目的繁育和鉴定调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)中条件性Notch2基因敲除小鼠,为Notch2在Treg中的功能提供研究工具;为Treg与免疫性疾病的发病关系及靶向治疗提供研究手段。方法将引进的Notch2^(flox/flox)小鼠和Foxp3-Cre^(+)小...目的繁育和鉴定调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)中条件性Notch2基因敲除小鼠,为Notch2在Treg中的功能提供研究工具;为Treg与免疫性疾病的发病关系及靶向治疗提供研究手段。方法将引进的Notch2^(flox/flox)小鼠和Foxp3-Cre^(+)小鼠进行饲养和杂交;将繁育得到的第一代小鼠进行相互交配,再得到第二代小鼠。通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定出具有Notch2^(flox/flox)Foxp3-Cre^(+)基因型的小鼠,再通过该小鼠进行繁育。通过流式细胞术分选出野生型小鼠和Notch2^(flox/flox)Foxp3-Cre^(+)小鼠体内的Treg,Western blot检测小鼠Treg中Foxp3、Notch2、NICD2蛋白的表达,苏木精-伊红(hemotoxylin-eosin,HE)染色观察小鼠肺脏等器官的形态学变化。结果该方法成功构建了在Treg中敲除Notch2基因的小鼠。Western blot结果显示Notch2^(flox/flox)Foxp3-Cre+小鼠体内的Treg中Notch2、NICD2、Foxp3蛋白表达明显下降(P<0.05),HE染色显示该小鼠肺脏等器官出现明显炎症细胞浸润。结论本研究成功构建了Treg中条件性敲除Notch2基因的实验小鼠,为Treg与免疫性疾病的发病和靶向干预研究奠定了基础。展开更多
目的用外显子捕获-高通量测序(exon-capture high-throughput sequencing,EC-HTS)技术寻找法洛四联症(tetralogy of fallot,TOF)胎儿可能存在的遗传学致病性证据,并探讨其在产前分子遗传学诊断中的价值。方法选择经超声心动图发现且G显...目的用外显子捕获-高通量测序(exon-capture high-throughput sequencing,EC-HTS)技术寻找法洛四联症(tetralogy of fallot,TOF)胎儿可能存在的遗传学致病性证据,并探讨其在产前分子遗传学诊断中的价值。方法选择经超声心动图发现且G显带和微阵列比较基因组杂交(array-based comparative genomic hybridization,a CGH)分析结果均正常的9例TOF胎儿作为研究对象,以63个人类已知的先天性心脏病致病基因作为检测靶点制作捕获芯片,用EC-HTS技术进行检测,数据经过Calling、数据库比对、软件分析得到最终病理性突变位点;并用Sanger测序对其进行验证。结果在9例胎儿中共检测到单核苷酸多态性(SNP)位点732个,结果经过生物信息学分析得到致病性突变位点3个:CITED2 c.574_579 del AGCGGC(p.S192_G193del纯合突变,CHD7c.2550_2554 del GAGAA(p.K850Nfs*6)杂合突变,NOTCH2 c.4918T>C(p.F1640L)杂合突变。Sanger测序结果验证了这3个突变位点的真实存在,父母溯源检测发现这3个点突变均为新发突变。结论用靶向性EC-HTS技术发现了3例TOF胎儿存在病理性基因突变,可能为其致病的遗传学病因。展开更多
目的采用不依赖连接反应的克隆法,利用T7核酸外切酶和硫代磷酸化修饰引物克隆Notch2长片段基因。方法将难以扩增的Notch2 c DNA的编码序列(7416 bp)人为分成3段,引物设计时对此3个片段和载体骨架的引物进行碱基硫代磷酸化修饰,用这些引...目的采用不依赖连接反应的克隆法,利用T7核酸外切酶和硫代磷酸化修饰引物克隆Notch2长片段基因。方法将难以扩增的Notch2 c DNA的编码序列(7416 bp)人为分成3段,引物设计时对此3个片段和载体骨架的引物进行碱基硫代磷酸化修饰,用这些引物扩增Notch2的3个片段和载体骨架。然后用T7核酸外切酶分别处理PCR产物,产生4个具有3'互补突出末端的片段,并将此4个末端突出的片段退火复性,完成Notch2基因克隆。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示Notch2 3个片段和载体骨架的PCR产物大小与预期大小相符,经退火复性获得的克隆通过PCR、酶切和测序进行克隆鉴定,确定Notch2编码序列已经插入到pc DNA3.0-3*Flag载体中。结论利用T7核酸外切酶和引物的碱基磷酸化修饰进行的不依赖连接反应的克隆方法能够用于长片段基因的克隆。展开更多
Hajdu-Cheney syndrome （HCS） is a rare disorder which is characterized by developmental delay, craniofacial anomalies, congenital heart defects, hearing deficit, polycystic kidneys, and bone abnormalities, including ...Hajdu-Cheney syndrome （HCS） is a rare disorder which is characterized by developmental delay, craniofacial anomalies, congenital heart defects, hearing deficit, polycystic kidneys, and bone abnormalities, including progressive osteoporosis, acroosteolysis, wormian bones, and abnormal bonefractures.展开更多
文摘目的用外显子捕获-高通量测序(exon-capture high-throughput sequencing,EC-HTS)技术寻找法洛四联症(tetralogy of fallot,TOF)胎儿可能存在的遗传学致病性证据,并探讨其在产前分子遗传学诊断中的价值。方法选择经超声心动图发现且G显带和微阵列比较基因组杂交(array-based comparative genomic hybridization,a CGH)分析结果均正常的9例TOF胎儿作为研究对象,以63个人类已知的先天性心脏病致病基因作为检测靶点制作捕获芯片,用EC-HTS技术进行检测,数据经过Calling、数据库比对、软件分析得到最终病理性突变位点;并用Sanger测序对其进行验证。结果在9例胎儿中共检测到单核苷酸多态性(SNP)位点732个,结果经过生物信息学分析得到致病性突变位点3个:CITED2 c.574_579 del AGCGGC(p.S192_G193del纯合突变,CHD7c.2550_2554 del GAGAA(p.K850Nfs*6)杂合突变,NOTCH2 c.4918T>C(p.F1640L)杂合突变。Sanger测序结果验证了这3个突变位点的真实存在,父母溯源检测发现这3个点突变均为新发突变。结论用靶向性EC-HTS技术发现了3例TOF胎儿存在病理性基因突变,可能为其致病的遗传学病因。
基金This research was supported by a grant from the National Natural Science Foundation of China （No. 81571605）.
文摘Hajdu-Cheney syndrome （HCS） is a rare disorder which is characterized by developmental delay, craniofacial anomalies, congenital heart defects, hearing deficit, polycystic kidneys, and bone abnormalities, including progressive osteoporosis, acroosteolysis, wormian bones, and abnormal bonefractures.
