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基于Nrf2/GPX4通路调控铁死亡探讨黄连解毒汤对动脉粥样硬化小鼠的影响 被引量：8
1
作者 龚兆会 高黎 +6 位作者 翟惠奇 余锦紫 褚庆民 罗川晋 卿立金 吴伟 李荣 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第3期22-28,共7页
目的:研究黄连解毒汤通过改善铁死亡治疗动脉粥样硬化(AS)小鼠的作用机制。方法:取SPF级C57BL/6J小鼠10只为正常组,另取载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠50只随机分为5组,分别为模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组和阿托伐他汀组(ATV组)... 目的:研究黄连解毒汤通过改善铁死亡治疗动脉粥样硬化(AS)小鼠的作用机制。方法:取SPF级C57BL/6J小鼠10只为正常组,另取载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠50只随机分为5组,分别为模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组和阿托伐他汀组(ATV组)。ApoE^(-/-)小鼠采用高脂饲料喂食8周构建AS模型,并在第9周开始分别予生理盐水,黄连解毒汤低、中、高剂量(3.9、7.8、15.6 g·kg^(-1)·d^(-1))和阿托伐他汀钙片(0.01 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,共给药8周。采用大体油红O染色和马松(Masson)染色观察小鼠主动脉斑块的形成情况,自动生化分析仪测定血脂四项总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,透射电镜观察主动脉线粒体结构,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)水平,微板法检测血清中还原型谷胱甘肽(GSH)含量,TBA法检测血清中丙二醛(MDA)含量,蛋白免疫印迹法检测小鼠主动脉核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组主动脉管腔斑块沉积,血清TC、LDL-C、TG、HDL-C、MDA含量显著升高(P<0.01),血清SOD、GSH和主动脉Nrf2、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、GPX4的表达水平均显著降低(P<0.01),主动脉线粒体碎裂、空泡化、体积萎缩,线粒体内嵴减少或者呈现松散、紊乱的形态。与模型组比较,黄连解毒汤低、中、高剂量组和ATV组主动脉管腔斑块沉积明显减少,小鼠血清TC、LDL-C、TG和MDA含量明显降低(P<0.05,P<0.01),血清SOD、GSH水平和主动脉Nrf2、SLC7A11、GPX4的表达水平升高(P<0.05,P<0.01),主动脉线粒体空泡化症状减轻,嵴数量增多且排序整齐。结论:黄连解毒汤能减轻AS小鼠主动脉管腔斑块沉积,降低血脂和MDA表达,升高SOD和GSH表达,改善铁死亡病理改变,其作用机制与Nrf2/GPX4信号通路有关。 展开更多
关键词 黄连解毒汤 动脉粥样硬化 铁死亡 核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路
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基于TLR4 NF-κB通路-神经相关因子探究依达拉奉对急性脑梗死患者炎症反应与神经损伤的保护机制 被引量：6
2
作者 李莉 姜雪 +1 位作者 姜荣格 李恳 《中国实用神经疾病杂志》 2025年第1期47-52,共6页
目的基于Toll样受体4(TLR4)核因子-κB(NF-κB)通路-神经相关因子探究依达拉奉对急性脑梗死(ACI)患者炎症反应与神经损伤的保护机制。方法选取2020-07—2023-07保定市第一中心医院收治的110例ACI患者,以随机数字表法分为观察组、对照组,... 目的基于Toll样受体4(TLR4)核因子-κB(NF-κB)通路-神经相关因子探究依达拉奉对急性脑梗死(ACI)患者炎症反应与神经损伤的保护机制。方法选取2020-07—2023-07保定市第一中心医院收治的110例ACI患者,以随机数字表法分为观察组、对照组,各55例,对照组给予阿替普酶溶栓,观察组给予阿替普酶溶栓联合依达拉奉治疗。比较2组疗效、神经功能[美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、改良Rankin评分]、TLR4 NF-κB通路指标(TLR4、NF-κB)、神经损伤相关因子[神经元特异性烯醇化酶(NSE)、中枢神经特异性蛋白(S-100β)、脑源性神经营养因子(BDNF)]、TLR4 NF-κB通路相关炎症因子[白介素-1β(IL-1β)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、五聚素3(PTX3)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)]。结果观察组总有效率96.36%,高于对照组的83.64%(P<0.05)。治疗1、2周观察组NIHSS评分、改良Rankin评分均低于对照组(P<0.05),观察组TLR4、NF-κB均低于对照组(P<0.05)。相较于治疗前,2组治疗1、2周后S-100β、NSE水平明显下降,BDNF水平明显升高,观察组S-100β、NSE水平均低于对照组,BDNF水平高于对照组(P<0.05)。相较于治疗前,2组治疗1、2周后IL-1β、hs-CRP、TNF-α、PTX3、Lp-PLA2水平均明显下降,观察组IL-1β、hs-CRP、TNF-α、PTX3、Lp-PLA2水平均低于对照组(P<0.05)。结论依达拉奉对ACI患者的疗效显著,有利于缓解炎症反应,改善神经损伤,其保护机制可能与TLR4 NF-κB通路调控神经损伤、炎症反应相关因子有关。 展开更多
关键词 急性脑梗死 TOLL样受体4 核因子-ΚB 依达拉奉 TLR4 NF-κB通路
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栀子苷调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路缓解膝骨关节炎大鼠的炎症反应 被引量：3
3
作者 张健 颜运涛 +4 位作者 王响 焦永伟 李锡 杨琦 任伟亮 《中药药理与临床》 北大核心 2025年第5期22-27,共6页
目的:探究栀子苷对大鼠膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)的影响及其潜在机制。方法:建立碘乙酸钠诱导的大鼠KOA模型,并随机分为:正常对照组、模型对照组、栀子苷30、60、120 mg/kg组和阳性对照双氯芬酸6 mg/kg组。采用苏木精-伊红(... 目的:探究栀子苷对大鼠膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)的影响及其潜在机制。方法:建立碘乙酸钠诱导的大鼠KOA模型,并随机分为:正常对照组、模型对照组、栀子苷30、60、120 mg/kg组和阳性对照双氯芬酸6 mg/kg组。采用苏木精-伊红(HE)和番红O-固绿(SO/FG)染色观察软骨组织病理变化,并使用Mankin评分原则进行定量评分;应用透射电镜术(TEM)观察软骨组织的超微结构;使用ELISA试剂盒检测血清中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和过氧化氢酶(CAT)的含量或活力;采用定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测软骨组织Toll样受体4(Tlr4)、髓样分化因子88(Myd88)和核转录因子κB(Nfκb)mRNA表达;以Western blot检测TLR4/MyD88/NFκB通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组出现明显的软骨组织破坏、关节炎症和氧化应激反应血清中炎症因子含量升高,软骨组织Tlr4、Myd88、Nfkb的mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,栀子苷60、120 mg/kg组软骨破坏和其他病变显著改善,血清中MMP13、IL-1β、TNF-α和IL-6的含量明显降低,氧化应激反应被明显抑制,软骨组织Tlr4、Myd88、Nfkb的mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:栀子苷通过调节TLR4/MyD88/NFκB信号通路降低炎症细胞因子释放和氧化应激水平,保护KOA大鼠的关节软骨免受损伤。 展开更多
关键词 栀子苷 膝骨关节炎 软骨损伤 氧化应激 炎症反应 Toll样受体4 髓样分化因子88 核转录因子ΚB
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莪术抗抑郁有效成分筛选及其调控Nrf2/GPX4/GSH通路的作用机制 被引量：2
4
作者 宋永贵 段德林 +7 位作者 赖美茜子 刘亚丽 艾志福 朱根华 徐焕华 郑琴 杨明 苏丹 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第6期211-221,共11页
目的:对莪术抗抑郁有效成分进行筛选、评价,并从抗氧化角度探索其调控核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽(GSH)过氧化物酶4(GPX4)/GSH通路的作用机制。方法:采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2'-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸... 目的:对莪术抗抑郁有效成分进行筛选、评价,并从抗氧化角度探索其调控核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽(GSH)过氧化物酶4(GPX4)/GSH通路的作用机制。方法:采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2'-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除实验检测包括莪术醇、莪术酮、莪术二酮、莪术烯、莪术烯醇、莪术双环烯酮、去氢莪术二酮、异莪术烯醇、莪术呋喃二烯酮、莪术呋喃二烯、蓬莪术环氧酮在内的莪术11种特征成分的体外抗氧化活性。通过慢性不可预知应激(CUMS)建立果蝇抑郁模型,将W1118野生型黑腹雄性果蝇随机分为空白组、模型组、莪术醇组、莪术酮组、莪术二酮组、莪术烯组、莪术烯醇组、莪术双环烯酮组、去氢莪术二酮组、异莪术烯醇组、莪术呋喃二烯酮组、莪术呋喃二烯组、蓬莪术环氧酮组和氟西汀组(10μmol·L^(-1)),其中,莪术11种特征成分给药组剂量均为0.1 g·L^(-1),空白组和模型组给予等体积的溶媒。采用糖水偏好实验、攀爬实验、强迫游泳实验,评价果蝇抑郁行为学指标,采用液相色谱-质谱法评价果蝇大脑中5-羟色胺(5-HT)和多巴胺(DA)的水平,并采用熵权法综合评价确定莪术抗抑郁有效成分。此外,将7周龄C57BL/6J小鼠随机分为空白组,模型组,莪术烯低、高剂量组(0.5、1 mg·kg^(-1))和氟西汀组(10 mg·kg^(-1)),采用CUMS建立抑郁小鼠模型,结合行为学确认最佳活性成分莪术烯的抗抑郁效果。流式细胞术检测小鼠海马中活性氧(ROS)的含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测三磷酸腺苷(ATP)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、GSH含量的影响;透射电镜观察莪术烯对海马组织线粒体超微结构的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定莪术烯对Nrf2蛋白水平的影响,并采用Nrf2抑制剂ML385验证其抗抑郁作用与调控Nrf2的关系;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测莪术烯对GPX mRNA表达水平的影响。结果:体外抗氧化结果显示,具有六并五呋喃骨架的莪术烯和莪术酮清除自由基能力最为显著;熵权法综合评价结果显示,莪术烯是最具潜力的活性成分。与空白组比较,模型组小鼠糖水偏好系数和进入旷场中心次数显著下降(P<0.01),强迫游泳和悬尾实验的不动时间显著增加(P<0.01);海马组织中ROS含量显著升高(P<0.01),ATP含量显著下降(P<0.01);线粒体嵴紊乱,内膜空泡化,破坏严重;Nrf2蛋白表达水平明显下降(P<0.05),抗氧化酶SOD、CAT和GSH含量明显下降(P<0.05,P<0.01),GPX家族中GPX1、GPX4、GPX7基因表达水平显著下降(P<0.01)。与模型组比较,莪术烯高剂量组小鼠糖水偏好系数和进入旷场中心次数明显增加(P<0.05),游泳和悬尾不动时间明显减少(P<0.05,P<0.01);ROS含量显著下降(P<0.01),ATP含量明显增加(P<0.05);线粒体损伤减轻;Nrf2蛋白表达水平明显增加(P<0.05),Nrf2抑制剂ML385可逆转莪术烯对CUMS小鼠抑郁行为的改善作用;GSH含量显著增加(P<0.01),SOD和CAT含量无显著性差异;GPX4基因表达水平明显增加(P<0.05),而其他GPX家族基因差异均为统计学意义。结论:莪术烯为莪术中具有抗抑郁活性的最佳成分,其可能通过调控Nrf2,及其下游GPX4/GSH通路,而非CAT或SOD途径,改善线粒体功能障碍,发挥抗抑郁作用。 展开更多
关键词 莪术 抑郁症 药效评价 作用机制 氧化应激 核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)/谷胱甘肽(GSH)通路
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ATF3通过NF-κB信号通路调控动脉粥样硬化斑块内的炎症反应 被引量：1
5
作者 夏冰 彭进 +6 位作者 丁九阳 王杰 唐国伟 刘国杰 王沄 万昌武 乐翠云 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第6期1131-1142,共12页
目的 探讨转录激活因子3(ATF3)在动脉粥样硬化斑块内的表达及其调控炎症反应参与动脉粥样硬化(AS)进程的机制。方法 收集尸检案例中的人冠状动脉标本,免疫荧光和Western blotting检测ATF3蛋白表达及分布;高脂饮食12周后的载脂蛋白E基因... 目的 探讨转录激活因子3(ATF3)在动脉粥样硬化斑块内的表达及其调控炎症反应参与动脉粥样硬化(AS)进程的机制。方法 收集尸检案例中的人冠状动脉标本,免疫荧光和Western blotting检测ATF3蛋白表达及分布;高脂饮食12周后的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠尾静脉注射9型腺相关病毒(AAV9)敲低ATF3的表达,继续高脂喂养5周构建ATF3基因敲除的动脉粥样硬化ApoE-/-小鼠模型。麻醉处死后观察主动脉斑块结构改变,检测斑块内ATF3、炎症相关因子及NF-κB信号通路蛋白表达改变,并在体外构建ATF3的过表达质粒及siRNA干预THP-1诱导的泡沫细胞模型验证ATF3与NF-κB信号通路间关系。结果 在人冠状动脉粥样硬化斑块内,ATF3的表达增高(P<0.05),且与CD68呈部分共表达;在ATF3基因敲除后,小鼠的主动脉斑块体积增大(P<0.05),斑块内炎症相关因子(CD45、CD68、IL-1β、TNF-α)表达增强(P<0.05),NF-κB信号通路相关蛋白(PIKKα/β、P-NF-κB p65)表达增高(P<0.05),VCAM1、MMP9及MMP2表达增强(P<0.05);在离体THP-1细胞实验中验证了沉默ATF3后NF-κB信号通路进一步激活,而过表达ATF3后NF-κB信号受到抑制。结论 动脉粥样硬化诱导ATF3的表达,ATF3的缺乏会促进AS的发生,增强斑块内炎症反应,其机制可能是通过进一步激活NF-κB信号通路导致,ATF3可能是AS潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 转录激活因子3 炎症反应 NF-ΚB 冠心病猝死
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基于细胞凋亡机制探讨黑逍遥散对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的改善作用 被引量：7
6
作者 王虎平 杨娇 +5 位作者 陈怡琴 孟志鹏 吕育洁 胡韵韵 裴文丽 韩玉梅 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第9期108-115,共8页
目的:从磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路介导的细胞凋亡机制探讨黑逍遥散改善阿尔茨海默病(AD)认知功能的影响。方法:体内(动物)实验将雄性4月龄SD大鼠随机分为空白组,假手术组,模型组,盐酸多奈... 目的:从磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路介导的细胞凋亡机制探讨黑逍遥散改善阿尔茨海默病(AD)认知功能的影响。方法:体内(动物)实验将雄性4月龄SD大鼠随机分为空白组,假手术组,模型组,盐酸多奈哌齐组(0.45 mg·kg^(-1)),黑逍遥散高、中、低剂量组(15.30、7.65、3.82 g·kg^(-1)),每组10只。假手术组双侧海马注射生理盐水1μL,模型组、盐酸多奈哌齐组及黑逍遥散各剂量组均采用双侧海马注射β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))溶液1μL制备AD模型。每天灌胃给药1次,连续42 d。Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马区病理改变,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PI3K、Akt和NF-κB蛋白表达。体外(细胞)采用Aβ_(1-42)与PC12细胞共同培养建立AD的细胞模型,采用细胞增殖活性检测(CCK-8)试剂盒检测细胞活力,流式细胞术(FC)检测细胞凋亡。结果:动物实验表明,与空白组比较,模型组逃避潜伏期显著增加(P<0.01),穿越平台次数显著减少(P<0.01),海马细胞排列无序,神经元数目明显减少,Bax和Caspase-3蛋白表达显著升高,而Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达显著降低,p-NF-κB/NF-κB蛋白表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组及黑逍遥散高、中剂量组逃避潜伏期缩短而穿越平台次数明显增加(P<0.05,P<0.01),盐酸多奈哌齐组及黑逍遥散剂量组大鼠海马区细胞排序较整齐,且神经元数目增加,盐酸多奈哌齐组及黑逍遥散给药组中Bax和Caspase-3蛋白表达明显降低,而Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),且其p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt的蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01),p-NF-κB/NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。细胞实验表明,与空白组比较,模型组PC12细胞活力显著降低而凋亡率显著升高(P<0.01);与模型组比较,黑逍遥散含药血清各剂量组PC12细胞活性显著增高(P<0.01),黑逍遥散含药血清高剂量组PC12细胞凋亡显著降低(P<0.01)。结论:体内实验和体外实验结果显示,黑逍遥散可能通过细胞凋亡机制改善AD模型大鼠的学习记忆能力,同时提高AD模型细胞的活力及降低其细胞凋亡率,其可能与调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 黑逍遥散 细胞凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路
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术后腹腔粘连形成机制及间充质干细胞外泌体的治疗前景 被引量：1
7
作者 张兴洲 魏明 +3 位作者 董国强 杜为 罗依雯 张楠 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第1期147-155,共9页
背景:术后腹腔粘连的形成是一个复杂的过程,预防术后粘连是临床上亟待解决的问题。目的:旨在从细胞及分子水平分析粘连的发生机制,为间充质干细胞外泌体预防和治疗粘连提供理论依据。方法:以“腹腔粘连,盆腔粘连,术后粘连,上皮间充质转... 背景:术后腹腔粘连的形成是一个复杂的过程,预防术后粘连是临床上亟待解决的问题。目的:旨在从细胞及分子水平分析粘连的发生机制,为间充质干细胞外泌体预防和治疗粘连提供理论依据。方法:以“腹腔粘连,盆腔粘连,术后粘连,上皮间充质转化,间充质干细胞,干细胞外泌体,间充质干细胞外泌体”为中文检索词,以“Abdominal adhesion,pelvic adhesion,postoperative adhesion,epithelial mesenchymal transformation,mesenchymal stem cell,stem cell exosomes,mesenchymal stem cell exosomes”为英文检索词,检索PubMed、中国知网和中国生物医学文献数据库,筛选各数据库建库至2023年8月发表的术后腹腔粘连及间充质干细胞外泌体干预研究的相关文章,并进行系统的整理分析,最终纳入54篇文献进行综述。结果与结论:(1)任何腹膜炎症、机械损伤、组织缺血和异物植入等病理因素均可引起腹膜表面的损伤,引起术后腹腔粘连;腹腔粘连的形成过程包括腹膜间皮细胞修复、炎性反应、纤溶系统及凝血途径等过程的相互作用,涉及多种细胞因子及信号通路,包括Wnt/β-catenin通路能诱导纤维化和血管生成,并与转化生长因子β/Smads信号通路相互协同,能刺激成纤维细胞增殖,引起腹膜纤维化;同时,核转录因子kB信号通路上调细胞炎症因子的表达,促进成纤维细胞增生,组织纤维化的过程中发挥关键作用。(2)干细胞的旁分泌功能是目前以再生医学为基础的分子干预腹腔粘连的重要方向,可以参与作用于腹腔粘连中的多种复杂细胞因子及信号通路。(3)相对于传统治疗腹腔粘连的方法,间充质干细胞外泌体具有生物活性、使用安全、无需特殊培养和扩增、更低的免疫原性及较长的稳定性等优势,能通过多种途径引导一种正常的修复和愈合。(4)间充质干细胞外泌体在以往研究中均被证明可以参与调节粘连形成的上述各过程,在临床研究中显示出潜在的应用前景,但需要进一步临床研究以探索适当的间充质干细胞外泌体治疗方案,来解决临床转化的问题。 展开更多
关键词 术后腹腔粘连 上皮间质转化 炎症反应 纤溶系统 间充质干细胞外泌体 肿瘤坏死因子α 白细胞介素 生长因子 转化生长因子β/Smads信号通路 Wnt/β-catenin 核转录因子kB信号通路
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川芎嗪对白细胞介素-1β诱导的软骨细胞凋亡和氧化应激的影响及作用机制研究 被引量：1
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作者 李科 曹玉净 +2 位作者 钱亚男 李光辉 周松林 《中医正骨》 2025年第2期21-27,共7页
目的:观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对白细胞介素(interleukin,IL)-1β诱导的软骨细胞凋亡和氧化应激的影响,并探讨其作用机制。方法:选用ATDC5小鼠软骨细胞进行实验,加入IL-1β模拟骨关节炎环境,通过测定不同浓度TMP干预后的细... 目的:观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对白细胞介素(interleukin,IL)-1β诱导的软骨细胞凋亡和氧化应激的影响,并探讨其作用机制。方法:选用ATDC5小鼠软骨细胞进行实验,加入IL-1β模拟骨关节炎环境,通过测定不同浓度TMP干预后的细胞存活率确定本实验中TMP的浓度为5μg·mL^(-1)和10μg·mL^(-1)。将ATDC5小鼠软骨细胞分为4组。对照组常规培养,模型组、TMP低剂量组、TMP高剂量组均按照10μmol·L^(-1)加入IL-1β,TMP低剂量组、TMP高剂量组在此基础上分别按照5μg·mL^(-1)和10μg·mL^(-1)加入TMP。采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,采用Western Blot法检测B细胞淋巴瘤-2相关X(B-cell lymphoma-2 Associated X,Bax)蛋白含量、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白含量确定细胞凋亡情况,采用ELISA测定技术检测炎症因子含量[IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)],分别采用硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化酶法和比色法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)等氧化应激指标含量,采用Western Blot法检测核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)信号通路相关蛋白[Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、Nrf2、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、SOD2]含量。将ATDC5小鼠软骨细胞分为4组。空白组常规培养;诱导组按照10μmol·L^(-1)加入IL-1β;TMP组按照10μmol·L^(-1)加入IL-1β,并按照10μg·mL^(-1)加入TMP;Nrf2抑制剂组先按照10μmol·L^(-1)加入IL-1β、按照5μg·mL^(-1)加入Nrf2抑制剂ML385,最后按照10μg·mL^(-1)加入TMP,采用Western Blot法检测Nrf2下游蛋白(HO-1、SOD2)含量。结果:①软骨细胞增殖情况检测结果。模型组的细胞增殖抑制率高于对照组(P=0.043),TMP低剂量组和TMP高剂量组的细胞增殖抑制率均低于模型组(P=0.030,P=0.033),TMP低剂量组的细胞增殖抑制率高于TMP高剂量组(P=0.049)。②软骨细胞凋亡情况检测结果。模型组的Bax/Bcl-2蛋白含量比值高于对照组、TMP低剂量组及TMP高剂量组(P=0.000,P=0.005,P=0.000),TMP高剂量组的Bax/Bcl-2蛋白含量比值低于TMP低剂量组(P=0.003)。③软骨细胞中炎症因子含量检测结果。模型组的IL-6和TNF-α含量均高于对照组、TMP低剂量组及TMP高剂量组(IL-6:P=0.035,P=0.024,P=0.049;TNF-α:P=0.017,P=0.039,P=0.032);TMP低剂量组的IL-6和TNF-α含量均高于TMP高剂量组(P=0.019,P=0.028)。④软骨细胞中氧化应激指标含量检测结果。模型组的MDA含量高于对照组(P=0.027),SOD和GSH含量均低于对照组(P=0.013,P=0.028);TMP低剂量组和TMP高剂量组的MDA含量均低于模型组(P=0.020,P=0.040),SOD和GSH含量均高于模型组(SOD:P=0.048,P=0.039;GSH:P=0.031,P=0.022);TMP高剂量组的MDA含量低于TMP低剂量组(P=0.040),SOD和GSH含量均高于TMP低剂量组(P=0.026,P=0.038)。⑤软骨细胞中Nrf2信号通路相关蛋白含量检测结果。模型组的Keap1蛋白含量高于对照组(P=0.000),Nrf2、HO-1及SOD2蛋白含量均低于对照组(P=0.003,P=0.004,P=0.003);TMP低剂量组和TMP高剂量组的Keap1蛋白含量均低于模型组(P=0.002,P=0.000),Nrf2、HO-1及SOD2蛋白含量均高于模型组(Nrf2:P=0.002,P=0.008;HO-1:P=0.000,P=0.001;SOD2:P=0.002,P=0.000);TMP高剂量组的Keap1蛋白含量低于TMP低剂量组(P=0.034),Nrf2、HO-1及SOD2蛋白含量均高于TMP低剂量组(P=0.000,P=0.039,P=0.029)。⑥Nrf2抑制剂干预后软骨细胞中Nrf2下游蛋白含量测定结果。诱导组的HO-1、SOD2蛋白含量均低于空白组(P=0.000,P=0.001),TMP组的HO-1、SOD2蛋白含量均高于诱导组(P=0.023,P=0.030),Nrf2抑制剂组的HO-1、SOD2蛋白含量均低于TMP组(P=0.040,P=0.000)。结论:TMP对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡和氧化应激具有保护作用,其作用机制可能与激活Nrf2信号通路,增强软骨细胞抗氧化能力有关。 展开更多
关键词 川芎嗪 骨关节炎 软骨细胞 细胞凋亡 氧化性应激 白细胞介素-1β 核转录因子红系2相关因子2 体外试验
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基于报告基因的重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白生物学活性测定方法的建立、验证及应用 被引量：1
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作者 范文红 安怡芳 +3 位作者 裴德宁 韩春梅 郭莹 周勇 《中国生物制品学杂志》 2025年第1期73-79,共7页
目的建立简便快捷的重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体(recombinant human tumor necrosis factor receptorⅡ,rhTNFRⅡ)抗体融合蛋白(rhTNFRⅡ-Fc)制品生物学活性测定方法,并对方法进行验证及应用,为该类制品工艺稳定性评价奠定基础。方法利... 目的建立简便快捷的重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体(recombinant human tumor necrosis factor receptorⅡ,rhTNFRⅡ)抗体融合蛋白(rhTNFRⅡ-Fc)制品生物学活性测定方法,并对方法进行验证及应用,为该类制品工艺稳定性评价奠定基础。方法利用HEK293T-NF-κB-Luc转基因细胞,不同浓度rhTNFRⅡ-Fc融合蛋白能够不同程度抑制TNF-α对转基因细胞中核因子(nuclear factor,NF)-kB的转录激活作用,通过荧光素酶检测系统(Bright-GloTM-Luciferase Assay System)对rhTNFRⅡ-Fc进行生物学活性检测,并对该方法进行试验参数的优化及专属性、准确性、线性及精密性验证。以rhTNFRⅡ-Fc融合蛋白生物学活性测定国际标准品作为参比品,采用该方法测定原研药依那西普及国内3家不同企业(A、B、C)各1批rhTNFRⅡ-Fc融合蛋白产品的比活性。结果rhTNFRⅡ-Fc融合蛋白在该方法中存在量效关系,且符合四参数曲线方程,R^(2)>0.99;方法优化后确定细胞铺板浓度为4×10^(5)个/mL,TNF-α作用浓度为10 ng/mL,rhTNFRⅡ-Fc稀释起始浓度为200 ng/mL,1∶1.5倍稀释,作用时间为4~5 h,样品稀释液为DMEM+1%FBS。仅依那西普产品能够抑制TNF-α对HEK293T-NF-κB-Luc细胞中NF-κB的转录激活,而其他几种融合蛋白类制品均无对TNF-α的诱导抑制作用;5个不同稀释组回收率样本经3次测定,回收率平均值分别为(101.54±4.63)%、(99.67±6.41)%、(101.20±5.58)%、(101.44±6.80)%、(100.72±6.15)%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于7%,线性拟合的R^(2)=0.9998;精密性验证日间和板间RSD均小于8.0%。该方法检测原研药依那西普及A、B、C企业rhTNFRⅡ-Fc融合蛋白的比活性分别为2.01×10^(6)、2.59×10^(6)、1.56×10^(6)、2.04×10^(6)IU/mg。结论利用HEK293T-NF-κB-Luc转基因细胞成功建立了rhTNFRⅡ-Fc融合蛋白生物学活性测定方法,该方法简便快捷,专属性强,准确性高,精密性良好,可用于不同企业该类制品的生物学活性常规检测。 展开更多
关键词 重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白 核因子-ΚB 报告基因 生物学活性 荧光素酶检测系统 国际标准品
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山柰酚调节TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路对过敏性鼻炎大鼠鼻黏膜损伤的影响 被引量：1
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作者 王永宝 李爱君 +1 位作者 韩建存 张海东 《现代免疫学》 2025年第5期549-554,共6页
为探讨山柰酚(kaempferol)是否通过调节TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路影响过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)大鼠的鼻黏膜损伤,建立AR大鼠模型,随机分为模型组,山柰酚低、高剂量组(分别添加50、100 mg/kg山柰酚)和山柰酚高剂量(100 mg/kg)... 为探讨山柰酚(kaempferol)是否通过调节TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路影响过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)大鼠的鼻黏膜损伤,建立AR大鼠模型,随机分为模型组,山柰酚低、高剂量组(分别添加50、100 mg/kg山柰酚)和山柰酚高剂量(100 mg/kg)+LPS(0.4 mg/kg)组,另设置空白对照组。药物干预后观察大鼠鼻炎症状并评分;H-E染色观察大鼠鼻黏膜组织病理学变化;ELISA检测大鼠鼻腔灌洗液(nasal lavage fluid,NLF)IL-6、TNF-α和血清IgE水平;Western blotting检测大鼠鼻黏膜组织中TLR4、NF-κB和TNF-α蛋白表达水平。结果显示,模型组大鼠鼻炎症状评分显著高于对照组(P<0.05),且模型组大鼠鼻黏膜组织出现明显的病理变化,NLF IL-6、TNF-α和血清IgE水平以及鼻黏膜组织中TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白表达水平均显著高于对照组(均P<0.05);与模型组比较,山柰酚处理组大鼠的鼻炎症状评分降低(均P<0.05),病理损伤减轻,NLF IL-6、TNF-α和血清IgE水平以及鼻黏膜组织中TLR4、NF-κB和TNF-α蛋白表达水平均降低,且高剂量组作用更强(均P<0.05);TLR4激活剂LPS可逆转山柰酚对AR大鼠的治疗效应(均P<0.05)。由此,山柰酚抑制TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路,缓解AR大鼠鼻黏膜病理损伤和炎症反应,改善AR大鼠症状。 展开更多
关键词 山柰酚 过敏性鼻炎 鼻黏膜 Toll样受体4/核因子κB/肿瘤坏死因子α信号通路
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当归-黄芪药物作用于NF-κB通路的抗炎机制研究进展 被引量：1
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作者 李亚荣 杜素芬 +3 位作者 赵信科 马文苑 田静 孟作环 《中华中医药学刊》 北大核心 2025年第6期66-70,I0014,共6页
当归-黄芪是中药方剂中常用的药对之一,药对使用有着明确的中医配伍意义,是具有较强代表性的药物组合之一。不仅可自成一方,还能作为临床基础药物组方配伍使用,故历来受到各医家的重视。当代药理学研究证实,当归与黄芪的药效组合在激发... 当归-黄芪是中药方剂中常用的药对之一,药对使用有着明确的中医配伍意义,是具有较强代表性的药物组合之一。不仅可自成一方,还能作为临床基础药物组方配伍使用,故历来受到各医家的重视。当代药理学研究证实,当归与黄芪的药效组合在激发造血功能、抑制肿瘤细胞生长、保护心脑血管、免疫系统调节方面具有良好的效果,临床常用于血管病变、肿瘤患者免疫低下等方面的治疗。核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)相关信号通路所介导的炎症因子在疾病的形成与发展中起到了极为重要的作用。研究显示中药单体及单药可通过NF-κB信号通路介导减少炎症反应,包括调控白介素(interleukin, IL)家族、环氧合酶-2(cyclooxygenased-2,COX-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、基质蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMPs)家族等因子的表达,起到抗炎抑制细胞黏附、增殖的作用。鉴于此,对当归-黄芪药理、功效及对NF-κB信号通路的调节进行综述,以为今后临床应用提供相关参考依据。 展开更多
关键词 当归 黄芪 核转录因子-ΚB 炎症因子 抗炎机制
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膝关节骨性关节炎患者外周血单个核细胞RANKL、PTGER2、COX2基因表达水平及意义 被引量：1
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作者 杨丽娟 周艳萍 +2 位作者 余楠 苏霞 池淑红 《转化医学杂志》 2025年第3期66-70,共5页
目的分析膝关节骨性关节炎(KOA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中核转录因子κB受体活化因子配体(RANKL)、前列腺素E2受体(PTGER2)、环氧化酶2(COX2)基因表达水平及意义。方法选取2018年1月至2023年12月宁夏医科大学总医院收治的100例KOA... 目的分析膝关节骨性关节炎(KOA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中核转录因子κB受体活化因子配体(RANKL)、前列腺素E2受体(PTGER2)、环氧化酶2(COX2)基因表达水平及意义。方法选取2018年1月至2023年12月宁夏医科大学总医院收治的100例KOA患者纳入KOA组,另外选取同时期30例健康志愿者纳入对照组。检测2组研究对象PBMC中RANKL、PTGER2、COX2基因表达水平。构建Logistic回归模型检验RANKL、PTGER2、COX2基因表达水平与KOA发生风险的关系。采用受试者工作特征曲线评估RANKL、PTGER2、COX2基因表达水平对KOA的诊断效能。结果KOA组RANKL、PTGER2、COX2基因表达水平明显高于对照组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,RANKL、PTGER2、COX2基因表达水平升高与KOA的发生有关(P<0.05)。RANKL、PTGER2、COX2基因表达水平诊断KOA的曲线下面积(AUC)分别为0.828、0.876、0.800,3项联合诊断AUC为0.970(95%CI:0.924~0.992),显著高于单独指标(Z=8.986、11.959、7.285,均P<0.01)。3项联合诊断KOA的截断值为0.30,敏感度为91.00%,特异度为96.67%。结论KOA患者RANKL、PTGER2、COX2基因为高表达水平,与发生风险呈明显相关性,联合检测可提高诊断效能。 展开更多
关键词 膝关节骨性关节炎 外周血单个核细胞 核转录因子κB受体活化因子配体 前列腺素E2受体 环氧化酶2 诊断效能
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大豆 GmNF-YB2 基因非生物胁迫诱导表达及蛋白互作分析
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作者 姜海英 陈炯辛 +5 位作者 滕迁莹 崔明元 王锋 陈香香 孟令媛 翟莹 《大豆科学》 北大核心 2025年第4期20-26,共7页
核因子(Nuclear Factor-Y,NF-Y)是一类能够在植物应对非生物胁迫过程中发挥转录调控作用的转录因子。为探究GmNF-YB2在大豆应对非生物胁迫过程中的功能和分子调控机制,本研究从大豆中克隆GmNF-YB2基因并对其进行生物信息学分析,采用实... 核因子(Nuclear Factor-Y,NF-Y)是一类能够在植物应对非生物胁迫过程中发挥转录调控作用的转录因子。为探究GmNF-YB2在大豆应对非生物胁迫过程中的功能和分子调控机制,本研究从大豆中克隆GmNF-YB2基因并对其进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对GmNF-YB2的表达量进行检测,通过酵母双杂交方法分析GmNF-YB2蛋白与GmNF-YC6蛋白和GmNF-YC15蛋白的互作情况。结果显示:以大豆叶片cDNA为模板,PCR扩增获得678 bp GmNF-YB2基因序列。生物信息学分析结果显示,GmNF-YB2基因编码1个含有225个氨基酸的蛋白质,预测分子量为24.66 kD,等电点为6.97,是不稳定的亲水性蛋白质,定位于细胞核中;GmNF-YB2蛋白序列中含有一段保守的组蛋白折叠基序HFM。蛋白系统进化分析表明,GmNF-YB2与杨树PdNF-YB7和拟南芥AtNF-YB2的亲缘关系最近。qRT-PCR结果显示,GmNF-YB2在大豆幼苗中能够被干旱、盐和低温胁迫诱导表达,GmNF-YB2在大豆茎中的表达量最高。酵母双杂交结果显示,GmNF-YB2蛋白与GmNF-YC6蛋白和GmNF-YC15蛋白均存在互作关系。结果表明GmNF-YB2可能参与大豆对非生物胁迫的应答。 展开更多
关键词 大豆 核因子 NF-YB GmNF-YB2 非生物胁迫 酵母双杂交
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T11TS通过调节T淋巴细胞中CaN-NFAT增强新生隐球菌感染大鼠免疫功能的实验研究
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作者 王立娟 苏艳宾 +2 位作者 叶珊珊 邢秀伟 陈建设 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第10期2416-2421,共6页
目的:探讨T11TS治疗新生隐球菌感染及对T淋巴细胞钙调神经磷酸酶(CaN)-活化的T淋巴细胞核因子(NFAT)途径的调节作用。方法:采用免疫增强剂T11TS治疗新生隐球菌感染SD大鼠,流式细胞术、免疫印迹及核移位法检测T细胞功能及相关信号通路变... 目的:探讨T11TS治疗新生隐球菌感染及对T淋巴细胞钙调神经磷酸酶(CaN)-活化的T淋巴细胞核因子(NFAT)途径的调节作用。方法:采用免疫增强剂T11TS治疗新生隐球菌感染SD大鼠,流式细胞术、免疫印迹及核移位法检测T细胞功能及相关信号通路变化。结果:CT3组肺和脾中新生隐球菌数量显著少于新生隐球菌感染组、CT1组及CT2组(P<0.05);流式细胞术实验结果显示,新生隐球菌感染组淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶LCK、FYN、LAT、磷脂酶Cγ1(PLCγ1)、CaN、NFAT及IL-2表达水平均显著低于健康对照组(P<0.05);CT1、CT2及CT3组LCK、FYN、LAT、PLCγ1、CaN、NFAT及IL-2表达水平均显著高于新生隐球菌感染组(P<0.05)。免疫印迹实验结果与流式细胞术实验相似。结论:T11TS治疗新生隐球菌感染可通过上调T淋巴细胞CaN-NFAT通路中相关信号因子表达,增加核内NFAT水平和IL-2表达,刺激T淋巴细胞活化增殖,从而达到增强机体免疫力的作用。 展开更多
关键词 新生隐球菌 感染 T淋巴细胞 钙调神经磷酸酶 活化T淋巴细胞核因子
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丙泊酚对脂多糖诱导的MHCC97H细胞黏附、迁移、侵袭和炎症因子的影响及与核转录因子-κB信号通路的关系 被引量：2
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作者 齐少霞 杨栋宝 +2 位作者 靳涛 王建华 兰基山 《安徽医药》 2025年第2期263-267,I0002,共6页
目的探究丙泊酚与脂多糖(LPS)刺激下MHCC97H细胞功能、炎症水平及核转录因子-κB(NF-κB)表达的关联。方法该研究起止时间为2021年12月至2022年12月。体外培养人MHCC97H细胞系,分为对照组(等量的溶剂),LPS组(1 mg/L LPS),实验组(LPS+6.2... 目的探究丙泊酚与脂多糖(LPS)刺激下MHCC97H细胞功能、炎症水平及核转录因子-κB(NF-κB)表达的关联。方法该研究起止时间为2021年12月至2022年12月。体外培养人MHCC97H细胞系,分为对照组(等量的溶剂),LPS组(1 mg/L LPS),实验组(LPS+6.25组、LPS+12.5组、LPS+25组,LPS组基础上分别加入6.25、12.5和25μmol/L丙泊酚),用酶联免疫吸附试验、细胞计数试剂盒检测炎症因子白细胞介素6(IL-6)的表达水平和细胞活力筛选出丙泊酚的最适浓度进行后续实验,后将细胞分为对照组、LPS组、LPS+25组和LPS+25+抑制剂组(LPS+25组基础上联合10μmol/L BAY 11-7082),干预24 h。细胞黏附实验测定黏附细胞数;Transwell小室法检测细胞迁移与侵袭水平;蛋白质印迹法测定上皮间质转化(EMT)及NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果根据细胞活力和炎症因子IL-6表达选择LPS+25组进行后续实验,与对照组相比,LPS组细胞黏附数、迁移数、侵袭数、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤连蛋白(FN)、IκB激酶α(IKKα)和p-NF-κB p65蛋白水平分别为(152.00±9.01)个、(84.01±10.44)个、(65.67±3.06)个、0.46±0.02、0.47±0.03、0.99±0.02、1.03±0.02、0.95±0.05上调,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达0.42±0.02下调(P<0.05);与LPS组相比,LPS+25组显著扭转了上述指标的变化(P<0.05);与LPS+25组相比,LPS+25+抑制剂组加入NF-κB通路抑制剂后,上述指标变化扭转得更为显著(P<0.05)。结论丙泊酚对LPS刺激下MHCC97H细胞炎症因子表达、黏附、迁移、侵袭能力及EMT进程具有抑制作用,可能与NF-κB通路活性受到抑制有关。 展开更多
关键词 二异丙酚 MHCC97H 核转录因子-κB信号通路 黏附 迁移 侵袭
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不同剂量艾司氯胺酮预先给药对乳腺手术患者的效果及Nrf2/HO-1通路的影响 被引量：1
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作者 赵云 任学军 梁晶光 《分子诊断与治疗杂志》 2025年第3期487-490,498,共5页
目的探讨不同剂量艾司氯胺酮(ESK)预先给药对乳腺手术患者的效果及其核因子E2相关因子2(Nrf2)/红素加氧酶-1(HO-1)通路的影响。方法纳入2023年9月至2024年9月在河南中医药大学第一附属医院收治的全身麻醉(GA)下乳腺手术女性乳腺良性肿... 目的探讨不同剂量艾司氯胺酮(ESK)预先给药对乳腺手术患者的效果及其核因子E2相关因子2(Nrf2)/红素加氧酶-1(HO-1)通路的影响。方法纳入2023年9月至2024年9月在河南中医药大学第一附属医院收治的全身麻醉(GA)下乳腺手术女性乳腺良性肿瘤患者共120例,随机分为高剂量组(40例,预先给予0.5 mg/kg的ESK稀释液5 mL)、低剂量组(40例,预先给予0.25 mg/kg的ESK稀释液5 mL)和对照组(40例,预先给予生理盐水5 mL)。比较各组的麻醉情况、麻醉/镇静效果(Ramsay评分)、血流动力学指标[心率(HR)、平均动脉压(MAP)]、炎症因子[白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)]及Nrf2、HO-1水平。结果术中瑞芬太尼用量为高剂量组<低剂量组<对照组,差异有统计学意义(P<0.05);麻醉诱导前(T_(1))时刻的Ramsay评分为高剂量组>低剂量组>对照组,拔出喉罩后5 min(T_(4))时刻的Ramsay评分为高剂量组<低剂量组<对照组,差异有统计学意义(P<0.05);T_(1)时刻三组HR、MAP差异均无统计学意义(P>0.05),舒芬太尼静脉给药1 min后(T_(2))HR、MAP为高剂量组>低剂量组>对照组,喉罩拔出时(T_(3))、T_(4)时刻HR、MAP为高剂量组<低剂量组<对照组,差异有统计学意义(P<0.05);术后24 h、72 h的IL-6、CRP水平均为高剂量组<低剂量组<对照组,Nrf2、HO-1水平均为高剂量组>低剂量组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ESK预先给药可改善麻醉情况和术中血流动力学,上调Nrf2、HO-1的水平并缓解炎症反应,且应用高剂量ESK的效果更显著。 展开更多
关键词 艾司氯胺酮 乳腺手术 全身麻醉 核因子E2相关因子/红素加氧酶-1通路 炎症
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基于Nrf2/HO-1/GPX4信号通路探讨葫芦巴碱对ARPE-19铁死亡的干预研究 被引量：2
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作者 岳欣欣 付洋 +2 位作者 金海哲 尹晓燕 傅全威 《国际眼科杂志》 2025年第2期191-197,共7页
目的:基于Nrf2/HO-1/GPX4途径探讨和阐明葫芦巴碱(TRG)保护人视网膜色素上皮(ARPE-19)铁死亡的干预机制。方法:用不同浓度的葫芦巴碱干预ARPE-19细胞筛选葫芦巴碱干预ARPE-19细胞的最佳浓度,随后进行分组(NC组、HG组、Fer-1组、TRG组),... 目的:基于Nrf2/HO-1/GPX4途径探讨和阐明葫芦巴碱(TRG)保护人视网膜色素上皮(ARPE-19)铁死亡的干预机制。方法:用不同浓度的葫芦巴碱干预ARPE-19细胞筛选葫芦巴碱干预ARPE-19细胞的最佳浓度,随后进行分组(NC组、HG组、Fer-1组、TRG组),收集样本进行相关指标测定。按照谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和铁离子检测试剂盒说明书评价各组细胞中GSH、MDA和铁离子变化水平;流式细胞术检测各组细胞中ROS变化水平;Western blot分析各组细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族4(ACSL4)的表达情况。结果:40μg/mL葫芦巴碱的预处理干预措施可有效减轻高糖造成的细胞活性的降低。HG组ROS、MDA的水平显著高于NC组;与HG组相比,TRG组ROS、MDA的水平显著下降,各组GSH变化情况与ROS、MDA相反,Fer-1组和TRG组中ACSL4蛋白和铁离子水平表达降低,Fer-1组和TRG组中Nrf2、HO-1、GPX4蛋白相对表达水平升高(均P<0.01)。结论:葫芦巴碱保护ARPE-19细胞免于高糖损伤是通过靶向抑制Nrf2/HO-1/GPX4信号通路抗铁死亡实现的。 展开更多
关键词 葫芦巴碱 铁死亡 核因子E2相关因子2(Nrf2) 血红素加氧酶-1(HO-1) 谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4) 氧化应激 糖尿病视网膜病变 人视网膜色素上皮(ARPE-19)
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异源过表达大豆GmNF-YB24提高转基因烟草抗旱性
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作者 翟莹 计俊杰 +4 位作者 陈炯辛 于海伟 李珊珊 赵艳 马天意 《生物技术通报》 北大核心 2025年第8期137-145,共9页
【目的】核因子(NF-Y)基因参与植物抗旱性的调控。对大豆GmNF-YB24的抗旱功能及抗旱机制进行解析,为后续NF-YB基因在高抗大豆遗传育种中的应用提供理论依据。【方法】利用RT-qPCR检测GmNF-YB24在盐、干旱和低温胁迫下的表达。克隆Gm NF-... 【目的】核因子(NF-Y)基因参与植物抗旱性的调控。对大豆GmNF-YB24的抗旱功能及抗旱机制进行解析,为后续NF-YB基因在高抗大豆遗传育种中的应用提供理论依据。【方法】利用RT-qPCR检测GmNF-YB24在盐、干旱和低温胁迫下的表达。克隆Gm NF-YB24,构建植物表达载体并转化烟草。对GmNF-YB24转基因烟草的抗旱性进行鉴定。【结果】盐、干旱和低温胁迫均能诱导GmNF-YB24的表达,且GmNF-YB24的表达对干旱胁迫的响应最明显。GmNF-YB24开放阅读框全长516 bp,编码的蛋白含有171个氨基酸残基。GmNF-YB24蛋白序列中含有1个组蛋白折叠基序(HFM)。构建pRI101-GmNF-YB24植物表达载体并转化烟草。共获得5株GmNF-YB24转基因烟草植株(OE1-OE5)。干旱及复水处理后,GmNF-YB24转基因烟草的表现优于野生型烟草。干旱胁迫下,与野生型烟草相比,GmNF-YB24转基因烟草的脯氨酸和可溶性糖含量增加,相对电解质渗透率和丙二醛含量降低,抗氧化酶活性提高,减少了过氧化物的积累。GmNF-YB24转基因烟草中胁迫相关基因NtOsmotin和NtERD10B的表达量高于野生型烟草。【结论】GmNF-YB24在烟草中的异源过表达提高了转基因烟草的抗旱性。 展开更多
关键词 大豆 核因子Y NF-YB 转基因烟草 抗旱性
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木犀草素调节TLR4/NF-κB信号通路改善大黄诱导大鼠腹泻
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作者 诸葛远莉 刘晓冉 +2 位作者 宋祖贤 崔倪 吴永东 《中国新药与临床杂志》 北大核心 2025年第7期533-539,共7页
目的探究木犀草素(Lut)调节Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对大黄诱导大鼠腹泻的改善作用。方法通过SD大鼠灌胃大黄提取液(2 g·mL^(-1))14 d建立腹泻模型,将造模成功的大鼠随机分为大黄组,培菲康(150 mg·kg^(-... 目的探究木犀草素(Lut)调节Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对大黄诱导大鼠腹泻的改善作用。方法通过SD大鼠灌胃大黄提取液(2 g·mL^(-1))14 d建立腹泻模型,将造模成功的大鼠随机分为大黄组,培菲康(150 mg·kg^(-1),阳性对照)组,Lut低、高剂量(30、90 mg·kg^(-1))组,Lut高剂量+脂多糖(LPS,0.4 mg·kg^(-1))组,每组10只;另取10只正常喂养的SD大鼠为对照组。给药结束后,记录所有大鼠体重和粪便含水量;使用酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒测定大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和分泌型免疫球蛋白A(SIgA)水平;使用试剂盒(比色法)检测大鼠血清中总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性;苏木精-伊红(HE)和阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色观察大鼠结肠组织病理变化;Western blot法检测大鼠结肠组织TLR4、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达。结果与对照组相比,大黄组大鼠体重,血清SIgA和T-AOC水平,GSH-Px和SOD活性显著降低(P<0.05);粪便含水量,血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平,结肠组织TLR4蛋白和p-NF-κB/NF-κB水平显著升高(P<0.05);结肠组织大量炎症细胞浸润,细胞排列紊乱,杯状细胞减少。与大黄组相比,培菲康组和Lut低、高剂量组大鼠体重、血清SIgA和T-AOC水平、GSH-Px和SOD活性显著升高(P<0.05);粪便含水量,血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平,结肠组织TLR4蛋白和p-NF-κB/NF-κB水平显著降低(P<0.05);结肠组织结构完整,杯状细胞含量恢复,且培菲康组和Lut高剂量组无显著差异(P>0.05)。与Lut高剂量组相比,Lut高剂量+LPS组大鼠体重、血清SIgA和T-AOC水平、GSH-Px和SOD活性显著降低(P<0.05);粪便含水量,血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平,结肠组织TLR4蛋白和p-NF-κB/NF-κB水平显著升高(P<0.05);结肠组织结构遭到破坏,有炎症细胞浸润,杯状细胞减少。结论Lut可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路缓解大黄诱导的大鼠腹泻症状。 展开更多
关键词 木犀草素 TOLL样受体4 核因子-ΚB 大黄 腹泻
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细柱五加中4个羽扇豆烷型三萜类化合物的抗炎作用研究
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作者 卢茂芳 吴剑 +5 位作者 蒋诗琴 鲁曼霞 陆昌洙 李建昊 戴玲 刘向前 《天然产物研究与开发》 北大核心 2025年第7期1259-1266,1330,共9页
研究细柱五加(Acanthopanax gracilistylus W.W.Smith,AGS)中4个羽扇豆烷型三萜类化合物的抗炎作用及其潜在的分子机制,这些化合物包括impressic acid(1)、3α,11α-dihydroxy-23-oxo-lup-20(29)-en-28-oic acid(2)、3α,11α,23-trihyd... 研究细柱五加(Acanthopanax gracilistylus W.W.Smith,AGS)中4个羽扇豆烷型三萜类化合物的抗炎作用及其潜在的分子机制,这些化合物包括impressic acid(1)、3α,11α-dihydroxy-23-oxo-lup-20(29)-en-28-oic acid(2)、3α,11α,23-trihydroxy-lup-20(29)-en-28-oic acid(3)、3α-hydroxy-lup-20(29)-en-23,28-dioic acid(4)。以脂多糖诱导RAW 264.7巨噬细胞为炎症模型,使用EZ4U检测法检测4个羽扇豆烷型三萜类化合物对RAW 264.7细胞的毒性作用;Griess法检测一氧化氮(NO)水平;ELISA法检测白细胞介素(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;Western blot检测高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1 protein,HMGB1)蛋白表达;RT-PCR法检测TNF-α、IL-1β的mRNA表达;ELISA法检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)水平。结果显示,与模型组相比,化合物1、4可明显抑制NO、TNF-α、IL-1β的释放,化合物2可抑制NO、IL-1β产生,化合物1、2、4抑制细胞分泌HMGB1,化合物1、4对LPS诱导的TNF-α的mRNA表达有明显抑制作用,化合物1、2、4会显著降低LPS刺激的RAW 264.7细胞中NF-κB的活性(均P<0.05)。综上所述,化合物1、2、4对LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症具有一定的抗炎作用,其可能的作用机制是通过抑制NF-κB信号通路的激活及下游炎症介质的转录表达,抑制HMGB1的分泌,缓解LPS诱导的RAW 264.7细胞的炎症反应。 展开更多
关键词 细柱五加 羽扇豆烷型三萜类化合物 抗炎 高迁移率族蛋白B1 核因子-ΚB
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