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阿司匹林诱导人恶性睾丸生殖细胞瘤NTera-2细胞凋亡 被引量：6
1
作者 易朵 李晓峰 +4 位作者 赵晓蒙 王成 张晓婷 刘喜枝 周畅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期630-636,共7页
阿司匹林,又称乙酰水杨酸,已证实有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和抑制血管生成等多种抗癌功能.除已知对环氧合酶COX-2的活性有抑制外,阿司匹林抗癌分子机制尚不十分清楚.已报道阿司匹林可以降低多种癌症发生风险,但应用于人类... 阿司匹林,又称乙酰水杨酸,已证实有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和抑制血管生成等多种抗癌功能.除已知对环氧合酶COX-2的活性有抑制外,阿司匹林抗癌分子机制尚不十分清楚.已报道阿司匹林可以降低多种癌症发生风险,但应用于人类睾丸肿瘤治疗的研究报道很少.本文研究了阿司匹林对人恶性睾丸肿瘤NTera-2细胞凋亡的机制.通过MTT方法检测细胞活力,发现阿司匹林以时间和剂量依赖方式抑制NTera-2细胞增殖.不同浓度阿司匹林处理NTera-2细胞后,采用Hoechest 33258染色方法和Annexin V-FITC/PI流式法分别检测NTera-2细胞的形态学变化、凋亡小体形成、细胞凋亡水平;RT-PCR结果显示,NTera-2细胞中Fas和caspase-8的表达以阿司匹林剂量依赖性上升;蛋白印迹结果显示,FasL的蛋白表达水平下降并活化caspase-8、caspase-3蛋白表达,PARP出现剪切体.进一步的实验证明,caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK能够减弱阿司匹林诱导NTera-2细胞凋亡.结果显示,阿司匹林能明显抑制NTera-2细胞活力,并通过激活caspase通路诱导NTera-2细胞的凋亡,为进一步利用阿司匹林治疗人类睾丸肿瘤的研究奠定基础. 展开更多
关键词 阿司匹林 ntera-2细胞 细胞凋亡 胱天蛋白酶
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NTERA-2细胞中人类CDCA8基因的转录因子谱的芯片分析(英文)
2
作者 戴灿 苗聪秀 +1 位作者 刘刚 卢光琇 《激光生物学报》 CAS CSCD 2010年第3期291-296,共6页
为了研究细胞周期相关基因8(CDCA8)的转录调控机制,首先克隆了人类CDCA8基因5’端上游的1071 bp转录调控区。生物信息学预测发现,此区域存在一系列已知转录因子的可能结合位点。联合运用DNApull-down和转录因子芯片技术分析发现共有114... 为了研究细胞周期相关基因8(CDCA8)的转录调控机制,首先克隆了人类CDCA8基因5’端上游的1071 bp转录调控区。生物信息学预测发现,此区域存在一系列已知转录因子的可能结合位点。联合运用DNApull-down和转录因子芯片技术分析发现共有114种转录因子在人恶性多发性畸胎瘤细胞(NTERA-2)中与该区域结合,其中某些转录因子有预测的结合位点,其他没有预测结合位点的转录因子可能是以复合物的形式结合到CDCA8基因的转录调控区。 展开更多
关键词 CDCA8基因 ntera-2细胞 蛋白质/DNA芯片 转录调控
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NTERA-2的精原干细胞生物学特征鉴定
3
作者 王姿力 周勇华 +2 位作者 罗超 莫艳秀 肖亚梅 《激光生物学报》 CAS 2015年第4期364-367,共4页
本研究通过免疫荧光分析,鉴定NTERA-2细胞是否具有精原干细胞特征。研究结果显示,重要精原干细胞标记分子GFRα-1和DDX4在NTERA-2细胞中均表现为阳性表达,NTERA-2细胞具有精原干细胞的特征。初步探讨了重要细胞信号转换蛋白JNK特异性抑... 本研究通过免疫荧光分析,鉴定NTERA-2细胞是否具有精原干细胞特征。研究结果显示,重要精原干细胞标记分子GFRα-1和DDX4在NTERA-2细胞中均表现为阳性表达,NTERA-2细胞具有精原干细胞的特征。初步探讨了重要细胞信号转换蛋白JNK特异性抑制剂SP600125对NTERA-2细胞生长和增殖的影响,为进一步以NTERA-2细胞为精原干细胞模型开展JNK对生殖细胞发育调节功能的研究奠定基础。 展开更多
关键词 ntera-2 精原干细胞 SP600125 免疫荧光技术
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免疫共沉淀结合质谱分析筛选HMGB4相互作用蛋白 被引量：9
4
作者 王成 赵晓蒙 +4 位作者 帅勇 李晓峰 刘喜枝 张晓婷 周畅 《晓庄学院自然科学学报》 CAS 北大核心 2012年第2期71-75,共5页
为揭示HMGB4在精子发生过程中所起的作用,采用免疫共沉淀技术富集NTera-2细胞中的HMGB4结合蛋白.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离,从胶中切取HMGB4结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)... 为揭示HMGB4在精子发生过程中所起的作用,采用免疫共沉淀技术富集NTera-2细胞中的HMGB4结合蛋白.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离,从胶中切取HMGB4结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)分析,得到相应的肽序列标签(peptide sequence tags,PST).通过搜索数据库在NTera-2细胞系中鉴定到5个HMGB4相互作用蛋白,分别是Pdha1、Keratin 6B、Keratin 5、Actb Actin cytoplasmic 1、RPL18.为进一步研究HMGB4在精子发生机制中的生理功能提供了基础. 展开更多
关键词 HMGB4 ntera-2 免疫共沉淀 相互作用蛋白
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人睾丸特异表达基因TDRG1 shRNA表达载体的构建及其表达 被引量：1
5
作者 彭圣林 阳建福 +6 位作者 陈厚仰 郭小亮 李东杰 周华波 甘宇 蒋先镇 汤育新 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期979-982,共4页
目的:构建人睾丸基因TDRG1的shRNA表达质粒,并研究其在NTERA-2细胞中的表达。方法:设计合成有短发夹结构靶位TDRG1基因的寡核苷酸,经退火成双链,克隆至载体pGPU6/GFP/Neo中,构建TDRG1shRNA表达载体,得到重组质粒TDRG1-shRNA486,TDRG1-sh... 目的:构建人睾丸基因TDRG1的shRNA表达质粒,并研究其在NTERA-2细胞中的表达。方法:设计合成有短发夹结构靶位TDRG1基因的寡核苷酸,经退火成双链,克隆至载体pGPU6/GFP/Neo中,构建TDRG1shRNA表达载体,得到重组质粒TDRG1-shRNA486,TDRG1-shRNA738,TDRG1-shRNA921和一个阴性对照,使用Lipofectamine 2000转染shRNA至NTERA-2细胞,应用RT-PCR法检测转染后NTERA-2细胞TDRG1 mRNA的表达水平。结果:经测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致。同时筛选到转染TDRG1-shRNA486的NTERA-2细胞TDRG1基因的mRNA表达水平明显抑制。结论:成功构建了人类睾丸基因TDRG1的shRNA表达载体,TDRG1-shRNA在NTERA-2细胞内成功表达。 展开更多
关键词 睾丸基因 TDRG1 RNAI SHRNA ntera-2细胞
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pAAV-PEG3-sTRAIL质粒的构建及表达研究
6
作者 蒋祥龙 彭炬 +1 位作者 潘艺 卢光琇 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期481-484,489,共5页
目的构建pAAV-PEG3-sTRAIL质粒并检测其诱导细胞凋亡的作用。方法从大鼠尾巴中提取gDNA,PCR扩增PEG3启动子,测序后定向替代pAAV载体中的CAG启动子。从培养的NTERA-2细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增sTRAIL基因(编码氨基酸序列114-281),测序... 目的构建pAAV-PEG3-sTRAIL质粒并检测其诱导细胞凋亡的作用。方法从大鼠尾巴中提取gDNA,PCR扩增PEG3启动子,测序后定向替代pAAV载体中的CAG启动子。从培养的NTERA-2细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增sTRAIL基因(编码氨基酸序列114-281),测序后定向插入至pAAV-PEG3质粒的多克隆位点。用pAAV-PEG3-sTRAIL质粒FUGENE HD转染人hSF、NTERA-2和hES细胞,用半定量RT-PCR和流式细胞仪分别检测sTRAIL基因的表达和细胞的早期凋亡。结果限制性内切酶酶切和测序分析证实,本文成功地获得了PEG3启动子和sTRAIL基因片断,并将PEG3和sTRAIL准确插入了pAAVL质粒。转染hSF、NTERA-2和人胚胎干细胞(hES)后,检测到sTRAIL基因的表达及其引起的肿瘤细胞NTER-A-2的早期凋亡。结论成功构建了pAAV-PEG3-sTRAIL质粒,并有可能用于肿瘤的基因治疗。 展开更多
关键词 PEG3 STRAIL 凋亡 胚胎干细胞 ntera-2
暂未订购
sTRAIL基因引起人恶性畸胎瘤细胞与人胚胎干细胞凋亡比较
7
作者 蒋祥龙 潘艺 卢光琇 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第3期401-403,共3页
目的:评估sTRAIL基因引起人胚胎干细胞[human embryonic stem(hES)cells]和人恶性畸胎瘤(human malignant teratoma)细胞NTERA-2凋亡的作用。方法:本室已构建的pAAV-PEG3-sTRAIL质粒,转染NTERA-2和hES细胞,用流式细胞仪和定量PCR检测NTE... 目的:评估sTRAIL基因引起人胚胎干细胞[human embryonic stem(hES)cells]和人恶性畸胎瘤(human malignant teratoma)细胞NTERA-2凋亡的作用。方法:本室已构建的pAAV-PEG3-sTRAIL质粒,转染NTERA-2和hES细胞,用流式细胞仪和定量PCR检测NTERA-2和hES细胞的早期凋亡及sTRAIL基因的受体的表达。结果:NTERA-2细胞经瞬时转染pAAV-PEG3-sTRAIL质粒后,早期凋亡比例达24.4%±2.1%,sTRAIL的死亡受体DR4、和DR5的表达分别上升2和3倍,而hES细胞转染pAAV-PEG3-sTRAIL质粒后,早期凋亡比例仅2.3%±1.2%,受体DR4、DR5、DcR1和DcR2的表达未有明显变化。结论:pAAV-PEG3-sTRAIL质粒可有效地引起人恶性畸胎瘤细胞NTERA-2的凋亡,但是对人胚胎干细胞尚未发现可见的细胞凋亡现象。 展开更多
关键词 STRAIL 凋亡 胚胎干细胞 ntera-2
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过表达hsa-miR-145对人恶性多发性畸胎瘤细胞增殖凋亡的影响
8
作者 张丽媛 丁显平 +3 位作者 魏霞 聂双双 张玉平 张辉 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期194-200,共7页
通过构建hsa-miR-145的重组体pGenesil-1-miR-145,并瞬时转染到人恶性多发性畸胎瘤细胞(NTERA-2)后,利用qRT-PCR法检测hsa-miR-145,以及肿瘤发生相关基因OCT4,SOX2,c-Myc,KLF4,FSCN1在转录水平的表达差异;同时利用MTT法和流式细胞术Anne... 通过构建hsa-miR-145的重组体pGenesil-1-miR-145,并瞬时转染到人恶性多发性畸胎瘤细胞(NTERA-2)后,利用qRT-PCR法检测hsa-miR-145,以及肿瘤发生相关基因OCT4,SOX2,c-Myc,KLF4,FSCN1在转录水平的表达差异;同时利用MTT法和流式细胞术Annexin V-APC/7-AAD双染法检测hsa-miR-145对NTERA-2细胞增殖的生物学效应和细胞凋亡的影响.结果表明:hsa-miR-145的高表达导致NTERA-2细胞增殖明显减弱,凋亡率增加;转染重组质粒hsa-miR-145后,OCT4,SOX2,c-Myc,FSCN1基因的表达量均有所降低,提示miR-145的过表达可能通过抑制靶基因的表达从而影响生殖肿瘤细胞的生物学功能. 展开更多
关键词 睾丸生殖细胞肿瘤 hsa-miR-145 真核表达载体 细胞增殖 细胞凋亡
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