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人血浆Nav1.5通道蛋白ELISA检测方法的建立
1
作者 陈瑞庆 王锃 +3 位作者 蓝瑞隆 陈锦容 陈纬 张鲁榕 《福建医药杂志》 CAS 2018年第1期108-110,共3页
目的建立一种高效特异、灵敏度高的ELISA方法检测人血浆Nav1.5(心脏电压门控性钠通道)通道蛋白。方法设计并合成Nav1.5蛋白质的部分肽链作抗原免疫新西兰大耳白兔,制备抗体。经亲和层析提取纯化并生物素化,分别作为包被或检测抗体使用... 目的建立一种高效特异、灵敏度高的ELISA方法检测人血浆Nav1.5(心脏电压门控性钠通道)通道蛋白。方法设计并合成Nav1.5蛋白质的部分肽链作抗原免疫新西兰大耳白兔,制备抗体。经亲和层析提取纯化并生物素化,分别作为包被或检测抗体使用。建立检测人血浆Nav1.5通道蛋白的ELISA方法并优化条件。结果获得抗人血浆Nav1.5通道蛋白的抗体,并成功建立ELISA检测人血浆Nav1.5通道蛋白的方法。用该方法检测Brugada 1型患者血浆中Nav1.5钠通道蛋白的表达水平,与正常人的比较差异显著。结论建立高效特异检测人血浆Nav1.5通道蛋白的ELISA方法,为临床研究Nav1.5通道蛋白提供一个可行的方案。 展开更多
关键词 navl.5通道蛋白 酶联免疫吸附试验 离子通道病
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成熟型与幼稚型Nav 1.5Na^+通道变构体在神经损伤大鼠背根神经节细胞中的表达 被引量：1
2
作者 郑家涛 王军 +1 位作者 欧绍武 王运杰 《沈阳医学院学报》 2016年第4期229-233,236,共6页
目的:研究幼稚型和成熟型Nav1.5 Na^+通道变构体在选择性神经损伤(SNI)大鼠背根神经节细胞(DRG)中的表达情况。方法:建立SNI大鼠模型。采用RT-PCR、DNA测序、限制性酶切技术、免疫组化等方法检测幼稚型和成熟型Nav1.5 Na^+通道变构体在... 目的:研究幼稚型和成熟型Nav1.5 Na^+通道变构体在选择性神经损伤(SNI)大鼠背根神经节细胞(DRG)中的表达情况。方法:建立SNI大鼠模型。采用RT-PCR、DNA测序、限制性酶切技术、免疫组化等方法检测幼稚型和成熟型Nav1.5 Na^+通道变构体在SNI大鼠DRG中的表达;采用Western blot法检测DRG神经元中蛋白激酶C(PKC)的表达。结果:成熟型和幼稚型Nav1.5 Na^+通道变构体在大鼠DRG神经元中的表达比例为2.5∶1。在SNI大鼠模型中,幼稚型和成熟型Nav1.5的m RNA和蛋白表达水平均降低50%左右,PKC-γ表达水平增加大约1倍。结论:幼稚型和成熟型Nav1.5 Na^+通道变构体在大鼠DRG中有表达,在疼痛模型中的表达水平显著降低;在SNI模型中,PKC-γ表达水平的上调直接或间接导致了Nav1.5亚型的低表达,此机制可能参与了神经病理性疼痛的发生发展过程。 展开更多
关键词 navl.5 Na+通道 背根神经节细胞 疼痛模型
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编码脑组织Nav1.5钠通道新外显子的克隆、鉴定和分布 被引量：9
3
作者 王军 宗志红 +4 位作者 欧绍武 王运杰 任成涛 林毅 孟晓娜 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第3期255-259,共5页
Nav1.5电压-门控钠通道(VGSC)被认为是心肌的特异性通道,但最近的研究发现,该通道在脑组织尤其是边缘系统中亦广泛分布.此前,在对人神经母细胞瘤细胞钠通道的基因克隆中,发现Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子参与编码该通道.采用人及鼠脑组... Nav1.5电压-门控钠通道(VGSC)被认为是心肌的特异性通道,但最近的研究发现,该通道在脑组织尤其是边缘系统中亦广泛分布.此前,在对人神经母细胞瘤细胞钠通道的基因克隆中,发现Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子参与编码该通道.采用人及鼠脑组织,通过RT-PCR法对Nav1.5钠通道基因进行克隆发现:Nav1.5/SCN5A基因中的第6A外显子参与编码了该通道,而心肌等其他组织却是第6外显子参与编码该通道.人Nav1.5/SCN5A基因的第6A和第6外显子都定位于3号染色体,共有92个碱基,都可以编码产生30个氨基酸,但却有7个氨基酸不同.人和鼠脑组织Nav1.5/SCN5A基因的第6A外显子仅有一个碱基不同,却产生相同的氨基酸序列.RT-PCR法证实第6A外显子在鼠脑的不同部位表达不同,第6外显子在大鼠不同组织中的表达也不同,这为深入研究不同系统中Nav1.5钠通道的功能提供了基础. 展开更多
关键词 第6A外显子 第6外显子 基因克隆 Nav1.5钠通道 脑组织
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中药甘松挥发油对HEK细胞Na_v1.5电流电压及电导电压的影响 被引量：13
4
作者 葛郁芝 吴志婷 +1 位作者 胡朗吉 Yeh Jay Z 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期1-3,共3页
目的应用膜片钳技术研究HEK细胞Nav1.5电流电压依赖性Na+电流失活与激活曲线,甘松挥发油对电流-电压关系(I-V),电导-电压关系(G-V)曲线的影响,以及对快Na+通道失活(H-I)的影响。方法应用膜片钳技术研究HEK细胞Nav1.5电压依赖性Na+电流... 目的应用膜片钳技术研究HEK细胞Nav1.5电流电压依赖性Na+电流失活与激活曲线,甘松挥发油对电流-电压关系(I-V),电导-电压关系(G-V)曲线的影响,以及对快Na+通道失活(H-I)的影响。方法应用膜片钳技术研究HEK细胞Nav1.5电压依赖性Na+电流失活曲线,I-V和H-I曲线。结果正常自然依赖性失活曲线向超极化移位,移动速度10 min内是4 mV。甘松挥发油能降低I-V曲线Na电流的峰电位,但不能改变其Na电位(ENa)从内流向外流的反转电位的方向。G-V曲线明显向超极化方面移动,Vg1/2=(-59.8±4.22)mV是对照自然失活曲线;Vg1/2=(-58.8±5.69)mV是10 PPM甘松挥发油;Vg1/2=(-68.0±4.36)mV是药物被洗脱后失活曲线(P<0.01,n=6)。在除去自然移动值后10 PPM甘松挥发油的Na电位失活作用明显。甘松挥发油应用前,应用10 PPM甘松挥发油以及药物洗脱后H-I曲线与自然失活曲线比较,校正自然失活因素后10 PPM甘松挥发油实际移动Vg1/2是(18.0±4.50)mV(P<0.01,n=5),洗脱40min后接近对照状态。结论甘松挥发油对I-V,G-V曲线有向超极化移位的影响。对快Na+通道有加速失活与抑制激活的作用,然而电压依赖性Na失活是可逆性的。这一作用奠定了甘松挥发油抗心律失常的作用机制。 展开更多
关键词 甘松挥发油 HEK细胞 NAV1.5 膜片钳
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HEK细胞Nav1.5电流对甘松挥发油浓度及电压依赖性阻滞 被引量：5
5
作者 葛郁芝 吴志婷 +2 位作者 张淑华 盛国太 Yeh Jay Z 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期30-32,共3页
目的:研究甘松挥发油对人肾胚胎(HEK)细胞Nav1.5电流的影响。方法:应用细胞膜片钳技术研究甘松挥发油对鼠cDNA编码组成的纯钠通道在人胚胎肾细胞(HEK)表达的Nav1.5细胞离子通道电流的影响。结果:发现甘松挥发油对Na电流的阻滞作用受挥... 目的:研究甘松挥发油对人肾胚胎(HEK)细胞Nav1.5电流的影响。方法:应用细胞膜片钳技术研究甘松挥发油对鼠cDNA编码组成的纯钠通道在人胚胎肾细胞(HEK)表达的Nav1.5细胞离子通道电流的影响。结果:发现甘松挥发油对Na电流的阻滞作用受挥发油浓度影响,量-效反应量呈"S"曲线型,电压钳制影响表现为膜电位越低(电位上移)阻滞作用越强。结论:甘松挥发油对钠电位有明显阻滞作用,其作用随剂量增加而增加,随膜电位降低而作用加强。提示临床可用于因心肌缺血导致膜电位降低而诱发的心律失常。 展开更多
关键词 甘松挥发油 HEK细胞 NAV1.5 膜片钳
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中药甘松挥发油对HEK细胞Na_v1.5电流频率依赖性阻滞的影响 被引量：7
6
作者 刘艳阳 葛郁芝 Jay Z.Yeh 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期15-16,共2页
目的研究中药甘松挥发油对HEK细胞Nav1.5电流频率依赖性阻滞的影响。方法用Nav1.5细胞,采取膜片钳技术直接记录甘松挥发油(VONCB)对HEK细胞Nav1.5电流频率依赖性阻滞。结果 VONCB对HEK细胞表达的鼠心肌Na+通道的具有阻滞作用。5 ppm VO... 目的研究中药甘松挥发油对HEK细胞Nav1.5电流频率依赖性阻滞的影响。方法用Nav1.5细胞,采取膜片钳技术直接记录甘松挥发油(VONCB)对HEK细胞Nav1.5电流频率依赖性阻滞。结果 VONCB对HEK细胞表达的鼠心肌Na+通道的具有阻滞作用。5 ppm VONCB在-100 mV电压钳制下,导致20%Na+电流抑制,静息状态产生轻微阻滞;VONCB对Na+通道抑制随刺激频率增加(1～20 Hz)而增加,产生明显的Na+通道频率依赖性阻滞。结论 VONCB对HEK细胞表达的Nav1.5通道的具有频率依性阻滞作用,VONCB对Na+通道抑制随刺激频率增加(1～20 Hz)而增加。 展开更多
关键词 HEK细胞 NAV1 5 膜片钳 甘松挥发油 频率依赖性阻滞
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同种异体骨髓间充质干细胞在大鼠体内心肌缺血微环境中Nav1.5的表达 被引量：1
7
作者 张静 王亭忠 +2 位作者 魏峰 倪雅娟 马爱群 《山西医科大学学报》 CAS 2014年第10期907-910,1001,共5页
目的观察大鼠同种异体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体内心肌缺血微环境中向心肌细胞分化过程中Nav1.5的分化表达。方法采用左冠状动脉前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)结扎术建立大鼠急性心... 目的观察大鼠同种异体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体内心肌缺血微环境中向心肌细胞分化过程中Nav1.5的分化表达。方法采用左冠状动脉前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)结扎术建立大鼠急性心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型(n=50),将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转染标记MSCs,并贴壁培养,用心外膜下注射的方法将GFP标记的MSCs移植到心肌梗死周边区;通过免疫荧光染色观察移植后3,5,7 d移植的MSCs上Nav1.5蛋白的表达;应用激光捕获显微切割技术分离移植后3,5,7 d心肌组织中GFP标记的MSCs群,应用realtime PCR测定移植后3,5,7 d Nav1.5及未移植MSCs mRNA的相对表达量;对移植后9 d的移植区域行TUNEL凋亡染色。结果免疫荧光染色观察移植的MSCs于移植后3,5,7 d均不表达Nav1.5;real-time PCR测定显示Nav1.5相对表达量在移植后3,5,7 d之间比较及分别与未移植的MSCs相比均无明显变化(P>0.05);移植的MSCs于移植后9 d在心肌组织中几乎观察不到,TUNEL凋亡染色显示移植的MSCs发生了凋亡。结论在大鼠体内心肌缺血微环境中移植的同种异体MSCs不表达Nav1.5且不能长期存活。 展开更多
关键词 心肌梗死 骨髓间充质干细胞 移植 NAV1.5
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