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i TRAQ联合NanoLC-LTQ-Orbitrap技术分析二仙汤干预去卵巢骨质疏松大鼠的骨组织差异表达蛋白 被引量:2
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作者 刘波 刘志文 +3 位作者 吴琪 谢慧慧 杨硕 王莹 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期194-199,共6页
目的筛选以二仙汤干预去卵巢骨质疏松大鼠后的差异表达蛋白质,探讨二仙汤防治骨质疏松的分子作用机制。方法雌性SD大鼠,按体质量随机分为3组,即假手术组、模型组、二仙汤组,其中假手术组和模型组灌胃生理盐水,二仙汤组按生药量12 g·... 目的筛选以二仙汤干预去卵巢骨质疏松大鼠后的差异表达蛋白质,探讨二仙汤防治骨质疏松的分子作用机制。方法雌性SD大鼠,按体质量随机分为3组,即假手术组、模型组、二仙汤组,其中假手术组和模型组灌胃生理盐水,二仙汤组按生药量12 g·kg^(-1)灌胃,每日1次,连续给药90 d。取大鼠股骨,运用同位素相对和绝对定量(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)联合纳升高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱(NanoLC-LTQ-Orbitrap)高分辨质谱技术的定量蛋白质组学方法检测骨蛋白,采用ProteinDiscovery软件进行分析和鉴定差异蛋白质,通过生物信息学分析差异表达的蛋白质功能。结果质谱分析共鉴定出862个差异蛋白,其中二仙汤组与模型组相比较,共发现82个与假手术组趋势一致的差异蛋白,上调蛋白45个,下调蛋白37个。生物信息学分析发现,差异表达的蛋白大多数属于水解酶、核酸结合类蛋白、受体类蛋白等。结论细胞色素b-245轻链、促分裂原活化蛋白激酶-1、Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物-1等相关差异蛋白质可能是二仙汤防治骨质疏松症的作用靶点。 展开更多
关键词 同位素相对和绝对定量 纳升高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱 二仙汤 骨质疏松症 蛋白质组学 生物信息学
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新型亲和去垢小柱净化-液相色谱-串联质谱法分析水稻叶片蛋白质组 被引量:8
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作者 曹晓林 巩佳第 +3 位作者 陈铭学 于莎莎 卞英芳 曹赵云 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1181-1186,共6页
采用亲和去垢小柱净化,建立了水稻叶片蛋白质组的纳升液相色谱-串联质谱分析方法。水稻叶片蛋白质分别采用酚提取法结合十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)裂解,裂解液经亲和去垢小柱净化,酶解肽段用纳升液相色谱-线性离子阱/... 采用亲和去垢小柱净化,建立了水稻叶片蛋白质组的纳升液相色谱-串联质谱分析方法。水稻叶片蛋白质分别采用酚提取法结合十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)裂解,裂解液经亲和去垢小柱净化,酶解肽段用纳升液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱(nanoLC-LTQ/Orbitrap MS)分析,相关数据库检索鉴定。比较了超滤辅助样品制备法(FASP法)、亲和去垢小柱法和丙酮沉淀法对SDS去除效率及对蛋白质鉴定结果的影响。结果表明:3种方法均有较好的SDS去除效果(去除效率均大于95%);尽管3种方法鉴定的蛋白质种类具有一定的互补性,但以亲和去垢小柱法鉴定的蛋白质数目最多,为563种,远多于FASP法和丙酮沉淀法的196和306种;此外,亲和去垢小柱法适合于各种相对分子质量和不同pI值蛋白质的净化,而FASP法和丙酮沉淀法中不同相对分子质量和pI值蛋白质均有类似程度的损失。采用本文建立的方法,一次进样分析可鉴定出水稻叶片蛋白质多达588种;肽段匹配数≥2的296个蛋白质的生物学功能主要分为结合活性、酶活性、转移运输活性和结构组成等。该蛋白质分析方法可为开展水稻蛋白质组学研究提供技术参考。 展开更多
关键词 亲和去垢小柱 纳升液相色谱-线性离子阱/ 静电场轨道阱组合式高分辨质谱 鸟枪法 蛋白质组学 水稻叶片 十二烷基硫酸钠
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