鸭坦布苏病毒非结构蛋白NS1和NS3诱导Neuro-2a细胞不完全自噬的研究

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作者 陈星宇 姜雅倩 +2 位作者 宋春丽 宋臣阳 王晴 《病毒学报》 北大核心 2025年第3期845-855,共11页

本研究在鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus, DTMUV)诱导小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a)不完全自噬促进病毒复制的基础上,鉴定诱导Neuro-2a细胞自噬的病毒蛋白,探究病毒非结构蛋白NS1、NS3在诱导Neuro-2a细胞不完全自噬中的作用。用载体... 本研究在鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus, DTMUV)诱导小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a)不完全自噬促进病毒复制的基础上,鉴定诱导Neuro-2a细胞自噬的病毒蛋白,探究病毒非结构蛋白NS1、NS3在诱导Neuro-2a细胞不完全自噬中的作用。用载体pCMV14-Flag构建DTMUV十个编码蛋白基因的真核表达质粒,分别将其转染至Neuro-2a细胞,Western blot检测病毒蛋白和自噬标志性蛋白的表达,明确诱导Neuro-2a细胞自噬的病毒蛋白,并通过透射电镜、激光共聚焦、Western blot等方法进一步验证以上病毒蛋白在诱导Neuro-2a细胞不完全自噬中的作用。结果显示,本研究成功构建了DTMUV十个编码蛋白基因的真核表达质粒,且能够在Neuro-2a细胞中正常表达;非结构蛋白NS1和NS3能显著增加LC3-Ⅱ和P62蛋白水平,促进Neuro-2a细胞中自噬体形成,诱导Neuro-2a细胞发生不完全自噬,且NS1和NS3蛋白诱导的Neuro-2a细胞不完全自噬具有剂量和时间依赖性。综上所述,本研究证实DTMUV非结构蛋白NS1、NS3是诱导Neuro-2a细胞不完全自噬的关键蛋白,为进一步研究DTMUV的致病机制奠定基础。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 非结构蛋白NS1 非结构蛋白NS3 neuro-2a细胞 不完全自噬

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利用CRISPR/Cas9技术构建RIPK1基因敲除的Neuro-2a细胞系及其功能研究

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作者 刘佳琪 李梦瑶 +6 位作者 郝晨琳 曾权 许梦潇 丁雪燕 靳晓慧 胡慧 张红垒 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1121-1130,共10页

通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建受体相互作用蛋白激酶1(Receptor-interacting protein kinase 1,RIPK1)基因缺失的小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a),并探究敲除RIPK1基因后对乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)复制及对JE... 通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建受体相互作用蛋白激酶1(Receptor-interacting protein kinase 1,RIPK1)基因缺失的小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a),并探究敲除RIPK1基因后对乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)复制及对JEV诱导的细胞死亡的影响。根据NCBI数据库中小鼠的RIPK1基因序列(Gene ID:19766)设计三条sgRNA,构建LentiCRISPR v2-RIPK1重组敲除质粒,并将其转染至HEK-293T细胞中获得慢病毒液;使用嘌呤霉素对慢病毒液感染的Neuro-2a细胞进行筛选,再通过有限稀释法获取RIPK1敲除的Neuro-2a单克隆细胞,对其进行基因组测序和Western blot试验鉴定。测序结果显示RIPK1基因发生了26 bp碱基缺失并且Western blot试验未检测到RIPK1蛋白的表达。利用CCK-8评估RIPK1基因敲除后细胞活力的变化,结果显示RIPK1敲除后不影响Neuro-2a的细胞活力。使用Western blot和Annexin V-mCherry/SYTOX Green染色试验检测RIPK1基因敲除对JEV复制及JEV诱发的细胞死亡的影响,与野生型细胞相比,RIPK1敲除后并未对JEV复制产生影响,但减少了JEV诱发的细胞死亡。本试验利用CRISPR/Cas9技术成功构建了RIPK1基因缺失的Neuro-2a细胞,为进一步探究RIPK1在JEV引发的细胞死亡中的分子机制提供细胞模型。 展开更多

关键词 RIPK1基因 CRISPR/Cas9基因编辑技术 neuro-2a细胞 乙型脑炎病毒

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PRDM5过表达慢病毒载体的构建及稳定转染Neuro-2a细胞的建立

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作者 吴钊淳 李友 +2 位作者 何嘉文 廖科棋 李胜男 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期1-8,共8页

目的:构建PR锌指区域蛋白(PRDM)5基因的过表达慢病毒载体,建立稳定转染的小鼠神经瘤母细胞Neuro-2a,为探讨PRDM5在缺血性脑卒中(IS)发病机制中的作用奠定基础。方方法法:在NCBI上搜索PRDM5的序列并设计引物,PCR法扩增获取PRDM5基因序列... 目的:构建PR锌指区域蛋白(PRDM)5基因的过表达慢病毒载体,建立稳定转染的小鼠神经瘤母细胞Neuro-2a,为探讨PRDM5在缺血性脑卒中(IS)发病机制中的作用奠定基础。方方法法:在NCBI上搜索PRDM5的序列并设计引物,PCR法扩增获取PRDM5基因序列,将其与Bam HⅠ和AgeⅠ限制性内切酶双酶切后的慢病毒载体GV492进行连接,构建GV492-PRDM5过表达重组质粒,采用PCR法筛选并鉴定出的与目的基因片段长度相近的阳性克隆送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。将测序正确的GV492-control质粒和GV492-PRDM5过表达重组质粒分别转染至人胚胎肾细胞HEK293T中,转染48 h后离心收集慢病毒,分别为GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒,采用慢病毒滴度测定法检测上述2种慢病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为GV492-control组和GV492-PRDM5组,分别使用GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,感染72 h后使用嘌呤霉素(10 mg·L^(-1))对成功感染GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒的Neuro-2a细胞进行筛选,通过荧光显微镜观察GV492-control组和GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞的生长状态及绿色荧光蛋白的表达情况。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组Neuro-2a细胞中PRDM5 mRNA表达水平;Western blotting法检测2组Neuro-2a细胞中PRDM5蛋白表达水平。结果:PCR法,GV492-PRDM5重组质粒阳性转化子的长度约为684 bp,GV492-PRDM5过表达重组质粒基因序列与设计合成的PRDM5过表达序列一致;GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒的滴度均为2.5×108 TU·mL^(-1)。荧光显微镜,GV492-control组和GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞的生长状态均良好,且能观察到绿色荧光蛋白的表达。RT-qPCR法,与GV492-control组比较,GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞中PRDM5 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。Western blotting法,GV492-control组和GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞在相对分子质量为75000附近出现特异性条带;与GV492-control组比较,GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞中PRDM5蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:成功构建PRDM5过表达慢病毒载体,建立了稳定转染的GV492-PRDM5-Neuro-2a细胞。 展开更多

关键词 PR锌指区域蛋白 过表达慢病毒载体 稳定表达 neuro-2a细胞

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胞质分裂作用因子4过表达慢病毒载体的构建和稳定转染Neuro-2a细胞的建立

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作者 李胜男 何嘉文 +1 位作者 廖科棋 李友 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1322-1329,共8页

目的:构建胞质分裂作用因子4(DOCK4)过表达慢病毒载体,建立DOCK4稳定过表达的Neuro-2a细胞。方法:在美国国家生物信息中心(NCBI)查找DOCK4的序列并设计合成引物,采用聚合酶链式反应(PCR)法扩增获取DOCK4基因序列,通过Bam HⅠ和AgeⅠ限... 目的:构建胞质分裂作用因子4(DOCK4)过表达慢病毒载体,建立DOCK4稳定过表达的Neuro-2a细胞。方法:在美国国家生物信息中心(NCBI)查找DOCK4的序列并设计合成引物,采用聚合酶链式反应(PCR)法扩增获取DOCK4基因序列,通过Bam HⅠ和AgeⅠ限制性内切酶酶切后,将其与酶切后的慢病毒载体GV492进行连接,构建GV492-DOCK4过表达重组质粒,PCR法鉴定筛选出与目的基因片段长度大小相近的阳性克隆。将GV492-对照质粒和GV492-DOCK4过表达重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为GV492-对照组和GV492-DOCK4组,分别采用GV492-对照组慢病毒和GV492-DOCK4过表达慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,感染72 h后采用嘌呤霉素(10 mg·L^(-1))筛选出成功感染GV492-对照组慢病毒和GV492-DOCK4过表达慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞生长状态及绿色荧光蛋白表达情况;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中DOCK4 mRNA和DOCK4蛋白表达水平。结果:PCR检测,GV492-DOCK4过表达重组质粒的基因片段长度约为691 bp,测序结果显示GV492-DOCK4过表达重组质粒基因序列与设计合成的DOCK4过表达序列一致;GV492-对照组和GV492-DOCK4过表达组慢病毒的滴度分别为2.5×10^(8) TU·mL^(-1)和2.5×10^(8) TU·mL^(-1);荧光显微镜观察,各组Neuro-2a细胞生长状态良好且存在绿色荧光蛋白表达;RT-qPCR法检测,与GV492-对照组比较,GV492-DOCK4组Neuro-2a细胞中DOCK4 mRNA表达水平明显升高(P<0.01);Western blotting法检测,各组细胞在相对分子质量225000附近出现特异性条带,与GV492-对照组比较,GV492-DOCK4组Neuro-2a细胞中DOCK4蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:本研究成功构建DOCK4过表达慢病毒载体,建立了稳定过表达DOCK4的Neuro-2a细胞。 展开更多

关键词 胞质分裂作用因子4 过表达慢病毒载体 neuro-2a细胞 稳定转染 过表达慢病毒

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沉默TRPM7对无镁外液致痫Neuro-2a细胞炎症反应的影响

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作者 王娟 李心雨 +5 位作者 杨雪 杨楠 王玉雪 陶怡 朱敬汝 张莉 《中国体视学与图像分析》 2024年第2期160-166,共7页

目的观察沉默瞬时受体电位M7通道(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)对无镁外液致痫小鼠脑神经瘤Neuro-2a细胞炎症反应的影响。方法Neuro-2a细胞经脂质体转染TRPM7 siRNA,经无镁外液培养3 h建立癫痫细胞模型。实验分为4... 目的观察沉默瞬时受体电位M7通道(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)对无镁外液致痫小鼠脑神经瘤Neuro-2a细胞炎症反应的影响。方法Neuro-2a细胞经脂质体转染TRPM7 siRNA,经无镁外液培养3 h建立癫痫细胞模型。实验分为4组:对照组(Control)、癫痫组(EP)、癫痫转染组(EP+si-TRPM7)和癫痫转染阴性对照组(EP+si-NC)。成模后24 h,利用实时荧光定量PCR技术检测TRPM7 mRNA表达;利用Western Blot检测HMGB1和TLR4蛋白的表达;利用ELISA方法检测上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;CCK-8法检测细胞活力。结果成模后24 h,与Control组比较,EP组TRPM7 mRNA、HMGB1和TLR4蛋白表达增多,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量增多,细胞活力降低。与EP+si-NC组比较,EP+si-TRPM7组TRPM7 mRNA、HMGB1和TLR4蛋白表达减少,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量减少,细胞活力增高(P<0.01)。结论沉默TRPM7能抑制HMGB1/TLR4通路,减轻炎症反应,对无镁外液致痫细胞有保护作用。 展开更多

关键词 瞬时受体电位M7通道 癫痫 无镁外液 neuro-2a细胞 炎症反应

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Neuro-2A神经元衰老细胞模型的构建及桑黄活性成分的筛选研究 被引量：4

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作者 汪雯翰 张劲松 +3 位作者 杨焱 王钦博 吴迪 颜梦秋 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期172-176,180,共6页

目的利用神经元衰老模型筛选桑黄活性成分。方法以叠氮钠和Neuro-2A细胞分别作为造模药物和实验对象,通过检测细胞活力、早期凋亡率和β-半乳糖酶活性变化构建神经元衰老模型,并利用此模型从桑黄有机溶剂萃取物中筛选具有抗衰老功效的... 目的利用神经元衰老模型筛选桑黄活性成分。方法以叠氮钠和Neuro-2A细胞分别作为造模药物和实验对象,通过检测细胞活力、早期凋亡率和β-半乳糖酶活性变化构建神经元衰老模型,并利用此模型从桑黄有机溶剂萃取物中筛选具有抗衰老功效的活性成分。结果研究结果表明,叠氮钠能成功构建此筛选模型,并且在此模型中正丁醇和乙酸乙酯萃取相均能显著性抑制叠氮钠引起细胞活力下降,早期细胞凋亡率和β-半乳糖苷酶活性上升。结论桑黄正丁醇和乙酸乙酯萃取相在叠氮钠所致Neuro-2A细胞神经元衰老模型中表现出良好的抗衰老功效。 展开更多

关键词 衰老 neuro-2a 桑黄 活性成分

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血清型A肉毒杆菌神经毒素重链对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用 被引量：6

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作者 高美玲 王红 +2 位作者 张彩云 兰婧 李夏青 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2221-2227,共7页

目的:观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,Bo NT/A HC)对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法:采用体外细胞培养技术,在培养液中加入不同浓度的Bo NT/A H... 目的:观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,Bo NT/A HC)对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法:采用体外细胞培养技术,在培养液中加入不同浓度的Bo NT/A HC(0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L)进行干预,于24 h、48 h和72 h时收集细胞进行免疫荧光染色,再计算细胞突起长度及有突起细胞的百分比;在此基础上,选择最有效的Bo NT/A HC浓度作为处理剂量加入细胞培养液,于Bo NT/A HC作用后不同时点收集全细胞蛋白,采用Western blot检测p-ERK1/2及p-Akt的蛋白水平。结果:当Bo NT/A HC浓度为0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L时,细胞突起的长度及有突起细胞的百分比与对照组相比皆明显增加,差异显著(P<0.05),其中1 nmol/L效果最显著。在细胞培养液内加入1 nmol/L Bo NT/A HC后,p-ERK1/2的蛋白水平呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用60 min后,p-ERK1/2的增加与对照组相比差异显著(P<0.05);与p-ERK1/2变化趋势类似,细胞培养液内加入1 nmol/L的Bo NT/A HC后,p-Akt的蛋白水平也呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用15 min和60 min时,p-Akt增加显著(P<0.05)。结论:一定剂量的Bo NT/A HC可以促进神经细胞突起再生和生长;Bo NT/A HC对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用机制可能通过激活与神经再生相关的信号蛋白ERK1/2和Akt的磷酸化而实现。 展开更多

关键词 血清型A肉毒杆菌神经毒素重链 neuro-2a细胞株 神经突起再生 细胞外信号调节激酶 蛋白激酶B

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Lipofectamine^(TM)2000转染Neuro-2a细胞实验条件的优化 被引量：2

8

作者 张锐虎 荣曼 刘田福 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第3期416-418,421,共4页

目的优化LipofectamineTM2000介导外源基因转染Neuro-2a(N-2a)细胞的条件,以提高转染效率。方法将携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的真核表达载体pEGFP-N1在LipofectamineTM2000介导下转染N-2a细胞,... 目的优化LipofectamineTM2000介导外源基因转染Neuro-2a(N-2a)细胞的条件,以提高转染效率。方法将携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的真核表达载体pEGFP-N1在LipofectamineTM2000介导下转染N-2a细胞,对转染时间、细胞融合度、质粒质量与脂质体体积比例及培养基pH值进行优化,荧光显微镜观察EGFP的表达,并计算转染效率。结果在细胞融合度达80%,质粒质量与脂质体体积比为1∶3的条件下转染48 h,EGFP的阳性率最高(P<0.05);培养基pH值为8.0左右时,EGFP的阳性率较高,且细胞凋亡率较低。结论优化了LipofectamineTM2000转染N-2a细胞的条件,提高了转染效率,为外源基因高效转染N-2a细胞奠定了基础。 展开更多

关键词 脂质体 neuro-2a细胞 转染 绿色荧光蛋白 优化

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miRNA-99a对过氧化氢诱导neuro-2a细胞氧化损伤的影响 被引量：3

9

作者 陶真 王荣亮 +1 位作者 赵海苹 罗玉敏 《首都医科大学学报》 CAS 2014年第3期305-309,共5页

目的研究microRNA-99a(miR-99a)对过氧化氢所诱导神经细胞neuro-2a氧化损伤的影响。方法常规培养neuro-2a细胞并分为3组:正常对照组,过氧化氢100μmol/L刺激组,miR-99a预处理组(转染miRNA-99a mimics+过氧化氢100μmol/L刺激),用CCK-8... 目的研究microRNA-99a(miR-99a)对过氧化氢所诱导神经细胞neuro-2a氧化损伤的影响。方法常规培养neuro-2a细胞并分为3组:正常对照组,过氧化氢100μmol/L刺激组,miR-99a预处理组(转染miRNA-99a mimics+过氧化氢100μmol/L刺激),用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,生化试剂盒检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)含量和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)活性,Western blotting检测突触小体相关蛋白(synaptosoma associated protein of molecular mass 25 000,SNAP25)及Mn-SOD、细胞外超氧化物歧化酶(extracellular SOD,EC-SOD)的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,过氧化氢刺激的2组细胞存活率明显下降,分别为85%和89%(P<0.05),但miR-99a预处理组的细胞存活率下降程度较小仅为11%(P<0.05)。进一步研究发现,过氧化氢刺激引起细胞T-SOD、Mn-SOD活性降低(P<0.05),转染miR-99a mimics不但能增强T-SOD和Mn-SOD的活性,还能促进Mn-SOD和EC-SOD的表达(P<0.05)。过氧化氢导致细胞中NADH含量降低(P<0.05),miR-99a能够增加NADH含量甚至高于正常细胞水平(P<0.05)。miR-99a还有增加neuro-2a细胞表达SNAP25的趋势。结论 miR-99a对过氧化氢诱导neuro-2a细胞引起的氧化损伤具有保护作用。 展开更多

关键词 miR-99a neuro-2a 过氧化氢 氧化损伤

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D609对Neuro-2a脑神经瘤细胞增殖和细胞周期的影响 被引量：1

10

作者 张伟 何薇 +2 位作者 赵丁丁 宗云辉 邢瑞 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第8期1447-1449,1419,共4页

目的:探讨小分子化合物D609对脑神经瘤细胞Neuro-2a的生长抑制及诱导细胞周期阻滞的效应,并初步研究其机制。方法:采用CCK-8法检测D609对Neuro-2a细胞的生长抑制作用;利用流式细胞术(FACS)检测D609处理对细胞周期进程的影响;利用免疫印... 目的:探讨小分子化合物D609对脑神经瘤细胞Neuro-2a的生长抑制及诱导细胞周期阻滞的效应,并初步研究其机制。方法:采用CCK-8法检测D609对Neuro-2a细胞的生长抑制作用;利用流式细胞术(FACS)检测D609处理对细胞周期进程的影响;利用免疫印迹实验(Western blot)检测不同浓度的D609处理后,细胞裂解液中细胞周期蛋白抑制因子p27的表达水平。结果:CCK-8的实验结果显示,加入150μmol/L D609处理72小时后,细胞生长受到明显地抑制,且伴有剂量依赖效应;流式细胞术的结果表明,D609处理使细胞周期阻滞在G0/G1期;免疫印迹的结果表明药物处理提升了p27的表达,且随药物浓度升高其表达亦增强。结论:D609可以有效地抑制Neuro-2a细胞的生长;进一步研究表明药物处理可以提升p27的表达水平并可以诱导将细胞阻滞在G0/G1期。因此,此研究将为脑神经瘤的治疗提供借鉴。 展开更多

关键词 D609 neuro-2a细胞 生长抑制 细胞周期阻滞 P27

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鱼藤素降低小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2A存活率的实验研究 被引量：1

11

作者 熊中奎 王思本 郎娟 《中国药师》 CAS 2014年第11期1793-1796,共4页

目的：研究鱼藤素对小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2A（N2A）存活率及凋亡的影响。方法：N2A细胞以5×10^4·ml^-1密度接种到细胞培养板中,1×10^-8mol·L^-1鱼藤素处理后6,12,24,48,72 h等5个时间点上测定细胞存活率;加... 目的：研究鱼藤素对小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2A（N2A）存活率及凋亡的影响。方法：N2A细胞以5×10^4·ml^-1密度接种到细胞培养板中,1×10^-8mol·L^-1鱼藤素处理后6,12,24,48,72 h等5个时间点上测定细胞存活率;加入鱼藤素0,1×10^-11,1×10^-10,1×10^-9,1×10^-8,1×1^0-7,1×10^-6mol·L^-1等7个不同浓度干预48 h后测定细胞存活率。2×10^-8mol·L^-1鱼藤素干预24 h,测定细胞匀浆中caspase 3活力。结果：5×10^4·ml^-1N2A细胞以含10%胎牛血清DMEM培养基培养,第48 h达到细胞生长曲线的峰值。1×10^-8mol·L^-1鱼藤素干预24-72 h,时间依赖性显著降低N2A细胞存活率（P〈0.05）;在鱼藤素干预48 h时间点上,1×10^-8-1×10^-6·mol·^L-1浓度范围内剂量依赖性可显著降低N2A细胞存活率（P〈0.05）,其IC50=1.6×10^-8mol·L^-1。鱼藤素作用于N2A细胞24 h可显著提高caspase 3活力,约达到对照组的5.6倍。结论：鱼藤素可时间依赖性且剂量依赖性降低N2A细胞存活率,可能与增加caspase 3活力有关。 展开更多

关键词 鱼藤素 neuro-2a细胞 细胞存活率 CASPASE 3

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Neuro-2a细胞替代神经元原代培养进行神经轴突测量实验研究 被引量：3

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作者 马志奎 赵炜疆 《中国实用神经疾病杂志》 2012年第10期4-6,共3页

目的建立使用小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞替代原代培养神经元进行神经轴突测量的方法,用于神经损伤研究。方法使用浓度200μmol/L、500μmol/L、1 000μmol/L过氧化氢处理Neuro-2a细胞12h,戊二醛固定,生物染色,在光学显微镜下手动测... 目的建立使用小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞替代原代培养神经元进行神经轴突测量的方法,用于神经损伤研究。方法使用浓度200μmol/L、500μmol/L、1 000μmol/L过氧化氢处理Neuro-2a细胞12h,戊二醛固定,生物染色,在光学显微镜下手动测量突起长度。结果过氧化氢可剂量依赖性引起神经突起逐渐回缩变短,1 000μmol/L过氧化氢处理组光镜下见不到明显突起,突起测量数据显示,过氧化氢处理后突起长度与未经处理细胞有显著差异。结论 Neuro-2a细胞在一定程度上可替代原代培养神经元进行轴突测量研究,该测量方法可用于神经轴突再生研究。 展开更多

关键词 neuro-2a 轴突测量 过氧化氢

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姜黄素对游离脂肪酸诱导的Neuro-2a神经细胞炎症反应的保护作用 被引量：1

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作者 陈刚 王远化 莫永彪 《热带医学杂志》 CAS 2019年第8期983-986,共4页

目的通过离体细胞实验探讨姜黄素对游离脂肪酸诱导的Neuro-2a神经细胞炎症反应的保护机制。方法体外培养神经细胞系Neuro-2a细胞,对照组不作处理,干预组用棕榈酸(PA)刺激细胞,预保护组用姜黄素预保护细胞。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)... 目的通过离体细胞实验探讨姜黄素对游离脂肪酸诱导的Neuro-2a神经细胞炎症反应的保护机制。方法体外培养神经细胞系Neuro-2a细胞,对照组不作处理,干预组用棕榈酸(PA)刺激细胞,预保护组用姜黄素预保护细胞。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测细胞炎症因子释放情况;qPCR和Western blot分别测定细胞基因和蛋白表达。结果 0.2 mmol/L的PA刺激能使Neuro-2a细胞白细胞介素-8(IL-8)的释放明显增加,干预组明显大于对照组,差异有统计学意义(t=6.795,P=0.002 5),25μmol/L的姜黄素预保护能明显降低IL-8释放,25μmol/L姜黄素预保护组小于干预组,差异有统计学意义(t=3.436,P=0.026 4);同时,相对于对照组,干预组IL-8(t=6.030,P=0.003 8)的mRNA表达均异常升高,姜黄素具有抑制作用,预保护组IL-8基因表达小于干预组,差异有统计学意义(t=3.236,P=0.031 8)。相对于对照组,干预组活化性蛋白-1(AP-1)表达明显升高(t=9.295,P=0.000 7),姜黄素具有抑制作用,预保护组的AP-1低于干预组,差异有统计学意义(t=5.422,P=0.005 6)。结论姜黄素可抑制游离脂肪酸诱导的Neuro-2a细胞炎症损伤,其作用机制可能是通过抑制AP-1来调控。 展开更多

关键词 姜黄素 游离脂肪酸 neuro-2a细胞 IL-8 活化性蛋白-1

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50 Hz磁场和双酚A暴露对大鼠脑组织和Neuro-2a细胞Tau蛋白磷酸化的影响

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作者 张彦文 吕艳玲 +7 位作者 马秦龙 高鹏 陈纯海 何旻蒂 张蕾 卢永辉 皮会丰 余争平 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期950-959,共10页

目的研究50 Hz磁场、双酚A(bisphenol A,BPA)单独和联合暴露对神经细胞Tau蛋白磷酸化的影响。方法24只SD雄性大鼠,体质量(150±10)g,分为对照组(生理盐水灌胃+50 Hz磁场假性暴露)、50 Hz磁场暴露组(0.5 mT、4 h/d 50 Hz磁场暴露+生... 目的研究50 Hz磁场、双酚A(bisphenol A,BPA)单独和联合暴露对神经细胞Tau蛋白磷酸化的影响。方法24只SD雄性大鼠,体质量(150±10)g,分为对照组(生理盐水灌胃+50 Hz磁场假性暴露)、50 Hz磁场暴露组(0.5 mT、4 h/d 50 Hz磁场暴露+生理盐水灌胃)、BPA暴露组(BPA20μg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃+50 Hz磁场假性暴露)、50 Hz磁场和BPA复合暴露组(BPA 20μg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃+0.5 mT、4 h/d 50 Hz磁场暴露)4组,每组6只。处理1次/d,6 d/周,连续12周。小鼠神经母细胞瘤细胞株(Neuro-2a),分为对照组、50 Hz磁场暴露组(1 mT、48 h)、BPA暴露组(100μmol/L、24 h)、50 Hz磁场+BPA复合暴露组(1 mT、48 h+100μmol/L,24 h)4组。大鼠暴露结束按标准方法取材,组织免疫荧光化学方法检测大脑皮层和海马脑组织Tau-Thr^(231)、Tau-Ser^(404)的表达以及细胞凋亡。细胞实验暴露后采用CCK-8法检测细胞活力,采用细胞免疫荧光化学和Western blot方法检测Tau-Thr^(231)、TauSer;、Caspase-3的表达。结果50 Hz磁场暴露12周后,大鼠皮层和海马脑区Tau-Thr^(231)位点磷酸化水平明显升高(P<0.05);BPA暴露或与50 Hz磁场复合暴露12周后,大鼠皮层和海马脑区Tau-Thr^(231)位点磷酸化水平、皮层Tau-Ser^(404)位点磷酸化水平明显升高(P<0.05),复合暴露组皮层和海马脑区细胞凋亡水平变化明显(P<0.05)。50 Hz磁场暴露、BPA单独暴露或与50 Hz磁场复合暴露48 h后,Neuro-2a细胞活力均明显低于对照组(P<0.05)。50 Hz磁场暴露48 h后,Neuro-2a细胞Tau-Ser^(404)位点磷酸化水平明显高于对照组(P<0.05);BPA单独暴露或与50 Hz磁场复合暴露48 h后,Neuro-2a细胞Tau-Thr^(231)位点和Tau-Ser^(404)位点磷酸化水平、Caspase-3的表达水平明显升高(P<0.05)。结论50 Hz磁场、BPA暴露可引起神经细胞Tau蛋白不同位点过度磷酸化,并且二者之间存在协同效应,可引起神经细胞损伤。 展开更多

关键词 50 Hz磁场 双酚A 雄性大鼠 neuro-2a细胞 TAU蛋白磷酸化

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激活素A对Neuro-2a细胞电压门控钠电流的作用

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作者 孙洋 柳忠辉 +3 位作者 王轶楠 刘海岩 王东辉 葛敬岩 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期837-840,F0002,共5页

目的:研究激活素A(activinA)对Neuro-2a细胞电压门控钠电流(INa)的作用及其机制,为激活素A在神经系统疾病中的应用奠定基础。方法:培养小鼠源性Neuro-2a细胞,分为IgG对照组和抗激活素受体ⅡA(ActRⅡA)抗体染色组,免疫组织化学染色观察A... 目的:研究激活素A(activinA)对Neuro-2a细胞电压门控钠电流(INa)的作用及其机制,为激活素A在神经系统疾病中的应用奠定基础。方法:培养小鼠源性Neuro-2a细胞,分为IgG对照组和抗激活素受体ⅡA(ActRⅡA)抗体染色组,免疫组织化学染色观察ActRⅡA在Neuro-2a细胞中是否表达;将Neuro-2a细胞随机分为正常对照组和激活素A组,采用全细胞膜片钳技术检测激活素A对Neuro-2a细胞INa的作用;采用RT-PCR检测激活素A对血管活性肠肽(VIP)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的影响。结果:正常Neuro-2a细胞中可检测到ActRⅡA的表达;与正常对照组比较,激活素A明显增加Neuro-2a细胞INa(P<0.05);激活素A组Neuro-2a细胞VIPmRNA表达明显高于正常对照组(P<0.05),而iNOSmRNA表达低于正常对照组(P<0.05)。结论:激活素A具有增加Neuro-2a细胞电压门控Na+电流的作用,VIP和iNOS途径可能参与了激活素A调控神经细胞的功能。 展开更多

关键词 激活素A neuro-2a细胞 电压门控性钠电流

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ARIP1,2在小鼠Neuro-2a细胞中的表达研究

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作者 陈芳芳 刘海岩 +4 位作者 王轶楠 李楠 葛敬岩 柳忠辉 高振平 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期123-124,共2页

目的探讨激活素受体相互作用蛋白1,2(AR IP1,2)在小鼠神经细胞中表达及其作用的差异。方法实时定量PCR检测AR IP1,2 mRNA,免疫细胞化学染色检测AR IP1,2蛋白。结果实时定量PCR显示AR IP1,2 mRNA在小鼠脑神经瘤细胞系Neuro-2 a细胞均有表... 目的探讨激活素受体相互作用蛋白1,2(AR IP1,2)在小鼠神经细胞中表达及其作用的差异。方法实时定量PCR检测AR IP1,2 mRNA,免疫细胞化学染色检测AR IP1,2蛋白。结果实时定量PCR显示AR IP1,2 mRNA在小鼠脑神经瘤细胞系Neuro-2 a细胞均有表达,免疫细胞化学染色进一步证实Neuro-2 a细胞表达AR IP1,2成熟蛋白,LPS可以上调AR IP1,2蛋白表达。在Neuro-2 a细胞过表达AR IP1,2均能抑制Activin A诱导的特异基因转录,AR IP1还能抑制Sm ad3诱导的基因转录。结论AR IP1,2均可在神经细胞表达,但其在神经细胞中介导激活素生物学作用存在差异,其差异的机制尚有待进一步研究。 展开更多

关键词 neuro-2a细胞 激活素 受体相互作用蛋白

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C57小鼠LATl真核表达载体的构建及其对Neuro-2a细胞的影响

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作者 卫兵艳 刘田福 +1 位作者 樊林花 刘茂林 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第5期25-30,F0003,共7页

目的构建C57小鼠L型氨基酸转运载体1(LAT1)的真核表达载体,转染Neuro-2a肿瘤细胞进行表达,探讨LAT1对Neuro-2a细胞增殖及凋亡的影响。方法采用RT-PCR扩增出LAT1全长目的基因,定向克隆pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-LAT1重组表达质粒,... 目的构建C57小鼠L型氨基酸转运载体1(LAT1)的真核表达载体,转染Neuro-2a肿瘤细胞进行表达,探讨LAT1对Neuro-2a细胞增殖及凋亡的影响。方法采用RT-PCR扩增出LAT1全长目的基因,定向克隆pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-LAT1重组表达质粒,通过脂质体法将阳性克隆转染Neuro-2a细胞,经G418筛选获得稳定表达株后,用RT-PCR和western blot蛋白印迹法检测LAT1的表达情况。通过MTT法检测各组Neuro-2a细胞的增殖情况,并借助流式细胞仪检测LAT1对Neuro-2a细胞增殖和凋亡的影响。结果成功构建小鼠pcDNA3.1-LAT1真核表达载体,酶切和测序证实其序列正确,并成功转染Neuro-2a细胞建立稳定转染细胞系。MTT法显示转染重组质粒pcDNA3.1-LAT1的Neuro-2a细胞增殖速度显著高于对照组(P<0.05),且流式细胞术检测转染组对Neuro-2a细胞具有促进增殖抑制凋亡的作用。结论转染pcDNA3.1-LAT1质粒的Neuro-2a细胞能成功表达LAT1蛋白,且LAT1对Neuro-2a细胞的增殖和凋亡均有显著影响,为进一步研究LAT1的生物学作用奠定了重要基础。 展开更多

关键词 L型氨基酸转运载体1 真核表达载体 neuro-2a细胞 增殖 凋亡

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注射用丹参多酚酸通过调节Akt/mTOR通路介导的自噬对氧糖剥夺/再灌注Neuro-2a细胞凋亡的影响 被引量：21

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作者 张雯琪 李东娜 +5 位作者 马萌萌 徐杨杨 王少峡 柴丽娟 郭虹 胡利民 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2706-2714,共9页

目的研究注射用丹参多酚酸(SalvianolateLyophilizedInjection,SLI)对氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤小鼠脑神经瘤细胞株Neuro-2a的保护作用及机制。方法体外培养Neuro-2a细胞,建立OGD/R损伤模型,... 目的研究注射用丹参多酚酸(SalvianolateLyophilizedInjection,SLI)对氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤小鼠脑神经瘤细胞株Neuro-2a的保护作用及机制。方法体外培养Neuro-2a细胞,建立OGD/R损伤模型,给予SLI(10、25、50μg/mL)以及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)干预,检测SLI对OGD/R损伤Neuro-2a细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量及细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的释放;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用Western blotting法检测凋亡及自噬相关蛋白的表达情况。结果与OGD/R组比较,SLI显著提高OGD 4 h/R 24 h Neuro-2a细胞存活率(P<0.05、0.01),降低LDH漏出量(P<0.05、0.01),抑制细胞凋亡和细胞内Cyt-C释放(P<0.05、0.01),调节活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cystein-asparate protease,cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达(P<0.05、0.01)。SLI还可以增加OGD 4 h/R 6 h细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3II,LC3Ⅱ)、自噬效应蛋白(Beclin-1)表达(P<0.05、0.01),减少自噬选择性底物p62蓄积(P<0.05、0.01)。加入自噬抑制剂,可以抵消SLI对OGD/R损伤Neuro-2a细胞的保护及凋亡抑制作用。此外,SLI可以降低磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)水平以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)表达(P<0.05、0.01),介导细胞自噬的发生。结论SLI对OGD/R损伤后的Neuro-2a细胞具有保护作用,其机制可能是通过调节Akt/mTOR信号通路介导的细胞自噬,进而发挥抑制细胞凋亡的作用。 展开更多

关键词 注射用丹参多酚酸 氧糖剥夺/再灌注 neuro-2a细胞 自噬 凋亡 蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路

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0.22太赫兹电磁辐射暴露致神经母细胞瘤Neuro-2a细胞损伤的非热效应研究 被引量：8

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作者 马秦龙 陈纯海 +9 位作者 林敏 陶嘉雯 邓平 高鹏 卢永辉 皮会丰 何旻蒂 张蕾 张彦文 余争平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第23期2267-2273,2289,共8页

目的探讨0.22太赫兹(terahertz,THz)电磁辐射暴露致小鼠神经母细胞瘤细胞株——Neuro-2a细胞损伤的非热效应特点。方法以Neuro-2a细胞作为体外实验暴露模型,采用频率为0.22 THz,平均功率密度为0(Sham组)、25(25 mW/cm^2辐照组)、50 mW/c... 目的探讨0.22太赫兹(terahertz,THz)电磁辐射暴露致小鼠神经母细胞瘤细胞株——Neuro-2a细胞损伤的非热效应特点。方法以Neuro-2a细胞作为体外实验暴露模型,采用频率为0.22 THz,平均功率密度为0(Sham组)、25(25 mW/cm^2辐照组)、50 mW/cm^2(50 mW/cm^2辐照组)辐照细胞,辐照时间为5 min,监测辐照引起的细胞培养基温度变化;于暴露后24 h检测细胞增殖(EdU阳性细胞比例和细胞活力)、凋亡(γH2AX、TUNEL阳性细胞比例、Bax与Bcl2基因表达水平);于暴露后48 h分析细胞突触生长(突触长度、分支数目及Tubb3与Syp基因表达水平)的变化情况。结果与Sham组比较,两辐照组细胞培养基温度升高在0.1~0.4℃;EdU阳性细胞比例、细胞活力、γH2AX和TUNEL阳性细胞比例及Bax、Bcl2基因表达水平均无明显改变;仅50 mW/cm^2辐照组细胞突触长度和分支数目较Sham组明显减少(P<0.01),Tubb3和Syp基因表达也明显降低(P<0.05)。结论THz辐射暴露以非热效应为主,可抑制Neuro-2a细胞突触生长,而不影响细胞增殖和凋亡,提示神经细胞突触生长是THz辐射产生神经生物效应的敏感靶标。 展开更多

关键词 太赫兹辐射 细胞增殖 细胞凋亡 突触生长 neuro-2a细胞

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京尼平通过线粒体动力学缓解氧化应激诱导的Neuro-2a细胞凋亡 被引量：6

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作者 谢祥军 吴菲菲 +3 位作者 王圣明 拜云虎 王亚云 杨瑞华 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期320-326,共7页

目的:观察京尼平(genipin)对H2O2诱导Neuro-2a细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:体外培养Neuro-2a细胞,利用400μmol/L H2O2诱导6 h建立Neuro-2a凋亡模型。处于对数生长期的Neuro-2a细胞随机分为对照组、模型组、京尼平组... 目的:观察京尼平(genipin)对H2O2诱导Neuro-2a细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:体外培养Neuro-2a细胞,利用400μmol/L H2O2诱导6 h建立Neuro-2a凋亡模型。处于对数生长期的Neuro-2a细胞随机分为对照组、模型组、京尼平组、京尼平预处理后模型组。MTT法测定细胞存活率;倒置相差显微镜观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;DCFH-DA(2,7-二氯荧光素二乙酸酯)染色、流式细胞仪检测细胞内线粒体活性氧(ROS)的产生;qRT-PCR检测UCP2、UCP4、Mfn2、Drp1 mRNA表达;Western blot测定UCP2、UCP4、Mfn2、Drp1蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率增加,ROS生成量升高,同时UCP2、Drp1蛋白及mRNA表达增加,Mfn2蛋白及mRNA表达降低,UCP4及mRNA蛋白表达无明显变化。提前给予京尼平(40μmol/L)干预后,与模型组相比,细胞存活率提高,细胞凋亡率降低,ROS生成量减少,同时UCP2、Drp1蛋白及mRNA表达减少,Mfn2蛋白及mRNA表达升高,但UCP4蛋白及mRNA表达无明显变化。以上指标相比,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:适宜浓度的京尼平能缓解氧化应激诱导的Neuro-2a细胞凋亡,其机制可能与抑制UCP2蛋白表达,促进线粒体融合进而改善线粒体功能有关。 展开更多

关键词 京尼平 neuro-2a细胞 线粒体融合 氧化应激 凋亡

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