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蜜蜂囊状幼虫病毒病的Nest-PCR检测 被引量:24
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作者 许益鹏 章奕卿 +2 位作者 李江红 邢丽苹 张传溪 《科技通报》 2007年第6期824-827,共4页
蜜蜂的囊状幼虫病是中华蜜蜂常见且危害严重的疾病,病原为一小正链RNA病毒。如何尽早鉴别蜂群的感染在养蜂业生产上具有重要的意义。本文报道一种利用RNA反转录结合巢式PCR检测鉴定蜜蜂的囊状幼虫病毒病的方法。
关键词 中华蜜蜂 囊状幼虫病毒病 反转录 Nest—PCR 检测
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HIV-1包膜单基因Nest-PCR体系优化及包膜基因准种扩增
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作者 全红 刘松 +4 位作者 张昊天 任彩云 庄敏 凌虹 李妍 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第4期323-328,共6页
目的确定HIV-1包膜(envelope,env)单基因扩增(single genome amplification,SGA)的最优反应体系,获得env单基因扩增产物。方法采用SGA及Nest-PCR扩增HIV-1 env全长基因,并对Nest-PCR反应体系中各成分量进行优化;在此基础上,适当稀释HIV-... 目的确定HIV-1包膜(envelope,env)单基因扩增(single genome amplification,SGA)的最优反应体系,获得env单基因扩增产物。方法采用SGA及Nest-PCR扩增HIV-1 env全长基因,并对Nest-PCR反应体系中各成分量进行优化;在此基础上,适当稀释HIV-1感染者cDNA模板进行Nest-PCR,以获得PCR扩增产物阳性率不超过30%的模板稀释度。结果 SGA Nest-PCR扩增HIV-1 env全长基因,引物浓度为0.3μmol/L,dNTP浓度为0.25μmol/L时可获得特异性高的env全长基因;凝胶回收纯化及稀释第一轮PCR产物可有效提高特异性条带的产量。采用优化反应体系成功从一名HIV-1感染者体内扩增出18株env单基因序列。结论优化了HIV-1 env基因SGA Nest-PCR的反应体系,并从HIV-1感染者获得了病毒包膜基因准种,为后续进行准种分析奠定了基础。 展开更多
关键词 HIV-1 包膜 单基因扩增 nest-pcr
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血清登革热病毒NEST-PCR检测 被引量:3
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作者 蒋力云 吴新伟 +4 位作者 何丽娟 鲁恩洁 刘远 熊远 狄飚 《预防医学情报杂志》 CAS 2006年第3期265-266,共2页
目的 建立用NEST—PCR快速检测登革热病毒的方法。方法 通用引物对样本进行RT—PCR扩增,然后用分型引物进行NEST—PCR,根据产物条带的位置分型。结果 标准毒株的扩增结果与预期结果相同,血清登革热病毒在病程2~5d的阳性率高于6~9d... 目的 建立用NEST—PCR快速检测登革热病毒的方法。方法 通用引物对样本进行RT—PCR扩增,然后用分型引物进行NEST—PCR,根据产物条带的位置分型。结果 标准毒株的扩增结果与预期结果相同,血清登革热病毒在病程2~5d的阳性率高于6~9d的阳性率,分别为6/7和2/6。结论 NEST—PCR方法是一个快速、准确检测登革热的方法,但它更适用于早期临床检测。 展开更多
关键词 登革热病毒 NEST—PCR RT—PCR
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应用RT-nest-PCR法检测慢性髓细胞白血病非亲缘异基因骨髓移植后微小残留病变
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作者 薛军 王云贵 +1 位作者 黄河 林茂芳 《临床血液学杂志》 CAS 2007年第2期93-95,共3页
目的:应用筑巢式RT—PCR(RT—nest—PCR)法检测慢性髓细胞性白血病(CML)患者非亲缘异基因骨髓移植(URD)后微小残留病变(MRD),并探讨它与复发的相关性。方法:分别采用RT-nest-PCR法和常规细胞遗传学方法检测bcr/abl融合基因和Ph染色体... 目的:应用筑巢式RT—PCR(RT—nest—PCR)法检测慢性髓细胞性白血病(CML)患者非亲缘异基因骨髓移植(URD)后微小残留病变(MRD),并探讨它与复发的相关性。方法:分别采用RT-nest-PCR法和常规细胞遗传学方法检测bcr/abl融合基因和Ph染色体。结果:20例CML行URD患者术前Ph染色体和bcr/abl融合基因检测均为阳性,移植术后30 d Ph染色体皆转为阴性,bcr/abl融合基因完全转阴时间为1~3个月,中位时间2个月;在随防的18例CML患者中,有16例患者bcr/abl融合基因完全转阴后没再转为阳性。在1例复发的CML患者中可见到血型、Ph染色体和bcr/abl融合基因动态变化,另1例CML患者在移植成功后的21个月和36个月检测到bcr/abl融合基因,经随访未见临床和血液学复发征象。结论:检测ber/abl融合基因是目前观察CML患者非亲缘异基因骨髓移植后微小残留病变最敏感的方法之一,非亲缘异基因骨髓移植能最大限度地消除CML患者体内残留病变,患者能长期无病生存。 展开更多
关键词 白血病 髓细胞性 BCR/ABL融合基因 筑巢式逆转录聚合酶链反应 非亲缘异基因骨髓移植 微小残留病变 PH染色体
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湖北省1例输血性恶性疟流行病学调查和溯源
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作者 孙凌聪 吴冬妮 +6 位作者 刘斯 朱红 涂珍 易佳 董小蓉 林文 夏菁 《中国热带医学》 北大核心 2026年第2期290-293,共4页
目的对2024年6月报告的1例感染来源不明的恶性疟患者开展流行病学调查和溯源分析,以明确其传染源和传播途径,增强应急处置能力。方法对该患者开展详尽的流行病学调查,收集其临床资料。对患者和供血者(疑似传染源)的血样,采用血涂片镜检... 目的对2024年6月报告的1例感染来源不明的恶性疟患者开展流行病学调查和溯源分析,以明确其传染源和传播途径,增强应急处置能力。方法对该患者开展详尽的流行病学调查,收集其临床资料。对患者和供血者(疑似传染源)的血样,采用血涂片镜检、疟疾快速诊断试验(rapid diagnostic test,RDT)和巢式PCR等3种方法进行检测。并对巢式PCR扩增阳性产物测序后进行同源性对比。结果该患者无既往疟疾感染史和疟疾流行区旅行史,外周血涂片镜检诊断为恶性疟原虫感染,RDT和巢式PCR检测均为恶性疟原虫阳性。经流行病学调查,患者2024年5月19日至27日住院期间曾接受3次输血,血源分别来自3名供血者,供血者留存血样巢式PCR检测显示1名赤道几内亚籍留学生留存血样恶性疟原虫阳性。患者与供血者2个基因片段SSU rRNA、PfMSP1的巢式PCR扩增产物序列同源性为100%。结论该患者为输血传播恶性疟患者,因输入非洲籍留学生血液而感染。 展开更多
关键词 恶性疟 输血 溯源 疟疾 血涂片镜检 疟疾快速诊断试验 巢式PCR
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苹果软枝病毒1巢式RT-PCR检测方法的建立及应用
6
作者 刘成龙 范旭东 +2 位作者 任芳 胡国君 董雅凤 《植物病理学报》 北大核心 2026年第1期181-184,共4页
苹果软枝病(apple rubbery wood disease, ARWD)是一种重要的苹果病毒病害,最早于1935年在英国苹果‘Lord Lambourne’上被发现[1-2]。主要影响木质素合成,进而使苹果的茎和枝条异常柔软,容易弯曲折断;还可以引起节间缩短,发育延迟,使... 苹果软枝病(apple rubbery wood disease, ARWD)是一种重要的苹果病毒病害,最早于1935年在英国苹果‘Lord Lambourne’上被发现[1-2]。主要影响木质素合成,进而使苹果的茎和枝条异常柔软,容易弯曲折断;还可以引起节间缩短,发育延迟,使树体对冷胁迫的敏感性增加[3-5]。在种植‘金冠’、‘嘎啦’等感病品种的地区或国家,可导致苹果减产30%[6-7]。 展开更多
关键词 木质素合成 苹果软枝病 RT-PCR检测
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基于多重巢式聚合酶链式反应和毛细管电泳检测三种食源性致病菌
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作者 李俊杰 王惺雅 +5 位作者 杨浩楠 魏娜 赵丽颖 朱淑云 朱建华 何文森 《食品与发酵工业》 北大核心 2026年第4期242-250,共9页
该研究旨在利用多重巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)与毛细管电泳技术建立快速检测大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的方法。该文以大肠埃希氏菌β-葡萄糖苷酶基因(uidA基因)、鼠伤寒沙门氏菌毒力基因(... 该研究旨在利用多重巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)与毛细管电泳技术建立快速检测大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的方法。该文以大肠埃希氏菌β-葡萄糖苷酶基因(uidA基因)、鼠伤寒沙门氏菌毒力基因(hilA基因)和金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因(nuc基因)为靶标,设计3对嵌套式引物进行2轮扩增,利用毛细管电泳分析产物,通过对2轮巢式PCR退火温度的优化,建立3种食源性致病菌的多重巢式PCR-毛细管电泳检测方法。3对嵌套式引物特异性良好,2轮巢式PCR最佳退火温度分别为54℃和56℃,对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌检测灵敏度可达10^(1)copies,对鼠伤寒沙门氏菌检测灵敏度可达10^(3)copies。该方法快速、准确和高灵敏,适用于能提取DNA的食品样本中3种食源性致病菌的检测,为食源性致病菌的检测提供新方案。 展开更多
关键词 多重巢式PCR 毛细管电泳 食源性致病菌 特异性 灵敏度
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16SrⅡ组槟榔黄化植原体巢式PCR检测方法的建立
8
作者 林兆威 唐庆华 +2 位作者 于少帅 龙仕达 宋薇薇 《热带作物学报》 北大核心 2026年第3期694-701,共8页
在中国,引起槟榔黄化病(areca palm yellow leaf disease,AYLD)的植原体主要有16SrⅠ组、16SrⅡ组及16SrXXXⅡ组3个种群,但目前的检测技术主要针对16SrⅠ组或3个种群的共同检测,缺乏对16SrⅡ组植原体的特异性识别手段。为了对16SrⅡ组... 在中国,引起槟榔黄化病(areca palm yellow leaf disease,AYLD)的植原体主要有16SrⅠ组、16SrⅡ组及16SrXXXⅡ组3个种群,但目前的检测技术主要针对16SrⅠ组或3个种群的共同检测,缺乏对16SrⅡ组植原体的特异性识别手段。为了对16SrⅡ组槟榔黄化植原体进行特异性检测,本研究基于16SrⅡ组植原体核糖体蛋白(rp)基因序列,设计并筛选特异性巢式PCR引物,并对该方法的特性及其应用效果进行评估。结果显示,在准确性方面,该方法能准确区分出阳性和阴性样品;在敏感性比较中,该方法敏感性高于16S rRNA和tuf基因的通用巢式PCR检测;在特异性评估中,16SrⅠ组和16SrXXXⅡ组植原体、供试的槟榔病原及内生菌均对本方法未造成干扰;在应用中,从海南文昌采集的22份槟榔样品检测出4份阳性样品,并且可检测出属于16SrⅡ组的银胶菊丛枝植原体、皱子鸟足菜丛枝植原体及花生丛枝植原体,表现出较好的适用性。综上,本研究建立的基于rp基因的巢式PCR方法对16SrⅡ组槟榔黄化植原体检测具有较好的特异性,可为16SrⅡ组槟榔黄化植原体的田间诊断、病情监测提供技术参考。 展开更多
关键词 槟榔 槟榔黄化病 植原体检测 巢式PCR
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猪细小病毒巢式PCR检测方法的建立
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作者 郑佳 仇德洋 +2 位作者 曹志 姜莉群 吕延飞 《中国动物检疫》 2026年第3期89-94,共6页
为建立猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的鉴别检测方法,针对编码PPV非结构蛋白1的基因(NS1)序列,分别设计了1对内套引物和1对外套引物,经优化反应条件,成功建立了PPV巢式PCR检测方法。该方法仅能特异性扩增PPV,对其他猪源病毒扩增... 为建立猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的鉴别检测方法,针对编码PPV非结构蛋白1的基因(NS1)序列,分别设计了1对内套引物和1对外套引物,经优化反应条件,成功建立了PPV巢式PCR检测方法。该方法仅能特异性扩增PPV,对其他猪源病毒扩增均呈阴性,特异性好;对PPV重组质粒的检测限为5.60×10^(1) copies/μL,灵敏度高;组内和组间试验中,在同等扩增条件下,均出现同样的目的条带,重复性好。应用本研究建立的方法对76份临床样品进行检测,并将其检测结果与常规PCR进行比对,符合率为96.05%。结果表明,本研究建立的PPV巢式PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,为PPV感染的临床检测和及时防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 巢式PCR 猪细小病毒 检测方法 NS1蛋白
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啮齿类实验动物4种常见病原菌多重巢式PCR检测方法的建立与初步应用 被引量:1
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作者 席晓霞 孙婧 +3 位作者 郭家熙 张丽娟 刘晓玲 段天林 《中兽医医药杂志》 2025年第4期18-25,共8页
建立一种检测啮齿类实验动物鼠伤寒沙门菌、鼠棒状杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等4种常见致病菌的多重巢式PCR检测方法,在此基础上,采用咽拭子和肛拭子等采样方法优化检测流程。试验针对病原菌16S rDNA序列保守区和可变区,通过... 建立一种检测啮齿类实验动物鼠伤寒沙门菌、鼠棒状杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等4种常见致病菌的多重巢式PCR检测方法,在此基础上,采用咽拭子和肛拭子等采样方法优化检测流程。试验针对病原菌16S rDNA序列保守区和可变区,通过引物长短差异分别设计通用引物和特异性引物,通过巢式PCR检测各种样本中的病原菌。结果显示,优化后的四重巢式PCR方法可对同一样品中的4种致病菌模板进行特异性扩增,无交叉反应;多重巢式PCR方法可从标准菌株DNA模板中扩增出待检病原菌DNA片段,而阴性对照组均未能检出;多重巢式PCR方法的检测灵敏度明显高于普通多重PCR方法(≤10-2pg/μL vs≤1 pg/μL);多重巢式PCR方法可从混合感染的样本中特异性地检测出4种致病菌;在实际应用中,多重巢式PCR可检测出病原菌感染的阳性样本,且检出率高于普通多重PCR方法。本试验建立的4种病原菌多重巢式PCR检测方法可同时检测动物咽拭子或肛拭子等临床样本中的多种病原菌,与普通多重PCR方法相比,该方法具有省时省力、灵敏性高、特异性强等优点。 展开更多
关键词 多重巢式PCR 鼠伤寒沙门菌 鼠棒状杆菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
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水貂震颤综合征-星状病毒的检测及半巢式RT-PCR检测方法的建立
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作者 王旭 刘德凯 +3 位作者 赵碧田 黄泽楷 李海名 张彦龙 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期143-150,共8页
为探究黑龙江省某水貂养殖场幼貂发生疑似水貂震颤综合征(shaking mink syndrome,SMS)继发死亡的病原并针对病原建立特异性强、灵敏度高的检测方法,试验首先采集3只病死幼貂的脑、肝脏、肾脏和肺脏组织标本,经H.E.染色制作成病理切片进... 为探究黑龙江省某水貂养殖场幼貂发生疑似水貂震颤综合征(shaking mink syndrome,SMS)继发死亡的病原并针对病原建立特异性强、灵敏度高的检测方法,试验首先采集3只病死幼貂的脑、肝脏、肾脏和肺脏组织标本,经H.E.染色制作成病理切片进行组织病理学观察,采用RT-PCR方法对水貂常见病原[星状病毒(Astrovirus,AstV)、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)、阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)]进行检测,并对检测的病原进行遗传进化分析;然后建立针对病原建立半巢式RT-PCR检测方法,对建立的方法进行条件(退火温度、Taq酶体积、引物体积)优化、特异性试验、敏感性试验、重复性试验,并采用该方法对119份病死幼貂的脑组织样本进行检测。结果表明:病死水貂大脑-皮质内部分神经细胞变性、坏死,皮质内部分血管周围有炎性细胞浸润,出现管套现象,皮质内胶质细胞散在性浸润,与神经毒性AstV引起的特征性病理变化相似;其他组织未见明显病理变化。从病死幼貂脑组织中仅检测到AstV,命名为SMS-AstV-Harbin。从基于AstV ORF1b基因构建的遗传进化树中可见,SMS-AstVHarbin与Mink astrovirus isolate-SMS-AstV(登录号为GU985458.1)处于同一小分支,亲缘关系较近;与Human astrovirus UK1(登录号为KM358468.1)、Canine astrovirus strain HUN/2012/8(登录号为KX599354.1)、Feline astrovirus 2(登录号为KF499111.1)、Porcine astrovirus 3 strain NI-Brain/173-2016a/HUN(登录号为KY073231.1)、Bovine astrovirus CH13(登录号为KM035759.1)、Ovine astrovirus 2(登录号为NC_002469.1)处于不同小分支,亲缘关系较远。建立的半巢式RT-PCR检测方法的最优退火温度、Taq酶(5 U/μL)体积和引物(10μmol/L)体积分别为52℃、0.5μL和1μL。该方法能特异性地检出SMS-AstV,其cDNA最低检测限为1 pg/μL,且对3份样本的3次重复检测结果均一致。采用该方法检出SMS-AstV阳性样本117份,阳性率为98.32%。说明引起该养殖场幼貂死亡的病原为SMS-AstV,针对该病原建立的半巢式RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于快速检测。 展开更多
关键词 水貂震颤综合征 水貂星状病毒 病理学观察 病毒鉴定 遗传进化分析 半巢式RT-PCR方法
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西藏日喀则地区羊梨形虫病原调查和分析 被引量:1
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作者 朱浩瀚 赵帅阳 +6 位作者 张少华 张楚晗 苏书晓 关贵全 殷宏 罗建勋 刘军龙 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第3期39-43,共5页
为了解我国西藏自治区日喀则市藏羊梨形虫病的流行情况,本试验采集了366份藏羊血液样品并提取基因组DNA,采用巢式PCR方法对藏羊梨形虫病病原进行检测和鉴定,并基于梨形虫18S rRNA基因序列构建系统进化树。结果显示,梨形虫阳性率为35.79%... 为了解我国西藏自治区日喀则市藏羊梨形虫病的流行情况,本试验采集了366份藏羊血液样品并提取基因组DNA,采用巢式PCR方法对藏羊梨形虫病病原进行检测和鉴定,并基于梨形虫18S rRNA基因序列构建系统进化树。结果显示,梨形虫阳性率为35.79%(131/366),其中绵羊泰勒虫阳性率为35.25%(129/366),环形泰勒虫阳性率为0.55%(2/366);系统进化树结果显示,该地区绵羊泰勒虫与中国新疆株(GenBank:FJ603460)、土耳其株(GenBank:AY260172)和苏丹株(GenBank:AY260171)处于同一分支;环形泰勒虫与意大利株(GenBank:MT341858)、土耳其株(GenBank:524666)和中国内蒙古株(GenBank:EU083801)处于同一分支。本试验首次报道了西藏地区存在绵羊泰勒虫,为西藏地区羊梨形虫病的流行病学调查和综合防控提供了数据参考。 展开更多
关键词 藏羊 梨形虫 巢式PCR 系统进化树 流行病学调查
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甘肃省犬巴贝斯虫病分子流行病学调查 被引量:1
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作者 李娇 王锦明 +3 位作者 关贵全 王桂荣 叶得河 马永华 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期188-194,共7页
本研究从甘肃兰州、陇南、天水等14个地区共收集宠物犬抗凝血1628份,采用吉姆萨染色和PCR方法进行检测,并对阳性样本进行18S rRNA基因测序,将测序结果与GenBank中收录的巴贝斯虫基因序列进行同源性分析,构建分子系统进化树。结果显示,... 本研究从甘肃兰州、陇南、天水等14个地区共收集宠物犬抗凝血1628份,采用吉姆萨染色和PCR方法进行检测,并对阳性样本进行18S rRNA基因测序,将测序结果与GenBank中收录的巴贝斯虫基因序列进行同源性分析,构建分子系统进化树。结果显示,全省感染率为3.13%(51/1628)。以18S rRNA为靶基因的遗传分析发现,甘肃地区流行的虫株与陕西分离株、河南分离株、日本分离株、印度分离株的B.gibsoni处于同一分支,表明甘肃地区犬感染的巴贝斯虫种类为B.gibsoni。通过本次调查研究发现甘肃省犬巴贝斯虫的感染情况和流行优势虫种。可为甘肃省的犬巴贝斯虫病的防治提供流行病学数据。 展开更多
关键词 18S rRNA 吉氏巴贝斯虫 巢氏PCR扩增技术 分子生物学诊断
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应用巢式PCR对猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法
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作者 刘龑 徐蕴博 +4 位作者 张琦 徐倩倩 尹智 刘忠华 翁晓刚 《东北农业大学学报》 北大核心 2025年第4期47-55,共9页
为建立1种准确可靠的猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法,将不同数量细胞样本进行DNA提取纯化后进行PCR扩增,结果表明:当使用纯化的DNA模板进行1轮PCR扩增时,SRY/ZFX引物可在10个细胞中有效扩增,而AMEL和SUSY/SUS12S引物仅在50个细胞以上有... 为建立1种准确可靠的猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法,将不同数量细胞样本进行DNA提取纯化后进行PCR扩增,结果表明:当使用纯化的DNA模板进行1轮PCR扩增时,SRY/ZFX引物可在10个细胞中有效扩增,而AMEL和SUSY/SUS12S引物仅在50个细胞以上有效。与纯化DNA模板相比,使用细胞裂解液进行PCR扩增的效果更优,但单次PCR中SUSY/SUS12S和AMEL引物在1或10个细胞样本中未检测到特异性条带。通过设计巢式PCR引物,成功在单细胞中扩增目标基因,特别是AMEL引物效果最佳,并通过Y染色体DNA-FISH检测验证PCR结果准确性。此外,通过在体外受精囊胚中测试建立的巢式PCR方法,表现出良好特异性。 展开更多
关键词 胚胎 单细胞 巢式PCR 性别鉴定
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若尔盖县高原鼠兔贾第虫及隐孢子虫分子流行病学调查
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作者 陈虹汐 向阳 +4 位作者 吉克日洪 陈天祥 袁东波 朱良全 郝力力 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期331-338,共8页
目的了解四川省若尔盖县高原鼠兔贾第虫(Giardia)和隐孢子虫(Cryptosporidium)感染情况。方法2023年3月至12月,在若尔盖县5个乡镇(达扎寺镇、阿西镇、红星镇、唐克乡和麦溪乡)捕获高原鼠兔,取肠胃内容物并提取DNA,针对贾第虫bg、gdh、tp... 目的了解四川省若尔盖县高原鼠兔贾第虫(Giardia)和隐孢子虫(Cryptosporidium)感染情况。方法2023年3月至12月,在若尔盖县5个乡镇(达扎寺镇、阿西镇、红星镇、唐克乡和麦溪乡)捕获高原鼠兔,取肠胃内容物并提取DNA,针对贾第虫bg、gdh、tpi基因和隐孢子虫SSU rRNA(小亚基核糖体RNA)基因进行巢式PCR扩增;将PCR阳性样本测序后得到的序列进行剪切、比对并构建遗传进化树,以确定扩增序列所属的虫种和基因型。结果共捕获114只鼠兔,采集肠道内容物和胃内容物各114份。bg基因检出贾第虫阳性44份;gdh基因检出贾第虫阳性14份,总检出率43.9%(50/114)。共检出2种贾第虫集聚体[集聚体E和1种新的集聚体Assemblage OC1(暂命名)];SSU rRNA基因检出隐孢子虫阳性8份,总检出率7.0%(8/114),检出3种新的基因型。部分样本存在混合感染,检出率为3.5%(4/114)。结论若尔盖县高原鼠兔感染贾第虫为蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)和Giardia sp.(REG-1、REG-2),集聚体E为该地区优势集聚体,且存在一种新的集聚体Assemblage OC1;感染的隐孢子虫为Cryptosporidium sp.(REG-1、REG-2和REG-3)。应加强对若尔盖地区贾第虫和隐孢子虫的监测,为当地公共卫生提供重要的数据支撑。 展开更多
关键词 高原鼠兔 蓝氏贾第鞭毛虫 隐孢子虫 巢式PCR 流行病学
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鸡毒支原体套式PCR检测方法的建立及初步应用
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作者 周鲁阳 陈学圣 +9 位作者 宋法慧 吴际坤 俞长旭 王傲菲 魏书琦 杨硕 汪建华 张瑞华 姜世金 朱岩丽 《中国家禽》 北大核心 2025年第6期162-168,共7页
为建立一种快速实用的检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的方法,试验根据MG黏附蛋白的mgc2基因序列,选择其保守区域的基因片段,设计两对特异性引物,通过对反应条件和试剂浓度进行优化,建立鸡毒支原体套式PCR检测方法,并应用... 为建立一种快速实用的检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的方法,试验根据MG黏附蛋白的mgc2基因序列,选择其保守区域的基因片段,设计两对特异性引物,通过对反应条件和试剂浓度进行优化,建立鸡毒支原体套式PCR检测方法,并应用该方法检测鸭的临床样品。结果显示,建立的检测方法与其他病原体无交叉反应,特异性良好,MG DNA模板检测限为5×10^(-6) ng/μL,其敏感性是常规PCR的1000倍以上,且批内和批间试验重复性良好;利用该方法对临床病死鸭胚与咽、肛拭子混合样本的检出率分别为10%(5/50)和33%(21/63)。研究表明,建立的MG套式PCR检测方法具有特异性强、灵敏度高等优点,适用于鸭群中MG早期感染的检测,为MG的检测和防控及分子流行病学调查提供有力的检测手段。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 套式PCR mgc2
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内蒙古自治区部分地区鼠携带戊型肝炎病毒的调查分析
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作者 王珊珊 司晓艳 +5 位作者 张萌萌 罗曼 闫真 李利利 南晓伟 张忠兵 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第9期925-931,共7页
目的调查内蒙古自治区鼠戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)携带情况。方法2024年在内蒙古自治区呼和浩特市、包头市、呼伦贝尔市、兴安盟、通辽市、赤峰市、锡林郭勒盟、乌兰察布市、鄂尔多斯市、巴彦淖尔市和乌海市共11个盟市采集... 目的调查内蒙古自治区鼠戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)携带情况。方法2024年在内蒙古自治区呼和浩特市、包头市、呼伦贝尔市、兴安盟、通辽市、赤峰市、锡林郭勒盟、乌兰察布市、鄂尔多斯市、巴彦淖尔市和乌海市共11个盟市采集鼠的肝、脾、肾、肺组织样本,采用巢氏PCR(RT-PCR),检测HEV开放阅读框1(ORF1)基因保守区域,RT-PCR阳性产物测序后,对序列进行系统发育分析和同源性分析。结果此次调查捕获鼠816只,其中褐家鼠319只(39.09%,319/816),小家鼠206只(25.25%,206/816),长爪沙鼠140只(17.16%,140/816)。内蒙古地区鼠HEV感染率为3.68%(30/816),对RT-PCR检测阳性结果测序,分析碱基序列,获得30份鼠HEV的阳性样本,基因进化分析为HEV-C1型。内蒙古地区兴安盟、赤峰市、呼伦贝尔市、锡林郭勒盟、通辽市5个盟市的褐家鼠存在HEV的流行,带毒率分别为:16.67%、10.00%、5.98%、3.30%、2.50%。结论褐家鼠携带多种HEV的亚型均可引起人兽共患病,应加强人居环境周边鼠携带病原体的监测,优化鼠传疾病的防治工作,并应做好相关传染病的科普宣传,降低人群感染风险。 展开更多
关键词 戊肝病毒 巢氏PCR 遗传进化分析 内蒙古自治区
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福建省常见库蠓种类巢式PCR分子鉴定及遗传分析方法的建立
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作者 张圣昀 陈朱云 +1 位作者 肖丽贞 王金章 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第3期403-408,共6页
目的基于巢式PCR技术,建立一种福建省常见库蠓种类的分子鉴定方法,并开展库蠓的遗传进化分析。方法2023年6月—2024年7月,在福建省内采用灯诱法采集蠓虫,制作成玻片标本后进行形态学鉴定。设计、合成库蠓线粒体细胞色素C氧化酶亚基1(co... 目的基于巢式PCR技术,建立一种福建省常见库蠓种类的分子鉴定方法,并开展库蠓的遗传进化分析。方法2023年6月—2024年7月,在福建省内采用灯诱法采集蠓虫,制作成玻片标本后进行形态学鉴定。设计、合成库蠓线粒体细胞色素C氧化酶亚基1(cox1)序列的巢式PCR特异性引物。提取蠓虫基因组DNA,分别进行巢式PCR和普通PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后与形态学鉴定结果进行比较。巢式PCR扩增产物测序后使用SeqMan Pro软件拼接,BLAST比对核苷酸同源性。使用Clustal X软件对cox1序列进行比对分析。使用WinArl35、popart软件绘制单倍型网络图并计算单倍型多样性指数(Hd)。利用MEGA 11软件对样品序列进行特征分析,使用邻接法构建系统进化树。基于P距离模型,计算不同种类库蠓种群内、种群间的遗传距离。结果共采集35份蠓虫样品,经形态学鉴定为12种蠓虫,分别为荒川库蠓、原野库蠓、尖喙库蠓、霍飞库蠓、北京库蠓、苏岛库蠓、多斑库蠓、棒须库蠓、环基库蠓、东方库蠓、中华细蠓和武夷蠛蠓。巢式PCR结果显示,形态学鉴定为库蠓的29份DNA样品均能扩增出特异性条带,库蠓检出率为100%(29/29);普通PCR结果显示,形态学鉴定为库蠓的29份DNA样品仅17份扩增出亮度较低的特异性条带,库蠓检出率为58.6%(17/29)。BLSAT结果显示,形态学鉴定为环基库蠓的4条cox1序列与GenBank中C.flumineus(ON002367)的序列一致性最高,为91.64%~91.78%,与环基库蠓参考序列(KY441782)的一致性仅为84.78%~84.87%;形态学鉴定为东方库蠓的3条cox1序列与C.flumineus(ON002367)的序列一致性最高,为91.64%~91.78%,与东方库蠓参考序列(KT352219)的一致性仅为81.93%~82.42%;其他22条cox1序列的BLSAT结果与形态学鉴定结果一致,序列一致性为86.78%~100%。cox1单倍型网络图结果显示,29条cox1序列共有22个单倍型,不同种类库蠓间的遗传变异水平差异较大(Hd=0.9680)。系统进化树结果显示,29条cox1序列均按照其所属亚属在进化树上聚集。遗传距离分析结果显示,各种类库蠓间遗传距离范围在0.0004~0.2229;种内遗传距离范围在0.0000~0.0062。结论建立了基于巢式PCR技术建立的分子鉴定方法,该法能够适用于福建省内多种常见库蠓的鉴定。 展开更多
关键词 库蠓 巢式PCR 线粒体细胞色素C氧化酶亚基1 分子鉴定 遗传进化
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燕麦炭疽病菌巢式PCR快速检测方法的建立
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作者 付鹏 赵弋锐 +4 位作者 张金凤 孙小涵 杨天星 赵祥 高鹏 《植物病理学报》 北大核心 2025年第3期487-495,共9页
由禾谷炭疽菌(Colletotrichum cereale)引起的燕麦炭疽病是影响燕麦产量和品质的主要病害,建立准确、快速的检测方法是及时监测和防治燕麦炭疽病的关键。本研究基于ITS区序列设计特异性引物ITS-2F/ITS-2R,将其与通用引物ITS1/ITS4组合... 由禾谷炭疽菌(Colletotrichum cereale)引起的燕麦炭疽病是影响燕麦产量和品质的主要病害,建立准确、快速的检测方法是及时监测和防治燕麦炭疽病的关键。本研究基于ITS区序列设计特异性引物ITS-2F/ITS-2R,将其与通用引物ITS1/ITS4组合成巢式PCR引物组,在优化的反应条件和反应体系下可稳定扩增出287 bp单一明亮的目的条带,可检测的最低DNA浓度达1 fg·μL^(-1),利用该方法对燕麦叶片、燕麦种子及种植地土壤样本进行检测,均能够特异地检测到C.cereale。该方法具有快速、准确、高效、灵敏度高等特点,可用于燕麦炭疽病的田间诊断和检测,为及时开展病害防控提供科学依据。 展开更多
关键词 燕麦 炭疽病 燕麦炭疽病菌 巢式PCR 快速检测
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西藏自治区部分地区家犬细粒棘球绦虫和十二指肠贾第虫感染情况调查
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作者 杨涛 郝力力 +9 位作者 拉巴次仁 党发发 旺扎 益西尊姆 向阳 次仁桑珠 白玛玉珍 普布卓玛 宁立宏 冯青 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第4期28-36,共9页
为了解西藏部分地区家犬感染细粒棘球绦虫和十二指肠贾第虫的基本情况,本试验基于细粒棘球绦虫烟酰胺脱氢酶亚基Ⅰ(nadⅠ)基因以及十二指肠贾第虫磷酸丙糖异构酶(tpi)、β-贾第素(bg)和谷氨酸脱氢酶(gdh)基因,采用巢式PCR方法对采集自... 为了解西藏部分地区家犬感染细粒棘球绦虫和十二指肠贾第虫的基本情况,本试验基于细粒棘球绦虫烟酰胺脱氢酶亚基Ⅰ(nadⅠ)基因以及十二指肠贾第虫磷酸丙糖异构酶(tpi)、β-贾第素(bg)和谷氨酸脱氢酶(gdh)基因,采用巢式PCR方法对采集自拉萨市和林芝市4个乡镇(工卡镇、日多乡、娘蒲乡和加兴乡)的553份家犬粪便样本进行检测,并对PCR阳性产物进行测序、序列比对和遗传进化分析,从而确定细粒棘球绦虫和十二指肠贾第虫的感染情况和遗传进化关系。结果显示,本试验共检出57份细粒棘球绦虫阳性样本,总阳性率为10.3%(57/553),遗传进化分析结果显示,阳性样本为细粒棘球绦虫G5基因型[奥氏棘球绦虫(Echinococcus ortleppi)];共检出46份十二指肠贾第虫阳性样本,总阳性率为8.3%(46/553),遗传进化分析结果显示,阳性样本基因型为十二指肠贾第虫集聚体C、D和G。结果表明,西藏部分地区家犬细粒棘球绦虫和十二指肠贾第虫感染率均较高,家犬粪便中检出的细粒棘球绦虫G5基因型目前在我国报道较少,检出的十二指肠贾第虫集聚体G仅感染啮齿类动物,提示调查地区细粒棘球绦虫和十二指肠贾第虫出现了新的流行情况。本试验为当地犬寄生虫病的防控提供了重要数据支撑,后期应进一步加强犬只监测,并做好相应的管理和驱虫工作。 展开更多
关键词 家犬 细粒棘球绦虫 十二指肠贾第虫 巢式PCR G5基因型 集聚体G
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