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无血清培养条件下诱导胚胎干细胞向多巴胺能神经元定向分化的实验研究 被引量:2
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作者 郭雨霁 高英茂 邴鲁军 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期422-425,共4页
目的 寻求无血清、无饲养层细胞存在的情况下 ,胚胎干细胞向多巴胺能神经元定向诱导分化的最佳条件。 方法 采用阶段诱导的方法 ,在不同阶段加入不同的生长因子 ,对新近分离的胚胎干细胞进行分化培养。首先向无血清培养液中分别加入b... 目的 寻求无血清、无饲养层细胞存在的情况下 ,胚胎干细胞向多巴胺能神经元定向诱导分化的最佳条件。 方法 采用阶段诱导的方法 ,在不同阶段加入不同的生长因子 ,对新近分离的胚胎干细胞进行分化培养。首先向无血清培养液中分别加入bFGF和LIF ,实现由胚胎干细胞向神经前体细胞的定向分化 ,通过巢蛋白(nestin)免疫细胞化学染色对神经前体细胞进行鉴定 ;在此基础上 ,撤除bFGF和LIF ,加入B2 7无血清培养基、IL 1后继续培养 ,实现由神经前体细胞向多巴胺能神经元的定向诱导分化 ;通过酪氨酸羟化酶 (TH)免疫细胞化学染色对多巴胺能神经元进行鉴定。 结果 有 85 %的细胞团呈nestin免疫阳性着色 ,多巴胺能神经元的分化比率为13% ,较多巴胺能神经元的自然分化比率 (4 % )有明显提高。 结论 在无血清、无饲养细胞的情况下 ,我们采用阶段诱导的方法 ,在不同的阶段加入不同的生长因子 ,可有效诱导多巴胺能神经元的分化 ,使胚胎干细胞的诱导分化过程更易于操作。 展开更多
关键词 神经前体细胞 多巴胺能神经元 诱导分化 碱性成纤维细胞生长因子 胚胎干细胞
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神经干细胞向少突胶质前体细胞的定向分化诱导(英文) 被引量:9
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作者 富赛里 胡建国 +4 位作者 李莹 尹岚 金建强 徐晓明 陆佩华 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期132-138,共7页
本研究采用神经胶质瘤细胞株(B104 neuroblatoma cells,B104 cells)培养上清(B104CM)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF),将冷冻复苏的大鼠胚胎脊髓神经干细胞(neural stem cells,NSCs)定向诱导为少突胶质... 本研究采用神经胶质瘤细胞株(B104 neuroblatoma cells,B104 cells)培养上清(B104CM)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF),将冷冻复苏的大鼠胚胎脊髓神经干细胞(neural stem cells,NSCs)定向诱导为少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precusor cells,OPCs)。形态学和免疫组化的结果显示,诱导后95%以上的细胞具有双极或多极突起的典型OPCs 形态,并表达A2B5和血小板源生长因子受体-α(platelet derived growth factor receptor-α,PDGFR-α)等OPCs标志,所有PDGFR-α阳性的OPCs均不表达β-Tublin Ⅲ,其中仅少量细胞表达胶质原纤维酸性蛋白(glia fibrillary acidic protein,GFAP)。在B104CM 和bFGF共存的培养条件下,悬浮培养的OPCs可大量增殖形成少突胶质细胞球,该细胞球可通过传代继续扩增,且扩增的OPCs仍能维持其特有的形态和自我增殖的特性。撤去bFGF和B104CM后,OPCs能进一步分化为成熟的少突胶质细胞(oligodendrocytes,OLs)或Ⅱ型星形胶质细胞。实验表明,诱导NSCs产生的OPCs在形态、增殖以及分化格局等方面均与已报道的存在于胚胎脑区的O-2A前体细胞相类似。该培养系统可为实验性细胞移植的研究提供丰富的细胞来源。 展开更多
关键词 神经干细胞 少突胶质前体细胞 B104细胞 碱性成纤维细胞生长因子
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胎儿海马神经干细胞的体外培养及神经元前体细胞的纯化 被引量:5
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作者 姜传涛 赵春礼 +4 位作者 杨秋慧 杨慧 王元身 鲁强 徐群渊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期453-457,共5页
目的 从人胎儿海马分离培养具有自我更新和多向分化能力的神经干细胞 ,并从中纯化神经元前体细胞。 方法 利用无血清培养从胚胎 4个月的胎儿海马区分离细胞 ,并在体外连续传代培养 ;采用免疫荧光细胞化学技术检测神经上皮干细胞蛋白 ... 目的 从人胎儿海马分离培养具有自我更新和多向分化能力的神经干细胞 ,并从中纯化神经元前体细胞。 方法 利用无血清培养从胚胎 4个月的胎儿海马区分离细胞 ,并在体外连续传代培养 ;采用免疫荧光细胞化学技术检测神经上皮干细胞蛋白 (nestin)的表达、经BrdU孵育后的BrdU表达 ;比较两种诱导分化方法所获得的神经元和胶质细胞的比例差异 ;利用单细胞克隆技术纯化神经元前体细胞。 结果 分离的细胞具有连续克隆能力 ,在体外培养了 16个月 ,传了 4 3代 ;细胞冻存、复苏后仍保持干细胞特性 ;培养的细胞呈Nestin阳性 ,在BrdU孵育后呈BrdU阳性 ,诱导分化后的细胞能够表达Tubulin、NeuN或GFAP ;利用无血清诱导所得到的分化细胞中神经元的比例约占 80 % ,而血清诱导的分化细胞中胶质细胞的比例则大于 90 %。利用单细胞克隆技术可从神经球中纯化的细胞表达Nestin ,并且全部分化成神经元。 结论 从胎儿海马区分离的细胞具有自我更新能力和多向分化潜能 ,属于神经干细胞 。 展开更多
关键词 胎儿 海马 神经干细胞 体外培养 神经元前体细胞 纯化 无血清培养
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补阳还五汤对缺血性脑损伤后成年大鼠海马齿状回神经发生的影响 被引量:1
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作者 余小骊 谭洁 +2 位作者 柴长春 徐江平 王卫东 《江西中医学院学报》 2004年第2期54-56,53,共4页
目的 :观察补阳还五汤对缺血性再灌注脑损伤后成年大鼠海马齿状回神经发生的影响。方法 :使用四血管阻断方法 (4 VO)制作成年大鼠全脑缺血再灌注模型。采用神经前体细胞 (BrdU)标记分裂细胞方法 ,观察、比较缺血再灌注脑损伤后 3、6、1 ... 目的 :观察补阳还五汤对缺血性再灌注脑损伤后成年大鼠海马齿状回神经发生的影响。方法 :使用四血管阻断方法 (4 VO)制作成年大鼠全脑缺血再灌注模型。采用神经前体细胞 (BrdU)标记分裂细胞方法 ,观察、比较缺血再灌注脑损伤后 3、6、1 2、2 4、36天时补阳还五汤干预组大鼠与相应对照组大鼠之间海马齿状回神经前体细胞的增殖水平。结果 :缺血再灌注脑损伤后 ,空白干预缺血组大鼠各时间点海马齿状回BrdU阳性细胞数量水平与缺血对照组大鼠相比均无显著性差异 (P >0 0 5) ;而补阳还五汤干预组大鼠齿状回BrdU阳性细胞数量较缺血对照组大鼠和空白干预组大鼠则明显增加 (P <0 0 1 )。结论 :补阳还五汤可明显促进缺血再性灌注脑损伤后海马齿状回神经发生水平的上调 。 展开更多
关键词 补阳还五汤 缺血性脑损伤 成年大鼠 海马 齿状回神经 神经发生 脑缺血 再灌注损伤
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