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蜜蜂囊状幼虫病毒病的Nest-PCR检测 被引量:24
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作者 许益鹏 章奕卿 +2 位作者 李江红 邢丽苹 张传溪 《科技通报》 2007年第6期824-827,共4页
蜜蜂的囊状幼虫病是中华蜜蜂常见且危害严重的疾病,病原为一小正链RNA病毒。如何尽早鉴别蜂群的感染在养蜂业生产上具有重要的意义。本文报道一种利用RNA反转录结合巢式PCR检测鉴定蜜蜂的囊状幼虫病毒病的方法。
关键词 中华蜜蜂 囊状幼虫病毒病 反转录 Nest—PCR 检测
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HIV-1包膜单基因Nest-PCR体系优化及包膜基因准种扩增
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作者 全红 刘松 +4 位作者 张昊天 任彩云 庄敏 凌虹 李妍 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第4期323-328,共6页
目的确定HIV-1包膜(envelope,env)单基因扩增(single genome amplification,SGA)的最优反应体系,获得env单基因扩增产物。方法采用SGA及Nest-PCR扩增HIV-1 env全长基因,并对Nest-PCR反应体系中各成分量进行优化;在此基础上,适当稀释HIV-... 目的确定HIV-1包膜(envelope,env)单基因扩增(single genome amplification,SGA)的最优反应体系,获得env单基因扩增产物。方法采用SGA及Nest-PCR扩增HIV-1 env全长基因,并对Nest-PCR反应体系中各成分量进行优化;在此基础上,适当稀释HIV-1感染者cDNA模板进行Nest-PCR,以获得PCR扩增产物阳性率不超过30%的模板稀释度。结果 SGA Nest-PCR扩增HIV-1 env全长基因,引物浓度为0.3μmol/L,dNTP浓度为0.25μmol/L时可获得特异性高的env全长基因;凝胶回收纯化及稀释第一轮PCR产物可有效提高特异性条带的产量。采用优化反应体系成功从一名HIV-1感染者体内扩增出18株env单基因序列。结论优化了HIV-1 env基因SGA Nest-PCR的反应体系,并从HIV-1感染者获得了病毒包膜基因准种,为后续进行准种分析奠定了基础。 展开更多
关键词 HIV-1 包膜 单基因扩增 nest-pcr
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血清登革热病毒NEST-PCR检测 被引量:3
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作者 蒋力云 吴新伟 +4 位作者 何丽娟 鲁恩洁 刘远 熊远 狄飚 《预防医学情报杂志》 CAS 2006年第3期265-266,共2页
目的 建立用NEST—PCR快速检测登革热病毒的方法。方法 通用引物对样本进行RT—PCR扩增,然后用分型引物进行NEST—PCR,根据产物条带的位置分型。结果 标准毒株的扩增结果与预期结果相同,血清登革热病毒在病程2~5d的阳性率高于6~9d... 目的 建立用NEST—PCR快速检测登革热病毒的方法。方法 通用引物对样本进行RT—PCR扩增,然后用分型引物进行NEST—PCR,根据产物条带的位置分型。结果 标准毒株的扩增结果与预期结果相同,血清登革热病毒在病程2~5d的阳性率高于6~9d的阳性率,分别为6/7和2/6。结论 NEST—PCR方法是一个快速、准确检测登革热的方法,但它更适用于早期临床检测。 展开更多
关键词 登革热病毒 NEST—PCR RT—PCR
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应用RT-nest-PCR法检测慢性髓细胞白血病非亲缘异基因骨髓移植后微小残留病变
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作者 薛军 王云贵 +1 位作者 黄河 林茂芳 《临床血液学杂志》 CAS 2007年第2期93-95,共3页
目的:应用筑巢式RT—PCR(RT—nest—PCR)法检测慢性髓细胞性白血病(CML)患者非亲缘异基因骨髓移植(URD)后微小残留病变(MRD),并探讨它与复发的相关性。方法:分别采用RT-nest-PCR法和常规细胞遗传学方法检测bcr/abl融合基因和Ph染色体... 目的:应用筑巢式RT—PCR(RT—nest—PCR)法检测慢性髓细胞性白血病(CML)患者非亲缘异基因骨髓移植(URD)后微小残留病变(MRD),并探讨它与复发的相关性。方法:分别采用RT-nest-PCR法和常规细胞遗传学方法检测bcr/abl融合基因和Ph染色体。结果:20例CML行URD患者术前Ph染色体和bcr/abl融合基因检测均为阳性,移植术后30 d Ph染色体皆转为阴性,bcr/abl融合基因完全转阴时间为1~3个月,中位时间2个月;在随防的18例CML患者中,有16例患者bcr/abl融合基因完全转阴后没再转为阳性。在1例复发的CML患者中可见到血型、Ph染色体和bcr/abl融合基因动态变化,另1例CML患者在移植成功后的21个月和36个月检测到bcr/abl融合基因,经随访未见临床和血液学复发征象。结论:检测ber/abl融合基因是目前观察CML患者非亲缘异基因骨髓移植后微小残留病变最敏感的方法之一,非亲缘异基因骨髓移植能最大限度地消除CML患者体内残留病变,患者能长期无病生存。 展开更多
关键词 白血病 髓细胞性 BCR/ABL融合基因 筑巢式逆转录聚合酶链反应 非亲缘异基因骨髓移植 微小残留病变 PH染色体
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水貂震颤综合征-星状病毒的检测及半巢式RT-PCR检测方法的建立
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作者 王旭 刘德凯 +3 位作者 赵碧田 黄泽楷 李海名 张彦龙 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期143-150,共8页
为探究黑龙江省某水貂养殖场幼貂发生疑似水貂震颤综合征(shaking mink syndrome,SMS)继发死亡的病原并针对病原建立特异性强、灵敏度高的检测方法,试验首先采集3只病死幼貂的脑、肝脏、肾脏和肺脏组织标本,经H.E.染色制作成病理切片进... 为探究黑龙江省某水貂养殖场幼貂发生疑似水貂震颤综合征(shaking mink syndrome,SMS)继发死亡的病原并针对病原建立特异性强、灵敏度高的检测方法,试验首先采集3只病死幼貂的脑、肝脏、肾脏和肺脏组织标本,经H.E.染色制作成病理切片进行组织病理学观察,采用RT-PCR方法对水貂常见病原[星状病毒(Astrovirus,AstV)、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)、阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)]进行检测,并对检测的病原进行遗传进化分析;然后建立针对病原建立半巢式RT-PCR检测方法,对建立的方法进行条件(退火温度、Taq酶体积、引物体积)优化、特异性试验、敏感性试验、重复性试验,并采用该方法对119份病死幼貂的脑组织样本进行检测。结果表明:病死水貂大脑-皮质内部分神经细胞变性、坏死,皮质内部分血管周围有炎性细胞浸润,出现管套现象,皮质内胶质细胞散在性浸润,与神经毒性AstV引起的特征性病理变化相似;其他组织未见明显病理变化。从病死幼貂脑组织中仅检测到AstV,命名为SMS-AstV-Harbin。从基于AstV ORF1b基因构建的遗传进化树中可见,SMS-AstVHarbin与Mink astrovirus isolate-SMS-AstV(登录号为GU985458.1)处于同一小分支,亲缘关系较近;与Human astrovirus UK1(登录号为KM358468.1)、Canine astrovirus strain HUN/2012/8(登录号为KX599354.1)、Feline astrovirus 2(登录号为KF499111.1)、Porcine astrovirus 3 strain NI-Brain/173-2016a/HUN(登录号为KY073231.1)、Bovine astrovirus CH13(登录号为KM035759.1)、Ovine astrovirus 2(登录号为NC_002469.1)处于不同小分支,亲缘关系较远。建立的半巢式RT-PCR检测方法的最优退火温度、Taq酶(5 U/μL)体积和引物(10μmol/L)体积分别为52℃、0.5μL和1μL。该方法能特异性地检出SMS-AstV,其cDNA最低检测限为1 pg/μL,且对3份样本的3次重复检测结果均一致。采用该方法检出SMS-AstV阳性样本117份,阳性率为98.32%。说明引起该养殖场幼貂死亡的病原为SMS-AstV,针对该病原建立的半巢式RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于快速检测。 展开更多
关键词 水貂震颤综合征 水貂星状病毒 病理学观察 病毒鉴定 遗传进化分析 半巢式RT-PCR方法
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啮齿类实验动物4种常见病原菌多重巢式PCR检测方法的建立与初步应用
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作者 席晓霞 孙婧 +3 位作者 郭家熙 张丽娟 刘晓玲 段天林 《中兽医医药杂志》 2025年第4期18-25,共8页
建立一种检测啮齿类实验动物鼠伤寒沙门菌、鼠棒状杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等4种常见致病菌的多重巢式PCR检测方法,在此基础上,采用咽拭子和肛拭子等采样方法优化检测流程。试验针对病原菌16S rDNA序列保守区和可变区,通过... 建立一种检测啮齿类实验动物鼠伤寒沙门菌、鼠棒状杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等4种常见致病菌的多重巢式PCR检测方法,在此基础上,采用咽拭子和肛拭子等采样方法优化检测流程。试验针对病原菌16S rDNA序列保守区和可变区,通过引物长短差异分别设计通用引物和特异性引物,通过巢式PCR检测各种样本中的病原菌。结果显示,优化后的四重巢式PCR方法可对同一样品中的4种致病菌模板进行特异性扩增,无交叉反应;多重巢式PCR方法可从标准菌株DNA模板中扩增出待检病原菌DNA片段,而阴性对照组均未能检出;多重巢式PCR方法的检测灵敏度明显高于普通多重PCR方法(≤10-2pg/μL vs≤1 pg/μL);多重巢式PCR方法可从混合感染的样本中特异性地检测出4种致病菌;在实际应用中,多重巢式PCR可检测出病原菌感染的阳性样本,且检出率高于普通多重PCR方法。本试验建立的4种病原菌多重巢式PCR检测方法可同时检测动物咽拭子或肛拭子等临床样本中的多种病原菌,与普通多重PCR方法相比,该方法具有省时省力、灵敏性高、特异性强等优点。 展开更多
关键词 多重巢式PCR 鼠伤寒沙门菌 鼠棒状杆菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
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西藏日喀则地区羊梨形虫病原调查和分析 被引量:1
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作者 朱浩瀚 赵帅阳 +6 位作者 张少华 张楚晗 苏书晓 关贵全 殷宏 罗建勋 刘军龙 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第3期39-43,共5页
为了解我国西藏自治区日喀则市藏羊梨形虫病的流行情况,本试验采集了366份藏羊血液样品并提取基因组DNA,采用巢式PCR方法对藏羊梨形虫病病原进行检测和鉴定,并基于梨形虫18S rRNA基因序列构建系统进化树。结果显示,梨形虫阳性率为35.79%... 为了解我国西藏自治区日喀则市藏羊梨形虫病的流行情况,本试验采集了366份藏羊血液样品并提取基因组DNA,采用巢式PCR方法对藏羊梨形虫病病原进行检测和鉴定,并基于梨形虫18S rRNA基因序列构建系统进化树。结果显示,梨形虫阳性率为35.79%(131/366),其中绵羊泰勒虫阳性率为35.25%(129/366),环形泰勒虫阳性率为0.55%(2/366);系统进化树结果显示,该地区绵羊泰勒虫与中国新疆株(GenBank:FJ603460)、土耳其株(GenBank:AY260172)和苏丹株(GenBank:AY260171)处于同一分支;环形泰勒虫与意大利株(GenBank:MT341858)、土耳其株(GenBank:524666)和中国内蒙古株(GenBank:EU083801)处于同一分支。本试验首次报道了西藏地区存在绵羊泰勒虫,为西藏地区羊梨形虫病的流行病学调查和综合防控提供了数据参考。 展开更多
关键词 藏羊 梨形虫 巢式PCR 系统进化树 流行病学调查
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应用巢式PCR对猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法
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作者 刘龑 徐蕴博 +4 位作者 张琦 徐倩倩 尹智 刘忠华 翁晓刚 《东北农业大学学报》 北大核心 2025年第4期47-55,共9页
为建立1种准确可靠的猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法,将不同数量细胞样本进行DNA提取纯化后进行PCR扩增,结果表明:当使用纯化的DNA模板进行1轮PCR扩增时,SRY/ZFX引物可在10个细胞中有效扩增,而AMEL和SUSY/SUS12S引物仅在50个细胞以上有... 为建立1种准确可靠的猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法,将不同数量细胞样本进行DNA提取纯化后进行PCR扩增,结果表明:当使用纯化的DNA模板进行1轮PCR扩增时,SRY/ZFX引物可在10个细胞中有效扩增,而AMEL和SUSY/SUS12S引物仅在50个细胞以上有效。与纯化DNA模板相比,使用细胞裂解液进行PCR扩增的效果更优,但单次PCR中SUSY/SUS12S和AMEL引物在1或10个细胞样本中未检测到特异性条带。通过设计巢式PCR引物,成功在单细胞中扩增目标基因,特别是AMEL引物效果最佳,并通过Y染色体DNA-FISH检测验证PCR结果准确性。此外,通过在体外受精囊胚中测试建立的巢式PCR方法,表现出良好特异性。 展开更多
关键词 胚胎 单细胞 巢式PCR 性别鉴定
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甘肃省犬巴贝斯虫病分子流行病学调查
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作者 李娇 王锦明 +3 位作者 关贵全 王桂荣 叶得河 马永华 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期188-194,共7页
本研究从甘肃兰州、陇南、天水等14个地区共收集宠物犬抗凝血1628份,采用吉姆萨染色和PCR方法进行检测,并对阳性样本进行18S rRNA基因测序,将测序结果与GenBank中收录的巴贝斯虫基因序列进行同源性分析,构建分子系统进化树。结果显示,... 本研究从甘肃兰州、陇南、天水等14个地区共收集宠物犬抗凝血1628份,采用吉姆萨染色和PCR方法进行检测,并对阳性样本进行18S rRNA基因测序,将测序结果与GenBank中收录的巴贝斯虫基因序列进行同源性分析,构建分子系统进化树。结果显示,全省感染率为3.13%(51/1628)。以18S rRNA为靶基因的遗传分析发现,甘肃地区流行的虫株与陕西分离株、河南分离株、日本分离株、印度分离株的B.gibsoni处于同一分支,表明甘肃地区犬感染的巴贝斯虫种类为B.gibsoni。通过本次调查研究发现甘肃省犬巴贝斯虫的感染情况和流行优势虫种。可为甘肃省的犬巴贝斯虫病的防治提供流行病学数据。 展开更多
关键词 18S rRNA 吉氏巴贝斯虫 巢氏PCR扩增技术 分子生物学诊断
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若尔盖县高原鼠兔贾第虫及隐孢子虫分子流行病学调查
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作者 陈虹汐 向阳 +4 位作者 吉克日洪 陈天祥 袁东波 朱良全 郝力力 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期331-338,共8页
目的了解四川省若尔盖县高原鼠兔贾第虫(Giardia)和隐孢子虫(Cryptosporidium)感染情况。方法2023年3月至12月,在若尔盖县5个乡镇(达扎寺镇、阿西镇、红星镇、唐克乡和麦溪乡)捕获高原鼠兔,取肠胃内容物并提取DNA,针对贾第虫bg、gdh、tp... 目的了解四川省若尔盖县高原鼠兔贾第虫(Giardia)和隐孢子虫(Cryptosporidium)感染情况。方法2023年3月至12月,在若尔盖县5个乡镇(达扎寺镇、阿西镇、红星镇、唐克乡和麦溪乡)捕获高原鼠兔,取肠胃内容物并提取DNA,针对贾第虫bg、gdh、tpi基因和隐孢子虫SSU rRNA(小亚基核糖体RNA)基因进行巢式PCR扩增;将PCR阳性样本测序后得到的序列进行剪切、比对并构建遗传进化树,以确定扩增序列所属的虫种和基因型。结果共捕获114只鼠兔,采集肠道内容物和胃内容物各114份。bg基因检出贾第虫阳性44份;gdh基因检出贾第虫阳性14份,总检出率43.9%(50/114)。共检出2种贾第虫集聚体[集聚体E和1种新的集聚体Assemblage OC1(暂命名)];SSU rRNA基因检出隐孢子虫阳性8份,总检出率7.0%(8/114),检出3种新的基因型。部分样本存在混合感染,检出率为3.5%(4/114)。结论若尔盖县高原鼠兔感染贾第虫为蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)和Giardia sp.(REG-1、REG-2),集聚体E为该地区优势集聚体,且存在一种新的集聚体Assemblage OC1;感染的隐孢子虫为Cryptosporidium sp.(REG-1、REG-2和REG-3)。应加强对若尔盖地区贾第虫和隐孢子虫的监测,为当地公共卫生提供重要的数据支撑。 展开更多
关键词 高原鼠兔 蓝氏贾第鞭毛虫 隐孢子虫 巢式PCR 流行病学
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鸡毒支原体套式PCR检测方法的建立及初步应用
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作者 周鲁阳 陈学圣 +9 位作者 宋法慧 吴际坤 俞长旭 王傲菲 魏书琦 杨硕 汪建华 张瑞华 姜世金 朱岩丽 《中国家禽》 北大核心 2025年第6期162-168,共7页
为建立一种快速实用的检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的方法,试验根据MG黏附蛋白的mgc2基因序列,选择其保守区域的基因片段,设计两对特异性引物,通过对反应条件和试剂浓度进行优化,建立鸡毒支原体套式PCR检测方法,并应用... 为建立一种快速实用的检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的方法,试验根据MG黏附蛋白的mgc2基因序列,选择其保守区域的基因片段,设计两对特异性引物,通过对反应条件和试剂浓度进行优化,建立鸡毒支原体套式PCR检测方法,并应用该方法检测鸭的临床样品。结果显示,建立的检测方法与其他病原体无交叉反应,特异性良好,MG DNA模板检测限为5×10^(-6) ng/μL,其敏感性是常规PCR的1000倍以上,且批内和批间试验重复性良好;利用该方法对临床病死鸭胚与咽、肛拭子混合样本的检出率分别为10%(5/50)和33%(21/63)。研究表明,建立的MG套式PCR检测方法具有特异性强、灵敏度高等优点,适用于鸭群中MG早期感染的检测,为MG的检测和防控及分子流行病学调查提供有力的检测手段。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 套式PCR mgc2
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内蒙古自治区部分地区鼠携带戊型肝炎病毒的调查分析
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作者 王珊珊 司晓艳 +5 位作者 张萌萌 罗曼 闫真 李利利 南晓伟 张忠兵 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第9期925-931,共7页
目的调查内蒙古自治区鼠戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)携带情况。方法2024年在内蒙古自治区呼和浩特市、包头市、呼伦贝尔市、兴安盟、通辽市、赤峰市、锡林郭勒盟、乌兰察布市、鄂尔多斯市、巴彦淖尔市和乌海市共11个盟市采集... 目的调查内蒙古自治区鼠戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)携带情况。方法2024年在内蒙古自治区呼和浩特市、包头市、呼伦贝尔市、兴安盟、通辽市、赤峰市、锡林郭勒盟、乌兰察布市、鄂尔多斯市、巴彦淖尔市和乌海市共11个盟市采集鼠的肝、脾、肾、肺组织样本,采用巢氏PCR(RT-PCR),检测HEV开放阅读框1(ORF1)基因保守区域,RT-PCR阳性产物测序后,对序列进行系统发育分析和同源性分析。结果此次调查捕获鼠816只,其中褐家鼠319只(39.09%,319/816),小家鼠206只(25.25%,206/816),长爪沙鼠140只(17.16%,140/816)。内蒙古地区鼠HEV感染率为3.68%(30/816),对RT-PCR检测阳性结果测序,分析碱基序列,获得30份鼠HEV的阳性样本,基因进化分析为HEV-C1型。内蒙古地区兴安盟、赤峰市、呼伦贝尔市、锡林郭勒盟、通辽市5个盟市的褐家鼠存在HEV的流行,带毒率分别为:16.67%、10.00%、5.98%、3.30%、2.50%。结论褐家鼠携带多种HEV的亚型均可引起人兽共患病,应加强人居环境周边鼠携带病原体的监测,优化鼠传疾病的防治工作,并应做好相关传染病的科普宣传,降低人群感染风险。 展开更多
关键词 戊肝病毒 巢氏PCR 遗传进化分析 内蒙古自治区
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福建省常见库蠓种类巢式PCR分子鉴定及遗传分析方法的建立
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作者 张圣昀 陈朱云 +1 位作者 肖丽贞 王金章 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第3期403-408,共6页
目的基于巢式PCR技术,建立一种福建省常见库蠓种类的分子鉴定方法,并开展库蠓的遗传进化分析。方法2023年6月—2024年7月,在福建省内采用灯诱法采集蠓虫,制作成玻片标本后进行形态学鉴定。设计、合成库蠓线粒体细胞色素C氧化酶亚基1(co... 目的基于巢式PCR技术,建立一种福建省常见库蠓种类的分子鉴定方法,并开展库蠓的遗传进化分析。方法2023年6月—2024年7月,在福建省内采用灯诱法采集蠓虫,制作成玻片标本后进行形态学鉴定。设计、合成库蠓线粒体细胞色素C氧化酶亚基1(cox1)序列的巢式PCR特异性引物。提取蠓虫基因组DNA,分别进行巢式PCR和普通PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后与形态学鉴定结果进行比较。巢式PCR扩增产物测序后使用SeqMan Pro软件拼接,BLAST比对核苷酸同源性。使用Clustal X软件对cox1序列进行比对分析。使用WinArl35、popart软件绘制单倍型网络图并计算单倍型多样性指数(Hd)。利用MEGA 11软件对样品序列进行特征分析,使用邻接法构建系统进化树。基于P距离模型,计算不同种类库蠓种群内、种群间的遗传距离。结果共采集35份蠓虫样品,经形态学鉴定为12种蠓虫,分别为荒川库蠓、原野库蠓、尖喙库蠓、霍飞库蠓、北京库蠓、苏岛库蠓、多斑库蠓、棒须库蠓、环基库蠓、东方库蠓、中华细蠓和武夷蠛蠓。巢式PCR结果显示,形态学鉴定为库蠓的29份DNA样品均能扩增出特异性条带,库蠓检出率为100%(29/29);普通PCR结果显示,形态学鉴定为库蠓的29份DNA样品仅17份扩增出亮度较低的特异性条带,库蠓检出率为58.6%(17/29)。BLSAT结果显示,形态学鉴定为环基库蠓的4条cox1序列与GenBank中C.flumineus(ON002367)的序列一致性最高,为91.64%~91.78%,与环基库蠓参考序列(KY441782)的一致性仅为84.78%~84.87%;形态学鉴定为东方库蠓的3条cox1序列与C.flumineus(ON002367)的序列一致性最高,为91.64%~91.78%,与东方库蠓参考序列(KT352219)的一致性仅为81.93%~82.42%;其他22条cox1序列的BLSAT结果与形态学鉴定结果一致,序列一致性为86.78%~100%。cox1单倍型网络图结果显示,29条cox1序列共有22个单倍型,不同种类库蠓间的遗传变异水平差异较大(Hd=0.9680)。系统进化树结果显示,29条cox1序列均按照其所属亚属在进化树上聚集。遗传距离分析结果显示,各种类库蠓间遗传距离范围在0.0004~0.2229;种内遗传距离范围在0.0000~0.0062。结论建立了基于巢式PCR技术建立的分子鉴定方法,该法能够适用于福建省内多种常见库蠓的鉴定。 展开更多
关键词 库蠓 巢式PCR 线粒体细胞色素C氧化酶亚基1 分子鉴定 遗传进化
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燕麦炭疽病菌巢式PCR快速检测方法的建立
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作者 付鹏 赵弋锐 +4 位作者 张金凤 孙小涵 杨天星 赵祥 高鹏 《植物病理学报》 北大核心 2025年第3期487-495,共9页
由禾谷炭疽菌(Colletotrichum cereale)引起的燕麦炭疽病是影响燕麦产量和品质的主要病害,建立准确、快速的检测方法是及时监测和防治燕麦炭疽病的关键。本研究基于ITS区序列设计特异性引物ITS-2F/ITS-2R,将其与通用引物ITS1/ITS4组合... 由禾谷炭疽菌(Colletotrichum cereale)引起的燕麦炭疽病是影响燕麦产量和品质的主要病害,建立准确、快速的检测方法是及时监测和防治燕麦炭疽病的关键。本研究基于ITS区序列设计特异性引物ITS-2F/ITS-2R,将其与通用引物ITS1/ITS4组合成巢式PCR引物组,在优化的反应条件和反应体系下可稳定扩增出287 bp单一明亮的目的条带,可检测的最低DNA浓度达1 fg·μL^(-1),利用该方法对燕麦叶片、燕麦种子及种植地土壤样本进行检测,均能够特异地检测到C.cereale。该方法具有快速、准确、高效、灵敏度高等特点,可用于燕麦炭疽病的田间诊断和检测,为及时开展病害防控提供科学依据。 展开更多
关键词 燕麦 炭疽病 燕麦炭疽病菌 巢式PCR 快速检测
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西藏自治区部分地区家犬细粒棘球绦虫和十二指肠贾第虫感染情况调查
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作者 杨涛 郝力力 +9 位作者 拉巴次仁 党发发 旺扎 益西尊姆 向阳 次仁桑珠 白玛玉珍 普布卓玛 宁立宏 冯青 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第4期28-36,共9页
为了解西藏部分地区家犬感染细粒棘球绦虫和十二指肠贾第虫的基本情况,本试验基于细粒棘球绦虫烟酰胺脱氢酶亚基Ⅰ(nadⅠ)基因以及十二指肠贾第虫磷酸丙糖异构酶(tpi)、β-贾第素(bg)和谷氨酸脱氢酶(gdh)基因,采用巢式PCR方法对采集自... 为了解西藏部分地区家犬感染细粒棘球绦虫和十二指肠贾第虫的基本情况,本试验基于细粒棘球绦虫烟酰胺脱氢酶亚基Ⅰ(nadⅠ)基因以及十二指肠贾第虫磷酸丙糖异构酶(tpi)、β-贾第素(bg)和谷氨酸脱氢酶(gdh)基因,采用巢式PCR方法对采集自拉萨市和林芝市4个乡镇(工卡镇、日多乡、娘蒲乡和加兴乡)的553份家犬粪便样本进行检测,并对PCR阳性产物进行测序、序列比对和遗传进化分析,从而确定细粒棘球绦虫和十二指肠贾第虫的感染情况和遗传进化关系。结果显示,本试验共检出57份细粒棘球绦虫阳性样本,总阳性率为10.3%(57/553),遗传进化分析结果显示,阳性样本为细粒棘球绦虫G5基因型[奥氏棘球绦虫(Echinococcus ortleppi)];共检出46份十二指肠贾第虫阳性样本,总阳性率为8.3%(46/553),遗传进化分析结果显示,阳性样本基因型为十二指肠贾第虫集聚体C、D和G。结果表明,西藏部分地区家犬细粒棘球绦虫和十二指肠贾第虫感染率均较高,家犬粪便中检出的细粒棘球绦虫G5基因型目前在我国报道较少,检出的十二指肠贾第虫集聚体G仅感染啮齿类动物,提示调查地区细粒棘球绦虫和十二指肠贾第虫出现了新的流行情况。本试验为当地犬寄生虫病的防控提供了重要数据支撑,后期应进一步加强犬只监测,并做好相应的管理和驱虫工作。 展开更多
关键词 家犬 细粒棘球绦虫 十二指肠贾第虫 巢式PCR G5基因型 集聚体G
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国内部分地区家猫嗜吞噬细胞无形体的追溯性分子检测
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作者 邹健磊 卓宇 +3 位作者 彭妍妍 夏保辉 刘国华 杨甜 《中国动物检疫》 2025年第9期25-30,共6页
为验证国内家猫群体中是否存在蜱传病原微生物嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum,APH)并了解其遗传进化特征,对2012年12月—2019年12月7个省份11个地区宠物医院收集的452份家猫血液样品,利用半巢氏PCR方法进行追溯性APH核酸检... 为验证国内家猫群体中是否存在蜱传病原微生物嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum,APH)并了解其遗传进化特征,对2012年12月—2019年12月7个省份11个地区宠物医院收集的452份家猫血液样品,利用半巢氏PCR方法进行追溯性APH核酸检测,对检出的阳性样品通过BLAST序列比对并结合系统发育树构建进行确认。经检测,在452份家猫血液样品中检出3份阳性,阳性样品均于夏季收集,其中2份来自长春市(采集于2018年7月),1份来自长沙市(采集于2019年6月)。阳性样品序列与APH参考株(GenBank登录号ON807566.1、ON795112.1,分别于2022年7月、8月分离自长沙市蜱体内)之间的相似度为96.4%~99.2%,呈现出高度的同源性;基于16S rRNA序列比对分析发现,阳性样品序列均归属于APH特异性进化分支。结果表明,我国家猫群体中早已存在APH流行且流行菌株系统发育稳定。本研究为我国蜱传疾病的监测预警和防控策略制定提供了重要依据。 展开更多
关键词 嗜吞噬细胞无形体 家猫 半巢式PCR 人兽共患病
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巴尔通体巢式PCR检测方法的建立与应用
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作者 刘宏 易山宏 +3 位作者 孙静 杨琛琛 雷巧玲 邵建伟 《佛山科学技术学院学报(自然科学版)》 2025年第1期85-91,共7页
为建立一种应用于巴尔通体(Bartonella)高灵敏度、高特异性的检测方法,根据巴尔通体16S保守序列设计特异性引物,通过优化反应体系及反应条件,建立巢式PCR检测方法,并利用该方法对在2023年广州市花都区采集的100份褐家鼠脾脏样品进行检... 为建立一种应用于巴尔通体(Bartonella)高灵敏度、高特异性的检测方法,根据巴尔通体16S保守序列设计特异性引物,通过优化反应体系及反应条件,建立巢式PCR检测方法,并利用该方法对在2023年广州市花都区采集的100份褐家鼠脾脏样品进行检测。结果显示:所建立的巢式PCR方法特异性良好,可特异性检测出巴尔通体阳性核酸,与其他对照菌株贝氏柯克斯体、无形体、钩端螺旋体、立克次体和伯氏螺旋体阳性核酸均无交叉反应;该方法灵敏度高,最低检出限为7.66×10^(1)copies·μL^(-1);应用该方法完成100份临床样品快速检测,检出4种巴尔通体,其中1种与人类疾病有关。表明建立的巴尔通体巢式PCR检测方法特异性强、灵敏度高,可为巴尔通体的临床样品检测提供技术支持。 展开更多
关键词 巴尔通体 巢式PCR 检测方法 应用
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大丽轮枝菌巢氏PCR检测方法的建立及在棉籽上的应用
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作者 方雨萧 刘丽娟 +2 位作者 张玉芳 缪卫国 陈代朋 《热带生物学报》 2025年第3期415-422,共8页
棉花黄萎病是棉花上的重要病害,严重威胁棉花产业。中国棉花黄萎病病原为大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)。棉花黄萎病防治困难,建立快速准确的分子检测方法对于该病的早期诊断、预警和防治具有重要意义。通过NCBI BLAST进行序列比对... 棉花黄萎病是棉花上的重要病害,严重威胁棉花产业。中国棉花黄萎病病原为大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)。棉花黄萎病防治困难,建立快速准确的分子检测方法对于该病的早期诊断、预警和防治具有重要意义。通过NCBI BLAST进行序列比对,找到大丽轮枝菌种内具有高度种间特异性和种内保守性的物种特异性序列,根据序列设计6对引物,筛选出特异性强、灵敏度高可用于检测大丽轮枝菌的巢氏PCR引物,并摸索最佳扩增条件。筛选到了两组巢氏PCR引物分别是VD-2和VD-5,扩增条件为:95℃5 min;95℃30 s;58℃30 s;72℃1 min,35个循环;72℃10 min,条带大小分别为512和375 bp。该方法可检测到的病菌DNA下限为1×10^(-6)ng·μL^(-1),比常规PCR灵敏度提高了3个数量级,使用包括长孢轮枝菌在内的15种菌对引物特异性进行了验证,检测混有大丽轮枝菌孢子的棉籽发现该方法的检测下限是每颗棉籽可达10个孢子。 展开更多
关键词 棉籽 棉花黄萎病 大丽轮枝菌 巢氏PCR 分子检测
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应用孕妇外周血cff-DNA检测胎儿RHD血型基因的方法学研究
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作者 任道菊 杨金华 +2 位作者 李小薇 肖军 李翠莹 《临床输血与检验》 2025年第2期163-169,共7页
目的研究一种新型应用孕妇外周血胎儿游离DNA(cell free fetal DNA,cff-DNA)检测胎儿RHD血型基因的无创检测方法,并分析该方法的可行性及准确性。方法以2023年8月—2024年8月本医学中心建档的RhD阴性孕妇为研究对象,采集孕妇5~8 mL外周... 目的研究一种新型应用孕妇外周血胎儿游离DNA(cell free fetal DNA,cff-DNA)检测胎儿RHD血型基因的无创检测方法,并分析该方法的可行性及准确性。方法以2023年8月—2024年8月本医学中心建档的RhD阴性孕妇为研究对象,采集孕妇5~8 mL外周血,首先对母亲RHD基因型进行检测,采用吸附柱法提取孕妇外周血中的基因组DNA,用PCR-SSP法检测母亲RHD基因分型,筛选出符合纳入标准的孕妇;然后采用磁珠法提取孕妇血浆中的cff-DNA,对提取得到的cff-DNA先进行质控检测,使用甲基化敏感限制性内切酶处理cff-DNA,酶切后扩增RASSF1A基因及β-actin基因,以确保提取到胎儿来源的cff-DNA;再进行胎儿RHD血型基因检测,运用巢式结合荧光探针的qPCR方法,扩增RHD第4、7、10外显子,确定胎儿RhD血型;最后对胎儿cff-DNA RHD血型基因检测结果准确性进行验证,追踪出生后新生儿血型,以其为金标准,判断孕妇外周血cff-DNA RHD血型基因检测结果的准确性。结果收集到4例RhD阴性孕妇样本,进行母亲RHD基因分型,结果3例为RHD全缺失,1例为RHD-CE(2-9),均符合纳入标准;对孕妇外周血中提取得到的cff-DNA,酶切后质控验证,RASSF1A基因均为阳性,β-actin基因均为阴性,均提取到cff-DNA;运用cff-DNA检测胎儿RHD血型基因,结果显示4例RHD第4、7、10外显子均为阳性,判断胎儿RhD血型为RhD阳性;追溯4例新生儿,新生儿血型血清学结果为RhD阳性。结论这种新的孕妇外周血cff-DNA检测胎儿RHD血型基因的方法可行,检测结果与出生后的新生儿血型结果一致,其对早期诊断RhD相关HDFN及指导RhD阴性孕妇应用抗D免疫球蛋白具有重要意义。 展开更多
关键词 cff-DNA 胎儿RHD血型基因 RHD阴性 胎儿新生儿溶血病 巢式PCR
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HBsAg ELISA+/HBV DNA NAT-献血者血清学与分子生物学特征分析 被引量:1
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作者 景媛媛 范云 +3 位作者 郭燕 张文娟 段勇 冯娜 《中国输血杂志》 CAS 2024年第4期412-416,共5页
目的 了解西安地区无偿献血人群HBsAg ELISA检测结果与HBV DNA检测结果不一致的标本相关血清学标志物的分布情况。方法 收集2022年11月1日—2023年4月30日陕西省血液中心HBsAg ELISA+/HBV DNA NAT-(ELISA+/NAT-)标本共计71份,对其采用... 目的 了解西安地区无偿献血人群HBsAg ELISA检测结果与HBV DNA检测结果不一致的标本相关血清学标志物的分布情况。方法 收集2022年11月1日—2023年4月30日陕西省血液中心HBsAg ELISA+/HBV DNA NAT-(ELISA+/NAT-)标本共计71份,对其采用电化学发光法检测乙肝血清学标志物,同时复检巢式PCR扩增HBV S区和C区基因片段。结果 双ELISA+/NAT-标本(n=30)巢式PCR检测阳性率远高于单ELISA+/NAT-标本(n=41)(60%vs 24.40%,P<0.05)。前者献血者100%为初次献血者,血清抗-HBc阳性率100%,血清学模式以1、4、5此3项阳性(80%)为主;后者献血者中31.7%为重复献血者,血清抗-HBc阳性率仅为19.51%,血清学模式以单2项阳性(43.90%)和全阴(36.58%)为主。结论 单ELISA+结果存在较多假阳性,导致不必要的血液报废;而NAT-标本可能存在低水平的HBV DNA,产生漏检风险。建议针对单HBsAg ELISA+/NAT-献血者,采用多套系统多种方法追溯检测,提高献血者HBV筛查的准确度,减少不必要的血液浪费。 展开更多
关键词 乙型肝炎表面抗原 无偿献血者 巢式PCR HBV DNA
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