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烟草单萜合酶基因NtTPS2的克隆及功能鉴定 被引量：6
1
作者 刘少华 赵希胜 +5 位作者 杨晴 杨长青 潘旭浩 张建会 杨爱国 李依婷 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期132-141,共10页
萜类化合物是植物次生代谢产物中结构和功能最丰富多样的类群,在植物的生长发育、胁迫响应以及与环境中的生物因子和非生物因子的互作中具有重要作用。研究烟草(Nicotiana tabacum)单萜合酶基因的功能,为研究烟草萜类化合物的生物合成... 萜类化合物是植物次生代谢产物中结构和功能最丰富多样的类群,在植物的生长发育、胁迫响应以及与环境中的生物因子和非生物因子的互作中具有重要作用。研究烟草(Nicotiana tabacum)单萜合酶基因的功能,为研究烟草萜类化合物的生物合成提供依据。从烟草中克隆得到一个单萜合酶基因,命名为NtTPS2。该基因的完整ORF为1854 bp,编码617个氨基酸的蛋白质,具有N端信号肽以及保守的DDxxD和NSE/DTE功能结构域。进化分析表明NtTPS2属于TPS-II分支,与矮牵牛、柠檬及柑橘等物种中的单萜合酶具有较高同源性。NtTPS2定位于叶绿体中,在烟草的根和雌蕊中表达量较高,且能够响应低温、高盐、干旱和ABA处理。将NtTPS2转入含甲羟戊酸途径以及牻牛儿基焦磷酸合成酶的大肠杆菌中,发现该工程菌可以合成单萜类化合物香叶醇及其异构体橙花醇。NtTPS2在烟草单萜类化合物的生物合成代谢中具有重要作用。 展开更多
关键词 烟草 nttpS2 单萜合酶 香叶醇 橙花醇
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烟草倍半萜合酶基因NtTPS21的克隆及功能鉴定 被引量：4
2
作者 杨晴 刘少华 +5 位作者 杨长青 耿锐梅 张钊 刘东阳 杨爱国 李依婷 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2022年第3期39-46,共8页
萜类化合物在植物生长发育、胁迫响应以及抵御病原菌侵染过程中发挥重要作用,克隆烟草倍半萜合酶基因并研究其功能可为烟草萜烯合酶的功能鉴定及抗病育种提供理论依据。本研究从普通烟草红花大金元中克隆获得了一个倍半萜合酶基因NtTPS... 萜类化合物在植物生长发育、胁迫响应以及抵御病原菌侵染过程中发挥重要作用,克隆烟草倍半萜合酶基因并研究其功能可为烟草萜烯合酶的功能鉴定及抗病育种提供理论依据。本研究从普通烟草红花大金元中克隆获得了一个倍半萜合酶基因NtTPS21,通过生物信息学分析、表达模式分析、酶学性质分析以及NtTPS21代谢产物的体外抑菌试验等方法,鉴定NtTPS21的生物学功能。结果表明,NtTPS21开放阅读框为1671bp,编码556个氨基酸,具有典型的萜类合酶催化活性位点,与拟南芥倍半萜合酶AtTPS21具有较高同源性。NtTPS21定位于核质中,能够被烟草青枯病菌感染诱导,且在青枯病抗病品种“岩烟97”中的表达水平显著高于感病品种“长脖黄”。NtTPS21能够以法尼基焦磷酸(FPP)为底物,催化合成倍半萜类化合物β-石竹烯,其代谢产物对烟草青枯病菌的生长具有显著抑制效果,以上结果说明NtTPS21基因及其代谢产物可能与烟草青枯病抗性相关。 展开更多
关键词 烟草 nttpS21 倍半萜合酶 β-石竹烯 青枯病抗性
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UPLC-MS/MS法测定磷酸西格列汀中基因毒性杂质NTTP 被引量：8
3
作者 袁松 李婕 +3 位作者 张娜 张龙浩 刘阳 张庆生 《药学研究》 CAS 2023年第12期1000-1004,共5页
目的建立磷酸西格列汀原料药及制剂中基因毒性杂质Nitroso-STG-19(NTTP)的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法。方法色谱柱为Eclipse Plus C_(18)RRHD(3.0 mm×150 mm,1.8μm),以含0.1%甲酸的水溶液为流动相A,0.1%甲酸的... 目的建立磷酸西格列汀原料药及制剂中基因毒性杂质Nitroso-STG-19(NTTP)的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法。方法色谱柱为Eclipse Plus C_(18)RRHD(3.0 mm×150 mm,1.8μm),以含0.1%甲酸的水溶液为流动相A,0.1%甲酸的乙腈溶液为流动相B,梯度洗脱,流速为0.35 mL·min-1,柱温为30℃,进样器温度为10℃,进样体积为5μL。采用多反应监测(MRM)模式,对磷酸西格列汀原料药及制剂中的NTTP进行定量检测。结果NTTP在0.54~53.93 ng·mL^(-1)范围内具有良好的线性关系。检测限和定量限分别为0.02 ng·mL^(-1)和0.08 ng·mL^(-1)。原料药及制剂在低、中、高3个浓度的平均加样回收率范围(n=3)分别为105.43%~107.21%(RSD≤3.2%)及115.03%~120.20%(RSD≤3.6%)。应用该方法对12批原料药及3批制剂中的NTTP进行检测,结果显示均有检出。结论该方法灵敏度高、专属性强,可用于测定磷酸西格列汀原料药及制剂中的NTTP,可为磷酸西格列汀原料药及制剂的质量控制提供参考。 展开更多
关键词 磷酸西格列汀 基因毒性杂质 Nitroso-STG-19 含量测定 超高效液相色谱-串联质谱
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高效液相色谱-串联三重四极杆质谱法测定西格列汀中Nitroso-STG-19 被引量：1
4
作者 刘雪 刘春霞 +2 位作者 冯今奋 张晨 邱璐 《化学分析计量》 CAS 2024年第9期69-73,共5页
建立高效液相色谱-串联三重四级杆质谱测定西格列汀中亚硝胺类杂质Nitroso-STG-19(NTTP)的方法。西格列汀样品用水溶解,以乙酸乙酯为提取溶剂进行超声提取,离心后取乙酸乙酯层,用Agilent Infinity Lab Poroshell 120 SB-AQ色谱柱(100 mm... 建立高效液相色谱-串联三重四级杆质谱测定西格列汀中亚硝胺类杂质Nitroso-STG-19(NTTP)的方法。西格列汀样品用水溶解,以乙酸乙酯为提取溶剂进行超声提取,离心后取乙酸乙酯层,用Agilent Infinity Lab Poroshell 120 SB-AQ色谱柱(100 mm×3.0 mm,2.7μm)分离,柱温为40℃,以水(含0.1%甲酸)和甲醇(含0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流量为0.6 mL/min。采用大气压化学电离源、正离子扫描、反应监测模式进行检测。NTTP的质量浓度在0.2~3.0 ng/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.998,检出限为0.750 ng/g,定量限为1.500 ng/g。测定结果的相对标准偏差为2.7%(n=6),样品加标平均回收率为101.0%。该方法可为控制西格列汀中NTTP的含量提供方法支持。 展开更多
关键词 Nitroso-STG-19 高效液相色谱-串联三重四极杆质谱 西格列汀
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无创性心脏临时起搏的临床应用 被引量：2
5
作者 李建军(综述) 李庚山(审校) 《临床心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第3期189-191,共3页
体外无创性心脏起搏于1952年由Zoll等[1]研制成功并用于临床、但因当时的起摒系统需发放较大的电流脉冲刺激方能起搏心脏,具有诸如局部疼痛、肌肉抽动以及巨大的伪迹信号等弊端而限制其临床过用。1959年,随着导管技术的兴起。
关键词 心脏起搏 nttp 临床应用
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