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神经营养因子neuritin在人体组织中的表达及验证 被引量：1
1
作者 孟平平 朱井玲 +2 位作者 曹建 魏瑜 罗星 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第6期505-509,共5页
目的基于生物信息学探讨神经营养因子neuritin(NRN1)在人体组织中的表达并验证。方法利用人类蛋白图谱(HPA)数据库对NRN1基因进行组织表达谱分析;分别利用实时定量PCR和免疫组织化学检测NRN1 mRNA及蛋白表达。利用已构建的pEGFP-C1-neur... 目的基于生物信息学探讨神经营养因子neuritin(NRN1)在人体组织中的表达并验证。方法利用人类蛋白图谱(HPA)数据库对NRN1基因进行组织表达谱分析;分别利用实时定量PCR和免疫组织化学检测NRN1 mRNA及蛋白表达。利用已构建的pEGFP-C1-neuritin绿荧光蛋白融合表达载体转染人肾上皮细胞系293细胞,免疫荧光检测293细胞中NRN1蛋白定位情况;同时检测小鼠海马神经元细胞系HT22细胞中内源性NRN1蛋白定位情况。结果HPA数据库分析结果显示,NRN1主要在大脑皮层、甲状旁腺、脂肪组织、胎盘等组织中表达。验证结果显示,NRN1在上述组织中均有表达,其中,脑及脾脏组织中表达量最高。免疫荧光结果显示NRN1在HT22细胞主要定位在细胞膜上;在293细胞主要定位在细胞质中。结论NRN1在人体脑、心脏、肝脏、肺、小肠以及卵巢等多种组织中表达,在脑组织中呈高表达。NRN1主要定位在细胞膜及细胞质中。 展开更多
关键词 neuritin 组织分布 表达谱 免疫组织化学 亚细胞定位
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Neuritin通过与Syap1相互作用促进神经突起的生长
2
作者 孟平平 魏瑜 +5 位作者 宋思玲 郝慧鑫 钟志伟 罗星 赵丹 朱井玲 《中国生物工程杂志》 北大核心 2025年第10期14-21,共8页
目的:筛选与Neuritin相互作用的蛋白并鉴定,探讨Neuritin促进神经突起生长的可能分子机制。方法:利用酵母双杂交技术筛选与Neuritin相互作用的蛋白;构建重组质粒pcDNA3.1-His-Neuritin和pcDNA3.1-Myc-Syap1,转染至HEK 293细胞,利用免疫... 目的:筛选与Neuritin相互作用的蛋白并鉴定,探讨Neuritin促进神经突起生长的可能分子机制。方法:利用酵母双杂交技术筛选与Neuritin相互作用的蛋白;构建重组质粒pcDNA3.1-His-Neuritin和pcDNA3.1-Myc-Syap1,转染至HEK 293细胞,利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,CO-IP)明确Neuritin与Syap1(synapse-associated protein 1)的相互作用;过表达和低表达Neuritin,利用Western blot检测Neuritin对Syap1表达水平的影响;利用间接免疫荧光观察Neuritin过表达对Syap1转运以及对SH-SY5Y细胞轴突形态的影响。结果:对酵母双杂交阳性克隆进行测序和序列比对分析,共获得57条与Neuritin互作的蛋白,与Neuritin功能高度一致的Syap1列为候选蛋白;正向与反向CO-IP结果表明Neuritin和Syap1具有特异性相互作用;过表达和低表达Neuritin后,Western blot结果表明Neuritin是Syap1的负向调控因子;Neuritin过表达可以促进SH-SY5Y细胞中Syap1蛋白向轴突终末转运,并可促进轴突延长。结论:Neuritin与Syap1具有特异性相互作用,是Syap1的负向调控因子,并且过表达Neuritin可以促进Syap1蛋白向轴突终末转运和神经突起延长。 展开更多
关键词 neuritin Syap1 相互作用 突起延长
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Neuritin对鸡胚尿囊膜及人脐静脉内皮细胞血管生成作用的影响
3
作者 梁富华 张云华 +4 位作者 杨萱 侯艳萌 吕贵珍 唐文洁 杨丽 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第2期170-177,共8页
目的 探究神经营养因子Neuritin过表达对鸡胚尿囊膜(CAM)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成作用的影响,为治疗血管生成性疾病提供新方向。方法 选择新鲜黄皮种蛋30枚建立CAM模型,采用随机数字表法分为3组:阳性对照组(bFGF)、阴性对照... 目的 探究神经营养因子Neuritin过表达对鸡胚尿囊膜(CAM)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成作用的影响,为治疗血管生成性疾病提供新方向。方法 选择新鲜黄皮种蛋30枚建立CAM模型,采用随机数字表法分为3组:阳性对照组(bFGF)、阴性对照组(NS)和实验组(Neuritin),每组10枚。阳性对照组载入2 500 U/mL的bFGF,实验组载入10μg/mL的Neuritin蛋白,阴性对照组载入NS,各组载入量均为10μL且所有CAM的培养温度、相对湿度及孵育时间相同,记录孵育72 h后各组CAM的血管分支、数目及大小。选择健康孕妇的新鲜脐带制作原代HUVECs,将其分为3组:转染重组质粒组(HUVEC-neu组)、转染空载体组(HUVEC-3.1组)和未转染组(HUVEC组)。HUVEC-neu组的原代HUVECs经重组质粒Neuritin转染,HUVEC-3.1组经空载体质粒转染,HUVEC组不给予特殊处理,3组均接受相同的传代培养方案。Western blot检测Neuritin在HUVEC-3.1组与HUVEC-neu组的蛋白表达水平。CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell实验和管型形成实验检测HUVEC-3.1组和HUVEC-neu组的细胞增殖、迁移和管型形成能力。结果 (1)实验组的CAM血管分支点数及微小血管数较阴性对照组明显增加(P <0.01),但两组的大、中血管数差异无统计学意义(P> 0.05);(2)HUVEC-neu组中Neuritin在HUVECs成功过表达。(3)与HUVEC-3.1组相比,HUVEC-neu组的细胞增殖活力下降(P <0.05),但其迁移、管型形成能力明显增强(P <0.01)。结论 Neuritin过表达可促进血管生成,通过影响细胞增殖、迁移和管型形成能力参与新生血管的调控。 展开更多
关键词 血管生成 neuritin 鸡胚尿囊膜 人脐静脉血管内皮细胞
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化浊解毒疏肝方对CUMS抑郁小鼠行为学及神经元活性和Neuritin表达的影响
4
作者 王呈炜 杨佳丽 +3 位作者 信碗红 徐文丹 芦晔 裴林 《中成药》 北大核心 2025年第5期1660-1665,共6页
目的 探讨化浊解毒疏肝方对CUMS抑郁小鼠行为学及神经元活性和Neuritin表达的影响。方法 将雄性C57BL/6J小鼠10只设为对照组,30只随机分为CUMS模型组、氟西汀组、化浊解毒疏肝方组,每组10只。对照组、CUMS模型组灌胃生理盐水,氟西汀组... 目的 探讨化浊解毒疏肝方对CUMS抑郁小鼠行为学及神经元活性和Neuritin表达的影响。方法 将雄性C57BL/6J小鼠10只设为对照组,30只随机分为CUMS模型组、氟西汀组、化浊解毒疏肝方组,每组10只。对照组、CUMS模型组灌胃生理盐水,氟西汀组、化浊解毒疏肝方组分别灌胃氟西汀(0.01 g/kg)和化浊解毒疏肝方(3.4 g/kg),连续灌胃4周。糖水偏爱、悬尾、强迫游泳和旷场实验评价抑郁模型小鼠行为学改变,HE染色观察小鼠海马组织CA3区病理变化,ELISA法检测小鼠血清中5-HT、NE、CORT水平,Tunel染色法检测海马组织CA3区神经元细胞凋亡情况,Western blot检测小鼠海马组织Neuritin、Neurl 1、Jagged 1、Caspase-3和cleaved Caspase-3蛋白表达。结果 与对照组比较,CUMS模型组小鼠糖水偏爱率降低(P<0.05),中央区停留时间、中央区总距离、直立次数减少(P<0.05),悬尾、强迫游泳静止时间增加(P<0.05),海马组织CA3区神经元细胞凋亡率升高(P<0.05),血清中5-HT、NE水平降低(P<0.05)、CORT水平升高(P<0.05),Neuritin蛋白表达降低(P<0.05)、Jagged 1、Neurl 1、cleaved Caspase-3/Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05);与CUMS模型组比较,化浊解毒疏肝组和氟西汀组糖水偏爱率升高(P<0.05),中央区停留时间、中央区总距离、直立次数增加(P<0.05),悬尾、强迫游泳静止时间减少,海马组织CA3区神经元细胞凋亡率降低(P<0.05),血清中5-HT、NE水平升高(P<0.05)、CORT水平降低(P<0.05),Neuritin蛋白表达升高(P<0.05)、Jagged 1、Neurl 1、cleaved Caspase-3/Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05)。结论 化浊解毒疏肝方促进了Neuritin表达,抑制了神经元凋亡,改善了小鼠的抑郁样行为。 展开更多
关键词 化浊解毒疏肝方 抑郁症 neuritin 凋亡 海马神经元
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PCDH10、Neuritin和E-钙黏附素在胃癌患者组织中的表达及其与临床病理特征的关系
5
作者 蒲萌萌 黄立言 +1 位作者 和庆强 王子众 《临床和实验医学杂志》 2025年第2期128-132,共5页
目的探究胃癌患者组织中原钙黏蛋白10(PCDH10)、神经突蛋白(Neuritin)和E-钙黏附素(E-cadherin)的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法采用回顾性研究方法,选取2023年1月至2024年7月邢台市人民医院收治的90例胃癌患者为研究对象。... 目的探究胃癌患者组织中原钙黏蛋白10(PCDH10)、神经突蛋白(Neuritin)和E-钙黏附素(E-cadherin)的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法采用回顾性研究方法,选取2023年1月至2024年7月邢台市人民医院收治的90例胃癌患者为研究对象。均接受手术治疗并经术后病理学诊断确诊,提取患者的胃癌组织及癌旁组织(距离癌组织2 cm以上的健康组织)进行PCDH10、Neuritin、E-cadherin检测,比较并分析癌组织与癌旁组织、不同临床病理特征胃癌患者的PCDH10、Neuritin、E-cadherin表达情况。结果胃癌组织PCDH10表达为(0.67±0.22)ng/mL,明显低于癌旁组织[(0.84±0.30)ng/mL],Neuritin、E-cadherin表达分别为(1.62±0.38)、(1.72±0.54)ng/mL,均明显高于癌旁组织[(1.03±0.43)、(1.38±0.46)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。90例患者中PCDH10阳性表达58例,占比64.44%。肿瘤≥5 cm、Ⅲ~Ⅳ期、中高分化、淋巴结转移N_(2)~N_(3)、浸润程度T_(3)~T_(4)胃癌患者的PCDH10阳性表达率分别为70.69%、72.41%、56.90%、75.86%、67.24%,均明显高于肿瘤<5 cm、Ⅰ~Ⅱ期、低分化、淋巴结转移N_(0)~N_(1)、浸润程度T_(1)~T_(2)的胃癌患者(43.75%、21.88%、34.38%、25.00%、37.50%),差异均有统计学意义(P<0.05)。90例患者中Neuritin阳性表达75例,占比83.33%。不同肿瘤大小、分化程度、浸润程度胃癌患者的Neuritin阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移N_(2)~N_(3)胃癌患者的Neuritin阳性表达率分别为61.33%、64.00%,均明显高于Ⅰ~Ⅱ期、淋巴结转移N_(0)~N_(1)的胃癌患者(20.00%、26.67%),差异均有统计学意义(P<0.05)。90例患者中E-cadherin阳性表达69例,占比76.67%。肿瘤≥5 cm、Ⅲ~Ⅳ期、中高分化、淋巴结转移N_(2)~N_(3)、浸润程度T_(3)~T_(4)胃癌患者的E-cadherin阳性表达率分别为71.01%、60.87%、57.97%、68.12%、66.67%,均明显高于肿瘤<5 cm、Ⅰ~Ⅱ期、低分化、淋巴结转移N_(0)~N_(1)、浸润程度T_(1)~T_(2)的胃癌患者(28.57%、33.33%、19.05%、23.81%、23.81%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌患者的PCDH10呈现出低表达状态,Neuritin、E-cadherin呈现出高表达状态,且其表达水平与临床病理特征有关。通过检测PCDH10、Neuritin、E-cadherin表达有助于早期胃癌的诊断,提高胃癌早期确诊率。 展开更多
关键词 胃癌 原钙黏蛋白10 神经突蛋白 E-钙黏附素
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血清NLRP3、CysC、Neuritin对脊柱骨折合并脊髓神经损伤患者术后神经功能恢复的预测效能
6
作者 袁冶 王天助 +2 位作者 陈彤 程帅 袁绍纪 《国际检验医学杂志》 2025年第8期915-920,共6页
目的探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、胱抑素C(CysC)、神经突起因子(Neuritin)对脊柱骨折合并脊髓神经损伤(SCI)患者术后神经功能恢复的预测效能。方法选取2021年7月至2023年7月该院收治的107例脊柱骨折合并SCI患者... 目的探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、胱抑素C(CysC)、神经突起因子(Neuritin)对脊柱骨折合并脊髓神经损伤(SCI)患者术后神经功能恢复的预测效能。方法选取2021年7月至2023年7月该院收治的107例脊柱骨折合并SCI患者,均于治疗后随访6个月,根据术后神经功能恢复情况分为恢复良好组(76例)与恢复不良组(31例)。比较两组临床资料、血清NLRP3、CysC、Neuritin水平,分析血清NLRP3、CysC、Neuritin与Frankel分级的相关性及对术后神经功能恢复情况的影响,评价血清NLRP3、CysC、Neuritin对术后神经功能恢复情况的预测效能。结果两组受伤至激素类药物使用时间≥8 h、椎管侵占率≥50%比例、Frankel分级比较差异均有统计学意义(P<0.05);恢复不良组血清NLRP3、CysC、Neuritin水平高于恢复良好组(P<0.05);血清NLRP3、CysC、Neuritin水平在Frankel分级A级、B级、C级、D级患者中呈逐渐下降趋势(P<0.05);血清NLRP3、CysC、Neuritin与Frankel分级呈负相关(P<0.05);血清NLRP3、CysC、Neuritin是脊柱骨折合并SCI患者术后神经功能恢复的独立危险因素(P<0.05);血清NLRP3、CysC、Neuritin预测患者术后神经功能恢复的曲线下面积(AUC)分别为0.813、0.774、0.757,灵敏度分别为74.19%、77.42%、70.97%,特异度分别为82.89%、68.42%、81.58%;三者联合预测患者术后神经功能恢复的AUC为0.927,灵敏度为83.87%,特异度为85.53%,预测价值高于各项指标单独预测(P<0.05)。结论血清NLRP3、CysC、Neuritin是脊柱骨折合并SCI患者术后神经功能恢复的独立危险因素,且联合预测价值较为可靠。 展开更多
关键词 脊柱骨折 脊髓神经损伤 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 胱抑素C 神经突起因子
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Neuritin野生型蛋白的制备及活性、稳定性的检测及分析 被引量：1
7
作者 朱礼彦 孟平平 +6 位作者 李煜 宋丹丹 孙嘉伟 汪海燕 朱金辉 魏韬艺 杨磊 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第2期215-222,共8页
目的制备符合药典结构要求的无标签Neuritin野生型(wild type,WT)蛋白,并完成其存在形式、活性及稳定性鉴定及分析。方法利用基因重组技术构建符合药典结构要求的Neuritin WT酵母重组子,利用SDS-PAGE还原电泳及Western blot对其进行高... 目的制备符合药典结构要求的无标签Neuritin野生型(wild type,WT)蛋白,并完成其存在形式、活性及稳定性鉴定及分析。方法利用基因重组技术构建符合药典结构要求的Neuritin WT酵母重组子,利用SDS-PAGE还原电泳及Western blot对其进行高表达筛选及鉴定;摸索建立无标签Neuritin WT蛋白纯化方法,对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE还原电泳分子量鉴定、Western blot免疫原性鉴定、SEC-HPLC精细鉴定及宿主DNA、宿主蛋白残留量检测;利用SDS-PAGE非还原电泳完成存在形式的鉴定;通过参照药典建立的重组Neuritin蛋白活性鉴定方法,检测并分析Neuritin WT纯化蛋白的活性,并观察37℃下不同时间Neuritin WT纯化蛋白的稳定性。结果制备了纯度高达98%以上的Neuritin WT纯化蛋白,蛋白相对分子质量为9.7 kDa,宿主DNA残留量为0.0094 ng/剂,宿主蛋白残留量占比0.0008%;经检测,该纯化蛋白存在单体、二聚体2种形式。活性鉴定结果表明该蛋白具有维持神经元存活的生物学活性;且37℃下3 d内降解率小于10%、7 d内未到达半衰期(蛋白降解率小于35%)。结论成功制备了纯度高达98%、杂质含量及结构符合药典要求的无标签Neuritin WT蛋白,分析了Neuritin WT蛋白的存在形式,并明确了该蛋白具有较好的生物学活性及稳定性,为Neuritin进一步功能、药学研究及生物制品的研制提供了物质基础。 展开更多
关键词 neuritin野生型蛋白 纯度 存在形式 神经元存活 稳定性
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Neuritin C56S突变对Neuritin蛋白结构、活性和热稳定性的影响
8
作者 魏韬艺 王宿洁 +4 位作者 张少轩 朱礼彦 宋丹丹 李煜 黄瑾 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第6期718-725,共8页
目的 蛋白质分子内半胱氨酸残基形成的二硫键是维持蛋白质结构非常重要的稳定力。本研究通过突变Neuritin蛋白活性片段的C56S,观察56位点的半胱氨酸对Neuritin蛋白的结构形式、活性及热稳定性的影响。方法 通过分析实验结果和来自生物... 目的 蛋白质分子内半胱氨酸残基形成的二硫键是维持蛋白质结构非常重要的稳定力。本研究通过突变Neuritin蛋白活性片段的C56S,观察56位点的半胱氨酸对Neuritin蛋白的结构形式、活性及热稳定性的影响。方法 通过分析实验结果和来自生物信息学的结构预测,明确了突变位点;利用重叠延伸PCR技术,构建了插入正确的pPIC9K-Neuritin C56S突变体穿梭质粒;电转入毕赤酵母GS115后,经G418抗药性筛选、基因型鉴定和高表达筛选,成功获得了突变体酵母重组子,并最终得到了表达量最高的菌株;利用我们已建立的纯化工艺,对Neuritin C56S突变体蛋白进行纯化,并对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE还原电泳考马斯亮蓝染色鉴定、Western blot免疫原性鉴定;随后利用SDS-PAGE非还原电泳考马斯亮蓝染色完成存在形式的鉴定;利用本课题组前期按照药典建立的重组Neuritin蛋白生物学活性检定方法,通过观察海马神经元HT22细胞存活情况,检测Neuritin C56S突变体蛋白的活性;并完成了在37℃下,不同时间点Neuritin C56S突变体纯化蛋白降解情况的检测分析。结果 构建了Neuritin C56S突变体的毕赤酵母表达系统,筛选出其表达量最高的毕赤酵母重组子菌株,得到了蛋白纯度为98%的重组人Neuritin C56S突变体纯化蛋白;与未突变的Neuritin蛋白相比,突变体蛋白中未见多聚体,二聚体增多,说明Neuritin C56S突变体蛋白单体中只有一个自由的半胱氨酸残基,只能形成二聚体,不能形成多聚体,因此可以推断其它链内二硫键稳定,不稳定的链内二硫键为C56-C4;同时,由于只有1个自由的半胱氨酸,其二聚体只能形成一个链间二硫键,因此37℃,14 d, Neuritin C56S突变体蛋白的降解明显增高。结论 Neuritin蛋白中C56-C4间的链内二硫键为不稳定结构;Neuritin蛋白C56S的点突变,影响了该蛋白自然状态下的结构形式,并进一步影响了它的活性和热稳定性。 展开更多
关键词 neuritin蛋白 半胱氨酸 二硫键 蛋白活性 热稳定性
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Neuritin、TUBB3与PI3K/Akt信号通路 在胃癌中作为潜在生物标志物的研究进展
9
作者 陈雪茹 张丽翠 +3 位作者 董香迎 王彤彤 马辉 钟晨 《农垦医学》 2024年第6期543-549,共7页
胃癌是全球第五大确诊恶性肿瘤,是癌症相关死亡的第三大常见原因。由于胃癌早期通常无症状或伴有非特异性症状,且晚期胃癌患者预后差,故研究对胃癌的早期诊断、疾病预后判断及治疗指导有效的生物标志物至关重要。近年来,与胃癌相关的分... 胃癌是全球第五大确诊恶性肿瘤,是癌症相关死亡的第三大常见原因。由于胃癌早期通常无症状或伴有非特异性症状,且晚期胃癌患者预后差,故研究对胃癌的早期诊断、疾病预后判断及治疗指导有效的生物标志物至关重要。近年来,与胃癌相关的分子研究大量存在,包括与肿瘤发生发展调控相关的潜在分子、可提示肿瘤侵袭性及判断疾病预后的因子,以及与化疗药物耐药性相关的信号通路及潜在治疗靶点。本文将系统阐述神经突起因子(Neuritin)、Ⅲ型β-微管蛋白(Type Ⅲ β-Microtubule protein,TUBB3)及PI3K/Akt信号通路的研究进展,并围绕Neuritin、TUBB3及PI3K/Akt信号通路在胃癌中潜在的生物学效应及相互作用进行讨论。 展开更多
关键词 neuritin TUBB3 PI3K/AKT信号通路 胃癌 研究进展
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海马组织高表达Neuritin转基因小鼠的构建及鉴定
10
作者 李和教 卢伟锋 《海南医学》 CAS 2024年第19期2737-2742,共6页
目的构建海马组织高表达Neuritin的基因小鼠并进行繁殖、基因型鉴定,为研究上调Neuritin表达对2型糖尿病认知功能障碍作用机制提供模型。方法将4对Emx1-cre基因小鼠、Neuritin-Loxp基因小鼠和db/db纯合子小鼠进行配对繁殖,提取小鼠尾巴... 目的构建海马组织高表达Neuritin的基因小鼠并进行繁殖、基因型鉴定,为研究上调Neuritin表达对2型糖尿病认知功能障碍作用机制提供模型。方法将4对Emx1-cre基因小鼠、Neuritin-Loxp基因小鼠和db/db纯合子小鼠进行配对繁殖,提取小鼠尾巴DNA样本,经PCR法鉴定各繁殖后子代小鼠的基因型,获得杂合子Loxp/Emx1-cre/db基因小鼠,繁殖并鉴定该小鼠子代基因型,获得纯合子loxp/^(+)_Emx1-cre/^(+)_db/db/^(+)基因小鼠。以C57BL/6J野生型小鼠作为正常对照组,采用免疫荧光进一步确定模型的成功性,采用尼氏染色观察各组神经元病理形态。结果3种转基因型小鼠均有较好的繁殖能力,相互杂交其子鼠基因型为loxp/^(+)_Emx1-cre/^(+)、loxp/^(-)_Emx1-cre/^(+)、loxp/^(+)_Emx1-cre/^(-)、loxp/^(+)_Emx1-cre/^(+)_db/db/^(-)、loxp/^(-)_Emx1-cre/^(+)_db/db/^(-)、loxp/^(+)_Emx1-cre/^(-)_db/db/^(-)、loxp/^(+)_Emx1-cre/^(+)_db/db/^(+)、loxp/^(-)_Emx1-cre/^(+)_db/db/^(+)、loxp/^(+)_Emx1-cre/^(-)_db/db/^(+)等,上述基因小鼠繁殖结果基本符合孟德尔遗传定律。免疫荧光结果显示:loxp/^(+)_Emx1-cre/^(+)_db/db/^(+)基因小鼠的Neuritin较Db/db/纯合子基因小鼠表达量较高,差异有统计学意义(F=18.15,P<0.05)。结论PCR鉴定小鼠基因型的方法可靠,loxp/^(-)_Emx1-cre/^(+)基因型小鼠与Db/db纯合子小鼠交配是获得loxp/^(+)_Emx1-cre/^(-)_db/db/^(+)基因型小鼠的有效途径。 展开更多
关键词 loxp/^(+)_Emx1-cre/^(+)_db/db/^(+)基因 2型糖尿病认知功能障碍 neuritin 免疫荧光 PCR鉴定
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广西巴马小型猪Neuritin基因克隆与生物信息学分析及真核表达载体的构建 被引量：1
11
作者 李龙 司景磊 +6 位作者 夏攀洁 何剑雄 吴延军 程晓芳 吴敏 徐文文 兰干球 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期557-563,共7页
本研究旨在通过克隆广西巴马小型猪的Neuritin基因并进行生物信息学分析,为后续对Neuritin的研究奠定基础。实验成功获得Neuritin基因的编码区序列,并对Neuritin基因编码区序列和预测蛋白序列进行分析。结果表明,广西巴马小型猪的Neuri... 本研究旨在通过克隆广西巴马小型猪的Neuritin基因并进行生物信息学分析,为后续对Neuritin的研究奠定基础。实验成功获得Neuritin基因的编码区序列,并对Neuritin基因编码区序列和预测蛋白序列进行分析。结果表明,广西巴马小型猪的Neuritin基因编码142个氨基酸,其中含有2个磷酸化位点和2个跨膜信号结构以及1个结构保守域。通过双酶切技术成功获得重组质粒pEGFP-N1-Neuritin并转染到N2a细胞中,在24 h拍照发现N2a细胞发出荧光,证明Neuritin真核表达载体构建成功。 展开更多
关键词 广西巴马小型猪 neuritin基因 信息学分析 pEGFP-N1-neuritin
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胡芦巴碱对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及海马neuritin表达的影响 被引量：8
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作者 江明金 莫志贤 +2 位作者 周吉银 曾圣雅 贺燕 《中国新药与临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期113-117,共5页
目的观察胡芦巴碱对2型糖尿病大鼠糖脂代谢和海马区neuritin表达的影响。方法采用链脲佐菌素(40 mg·kg-1,ip)加高糖、高脂饲料喂养建立2型糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠分为糖尿病模型组,罗格列酮组(4 mg·kg-1)和胡芦巴碱低、... 目的观察胡芦巴碱对2型糖尿病大鼠糖脂代谢和海马区neuritin表达的影响。方法采用链脲佐菌素(40 mg·kg-1,ip)加高糖、高脂饲料喂养建立2型糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠分为糖尿病模型组,罗格列酮组(4 mg·kg-1)和胡芦巴碱低、中、高剂量组(5、15、45 mg·kg-1),每组6只大鼠,连续给药8周。另取6只正常SD大鼠作为正常对照组。检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血清胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、肝糖原和肌糖原水平,real-time PCR结合Western blot分析海马区neuritin表达水平。结果给药8周后,糖尿病模型组大鼠FBG、HbA1c、FINS、TC、TG明显升高,胰岛素敏感指数(ISI)、肝糖原和肌糖原水平、海马neuritin mRNA及蛋白表达水平均下降,与正常对照组比较差异均有非常显著意义(P<0.01)。与糖尿病模型组相比,胡芦巴碱中、高剂量组和罗格列酮组大鼠FBG、HbA1c、FINS水平下降,ISI、肝糖原和肌糖原水平、海马neuritinmRNA及蛋白表达水平均上升,差异均有非常显著意义(P<0.01);胡芦巴碱中、高剂量组TC、TG明显下降(P<0.01),而罗格列酮组TC、TG无显著变化(P>0.05)。结论胡芦巴碱能改善糖尿病大鼠糖脂代谢和海马区neuritin表达。 展开更多
关键词 胡芦巴碱 糖尿病 海马 糖脂代谢 neuritin
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Neuritin在大鼠脑外伤合并骨折过程中的作用研究 被引量：7
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作者 彭方亮 董金波 +3 位作者 吴迎波 刘垚炜 张志峰 赵磊 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第15期2854-2857,共4页
目的:研究脑外伤合并股骨骨折的骨痂中Neuritin的表达及血清中变化,探讨中枢神经系统损伤加速对骨折愈合的作用,为临床难治性骨创伤提供新的理论依据。方法:取96只雄性SD大鼠随机分成:A组正常组8只、B组单纯骨折组40只、C组单纯脑外伤组... 目的:研究脑外伤合并股骨骨折的骨痂中Neuritin的表达及血清中变化,探讨中枢神经系统损伤加速对骨折愈合的作用,为临床难治性骨创伤提供新的理论依据。方法:取96只雄性SD大鼠随机分成:A组正常组8只、B组单纯骨折组40只、C组单纯脑外伤组8只及D组骨折合并脑外伤组40只,做股骨骨折和采用脑损伤液压装置建脑损伤模型,术后3、7、14、21、28天取血离心,ELISA法测血清中的Neuritin值。分时间处死B组和D组,取骨痂做切片,行免疫组织化学染色,观测各时间点骨痂中Neuritin的变化和骨折愈合情况。结果:①免疫组织化学染色:骨折愈合过程中血管内皮细胞、软骨细胞及成骨细胞的胞浆中有阳性表达,并显色强。D组1w至3w时的Neuritin阳性细胞百分数均高于B组有显著性统计意义(P<0.05),但4周时(P>0.05)。②血清浓度值:A组值(81.37±1.37),B组、C组、D组3天(94.94±3.77 107.28±3.46 118.35±1.43)逐渐升高,2周达到高峰(110.18±1.48131.89±3.26 161.48±1.46),然后下降,3d至3w时各组有显著性统计意义(P<0.05),4周下降为略高于正常(P>0.05)结论:血清和骨痂中Neuritin的表达显著升高。 展开更多
关键词 脑外伤 骨折愈合 neuritin
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Neuritin毕赤酵母表达系统的构建及其对PC12细胞的影响 被引量：6
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作者 张树军 赵臣 +4 位作者 狄建军 穆莎茉莉 仙玲玲 于娜 黄瑾 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期148-152,共5页
旨在构建Neuritin的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin蛋白,研究其神经生物学功能。PCR扩增编码neuritin基因cDNA序列,并纯化回收,通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K中,转化大肠杆菌DH5α,neuritin-pPIC9k重组质粒经PCR与测序... 旨在构建Neuritin的毕赤酵母表达系统获得大量有活性的Neuritin蛋白,研究其神经生物学功能。PCR扩增编码neuritin基因cDNA序列,并纯化回收,通过酶切和连接插入穿梭载体pPIC9K中,转化大肠杆菌DH5α,neuritin-pPIC9k重组质粒经PCR与测序鉴定后,使用SalⅠ酶切使其线性化,电击转化酵母菌GS115,经筛选与鉴定,成功构建了Neuritin的毕赤酵母表达系统。结果表明,使用甲醇诱导其表达,SDS-PAGE和Western blot分析得到11 kD的Neuritin蛋白,纯化的Neuritin蛋白加入PC12细胞培养液中,能促进其突起的生长。 展开更多
关键词 neuritin PPIC9K 毕赤酵母表达系统 PC12细胞
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NGF与Neuritin在脑外伤伴四肢骨折病人血清中的表达及意义 被引量：9
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作者 魏勇 董金波 +1 位作者 李长俊 张振东 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第19期3683-3686,共4页
目的:通过检测脑外伤患者、脑外伤合并骨折患者、骨折患者及正常人外周血中NGF,neuritin不同时间段的表达,根据其含量的变化,判断与骨折愈合速度的相关性,寻找骨折愈合的关键因子。方法:收集单纯脑外伤、单纯骨折患者各80例、脑外伤合... 目的:通过检测脑外伤患者、脑外伤合并骨折患者、骨折患者及正常人外周血中NGF,neuritin不同时间段的表达,根据其含量的变化,判断与骨折愈合速度的相关性,寻找骨折愈合的关键因子。方法:收集单纯脑外伤、单纯骨折患者各80例、脑外伤合并骨折患者60例、健康体检人群20例。选取外伤后3天、10天、2周抽取所有实验对象的静脉血,应用ELISA技术测定标本中NGF与Neuritin的含量。结果:损伤后每个时间段里,患者血清中NGF、neuritin含量有不同程度升高,均高于正常对照组,其中又以脑外伤合并骨折组最高。血清NGF在骨折合并脑外伤组伤后第3天含量明显升高,为(0.86±0.21),伤后10天为(1.47±0.29),14天为(2.0 7±0.21),脑外伤合并四肢骨折组neuritin血清含量在伤后第3天略有升高为(83.47±18.85),10天(108.50±31.65),2周(91.86±21.12).脑外伤合并骨折病人血清NGF、neuritin表达明显高于其他对照组,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论:脑外伤合并骨折病人血清NGF、neuritin表达明显高于其他对照组,说明与骨折愈合有着密切的相关性,两种因子可能在骨折愈合修复过程中共同起作用,从而,推测可能是脑外伤后骨折愈合加速的重要因素。 展开更多
关键词 神经生长因子 neuritin 脑外伤 骨折愈合
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乳腺癌组织中神经营养因子Neuritin的表达及其临床意义 被引量：5
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作者 曹健 王瑞 侯进 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期799-803,F0003,共6页
目的:观察神经营养因子Neuritin蛋白和mRNA在人乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用。方法:收集74例乳腺癌组织标本和12例正常乳腺组织标本,采用免疫组织化学和Western blotting法检测标本中Neu... 目的:观察神经营养因子Neuritin蛋白和mRNA在人乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用。方法:收集74例乳腺癌组织标本和12例正常乳腺组织标本,采用免疫组织化学和Western blotting法检测标本中Neuritin蛋白的阳性表达率和表达水平,利用RT-PCR法检测标本中Neuritin mRNA的表达水平。结果:Neuritin蛋白在正常乳腺组织中阳性表达率为25%,在乳腺癌组织中阳性表达率为70.62%,乳腺癌组织中Neuritin蛋白阳性表达率高于正常乳腺组织(P<0.05),且其在乳腺癌肿瘤细胞中定位于细胞核和细胞质。Neuritin蛋白的阳性表达率与乳腺癌淋巴结转移、TNM分期和ER/PR/HER2高阳性率有关联(P<0.05)。与正常乳腺组织比较,Ⅰ-Ⅱ期及Ⅲ-Ⅳ期乳腺癌组织中Neuritin蛋白和mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01);与Ⅰ-Ⅱ期乳腺癌组织比较,Ⅲ-Ⅳ期乳腺癌组织中Neuritin蛋白和mRNA表达水平亦升高(P<0.05)。结论:Neuritin可能是促进乳腺癌发生发展的一个重要基因,也可能是治疗乳腺癌的关键靶向分子。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 神经生长因子 neuritin 实时荧光定量PCR法
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Neuritin对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤影响的研究 被引量：3
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作者 李晓天 赵冬 +6 位作者 代林志 朱立仓 田卫东 唐仕军 朱文学 杨鹏 王业忠 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期2908-2914,共7页
目的探究Neuritin对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤过程中内质网应激因子GRP78及血-脑脊液屏障通透性的影响。方法 2014年4月—2015年9月选取成年健康雄性SD大鼠144只,按照随机数字表法分为对照组、假手术组(Sham组)、SAH组、Neur... 目的探究Neuritin对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤过程中内质网应激因子GRP78及血-脑脊液屏障通透性的影响。方法 2014年4月—2015年9月选取成年健康雄性SD大鼠144只,按照随机数字表法分为对照组、假手术组(Sham组)、SAH组、Neuritin组,各36只。再依据简单随机抽样法分别于3、6、12、24、48、72 h抽取每组6只大鼠处死,Neuritin组于处死前1 h采用立体定向技术向侧脑室注射Neuritin。建模后6、12、24、48、72 h处死大鼠前,记录各组大鼠Garcia神经功能评分;建模后3、6、12、24、48、72 h处死大鼠后,采用HE染色观察SAH建立情况,侧脑室微量注射亚甲蓝鉴定Neuritin注射情况;采用Western blotting法检测大鼠大脑皮质内质网应激因子GRP78表达水平;采用甲酰胺浸泡法检测大鼠脑内伊文蓝(EB)含量以评价血-脑脊液屏障通透性。结果 SAH组、Neuritin组建模后6、12、24、48、72 h大鼠Garcia神经功能评分均低于对照组和Sham组(P<0.05);Neuritin组建模后6、12、24、48、72 h大鼠Garcia神经功能评分均高于SAH组(P<0.05)。SAH组大鼠大脑表面弥散分布积血,其中在willis环、小脑延髓池及脑干腹侧有大量积血存在。Neuritin组大脑腹面有亚甲蓝循环存在,大脑背面无亚甲蓝,Neuritin侧脑室注射成功。SAH组建模后3、6、12、24、48、72 h GRP78表达水平高于对照组、Sham组(P<0.05);Neuritin组建模后6、12、24、48、72 h GRP78表达水平低于SAH组(P<0.05)。SAH组大鼠建模后3、6、12、24、48、72 h脑组织EB含量均高于对照组、Sham组(P<0.05);Neuritin组大鼠建模后3、12 h脑组织EB含量高于SAH组,建模后6、48、72 h脑组织EB含量低于SAH组(P<0.05)。结论 SAH后早期脑损伤过程中存在内质网应激反应,神经营养因子Neuritin可显著改变内质网应激因子GRP78表达水平,改善早期脑损伤过程中大鼠的神经行为学评分,并对血-脑脊液屏障通透性产生影响。 展开更多
关键词 蛛网膜下腔出血 脑损伤 神经生长因子类 血脑屏障 内质网应激 neuritin GRP78
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Neuritin在人非小细胞肺癌血管内皮细胞中的表达 被引量：3
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作者 张峤 王强 +1 位作者 张健 单莉 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期326-330,共5页
目的:明确Neuritin在人非小细胞肺癌血管内皮细胞(non-small lung cancer-vascular endothelial cells,NSCLCVECs)中的表达水平,探讨Neuritin与非小细胞肺癌血管发生的关系。方法:培养及鉴定人NSCLC-VECs及肺微血管内皮细胞株(human pul... 目的:明确Neuritin在人非小细胞肺癌血管内皮细胞(non-small lung cancer-vascular endothelial cells,NSCLCVECs)中的表达水平,探讨Neuritin与非小细胞肺癌血管发生的关系。方法:培养及鉴定人NSCLC-VECs及肺微血管内皮细胞株(human pulmonary microvascular endothelial cell,HPMEC),使用免疫荧光组织化学染色检测细胞膜上FactorⅧ抗体及CD34抗体表达水平,应用RT-PCR及Western blotting法检测Neuritin的表达水平。结果:经加压筛选稳定传代的NSCLCVECs及HPMEC细胞膜上可见内皮细胞特异性标记物FactorⅧ抗体及CD34抗体表达。NSCLC-VECs中Neuritin mRNA的表达水平显著高于HPMEC[(0.95±0.09)vs(0.64±0.05),P<0.05],Neuritin蛋白在NSCLC-VECs中的表达的水平明显高于HPMEC[(1.15±0.11)vs(0.27±0.14),P<0.05]。结论:Neuritin在人NSCLC-VECs中过表达,提示Neuritin可能与肿瘤血管发生相关,是一个潜在的肿瘤治疗靶点。 展开更多
关键词 neuritin 人非小细胞肺癌 血管内皮细胞 肿瘤血管发生
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Neuritin蛋白在脑损伤组织中的时相性表达及意义 被引量：6
19
作者 蔡云鹏 赵冬 +6 位作者 许晖 刘祺 戴晶 朱立仓 何学君 杨传豪 王业忠 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第15期2384-2386,共3页
目的:检测神经突蛋白(neuritin)在大鼠创伤性脑损伤组织中的时相性表达,探讨其在脑损伤后的意义。方法:42只SD大鼠分为正常组、对照组和实验组,改良Feeney法建立大鼠脑损伤模型,术后分6 h、12 h、24 h、3 d、7 d、14 d共6个亚组。免疫... 目的:检测神经突蛋白(neuritin)在大鼠创伤性脑损伤组织中的时相性表达,探讨其在脑损伤后的意义。方法:42只SD大鼠分为正常组、对照组和实验组,改良Feeney法建立大鼠脑损伤模型,术后分6 h、12 h、24 h、3 d、7 d、14 d共6个亚组。免疫组化、Western-blot检测脑损伤组织中neuritin蛋白表达。结果:免疫组化:实验组neuritin蛋白6 h呈阳性表达,12 h^7 d呈强阳性,明显高于对照组与正常组,14 d呈弱阳性表达。Western-blot:实验组neuritin蛋白6 h稍增高,24 h达高峰,持续到7 d,与对照组、正常组比较差异均有统计学差异(P<0.01),14 d明显降低,较正常组差异仍有统计学意义(P<0.05)。结论:Neuritin蛋白在脑损伤组织中表达明显增高,可能在脑损伤后起着重要作用。 展开更多
关键词 脑损伤 neuritin
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Neuritin对非小细胞肺癌血管内皮细胞的生物学作用及其机制研究 被引量：4
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作者 张建庆 章恒 +1 位作者 王珍 赵辉 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期7-15,共9页
目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中Neuritin的异常表达对肺血管内皮细胞的生物学作用及其作用机制。方法选择2017年9月至12月新疆维吾尔自治区人民医院NSCLC患者手术切除的癌组织5～10例,提取原代人NSCLC血管内皮细胞(NSCLC-VECs),原代培... 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中Neuritin的异常表达对肺血管内皮细胞的生物学作用及其作用机制。方法选择2017年9月至12月新疆维吾尔自治区人民医院NSCLC患者手术切除的癌组织5～10例,提取原代人NSCLC血管内皮细胞(NSCLC-VECs),原代培养经病理确诊的NSCLC患者NSCLC-VECs细胞,选择CD34及FactorⅧ经免疫组化鉴定。利用荧光定量PCR(QPCR)及Western-blotting检测NSCLC-VECs及人肺微血管内皮细胞株(HPMECs)中Neuritin的表达水平。构建过表达/敲低Neuritin的NSCLC-VECs、HPMEC细胞系及阴性对照组,MTT、细胞划痕、Transwell小室、流式细胞术分别检测转染干扰/过表达Neuritin对细胞增殖及转移能力、细胞周期、细胞凋亡的影响;扫描电镜观察转染后细胞形态的改变。结果 NSCLC-VECs细胞中的Neuritin表达显著高于HPMEC细胞(P <0. 01)。过表达Neuritin后HPMEC和NSCLC-VECs细胞内Notch1、VEGFR蛋白和mRNA表达均显著升高(P <0. 01);细胞体外增殖、划痕愈合及体外迁移能力较阴性对照组显著增强(P <0. 05);电镜下观察细胞表面伪足明显,细胞间粘连增加;同时,过表达Neuritin促进了HPMEC和NSCLC-VECs细胞周期进程,并抑制细胞凋亡(P <0. 001)。反之,干扰HPMEC和NSCLC-VECs细胞内Neuritin表达后,胞内Notch1、VEGFR蛋白和mRNA表达均受到显著抑制(P <0. 01);电镜下观察细胞表面光滑,细胞体外增殖活性、划痕愈合能力及迁移能力均较阴性对照组显著降低(P <0. 01); HPMEC和NSCLC-VECs细胞周期阻滞于G_0/G_1期,细胞凋亡率显著升高(P <0. 001)。结论Neuritin可能作为NSCLC潜在的生物标记物,在NSCLC的发生发展中发挥一定的生物学功能。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌(NSCLC) neuritin NOTCH1 血管内皮生长因子(VEGF)
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