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1株类NADC30 PRRSV三谱系重组株的分离鉴定及遗传分析
1
作者 蔡丙严 乔洋洋 +5 位作者 刘天昕 左伟勇 王永娟 张凯 陆辉 王海明 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第3期420-426,共7页
2018年6月黑龙江佳木斯某猪场的母猪出现了大量流产,随后该场的断奶仔猪在35日龄左右开始出现持续高烧症状,部分猪体温超过41.5℃。为确定此次疫情的病因,本研究对来自本养殖场送检的63份临床样品进行检测。结果显示,63份样品中有60份... 2018年6月黑龙江佳木斯某猪场的母猪出现了大量流产,随后该场的断奶仔猪在35日龄左右开始出现持续高烧症状,部分猪体温超过41.5℃。为确定此次疫情的病因,本研究对来自本养殖场送检的63份临床样品进行检测。结果显示,63份样品中有60份样品呈现猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗原阳性。随后将PRRSV抗原阳性病料接种于非洲绿猴胚胎肾细胞(Marc-145),盲传3代后,进行IFA(indirect immunofluorescence assay),结果显示,成功分离获得1株PRRSV,命名为HLJ38株。随后对HLJ38株进行了全基因组测序,并利用生物信息学软件对其基因组进行了详细分析,结果显示HLJ38株Nsp2基因的推导氨基酸序列中存在3处、共计131(323~433 aa、483 aa和504~522 aa)个氨基酸的缺失,符合类NADC30 PRRSV的分子遗传标志;进化树分析结果显示,HLJ38与GenBank中的类NADC30 PRRSV同属于谱系1亚群,与国内代表毒株CH-1a、HuN4亲缘关系较远,其核苷酸同源性仅为85.2%和84.6%;重组分析结果显示,HLJ38是1株重组的类NADC30 PRRSV,且重组的基因片段来源于多个毒株,其中1~201 nt片段由VR2332毒株提供,而6641~8061 nt来源于HP-PRRSV毒株。结果表明,该猪场此次疫情的原因可能是由不同谱系间PRRSV毒株发生重组所致,重组后的流行毒株不仅具有一定的致病性,而且现有的商品化疫苗对其交叉保护性较弱;不同谱系间的重组增加了PRRSV的基因多样性,也加剧了猪场PRRS防控的难度。因此,有必要持续监控猪场中PRRSV的流行动态,及时采取有效措施,遏制PRRS疫情的扩散。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类nadc30 PRRSV HLJ38 重组分析
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猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30和类NADC34毒株鉴别诊断方法的建立与应用
2
作者 马晶晶 孔维苏 +4 位作者 韩相敏 贾济宇 张江 蒋洁 赖志 《中国兽医卫生》 2025年第2期51-59,共9页
为快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV)类NADC30(NADC30-like)毒株和类NADC34(NADC34-like)毒株,基于两者在PRRSV Nsp2基因序列上的差异,设计特异性引物和探针,建立针对NADC30... 为快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV)类NADC30(NADC30-like)毒株和类NADC34(NADC34-like)毒株,基于两者在PRRSV Nsp2基因序列上的差异,设计特异性引物和探针,建立针对NADC30-like和NADC34-like毒株的双重TaqMan qRT-PCR检测方法,并对该方法的灵敏性、特异性和重复性等性能进行评估。结果显示,该方法的性能良好,适用于PRRSV的临床鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类nadc30毒株 类nadc34毒株 TaqMan qRT-PCR
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类NADC30-like株和HP-PRRSV鉴别诊断RT-PCR方法的建立及应用
3
作者 乔璐 柳海云 +4 位作者 杨健 黄国梁 郭慧琛 孙世琪 牛家强 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第12期1635-1642,共8页
本研究旨在建立一种猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)类NADC30株(NADC30-like)和高致病PRRSV(HP-PRRSV)鉴别诊断的RT-PCR方法,为该病的检测和防控提供依据。根据PRRSVNsp2基因核苷酸序列特征,设计一种可同时鉴定HP-PRRSV和NADC3O-like株的... 本研究旨在建立一种猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)类NADC30株(NADC30-like)和高致病PRRSV(HP-PRRSV)鉴别诊断的RT-PCR方法,为该病的检测和防控提供依据。根据PRRSVNsp2基因核苷酸序列特征,设计一种可同时鉴定HP-PRRSV和NADC3O-like株的RT-PCR方法。结果显示,该方法扩增出的HP-PRRSV和NADC30-like株Nsp2基因片段分别为931bp和628bp,最低检测下限分别为472copies/uL和132copies/uL,对其他基因亚型PRRSV和病毒均未扩增出特异性条带。针对此方法,分离优势毒株并纯化。对来自甘肃省部分地区猪场的196份临床样品进行检测,发现28份样品为HP-PRRSV核酸阳性,15份样品为NADC30-like核酸阳性,3份样品为HP-PRRSV+NADC30-like核酸阳性;RT-PCR检测ORF5基因,发现HP-PRRSV和NADC30-like核酸阳性样品数量分别为37份和9份,但未发现混合感染样品;分离优势毒株,得到了传代稳定的病毒;纯化后获得了纯度较高且结构完整的病毒粒子。本研究建立的RT-PCR方法可用于HP-PRRSV和NADC30-like株快速鉴别诊断和分子流行病学调查研究,但其灵敏度稍差;且其无法检测其他PRRSV亚型毒株。 展开更多
关键词 HP-PRRSV nadc3O-like 鉴别诊断 RT-PCR 分离纯化
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一株类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及致病力分析
4
作者 李明桃 刘云涛 +4 位作者 邹立宏 柳珊 刘茜 焦玉兰 郁宏伟 《中国畜禽种业》 2025年第2期104-111,共8页
该研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30流行毒株的感染模型评价其致病性。从广西某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株类NADC30毒株(RP-1株),为探究其对仔猪的致病性,将其作为感染毒株接种易感染猪只,其中感染组3头猪,对照组1头猪,... 该研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30流行毒株的感染模型评价其致病性。从广西某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株类NADC30毒株(RP-1株),为探究其对仔猪的致病性,将其作为感染毒株接种易感染猪只,其中感染组3头猪,对照组1头猪,感染后每日观察临床症状,测量直肠温度,并采集血液、口腔拭子、肛拭子以检测病毒血症与排毒情况,试验结束后进行病理剖检,观察大体病理变化。结果显示,感染组在感染后体温升高,第7天1头猪出现发热,第9天1头猪直肠温度达到峰值41.16℃;感染后第2天出现病毒血症及排毒,持续至感染后第21天;病理剖检发现肺部呈暗红色,局部发生实质性病变,未感染对照组未出现上述情况。可见,RP-1株可引起易感染猪只发病,并表现出明显的临床症状,但未致死,是一株中等毒力毒株,可为疫苗效力的评价提供毒株来源。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类nadc30毒株 病毒分离 致病力
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PRRS NADC30 GX-R18弱毒株对后备母猪免疫驯化效果的评估
5
作者 赵志超 张鹏轩 +3 位作者 张伟超 王庚 夏丽兰 钱平 《养殖与饲料》 2025年第10期1-6,共6页
[目的]为评估PRRS NADC30 GX-R18弱毒株对后备母猪的驯化效果。[方法]选取某后备猪场1930头PRRSV抗体阳性、抗原阴性的后备母猪,使用“两活一灭”的免疫驯化方式进行研究。分别在全场进满苗后的第7天和第28天免疫1针NADC30 GX-R18弱毒... [目的]为评估PRRS NADC30 GX-R18弱毒株对后备母猪的驯化效果。[方法]选取某后备猪场1930头PRRSV抗体阳性、抗原阴性的后备母猪,使用“两活一灭”的免疫驯化方式进行研究。分别在全场进满苗后的第7天和第28天免疫1针NADC30 GX-R18弱毒株、第58天免疫1针PRSS灭活疫苗。分别在免疫前、一免后21 d、二免后30 d、三免后30、45、60、90 d和转至母猪场后30 d进行前腔静脉采血,检测血液中PRRSV和N蛋白抗体。[结果]抗原单阴的断奶仔猪在免疫NADC30 GX-R18弱毒株后,分别在二免后30 d和三免后30 d检测到PRRSV病毒血症,其他阶段血液及引种前后备母猪扁桃体PRRSV检测呈阴性。一免后21 d和二免后30 d抗体显著上升,到三免后30 d达到100%,并持续到引种后30 d(N-ELISA抗体阳性率97.51%)。与免疫前相比,免疫后不同阶段抗体水平极显著升高(P<0.01),且抗体S/P值呈正态分布。生产性能统计分析该批次猪只生产成绩稳定。[结论]NADC30 GX-R18弱毒株具有高度安全性,对后备母猪免疫驯化效果良好,可以用于PRRS阳性后备母猪的免疫驯化。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30 GX-R18弱毒株 免疫驯化 后备母猪 生产性能
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2016年我国部分地区类NADC30新亚群猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析 被引量：34
6
作者 张洪亮 张晶 +12 位作者 李真 张文立 刘春晓 陈家锃 相丽润 冷超粮 彭金美 王倩 白云 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期675-680,共6页
为了解类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在我国新的流行特点,本研究根据GenBank中美国2012年提交的PRRSV NADC30株全基因组序列设计合成8对引物,通过RT-PCR的方法对本实验室2016年从4个省搜集的临床样品中检测到的15株类NADC30 PR... 为了解类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在我国新的流行特点,本研究根据GenBank中美国2012年提交的PRRSV NADC30株全基因组序列设计合成8对引物,通过RT-PCR的方法对本实验室2016年从4个省搜集的临床样品中检测到的15株类NADC30 PRRSVs株进行了全基因组测序,并且结合参考株进行了序列分析。NSP2推导氨基酸的序列比对表明,15株PRRSVs均具有aa323~aa433+aa484+aa505~aa523 (111+1+19) 131个氨基酸缺失的分子特征;经RDP4和Simplot生物学软件分析表明,15株PRRSVs中14株为重组病毒株,参与重组的亲本病毒株为PRRSV NADC30株,提供重组基因片段的病毒株为HP-PRRSV或以VR2332为代表的经典PRRSV株,这些类NADC30重组病毒株的重组位置、重组的基因片段及重组片段长度均具有多样性,而且重组的位置多位于编码非结构蛋白或次要结构蛋白的基因区域;全基因组遗传演化分析表明,这些病毒株远离国内之前流行的HP-PRRSV,同源性仅为83.4 %~87.2 %,而与其它的类NADC30病毒株位于一个相对独立的分支,以上结果均表明这类病毒株已形成了一个新的亚群,命名为5亚群。本研究中不同地区PRRSV的核苷酸同源性差异较大,仅为88.6 %~99.6 %,并且只有2个病毒株可以感染PAM和MARC-145细胞。本研究表明,以基因缺失和基因重组多样性为主要特征的5亚群PRRSV已在我国流行,其生物学特性有待进一步研究。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类nadc30 缺失 重组 5亚群
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福建NADC30-like PRRSV FJLY01株的全基因组分子特征分析 被引量：10
7
作者 魏春华 刘建奎 +4 位作者 戴爱玲 龚丽贞 李晓华 黄思琼 杨小燕 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第3期51-60,67,共11页
【目的】了解福建省NADC30-like PRRSV FJLY01株的分子生物学特征和遗传演化规律,为PRRSV的防控提供参考。【方法】对采自福建省规模化猪场的疑似病料进行PRRSV分离鉴定,以NADC30PRRSV毒株基因序列为参考设计并合成9对引物,分别对分离... 【目的】了解福建省NADC30-like PRRSV FJLY01株的分子生物学特征和遗传演化规律,为PRRSV的防控提供参考。【方法】对采自福建省规模化猪场的疑似病料进行PRRSV分离鉴定,以NADC30PRRSV毒株基因序列为参考设计并合成9对引物,分别对分离株序列进行分段PCR扩增,经克隆测序后进行序列拼接,采用MEGA 6.0软件进行核苷酸及氨基酸同源性比对,并绘制其与其他35株毒株的系统遗传进化树。【结果】FJLY01株基因组全长为15 016bp(不包含polyA),包含10个开放阅读框,5′-UTR长190bp,3′-UTR长148bp,Nsp2基因缺失393bp。Nsp2蛋白存在类似PRRSV MN184和NADC30株的131个氨基酸的缺失。核苷酸比对结果表明,FJLY01株与VR-2332、MLV RespPRRS/Repro、CH-1a和BJ-4株核苷酸的同源性为85.2%~86.3%,与JXA1、HuN4等HP-PRRSV株核苷酸的同源性为83.7%~84.1%,与MN184A、MN184B株核苷酸的同源性为87.9%~88.2%,与NADC30株核苷酸的同源性最高,为97.1%。系统进化树分析表明,该毒株属于NADC30-like毒株,与JXA1、VR2332和CH-1a的亲缘关系较远。【结论】福建省存在NADC30-like毒株,应该加强PRRSV的监测。 展开更多
关键词 PRRSV 全基因组 nadc30-like 福建省
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类NADC30与类NADC34 PRRSV双重qPCR检测方法的建立与应用 被引量：1
8
作者 马明洋 余文轩 +7 位作者 安川叶 张晶晶 杨紫烨 殷笑妍 杜叶 朱瑞冰 韩冬梅 刘冠慧 《中国动物检疫》 CAS 2024年第12期89-94,共6页
近年来,类NADC3O和类NADC34猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)给养猪业带来了严重经济损失。为实现类NADC30和类NADC34 PRRSV的同时检测,针对PRRSV经典毒株、高致病性毒株、类NADC30毒株和类NADC34毒株ORF5基因的明显差异区域序列,设计引... 近年来,类NADC3O和类NADC34猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)给养猪业带来了严重经济损失。为实现类NADC30和类NADC34 PRRSV的同时检测,针对PRRSV经典毒株、高致病性毒株、类NADC30毒株和类NADC34毒株ORF5基因的明显差异区域序列,设计引物与探针,经优化引物和探针浓度及退火温度,建立了类NADC30和类NADC34 PRRSV双重qPCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估,比较该方法与文献报道方法对临床样本检测结果的一致性。结果显示:本研究建立的双重qPCR方法仅对类NADC30和类NADC34 PRRSV核酸扩增呈阳性,而对其他常见猪病病原均无扩增,且类NADC30与类NADC34 PRRSV检测方法之间无交叉反应;对类NADC30和类NADC34 PRRSV核酸的最低检测限分别为1和10 copies/uL,组内及组间试验变异系数均小于2%;该方法与文献报道方法对类NADC30和类NADC34 PRRSV检测结果的符合率分别为89.5%和92.9%。结果表明,本研究建立的双重qPCR方法特异性好、灵敏度高、稳定性佳,能够有效区分类NADC30和类NADC34 PRRSV,为猪繁殖与呼吸综合征诊断和流行病学调查提供了技术支撑。 展开更多
关键词 类nadc30 PRRSV 类nadc34 PRRSV 双重qPCR 建立及应用
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Ca^(2+)、 La^(3+)及Eu^(3+)对NaDC胶团的作用 被引量：4
9
作者 孙颖 杨展澜 +2 位作者 张莉 翁诗甫 吴瑾光 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第10期873-878,共6页
在水溶液中将脱氧胆酸钠（ NaDC）分别与 CaCl2、 EuCl3及 LaCl3反应，改变反应物浓度和配比，合成了系列脱氧胆酸络合物 .利用红外光谱（ FTIR）、元素分析、 ICP分析及 X射线粉末衍射谱，对它们的组成和结构进行了研究 .结果表明：水... 在水溶液中将脱氧胆酸钠（ NaDC）分别与 CaCl2、 EuCl3及 LaCl3反应，改变反应物浓度和配比，合成了系列脱氧胆酸络合物 .利用红外光谱（ FTIR）、元素分析、 ICP分析及 X射线粉末衍射谱，对它们的组成和结构进行了研究 .结果表明：水溶液中 CaCl2与 NaDC的反应不是简单离子间的反应，改变其反应物浓度和配比，生成组成和结构不同的络合物 ;而 LnCl3与 NaDC反应时，反应物浓度和配比的改变不影响产物的组成和结构 .说明虽然 Ln3＋与 Ca2＋有相似之处，但它们与 NaDC的作用却有很大差别 . 展开更多
关键词 脱氧胆酸络合物 胶团 nadc 镧 钙 铕 肝胆疾病
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV免疫保护效果的评价 被引量：7
10
作者 张洪亮 相丽润 +13 位作者 许浒 宋帅杰 赵静 张文立 李真 汤艳东 陈家锃 冷超粮 王倩 彭金美 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期296-301,共6页
类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与... 类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)10^(5.0)TCID_(50)/头,免疫后21 d,免疫组和攻毒对照组每头各肌注2 mL和滴鼻2 mL类NADC30 PRRSV SD53-1603株(104.0TCID_(50)/mL)。攻毒后观察各组实验猪临床症状,可见攻毒对照组所有猪均发热,持续5 d9 d,免疫组仅2头猪发热1 d2 d。检测各组实验猪体重变化,结果显示,攻毒后免疫组和攻毒对照组体重增长均显著低于空白对照组(p<0.001),但攻毒14 d以后,免疫组体重增长显著高于攻毒对照组(p<0.05)。IDEXX ELISA测定各组猪血清中PRRSV的特异性抗体,结果显示免疫后14 d可以诱导免疫组仔猪产生良好的针对PRRSV的特异性抗体。利用荧光定量PCR测定血清和组织中的病毒载量,结果显示免疫组血清和组织中的病毒载量均极显著低于对照组(p<0.0001)。对PRRSV免疫后及攻毒后各组仔猪各脏器病理学观察,结果可见攻毒对照组与免疫组相比出现明显的剖检和组织病理学变化。以上结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV可以提供一定的交叉保护,该研究为评价我国现有疫苗是否对类NADC30 PRRSV具有保护效果提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 HuN4-F112 类nadc30 PRRSV 交叉保护
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甘肃NADC30-like PRRSV的分离及其基因组特性分析 被引量：6
11
作者 张婧 孙普 +4 位作者 韩镇 张海霞 田启会 刘在新 卢曾军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1096-1105,共10页
为了解甘肃省部分PRRSV流行株的分子生物学特征和遗传演化规律,对来自甘肃武威一猪场的疑似PRRS感染病料通过细胞培养进行PRRSV分离。该病料细胞培养物可以引起Marc-145细胞发生明显的细胞病变,PRRSV特异性引物RT-PCR扩增结果显示该病... 为了解甘肃省部分PRRSV流行株的分子生物学特征和遗传演化规律,对来自甘肃武威一猪场的疑似PRRS感染病料通过细胞培养进行PRRSV分离。该病料细胞培养物可以引起Marc-145细胞发生明显的细胞病变,PRRSV特异性引物RT-PCR扩增结果显示该病料组织为PRRSV阳性,IFA实验显示接种分离病毒株的Marc-145细胞可以与PRRSV N蛋白抗体反应,出现特异性荧光,将其命名为GSWW2018。设计引物对该毒株全基因组进行分段扩增,克隆测序后拼接得到全长序列。采用DNAstar软件分析其与48个参考毒株核苷酸及氨基酸的同源性,使用MEGA7.0软件绘制系统遗传进化树,并利用Simplot软件分析其重组事件。结果显示GSWW2018全长14 997 bp,其Nsp2蛋白存在与NADC30相似的"111+1+19"的131个氨基酸的不连续的缺失。Nsp2基因和ORF5基因系统进化树分析结果表明其属于类NADC30亚群。重组结果表明GSWW2018可能由HP-PRRSV与NADC30重组而来。本研究表明甘肃省已出现类NADC30毒株,需要进一步加强监测。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30-like 基因组特性
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1株PRRSV类NADC30毒株的分离鉴定及序列分析 被引量：5
12
作者 崔丹丹 王傲杰 +3 位作者 王新港 周峰 彭志锋 王川庆 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第9期132-138,共7页
为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的变异情况,将PRRSV阳性病料处理后接种Marc-145细胞,成功分离到1株PRRSV毒株,将其命名为HENZXC-4,并对其全基因组序列进行测定和分析。结果表明,HENZXC-4为未发生重组的类NADC30毒株,其NSP2... 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的变异情况,将PRRSV阳性病料处理后接种Marc-145细胞,成功分离到1株PRRSV毒株,将其命名为HENZXC-4,并对其全基因组序列进行测定和分析。结果表明,HENZXC-4为未发生重组的类NADC30毒株,其NSP2蛋白存在131个氨基酸不连续缺失,且其GP5蛋白存在1个氨基酸插入。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 类nadc30株 序列分析
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绿色荧光蛋白与人肾脏NaDC3融合基因的构建及其在肾小管上皮细胞中的定位 被引量：6
13
作者 程根阳 陈香美 +4 位作者 白雪源 冯哲 刘章锁 付博 洪权 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期170-174,共5页
本文采用RT-PCR方法从人的正常肾组织中扩增出hNaDC3基因全长cDNA序列,采用基因重组技术将hNaDC3基因和绿色荧光蛋白基因融合,通过真核表达质粒-脂质体介导,导入LLG-PK1细胞系,激光共聚焦显微镜动态观察GFP-hNaDC3的定位情况。结果显示p... 本文采用RT-PCR方法从人的正常肾组织中扩增出hNaDC3基因全长cDNA序列,采用基因重组技术将hNaDC3基因和绿色荧光蛋白基因融合,通过真核表达质粒-脂质体介导,导入LLG-PK1细胞系,激光共聚焦显微镜动态观察GFP-hNaDC3的定位情况。结果显示pEGFP-C3空白质粒转染的LLC-PK1细胞表达了GFP,GFP在胞内分布以核浆为主,呈均匀致密的细颗粒荧光,胞核染色强,核仁荧光稀少,界线清楚。而pEGFP-C3-hNaDC3转染细胞株的绿色荧光蛋白,转染后第1天混合分布于细胞浆和细胞膜,以粗颗粒荧光为主,两者界限不清楚,胞浆中可见未染色的圆形空洞,未见胞核染色;第3天主要聚集于细胞膜,核周的胞浆中可见粗颗粒荧光物质,胞浆和胞膜界线清楚,胞核亦未见绿色荧光蛋白;第5天清晰聚集于细胞膜,细胞膜连接呈网状。因此hNaDC3蛋白在细胞质中生成后,定位于细胞膜并稳定表达。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 人肾脏nadc3融合基因 肾小管上皮细胞中 定位 转运蛋白
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表达高致病性和NADC30样PRRSV毒株GP5蛋白的重组伪狂犬病病毒的构建 被引量：2
14
作者 王林青 侯承尧 +4 位作者 马晓 刘颖 刘芳 金钺 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1587-1593,共7页
参考猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)株HENAN-XINX基因组序列(GenBank登录号:KF611905)中GP5基因,合成1对特异性引物,BamHⅠ和HindⅢ分别引入到其5′端,RT-PCR扩增NADC30样PRRSV(NADC30-like PRRSV)毒株GP5基因。将扩增片段插入到真核表... 参考猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)株HENAN-XINX基因组序列(GenBank登录号:KF611905)中GP5基因,合成1对特异性引物,BamHⅠ和HindⅢ分别引入到其5′端,RT-PCR扩增NADC30样PRRSV(NADC30-like PRRSV)毒株GP5基因。将扩增片段插入到真核表达质粒pBApo-EF1α_Pur_DNA的BamHⅠ和HindⅢ位点,然后扩增含GP5/NA的表达盒,将其导入含高致病性PRRSV(HP-PRRSV)GP5基因的伪狂犬病病毒(PRV)转移质粒pG-GP5/HP-EGFP中,构建重组质粒pG-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP。用脂质体转染法将PRV变异株3基因缺失株rPRV-gE-/gI-/TK-基因组与pG-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP质粒共转染ST细胞,得到携带有HP-PRRSV和NADC30-like PRRSV的GP5基因和绿色荧光蛋白标记基因的重组PRV株rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP。该重组病毒与CRISPR/Cas9-EGFP敲除质粒共转染ST细胞,经4轮病毒空斑纯化得到了无绿色荧光标签的重组病毒rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30株。经PCR和RT-PCR证实成功构建重组病毒rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30。 展开更多
关键词 nadc30-like PRRSV HP-PRRSV GP5基因 重组PRV
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1株田间自然重组PRRSV类NADC30毒株的分离鉴定及序列分析 被引量：3
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作者 崔丹丹 彭志锋 +3 位作者 王傲杰 王新港 周峰 王川庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1071-1076,共6页
为了解田间猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRsv）的流行及变异情况，本研究将PRRSV阳性样品接种到Marc－145细胞并传代后成功分离到1株PRRSV，将其命名为HENZMD-9，并对其全基因序列进行测定和分析。结果显示，HENZMD-9为1株类美国NADC30毒... 为了解田间猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRsv）的流行及变异情况，本研究将PRRSV阳性样品接种到Marc－145细胞并传代后成功分离到1株PRRSV，将其命名为HENZMD-9，并对其全基因序列进行测定和分析。结果显示，HENZMD-9为1株类美国NADC30毒株，并与国内高致病性PRRSV（HP—PRRRSV）毒株的2个片段发生重组，这2个片段分别来自HP—PRRSV JXA1株的细胞传代致弱株JXA1-P80及JXA1P45，分别位于基因组5’端及开放式阅读框lab区域，表明HENZMD-9很有可能与JXA1-R疫苗回复株发生了重组，提示不同类型毒株在田间的共存会加剧PRRSV的演变，从而增加临床防控难度。因此，持续监测PRRSV田间流行及变异动态对PRRSV的防控具有一定的，临床指导意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 序列分析 重组分析 类nadc30株 JXA1-R疫苗回复突变株
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猪繁殖与呼吸综合征类NADC30 PRRSV荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：2
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作者 魏春华 卢贵平 +6 位作者 徐叶 刘辰 杨圆 何乐 戴爱玲 杨小燕 刘建奎 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1366-1372,共7页
为快速检测美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-2)并从中鉴别诊断NADC30-like PRRSV,根据PRRSV-2的ORF6基因及类NADC30的2个靶点Nsp9和ORF5基因片段分别设计3对特异性引物和探针,建立了一种三重荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,Ct值... 为快速检测美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-2)并从中鉴别诊断NADC30-like PRRSV,根据PRRSV-2的ORF6基因及类NADC30的2个靶点Nsp9和ORF5基因片段分别设计3对特异性引物和探针,建立了一种三重荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,Ct值与标准品在1×10^(9)-1×10^(1)拷贝/μL范围内存在良好的线性关系,R2均>0.990,最低检测浓度为10拷贝/μL;该方法特异性强,与其他基因亚型的PRRSV和其他主要猪源病毒无交叉反应;重复性分析结果显示,组内、组间变异系数均小于1%,呈现出良好重复性。应用建立的三重荧光定量RT-PCR检测方法对116份NADC30-like PRRSV样品进行检测,符合率为98.28%,对458份临床样品进行检测,2对引物单独使用时对NADC30-like PRRSV的检出率分别为36.03%(165/458)和32.3%(148/458),而2对引物同时使用时,NADC30-like PRRSV的检出率明显提高,为44.5%(204/458)。因此,本研究建立的三重荧光定量RT-PCR检测方法可用于PRRSV-2检测,可快速区分出NADC30-like PRRSV,可为PRRSV的防控提供技术支持。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 TaqMan荧光定量RT-PCR nadc30-like PRRSV 鉴别检测
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复方肾华片对缺氧/复氧肾小管上皮细胞NaDC1转运蛋白定位的影响 被引量：2
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作者 魏日胞 杨悦 +2 位作者 张雪光 方谦 张玉强 《中国中西医结合肾病杂志》 2013年第7期570-572,I0001,共4页
目的:观察复方肾华含药血清对缺氧/复氧模型肾小管上皮细胞钠/二羧酸协同转运蛋白1(NaDC1)的定位影响。方法:雄性wistar大鼠,灌胃给药3 d后处死,分离含药血清备用。分离培养大鼠肾小管上皮细胞,随机分4组:正常血清GFP空质粒组、正常血清... 目的:观察复方肾华含药血清对缺氧/复氧模型肾小管上皮细胞钠/二羧酸协同转运蛋白1(NaDC1)的定位影响。方法:雄性wistar大鼠,灌胃给药3 d后处死,分离含药血清备用。分离培养大鼠肾小管上皮细胞,随机分4组:正常血清GFP空质粒组、正常血清GFP-NaDC1质粒组、肾华含药血清GFP空质粒组和肾华含药血清GFP-NaDC1质粒组,分别进行质粒转染后,在正常培养基或肾华含药血清培养基中培养,进行缺氧/复氧处理后应用免疫荧光和生物素化免疫印迹技术观察肾小管上皮细胞NaDC1的分布变化及表达。结果:免疫荧光结果显示,正常血清GFP空质粒组、正常血清GFP-NaDC1质粒组和肾华含药血清GFP空质粒组NaDC1均匀分布在细胞内,肾华含药血清GFP-NaDC1质粒组NaDC1主要分布于胞膜。免疫印迹结果显示肾华含药血清GFP-NaDC1质粒组NaDC1顶端分布明显多于基底端,其余各组细胞NaDC1在顶端和基底端分布差异无统计学意义。结论:复方肾华含药血清可以有效促进缺氧/复氧损伤大鼠肾小管上皮细胞极性修复。 展开更多
关键词 缺氧/复氧 复方肾华片 nadc1 极性修复
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猪繁殖与呼吸障碍综合征NADC30类毒株研究进展 被引量：3
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作者 赵胜杰 王帅彪 +1 位作者 赵康宁 盛敏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期72-74,共3页
猪繁殖与呼吸障碍综合征（PRRS）在20世纪80年代末以临床暴发急性繁殖障碍而被首次报道,以母猪繁殖障碍,尤其是母猪怀孕100 d后出现流产、死胎、木乃伊胎、新生仔猪死亡,以及各阶段猪出现呼吸道疾病为特征。1996年中国首次报道从疑似PRR... 猪繁殖与呼吸障碍综合征（PRRS）在20世纪80年代末以临床暴发急性繁殖障碍而被首次报道,以母猪繁殖障碍,尤其是母猪怀孕100 d后出现流产、死胎、木乃伊胎、新生仔猪死亡,以及各阶段猪出现呼吸道疾病为特征。1996年中国首次报道从疑似PRRS流产胎儿中分离到猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）。 展开更多
关键词 nadc30 母猪繁殖障碍 病毒目 呼吸道疾病 动脉炎 基因序列分析 病毒重组 致病性 同源性 攻毒试验
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like分离株致病力分析 被引量：1
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作者 李秀丽 王利丽 +3 位作者 江珊 池晶晶 李程 张莉 《天津农业科学》 CAS 2022年第S01期28-32,共5页
为探究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的流行情况,从天津市某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,扩增其Nsp2基因,核苷酸序列比对结果显示该病毒属NADC30分支,与TJnh1501株同源性最高,命名为TJ18114株,并对其感染细胞能力... 为探究天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的流行情况,从天津市某猪场发病猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,扩增其Nsp2基因,核苷酸序列比对结果显示该病毒属NADC30分支,与TJnh1501株同源性最高,命名为TJ18114株,并对其感染细胞能力和对猪的致病力进行了研究。结果显示:该毒株能够在Marc145细胞上稳定增殖,引起明显的细胞病变,最佳收获时间为72 h(0.1MOI接种),TCID50为106.445·mL^(-1);用2×10^(5) TCID50·头-1的剂量经肌肉注射结合鼻腔喷雾方式接种45 d杜长大三元猪,猪只感染后24 h体温升高至40℃以上,血液中病毒载量达107.3copies·mL^(-1);感染后7 d PRRSV抗体阳转率100%;感染后15 d猪只消瘦、咳喘,剖检可见间质性肺炎,显微病理观察提示弥漫性肺泡萎缩、炎性浸润;PRRSV荧光定量PCR检测发现病猪的扁桃体、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和淋巴结中均含有较高的病毒。研究结果有助于进一步认识天津地区PRRSV流行毒株的体外增殖规律和临床致病特点,为PRRS的深入研究和防控提供依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nadc30-like毒株 致病力
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PRRSV经典毒株、高致病毒株、类NADC30毒株及类NADC34毒株鉴别RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：3
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作者 蹇艳银 张佳怡 +4 位作者 张耕馨 倪民婷 卢淳 师源 王金涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期465-471,共7页
为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不同流行毒株的快速鉴别诊断能力,本研究对近几年国内外流行的PRRSV不同毒株的Nsp2核苷酸序列进行比对,设计了1对可用于鉴别4类不同PRRSV毒株的简并引物,建立了鉴别PRRSV经典毒株(C-PRRSV)、高致病... 为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不同流行毒株的快速鉴别诊断能力,本研究对近几年国内外流行的PRRSV不同毒株的Nsp2核苷酸序列进行比对,设计了1对可用于鉴别4类不同PRRSV毒株的简并引物,建立了鉴别PRRSV经典毒株(C-PRRSV)、高致病毒株(HP-PRRSV)、类NADC30毒株(NADC30-like)及类NADC34毒株(NADC34-like)的RT-PCR检测方法。结果显示,C-PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like、NADC34-like毒株Nsp2基因的扩增片段大小分别为1072 bp、982 bp、679 bp、772 bp,检测限分别为4.70×10 copies/μL、3.34×10^(2)copies/μL、8.57×10 copies/μL、5.71×10^(2)copies/μL,对其他常见猪病病原均未扩增出特异性条带,3次重复试验均能够扩增出均匀一致的目的片段;83份临床组织样品共检出阳性27份,其中NADC30-like毒株7份、NADC34-like毒株20份,与GP5基因检测结果的符合率为97.6%。上述结果表明,本研究建立的PRRSV鉴别RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于C-PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like、NADC34-like毒株的快速鉴别和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 经典毒株 高致病毒株 类nadc30毒株 类nadc34毒株 鉴别
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