1∶10000、1∶100000、1∶1000000进行倍比稀释,采用磁珠法、滤纸血离心柱法和检测试剂盒自带试剂抽提法对每个稀释度样本进行核酸提取和检测,每个方法每份样本分成3份平行开展。结果磁珠法提取的核酸样本稀释度到10-6时,3份平行样本检测均为阴性;滤纸血离心柱法提取的核酸样本稀释度到10-4时,检测均为阴性;检测试剂盒自带抽提试剂提取的核酸样本除了原血样有1份检测为阳性外,其余所有样本检测均为阴性。磁珠法提取的核酸,原血样、1∶10、1∶100、1∶1000稀释度下其检测CT均值分别为16.18、20.48、22.76、24.51,明显小于采用滤纸血离心柱法的CT值22.50、26.51、30.58、32.63,差异均有统计学意义(t=-16.041、-6.133、-8.737、-5.580,P均<0.05)。磁珠法除了1∶10稀释度的CV值小于滤纸血离心柱法,其他浓度的样本CV值均大于滤纸血离心柱法。根据绝对定量标准曲线计算的初始拷贝数,磁珠法提取的各稀释度DNA初始拷贝数大于滤纸血离心柱法。结论3种核酸提取方法中,磁珠法和滤纸血离心柱法效果较好,磁珠法适合大规模样品筛查及突发疟疾疫情的高效检测,滤纸血离心柱法适合长期保存样本的检测研究。 展开更多
关键词 核酸 恶性疟原虫 磁珠法 离心柱法 实时荧光定量PCR
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不同核酸提取方法对HBV-DNA检测性能验证情况分析 被引量:2
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作者 周文娟 林真 徐建萍 《现代医药卫生》 2024年第4期575-580,共6页
目的评估2种乙型肝炎病毒(HBV)-DNA提取方法及2家检测试剂的性能,有助于选择优化提取试剂和检测试剂。方法2023年4月采用达安全自动核酸提取仪提取法(磁珠法)和手工提取法(一步法),并用达安和圣湘2种HBV-DNA试剂检测,对其进行精密度、... 目的评估2种乙型肝炎病毒(HBV)-DNA提取方法及2家检测试剂的性能,有助于选择优化提取试剂和检测试剂。方法2023年4月采用达安全自动核酸提取仪提取法(磁珠法)和手工提取法(一步法),并用达安和圣湘2种HBV-DNA试剂检测,对其进行精密度、正确度、线性范围、检出限及抗干扰能力等性能进行验证和评价。结果达安全自动核酸提取仪提取达安试剂检测、手工提取达安试剂检测和手工提取圣湘试剂检测在精密度、正确度、线性范围、检出限方面验证结果均达标;达安全自动核酸提取仪提取圣湘试剂检测在低值检测中变异系数大于5%,最低检测限验证不合格;抗干扰能力方面,全自动核酸提取仪提取的2.0 g/dL血红蛋白浓度的样本用达安和圣湘试剂检测结果均不受影响。手工提取甘油三酯浓度达3000 mg/dL的样本用达安和圣湘试剂检测的结果均不受影响。结论不同厂家的提取和检测试剂避免混用,达安和圣湘试剂对HBV-DNA定量检测的结果均符合要求。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒-DNA定量检测 全自动核酸提取仪法 手工提取法 性能验证
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核酸提取试剂盒对饲料中牛羊源性成分检测的影响
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作者 李泰 朱英才 +5 位作者 骆璐 彭强 凌洪权 廖星杰 王钦 张承双 《粮食与饲料工业》 CAS 2024年第1期70-71,共2页
实时荧光聚合酶链反应法(荧光PCR法)是目前饲料中牛羊源性成分的定性检测中常用方法之一。为了熟练操作和掌握这个方法,使得实验室工作人员在做饲料中牛羊源性成分定性这类检测时能有一个清晰的认识,通过核酸提取试剂盒的选取及平行实... 实时荧光聚合酶链反应法(荧光PCR法)是目前饲料中牛羊源性成分的定性检测中常用方法之一。为了熟练操作和掌握这个方法,使得实验室工作人员在做饲料中牛羊源性成分定性这类检测时能有一个清晰的认识,通过核酸提取试剂盒的选取及平行实验比对,对此进行了阐释。 展开更多
关键词 荧光PCR法 牛羊源性成分 检测分析 核酸提取试剂盒
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用于磁珠法核酸提取的微流控芯片及自动化平台 被引量:5
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作者 刘晨曦 姚延禄 周新丽 《分析试验室》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第1期111-117,共7页
基于磁珠法核酸提取原理,设计并制作出旋转驱动式核酸提取微流控芯片及自动化平台。微流控芯片包括裂解腔、清洗腔以及洗脱腔等结构,步进电机带动微流控芯片旋转,通过电磁铁吸附微流控芯片内的磁珠,实现磁珠在各腔室转移,完成核酸提取... 基于磁珠法核酸提取原理,设计并制作出旋转驱动式核酸提取微流控芯片及自动化平台。微流控芯片包括裂解腔、清洗腔以及洗脱腔等结构,步进电机带动微流控芯片旋转,通过电磁铁吸附微流控芯片内的磁珠,实现磁珠在各腔室转移,完成核酸提取和纯化。对芯片表面疏水性、磁力大小、磁珠分散程度以及核酸洗脱时间进行优化。结果表明,当磁力大小为250 N时,可实现磁珠转移;磁铁放置于芯片上方1 mm时,腔室内磁珠分散程度最好。洗脱时间为20 min时,芯片上提取大肠杆菌的核酸浓度较高。微流控芯片与磁珠核酸提取技术相结合提取的核酸样本,可直接应用于后续聚合酶链式反应扩增环节,有利于实现核酸自动提取及扩增的一体化。 展开更多
关键词 微流控技术 核酸提取 磁珠法 自动化提取
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荧光定量PCR熔解曲线法检测真菌核酸的临床应用价值评估 被引量:1
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作者 倪萍 徐娟 +4 位作者 胡海涛 彭海林 李旺 周成林 董苏荣 《临床检验杂志》 CAS 2024年第9期641-647,共7页
目的评估荧光定量PCR熔解曲线法检测真菌核酸的准确性及临床应用价值。方法纳入460例疑似或确诊为呼吸道真菌感染患者为研究对象,以荧光定量PCR熔解曲线法作为考核方法,以真菌26S rRNA基因核酸测定试剂盒联合Sanger测序法作为参考方法,... 目的评估荧光定量PCR熔解曲线法检测真菌核酸的准确性及临床应用价值。方法纳入460例疑似或确诊为呼吸道真菌感染患者为研究对象,以荧光定量PCR熔解曲线法作为考核方法,以真菌26S rRNA基因核酸测定试剂盒联合Sanger测序法作为参考方法,采集各研究对象痰液样本并同步使用考核方法、参考方法检测,计算两种方法的Kappa值以评价结果的一致性。结果以参考方法为对照,考核方法检测结果总符合率为92.83%(427/460);此外,与参考方法相比,考核方法检测8种真菌(白念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、新生隐球菌、季也蒙念珠菌、曲霉菌)的阳性符合率、阴性符合率、总符合率分别为97.34%(183/188)、97.06%(264/272)、97.17%(447/460);100.00%(33/33)、99.77%(426/427)、99.78%(459/460);100.00%(16/16)、99.55%(442/444)、99.57%(458/460);98.11%(52/53)、99.75%(442/444)、99.57%(458/460);95.08%(58/61)、99.50%(397/399)、98.91%(455/460);100.00%(9/9)、99.56%(449/451)、99.57%(458/460);85.00%(17/20)、99.32%(437/440)、98.70%(454/460);97.59%(81/83)、97.88%(369/377)、97.83%(450/460);两种方法检测结果一致性评价的Kappa值均大于0.8。对两种方法不一致结果进行复核检测,结果发现有53.7%(22/41)的检测结果与考核方法一致,有46.3%(19/41)的检测结果与参考方法一致。结论使用荧光定量PCR熔解曲线法能同时检测8种真菌,且检测结果与参考方法高度一致,在真菌检测中具有独特优势,且有重要的临床应用价值。 展开更多
关键词 真菌核酸检测 念珠菌鉴定 熔解曲线法
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奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的临床应用评估 被引量:2
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作者 胡秀花 王子华 +5 位作者 黄鹏成 刘园园 毛君杰 王桂琴 马翀 王少林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期61-69,共9页
为了评估商品化的奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(后文简称为“检测试剂盒”)在临床应用中的适用性,本试验采用传统细菌分离培养、检测试剂盒、16S rRNA基因扩增子测序和药物敏感性试验对宁夏回族自治区9个牧... 为了评估商品化的奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(后文简称为“检测试剂盒”)在临床应用中的适用性,本试验采用传统细菌分离培养、检测试剂盒、16S rRNA基因扩增子测序和药物敏感性试验对宁夏回族自治区9个牧场155份奶牛乳房炎奶样分别进行菌株鉴定和耐药性检测,并将检测试剂盒与其他3种检测结果进行比较和分析。结果显示,检测试剂盒与传统细菌分离培养在病原菌检出情况上基本保持一致,均主要检出了大肠杆菌、芽孢杆菌属和凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)等;检测试剂盒与16S rRNA基因扩增子测序结果在菌属组成上一致性较高,均主要检出了假单胞菌属、链球菌属和葡萄球菌属等;药物敏感性试验结果显示,检出率较高的66株病原菌分离株对β-内酰胺类抗菌药物的耐药率普遍偏高;奶样中β-内酰胺酶耐药基因blaZ的检测试剂盒检出结果与同一奶样中分离菌株的药物敏感性试验结果一致率达58%(7/12)。综上所述,该检测试剂盒具有较高的准确度和病原覆盖率,可为牧场奶牛乳房炎主要病原的快速诊断和耐药基因(blaZ)监测提供有效的技术支持,从而降低抗菌药物的使用量,以减少牧场经济损失。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 细菌分离培养 16S rRNA基因扩增子测序 药物敏感性试验
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一步法在泌尿生殖系统感染病原体核酸检测中的临床应用评价 被引量:1
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作者 黄国妮 颜申姬 +1 位作者 程静 谢闰萍 《分子诊断与治疗杂志》 2024年第2期203-206,215,共5页
目的 探讨一步法用于泌尿生殖系统感染病原体核酸检测的可行性,为一步法实现广泛的临床应用提供实验基础。方法 采集2021年3月至2021年8月期间到深圳市宝安区人民医院就诊的200例泌尿生殖道感染患者分泌物,分别用一步法和传统煮沸法进... 目的 探讨一步法用于泌尿生殖系统感染病原体核酸检测的可行性,为一步法实现广泛的临床应用提供实验基础。方法 采集2021年3月至2021年8月期间到深圳市宝安区人民医院就诊的200例泌尿生殖道感染患者分泌物,分别用一步法和传统煮沸法进行核酸提取,比较两种提取方法的结果一致性、灵敏度、抗干扰能力和重复性。结果 一步法与煮沸法的提取阳性率一致性Kappa值为0.949,一致性较高;对选取的阳性样本两种提取方法最高可检测出1∶100 000的稀释浓度;抗干扰实验干扰偏移均在10%以内;重复性实验显示两种提取方法的CV值均在5%以内。结论 两种提取方法比较差异无统计学意义,一步法操作简单快速,降低污染风险,具有非常好的临床应用价值。 展开更多
关键词 一步法 泌尿生殖道感染 聚合酶链式反应 核酸提取
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