目前针对恶性胶质瘤的治疗手段十分有限,本研究旨在通过揭示天然产物银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,GBE)的抗肿瘤机制,为恶性胶质瘤的治疗提供新的潜在治疗方案。研究发现,125μg/mL GBE处理A172胶质瘤细胞可显著抑制其活力(EC50=...目前针对恶性胶质瘤的治疗手段十分有限,本研究旨在通过揭示天然产物银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,GBE)的抗肿瘤机制,为恶性胶质瘤的治疗提供新的潜在治疗方案。研究发现,125μg/mL GBE处理A172胶质瘤细胞可显著抑制其活力(EC50=128.6μg/mL),TUNEL及瑞氏染色均观察到典型的细胞凋亡形态。机制上,GBE处理导致线粒体膜电位显著下降(JC-1法检测)并引发内质网扩张(ER-Tracker观察)。Western blot分析证实,GBE激活了线粒体自噬与内质网应激,表现为LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高以及葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)表达上调。与此同时,免疫荧光与Western blot结果显示,Notch同源物1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)/转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)/Smad家族成员2/3(Smad family member 2/3,Smad2/3)通路被激活,且Notch1胞内结构域(Notch1 intracellular domain,NICD)发生核转位。双荧光素酶报告实验进一步揭示,Smad2/3可直接促进LC3和CHOP的转录。关键的是,使用Notch1抑制剂(DAPT)或TGF-β1抑制剂(SB431542)进行干预,可部分逆转由GBE诱导的细胞器应激并提升细胞存活率。综上所述,GBE通过激活Notch1/TGF-β1/Smad2/3通路,破坏细胞器稳态,进而诱导A172胶质瘤细胞凋亡。本研究的目的在于系统阐明GBE通过“信号通路-细胞器”互作以发挥抗癌作用的全新分子机制,其意义不仅为GBE作为潜在的胶质瘤治疗药物提供了坚实的实验证据,更揭示了Notch1/TGF-β1/Smad2/3通路可作为未来开发抗胶质瘤新药的重要靶点。展开更多
目的 探究驱动蛋白家族成员2A(kinesin family member 2A,KIF2A)对肝癌细胞5-FU耐药的作用及其作用机制。方法 采用浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的方法诱导肝癌细胞BEL7402对5-FU耐药,以构建耐药株BEL7402/5-FU。采用慢病毒技术构建K...目的 探究驱动蛋白家族成员2A(kinesin family member 2A,KIF2A)对肝癌细胞5-FU耐药的作用及其作用机制。方法 采用浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的方法诱导肝癌细胞BEL7402对5-FU耐药,以构建耐药株BEL7402/5-FU。采用慢病毒技术构建KIF2A沉默的BEL7402/5-FU细胞。用Notch1/Hes1信号通路激动剂丙戊酸(valproic acid,VPA)对KIF2A沉默的BEL7402/5-FU细胞进行干预。用CCK-8实验、蛋白印迹法、免疫荧光、流式细胞术检测细胞活性、细胞凋亡率、KIF2A、cleaved-caspase-3、Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 BEL7402/5-FU细胞具有强5-FU耐药性,其IC_(50)为344.2μmol/L,是BEL7402细胞的92倍(IC_(50)=3.730μmol/L)。与BEL7402细胞比较,BEL7402/5-FU细胞中KIF2A蛋白表达明显增加(P<0.001);与si-NC组比较,si-KIF2A组BEL7402/5-FU细胞活性明显下降(P<0.001)、凋亡率和cleaved-caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.001),另外Notch1和Hes1蛋白表达明显减少(P<0.001);与si-NC+5-FU组比较,si-KIF2A+5-FU组BEL7402/5-FU细胞活性显著下降(P<0.001)、凋亡率显著增加(P<0.001);与si-KIF2A+5-FU组比较,si-KIF2A+5-FU+VPA组BEL7402/5-FU细胞活性明显提高(P<0.001)、凋亡率显著降低(P<0.001)、Notch1和Hes1蛋白表达量显著增加(P<0.001)。结论 KIF2A的沉默通过抑制Notch1/Hes1信号通路活性减弱BEL7402/5-FU细胞对5-FU的化疗耐药性。展开更多
文摘目前针对恶性胶质瘤的治疗手段十分有限,本研究旨在通过揭示天然产物银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,GBE)的抗肿瘤机制,为恶性胶质瘤的治疗提供新的潜在治疗方案。研究发现,125μg/mL GBE处理A172胶质瘤细胞可显著抑制其活力(EC50=128.6μg/mL),TUNEL及瑞氏染色均观察到典型的细胞凋亡形态。机制上,GBE处理导致线粒体膜电位显著下降(JC-1法检测)并引发内质网扩张(ER-Tracker观察)。Western blot分析证实,GBE激活了线粒体自噬与内质网应激,表现为LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高以及葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)表达上调。与此同时,免疫荧光与Western blot结果显示,Notch同源物1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)/转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)/Smad家族成员2/3(Smad family member 2/3,Smad2/3)通路被激活,且Notch1胞内结构域(Notch1 intracellular domain,NICD)发生核转位。双荧光素酶报告实验进一步揭示,Smad2/3可直接促进LC3和CHOP的转录。关键的是,使用Notch1抑制剂(DAPT)或TGF-β1抑制剂(SB431542)进行干预,可部分逆转由GBE诱导的细胞器应激并提升细胞存活率。综上所述,GBE通过激活Notch1/TGF-β1/Smad2/3通路,破坏细胞器稳态,进而诱导A172胶质瘤细胞凋亡。本研究的目的在于系统阐明GBE通过“信号通路-细胞器”互作以发挥抗癌作用的全新分子机制,其意义不仅为GBE作为潜在的胶质瘤治疗药物提供了坚实的实验证据,更揭示了Notch1/TGF-β1/Smad2/3通路可作为未来开发抗胶质瘤新药的重要靶点。
文摘目的 探究驱动蛋白家族成员2A(kinesin family member 2A,KIF2A)对肝癌细胞5-FU耐药的作用及其作用机制。方法 采用浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的方法诱导肝癌细胞BEL7402对5-FU耐药,以构建耐药株BEL7402/5-FU。采用慢病毒技术构建KIF2A沉默的BEL7402/5-FU细胞。用Notch1/Hes1信号通路激动剂丙戊酸(valproic acid,VPA)对KIF2A沉默的BEL7402/5-FU细胞进行干预。用CCK-8实验、蛋白印迹法、免疫荧光、流式细胞术检测细胞活性、细胞凋亡率、KIF2A、cleaved-caspase-3、Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 BEL7402/5-FU细胞具有强5-FU耐药性,其IC_(50)为344.2μmol/L,是BEL7402细胞的92倍(IC_(50)=3.730μmol/L)。与BEL7402细胞比较,BEL7402/5-FU细胞中KIF2A蛋白表达明显增加(P<0.001);与si-NC组比较,si-KIF2A组BEL7402/5-FU细胞活性明显下降(P<0.001)、凋亡率和cleaved-caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.001),另外Notch1和Hes1蛋白表达明显减少(P<0.001);与si-NC+5-FU组比较,si-KIF2A+5-FU组BEL7402/5-FU细胞活性显著下降(P<0.001)、凋亡率显著增加(P<0.001);与si-KIF2A+5-FU组比较,si-KIF2A+5-FU+VPA组BEL7402/5-FU细胞活性明显提高(P<0.001)、凋亡率显著降低(P<0.001)、Notch1和Hes1蛋白表达量显著增加(P<0.001)。结论 KIF2A的沉默通过抑制Notch1/Hes1信号通路活性减弱BEL7402/5-FU细胞对5-FU的化疗耐药性。
