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莱茵衣藻新黄素合成相关蛋白质的挖掘与分析 被引量:1
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作者 梁颖怡 赵安宿 +4 位作者 王瑞曦 沈天虹 马欣荣 王敏 骆健美 《生物技术通报》 北大核心 2025年第11期190-200,共11页
【目的】新黄素是一种广泛存在于绿色植物中的脂溶性类胡萝卜素,不仅是光合作用中不可或缺的关键色素,还具有抗氧化等多种重要的生理功能。深入分析影响新黄素合成的培养条件及相关蛋白质,对其产量提升具有重要意义。【方法】以模式微... 【目的】新黄素是一种广泛存在于绿色植物中的脂溶性类胡萝卜素,不仅是光合作用中不可或缺的关键色素,还具有抗氧化等多种重要的生理功能。深入分析影响新黄素合成的培养条件及相关蛋白质,对其产量提升具有重要意义。【方法】以模式微藻莱茵衣藻为对象,考察不同培养条件(缺氮、缺硫、光照强度)对新黄素合成的影响;基于生物信息学分析、RNA干扰技术、转录水平和HPLC检测相结合的方法,挖掘影响莱茵衣藻中新黄素合成的相关蛋白质。【结果】光照强度从3000 lx提高到4000 lx时,莱茵衣藻的新黄素含量提高16.1%,而缺氮和缺硫条件下的新黄素含量分别比正常条件下降37.2%和42.6%。3个含有DUF4281功能域的假定蛋白质中,nxs2和nxs3转录水平的下降使得新黄素含量分别提高17.4%和33.7%,而nxs1的干扰无明显影响。进一步分析发现,4000 lx光照和缺硫条件下,nxs3的转录水平分别降低30.4%和提高34.0%,该变化分别与新黄素含量在4000 lx条件下的上升和缺硫条件下的下降趋势对应。【结论】4000 lx光照条件比3000 lx更有利于新黄素合成,缺氮和缺硫条件则产生抑制作用。nxs2和nxs3负向调控莱茵衣藻的新黄素合成,而nxs1无显著影响。 展开更多
关键词 新黄素 莱茵衣藻 培养条件 相关蛋白质 RNAI 转录水平
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辣椒叶片中新黄质、紫黄质组分分离及含量的测定方法 被引量:1
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作者 王小龙 郁继华 +1 位作者 吴天珍 颉建明 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期307-312,共6页
为建立辣椒叶片中新黄质和紫黄质组分分离及含量测定的高效液相色谱检测方法,为辣椒品种耐性的研究提供方法依据。以KOH-甲醇溶液为皂化液,对其质量浓度、体积、皂化温度、皂化时间进行筛选,对提取溶剂、提取溶剂用量以及流动相、柱温... 为建立辣椒叶片中新黄质和紫黄质组分分离及含量测定的高效液相色谱检测方法,为辣椒品种耐性的研究提供方法依据。以KOH-甲醇溶液为皂化液,对其质量浓度、体积、皂化温度、皂化时间进行筛选,对提取溶剂、提取溶剂用量以及流动相、柱温、流速等色谱条件进行筛选,确定最佳提取工艺及检测条件。结果表明:建立以10 m L 80%丙酮为提取溶剂、以6 m L 200 g/L的KOH-甲醇溶液为皂化液,50℃皂化30 min为皂化条件的提取工艺;以C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为A.乙腈,B.乙酸乙酯,C.水,波长440nm,流速1 m L/min,柱温35℃为色谱检测条件的高效液相色谱检测方法。外标法进行定量,新黄质、紫黄质标准曲线线性关系良好,相关系数为0.998 9和0.998 7,方法平均回收率>70%,方法符合色谱检测要求,可用于辣椒叶片中新黄质、紫黄质含量检测。 展开更多
关键词 辣椒叶片 新黄质 紫黄质 反相高效液相色谱法
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番茄红素β-环化酶和新黄质合酶功能差异关键氨基酸的发掘
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作者 王丽 赵子龙 +1 位作者 刘振 毛相朝 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第16期41-48,共8页
酶是天然存在的高效催化剂,长期的进化过程产生了诸多的同源酶,同源酶的序列相似高却有不同的功能,而导致功能差异的原因也倍受关注。类胡萝卜素合成过程中,番茄红素β-环化酶(lycopene β-cyclase,LCYB)和新黄质合酶(neoxanthin syntha... 酶是天然存在的高效催化剂,长期的进化过程产生了诸多的同源酶,同源酶的序列相似高却有不同的功能,而导致功能差异的原因也倍受关注。类胡萝卜素合成过程中,番茄红素β-环化酶(lycopene β-cyclase,LCYB)和新黄质合酶(neoxanthin synthase,NSY)序列高度相似但对番茄红素的环化功能不同,且并未有研究报道导致环化差异的原因。因此该研究选用氨基酸序列相似性为88.2%的枸杞来源LyLCYB和番茄来源SoNSY为研究对象,通过将基因soNSY的片段替换为lyLCYB对应位置的片段构建不同的嵌合体基因,并且利用定点突变策略构建差异位点的点突变蛋白,将改造后的基因在大肠杆菌中异源表达,测定其番茄红素环化活性。最终发现了219位点是导致LyLCYB和SoNSY番茄红素β-环化功能差异的关键氨基酸,为进一步探究影响其他来源的LCYB和NSY功能差异提供了理论支持。 展开更多
关键词 番茄红素Β-环化酶 新黄质合酶 嵌合体 差异氨基酸 大肠杆菌异源表达
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岩藻黄质关键前体新黄质的代谢工程合成 被引量:4
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作者 张桂林 张亚亭 +2 位作者 姜宏 刘振 毛相朝 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期57-65,共9页
岩藻黄质是海洋藻类中常见的叶黄素之一,尤其在褐藻中含量较高,具有抑菌、抗炎、抗肥胖、抗糖尿病、抗肿瘤、调节肠道菌群和抗器官纤维化等多种生理活性。新黄质是岩藻黄质的可能前体物质,首次在大肠杆菌(Escherichia coli)中构建新黄... 岩藻黄质是海洋藻类中常见的叶黄素之一,尤其在褐藻中含量较高,具有抑菌、抗炎、抗肥胖、抗糖尿病、抗肿瘤、调节肠道菌群和抗器官纤维化等多种生理活性。新黄质是岩藻黄质的可能前体物质,首次在大肠杆菌(Escherichia coli)中构建新黄质合成途径,首先构建了pTrc99a-crt EBIYZ质粒,该质粒携带5个来自于菠萝泛菌(Pantoea ananatis)的基因crt E、crt B、crt I、crt Y和crt Z,编码的蛋白分别是牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶、八氢番茄红素合成酶、八氢番茄红素脱氢酶、番茄红素环化酶和β-胡萝卜素羟化酶。将该质粒转入大肠杆菌中,得到了产玉米黄质的工程菌E.coli BL21 pTrc99a-crt EBIYZ,玉米黄质产量(细胞干质量,下同)为0.70 mg·g^(-1)。以产玉米黄质工程菌为宿主,将来自三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)的ZEP3基因去信号肽之后转入,得到产紫黄质的工程菌E.coli BL21 pTrc99a-crt EBIYZ p ACYCDuet-1-QZEP3。在紫黄质工程菌E.coli BL21 p Trc99a-crt EBIYZ p ACYCDuet-1-QZEP3的基础上转入新黄质合酶基因NSY,成功获得了产新黄质的工程菌E.coli BL21 NEO,新黄质产量为99.27μg·g^(-1),紫黄质产量为150.30μg·g^(-1),玉米黄质产量为119.77μg·g^(-1)。 展开更多
关键词 大肠杆菌 岩藻黄质 玉米黄质 紫黄质 新黄质 代谢工程
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