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进境美国苹果牛眼果腐病病原真菌(Neofabraea perennans)的鉴定 被引量:1
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作者 王卫芳 胡佳 +4 位作者 温庆秋 何瑞芳 于璇 胡学难 何日荣 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期457-465,共9页
【目的】探明进境截获的美国苹果牛眼果腐病的病原真菌种类,为评估病菌的入侵风险提供科学依据。【方法】对苹果(Malus domestica)腐烂果实的症状特点、病菌的形态特征与培养特性进行观察,对分离物的致病性和DNA序列进行分析。【结果... 【目的】探明进境截获的美国苹果牛眼果腐病的病原真菌种类,为评估病菌的入侵风险提供科学依据。【方法】对苹果(Malus domestica)腐烂果实的症状特点、病菌的形态特征与培养特性进行观察,对分离物的致病性和DNA序列进行分析。【结果】32批次腐烂果实均表现果梗凹腐烂症状,病部较坚硬,病斑圆形褐色,中央色浅形似牛眼状。累计从病果上分离46株菌株,菌落圆形,气生菌丝稀少,白色至乳白色,加深至黄褐色至黑褐色,并形成深浅褐色相间同心轮纹,菌丝体最适生长温度15~20℃,经柯赫法则证实为病原菌。在病果及PDA上,病菌形成奶油色胶质状分生孢子盘,分生孢子梗瓶梗状,大型分生孢子及小型分生孢子圆柱形、直或下部稍弯曲、无色透明、单胞。基于β-微管蛋白基因序列的系统发育分析,8个代表性的分离物与已知的苹果牛眼果腐病菌Neofabraea perennans聚在同一簇。【结论】根据症状学、形态学与致病性及系统发育分析,将屡次从进境美国苹果中截获的苹果牛眼果腐病病原真菌鉴定为Neofabraea perennans,是我国高度关注的进境植物检疫性有害生物,对我国果树的生产存在安全隐患。 展开更多
关键词 苹果牛眼果腐病 蔷薇科 neofabraea perennans 形态学 分子 Β-微管蛋白 系统发育分析
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PCR Detection of the Three <i>Neofabraea</i>Pathogenic Species Responsible for Apple Bull’s Eye Rot 被引量:1
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作者 Dongmei Cao Xin Li +1 位作者 Jijuan Cao Weifang Wang 《Advances in Microbiology》 2013年第1期61-64,共4页
Apple bull’s eye rot is caused by pathogenic Neofabraea species including N. malicorticis, N. perennans and N. alba. Fruits carrying this fungal quarantine disease are prohibited from entering China. The host plants ... Apple bull’s eye rot is caused by pathogenic Neofabraea species including N. malicorticis, N. perennans and N. alba. Fruits carrying this fungal quarantine disease are prohibited from entering China. The host plants for the pathogens include several Rosaceae fruits including apple and pear. Disease symptoms and pathogen morphology are often insufficient to determine the identity of the pathogen, particularly at the species level. In the current study, we analyzed the inter-species sequence variations in the β-tublin gene, and designed specific primers to allow PCR amplification of 554 bp fragments from pathogenic Neofabraea species. The PCR products were recovered and sequenced, and Blast search was conducted using the DNA sequences in the Genbank database. The results indicated precise PCR amplification of the target sequences from the host pathogen, which allowed unambiguous identification of the species. 展开更多
关键词 APPLE Bull’S Eye ROT neofabraea Spp PCR Detection
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猕猴桃果实中Neofabraea actinidiae的快速分子检测 被引量:2
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作者 张莹 罗加凤 +4 位作者 李碧鹰 胡佳续 刘鹏 唐芳 廖芳 《植物检疫》 北大核心 2020年第1期26-29,共4页
通过对已报道的猕猴桃果腐病菌(Neofabraea actinidiae)及明孢盘属其他种真菌负责编码RNA聚合酶II的第2大亚基(the second largest RNA polymerase subunit,RPB2)的基因序列进行同源性比对,设计合成了一对用于猕猴桃果实中N. actinidia... 通过对已报道的猕猴桃果腐病菌(Neofabraea actinidiae)及明孢盘属其他种真菌负责编码RNA聚合酶II的第2大亚基(the second largest RNA polymerase subunit,RPB2)的基因序列进行同源性比对,设计合成了一对用于猕猴桃果实中N. actinidiae的检测引物NACF1/NACR1。利用该引物对包括N. actinidiae在内的8种9株Neofabraea属真菌的基因组DNA进行扩增,建立了猕猴桃果实中N. actinidiae的快速分子检测方法,并进行了灵敏度试验、病菌接种与病果中N. actinidiae的检测。结果表明:该引物特异性强,稳定扩增出片段大小为582 bp单一条带,检测灵敏度为0.2 ng/μL,可以特异性地检测到接种发病果实组织中N. actinidiae。该方法能够实现猕猴桃果实中N. actinidiae的快速检测,为口岸提供了特异、高效、可靠的检测方法。 展开更多
关键词 猕猴桃果腐病菌 分子检测 RPB2 猕猴桃 接种
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TaqMan探针实时荧光PCR快速检测苹果牛眼果腐病菌方法的建立 被引量:3
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作者 林惠娇 王卫芳 +3 位作者 易建平 胡学难 何日荣 蒋湘 《植物检疫》 北大核心 2016年第2期55-62,共8页
苹果牛眼果腐病菌(Neofabraea malicorticis、N.perennans、N.alba和N.kienholzii)是我国检疫性植物病原真菌,为建立该病菌的实时荧光PCR检测法,根据病菌及其近缘种的翻译延伸因子(EF-1α)的保守序列设计了特异性探针,分别以苹果牛眼果... 苹果牛眼果腐病菌(Neofabraea malicorticis、N.perennans、N.alba和N.kienholzii)是我国检疫性植物病原真菌,为建立该病菌的实时荧光PCR检测法,根据病菌及其近缘种的翻译延伸因子(EF-1α)的保守序列设计了特异性探针,分别以苹果牛眼果腐病菌菌株和本研究构建的EF-1α重组质粒DNA为阳性标准品检验探针的特异性和灵敏度。结果显示探针MAL-P、PER-P、ALB-P和KIE-P分别对N.malicorticis、N.perennans、N.alba和N.kienholzii表现特异性阳性扩增,而与近缘种及其他常见的果腐病菌无交叉反应,单重探针和4种探针混合液的灵敏度分别达1 fg/μL和10 fg/μL DNA。总计从美国、智利、新西兰、法国进境截获的29批可疑病果的分离物中检测到PCR阳性荧光信号,包括20批N.perennans、8批N.alba和1批N.kienholzii。该方法在6 h内即可完成整个检测流程,其特异性强、灵敏度高,适用于实际样品中苹果牛眼果腐病菌的快速检测。 展开更多
关键词 苹果牛眼果腐病菌 neofabraea 快速检测 TAQMAN探针 实时荧光PCR
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明孢盘菌属分类进展及其重要的病原菌种类 被引量:7
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作者 林惠娇 王卫芳 +3 位作者 胡学难 蒋湘 冯黎霞 何日荣 《植物检疫》 北大核心 2016年第1期1-8,共8页
明孢盘菌属(Neofabraea)中很多种类是重要的植物病原菌。该属真菌分类历史较为复杂,系统发育关系也长期存在较大的争议。本文对明孢盘菌属的分类学研究历史做了系统回顾,包括属的建立、物种组成及其命名更替和系统发育,概述了该属重要... 明孢盘菌属(Neofabraea)中很多种类是重要的植物病原菌。该属真菌分类历史较为复杂,系统发育关系也长期存在较大的争议。本文对明孢盘菌属的分类学研究历史做了系统回顾,包括属的建立、物种组成及其命名更替和系统发育,概述了该属重要的植物病原菌种类地理分布和经济为害性,讨论了该属真菌物种的传统分类方法及分子研究方法,指出了存在的问题及今后的研究方向。 展开更多
关键词 明孢盘菌属 分类学 历史 系统发育 分布 危害
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PCR检测引起苹果牛眼果腐病的明孢盘菌属3个致病种 被引量:8
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作者 李鑫 曹际娟 +3 位作者 王有福 王卫芳 刘冉 朱水芳 《植物检疫》 北大核心 2013年第3期75-79,共5页
苹果牛眼果腐病是由明孢盘菌属真菌(Neofabraea alba、N.perennans、N.malicorticis和Neofabraea undescribed species)引起的,被中国列为禁止入境的检疫性真菌病害。该病菌的寄主植物包括苹果、梨在内的多种蔷薇科果树。根据症状特点... 苹果牛眼果腐病是由明孢盘菌属真菌(Neofabraea alba、N.perennans、N.malicorticis和Neofabraea undescribed species)引起的,被中国列为禁止入境的检疫性真菌病害。该病菌的寄主植物包括苹果、梨在内的多种蔷薇科果树。根据症状特点和病菌形态特征很难鉴定到种。本研究根据明孢盘菌属β-tublin基因的高度保守性,设计针对明孢盘菌属3个致病种(Neofabraea alba、N.perennans、N.malicorticis)的特异性引物,进行PCR扩增及电泳检测,表明该引物对3个致病种均可扩增出554bp片段,而对其他参试菌株无特异扩增。此外,对PCR产物进行回收、测序及Blast分析,可根据序列比对结果准确地鉴定到3个致病种的水平。 展开更多
关键词 苹果牛眼果腐病 明孢盘菌属 PCR 检测
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智利苹果中牛眼果腐病菌的分离鉴定研究 被引量:3
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作者 张裕君 罗加凤 +2 位作者 刘鹏 刘跃庭 廖芳 《植物检疫》 北大核心 2012年第2期47-49,共3页
天津检验检疫局从智利进口的腐病苹果中分离了一株真菌,通过菌落、分生孢子形态特征比较,ITS序列比对分析,并通过科赫氏法则验证,确定该菌株为牛眼果腐病菌(Neofabraea alba),该病菌是导致苹果牛眼果腐病的4种病原真菌之一,该有害生物... 天津检验检疫局从智利进口的腐病苹果中分离了一株真菌,通过菌落、分生孢子形态特征比较,ITS序列比对分析,并通过科赫氏法则验证,确定该菌株为牛眼果腐病菌(Neofabraea alba),该病菌是导致苹果牛眼果腐病的4种病原真菌之一,该有害生物为我国首次截获。 展开更多
关键词 牛眼果腐病菌 形态学 核糖体基因间隔序列
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进境苹果果实中苹果牛眼果腐病菌的检疫鉴定 被引量:2
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作者 张露茜 胡培龙 +5 位作者 李薇 于子翔 焦彬彬 易建平 于翠 杨翠云 《植物检疫》 北大核心 2016年第1期36-39,共4页
对来自美国的苹果进行了病原菌分离,结果在果实中分离到1株疑似苹果牛眼果腐病菌的菌株Nk-2968。对其进行了病原菌形态学观察、致病性测定并结合分子生物学方法检测,实验结果表明,菌株Nk-2968在PDA培养基上生长良好,能产生大量的分生孢... 对来自美国的苹果进行了病原菌分离,结果在果实中分离到1株疑似苹果牛眼果腐病菌的菌株Nk-2968。对其进行了病原菌形态学观察、致病性测定并结合分子生物学方法检测,实验结果表明,菌株Nk-2968在PDA培养基上生长良好,能产生大量的分生孢子;经真菌通用引物(ITS4/ITS5)及β-tubulin引物(Bt-T2m-Up/Bt-LVL-Lo)分别扩增和测序,菌株Nk-2968与Gen Bank中登录号AF281462.1、HG793110.1和HG793112.1的菌株序列同源性达到100%;病菌接种苹果8 d后开始发病。根据上述实验结果,将分离获得的菌株Nk-2968鉴定为苹果牛眼果腐病菌(Neofabraea kienholzii)。这是我国口岸首次在进境的苹果果实上截获该危险性有害生物。 展开更多
关键词 苹果牛眼果腐病菌 形态特征 分子检测 致病性测定 鉴定
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进境新西兰猕猴桃中猕猴桃果腐病菌的检测与鉴定 被引量:2
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作者 张露茜 刘静远 +3 位作者 徐飞 焦彬彬 于翠 杨翠云 《植物检疫》 北大核心 2017年第4期46-49,共4页
对来自新西兰的猕猴桃进行了病原菌的分离培养,结果在果实中分离到2株疑似猕猴桃果腐病菌的菌株Na-3419和Na-4756。对其进行了病原菌形态学观察、致病性测定并结合分子生物学方法检测,实验结果表明,菌株Na-3419和Na-4756在PDA培养基上... 对来自新西兰的猕猴桃进行了病原菌的分离培养,结果在果实中分离到2株疑似猕猴桃果腐病菌的菌株Na-3419和Na-4756。对其进行了病原菌形态学观察、致病性测定并结合分子生物学方法检测,实验结果表明,菌株Na-3419和Na-4756在PDA培养基上生长良好,能产生大量的分生孢子;经真菌通用引物(ITS4/ITS5)扩增和测序,菌株Na-3419与Gen Bank中登录号EU482221.1和EU482220.1的菌株序列同源性达到100%,菌株Na-4756与Gen Bank中登录号AY359230.1、AY359226.1和KR859079.1的菌株序列同源性达到100%;病菌接种猕猴桃3 d后开始发病。根据上述试验结果,将分离获得的菌株Na-3419和Na-4756鉴定为猕猴桃果腐病菌(Neofabraea actinidiae)。这是上海口岸首次在进境的猕猴桃果实上截获该有害生物。 展开更多
关键词 猕猴桃果腐病菌 形态特征 分子检测 致病性测定 鉴定
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苹果牛眼果腐病菌3个致病种LAMP检测方法的建立
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作者 李鑫 黑多尔 +1 位作者 刘岩 张寅寅 《生物技术通讯》 CAS 2015年第6期854-856,共3页
目的:建立引起苹果牛眼果腐病的明孢盘菌属3个致病种的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法:以苹果牛眼果腐病菌3个致病种为目标菌进行LAMP引物设计,根据明孢盘菌属β-tublin基因设计引物对1、2;根据真菌通用ITS序列设计引物对3,并进行L... 目的:建立引起苹果牛眼果腐病的明孢盘菌属3个致病种的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法:以苹果牛眼果腐病菌3个致病种为目标菌进行LAMP引物设计,根据明孢盘菌属β-tublin基因设计引物对1、2;根据真菌通用ITS序列设计引物对3,并进行LAMP试验,从中筛选出最佳引物组合,并进行最适宜反应温度的筛选。结果和结论:经验证得出,由ITS序列得到的引物组合3对苹果牛眼果腐病菌的3个致病种有特异性的扩增,扩增最适温度为64℃。 展开更多
关键词 苹果牛眼果腐病 环介导等温扩增 明孢盘菌属
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EF-1α基因作为苹果牛眼果腐病菌DNA条形码的评价研究 被引量:5
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作者 林惠娇 王卫芳 《植物检疫》 北大核心 2019年第3期6-12,共7页
苹果牛眼果腐病菌(Neofabraea malacorticis、N. perennans、N. kienholzii和N. vagabunda)是我国重点关注的进境水果检疫性有害生物,相似的形态和生理特征使该类真菌的鉴定非常困难。本研究在EF-1α基因区域设计了一对通用引物(NS1/NS... 苹果牛眼果腐病菌(Neofabraea malacorticis、N. perennans、N. kienholzii和N. vagabunda)是我国重点关注的进境水果检疫性有害生物,相似的形态和生理特征使该类真菌的鉴定非常困难。本研究在EF-1α基因区域设计了一对通用引物(NS1/NS4),对不同地理来源的苹果牛眼果腐病菌及其近缘种菌株进行序列分析,考察EF-1α基因是否具备成为苹果牛眼果腐病菌条形码的特征与条件。结果显示, EF-1α基因在苹果牛眼果腐病菌上的PCR扩增和测序成功率均为100%,具有明显的种间和种内遗传变异间距(Barcoding Gap),系统树分析显示该基因片段对4种苹果牛眼果腐病菌及其近缘种具有很好的区分能力,因此认为EF-1α基因可作为苹果牛眼果腐病菌理想的DNA条形码候选片段。 展开更多
关键词 EF-1α基因 苹果牛眼果腐病菌 明孢盘菌属 DNA条形码 评价
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微滴式数字PCR技术快速精准检测苹果牛眼果腐病原多年明孢盘菌
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作者 李辉 姜锋 +3 位作者 杨春光 姜丽 赵鹏 李鑫 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期67-79,共13页
为了建立苹果牛眼果腐病原多年明孢盘菌Neofabraea perennans微滴式数字PCR (ddPCR)检测方法,实现苹果检疫性病原菌的高效率、高精度的检疫鉴定和疫情监控,为口岸外来有害生物防控和保护我国生态安全提供技术服务和支持。本研究以N.pere... 为了建立苹果牛眼果腐病原多年明孢盘菌Neofabraea perennans微滴式数字PCR (ddPCR)检测方法,实现苹果检疫性病原菌的高效率、高精度的检疫鉴定和疫情监控,为口岸外来有害生物防控和保护我国生态安全提供技术服务和支持。本研究以N.perennans为研究对象,通过生物信息学分析确定β-微管蛋白基因(TUB2)作为靶标进行特异性引物与探针设计,通过引物和探针浓度以及退火温度的优化,构建N.perennans的ddPCR特异性检测体系。研究结果表明,N.perennans的ddPCR检测体系的绝对定量检测低限为0.16 copies/μL,最低基因组DNA检测浓度为10.0 pg/μL,与qPCR方法一致,在定量检测范围内的线性相关系数R2大于0.999,RSD小于25%,说明该检测体系的重复性较好,能够用于进口水果样品中苹果牛眼果腐病原多年明孢盘菌N.perennans的快速精准检测。 展开更多
关键词 微滴式数字PCR 苹果牛眼果腐病 多年明孢盘菌 快速检测
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猕猴桃果腐病菌PCR和实时荧光PCR检测
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作者 焦彬彬 田沂民 +4 位作者 薛华杰 马纯珏 王卫芳 徐飞 杨翠云 《植物检疫》 北大核心 2020年第2期21-27,共7页
为了快速、准确地鉴定猕猴桃果腐病菌(Neofabraea actinidiae),根据GenBank中N.actinidiae的β-tubulin序列设计特异引物NAC-F/R和探针NAC-P,建立了常规PCR和实时荧光PCR检测方法。利用引物NAC-F/R扩增供试的4株N.actinidiae能得到389 b... 为了快速、准确地鉴定猕猴桃果腐病菌(Neofabraea actinidiae),根据GenBank中N.actinidiae的β-tubulin序列设计特异引物NAC-F/R和探针NAC-P,建立了常规PCR和实时荧光PCR检测方法。利用引物NAC-F/R扩增供试的4株N.actinidiae能得到389 bp的预期目标条带,但扩增其他20个非N.actinidiae供试菌株不能得到预期产物,检测灵敏度为140 pg菌丝体DNA;探针NAC-P对供试4株N.actinidiae表现为阳性扩增,而对其他菌株和空白对照均表现为阴性扩增,检测灵敏度可达14 pg菌丝体DNA,比常规PCR高10倍。样品检测试验结果表明两种PCR方法可用于口岸植物检疫中快速、准确地检测猕猴桃果腐病菌。 展开更多
关键词 猕猴桃果腐病菌 检测 PCR 实时荧光PCR
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台湾省苹果上牛眼果腐病菌的截获鉴定 被引量:1
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作者 张慧丽 李雪莲 +3 位作者 段丽君 徐瑛 陈先锋 段维军 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期90-96,共7页
为明确从宁波空港口岸入境旅客携带苹果上截获的1株明孢盘菌属菌株60017的分类地位,通过形态学特征观察、内转录间隔区(ITS)和β-微管蛋白基因(β-tubulin)序列比对分析以及致病性测定,对该菌株进行了种类鉴定。结果表明:菌株60017在PD... 为明确从宁波空港口岸入境旅客携带苹果上截获的1株明孢盘菌属菌株60017的分类地位,通过形态学特征观察、内转录间隔区(ITS)和β-微管蛋白基因(β-tubulin)序列比对分析以及致病性测定,对该菌株进行了种类鉴定。结果表明:菌株60017在PDA培养基上的菌落为圆形,边缘整齐,呈乳白色,气生菌丝较少,可产生大量分生孢子;基于ITS和β-tubulin序列构建的系统发育树中,菌株60017和苹果牛眼果腐病菌Neofabraea kienholzii处于同一分支;菌株60017接种苹果后,在接种部位能引起褐腐症状,与原发病症状一致。结合形态学特征、致病性测定结果以及分子鉴定结果,最终将该菌株鉴定为苹果牛眼果腐病菌N. kienholzii。 展开更多
关键词 苹果牛眼果腐病菌 形态观察 序列分析 致病性测定 检测鉴定
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