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Polycomb家族基因Nspc1在斑马鱼早期发育的表达 被引量：6
1
作者 吴旭东 张敏 +4 位作者 龚燕华 强伯勤 袁建刚 孟安明 彭小忠 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期550-553,共4页
目的探讨Polycomb家族基因Nspc1在模式生物斑马鱼发育早期的表达模式。方法根据GenBank中斑马鱼Nspc1的cDNA序列设计Nspc1原位杂交探针片断,并制备地高辛标记的探针。收取单细胞期、双细胞期、胚芽期及不同时间点的体节期斑马鱼胚胎,用... 目的探讨Polycomb家族基因Nspc1在模式生物斑马鱼发育早期的表达模式。方法根据GenBank中斑马鱼Nspc1的cDNA序列设计Nspc1原位杂交探针片断,并制备地高辛标记的探针。收取单细胞期、双细胞期、胚芽期及不同时间点的体节期斑马鱼胚胎,用制备好的探针作原位杂交,显微镜下拍照,获得信号适当的杂交结果。结果在斑马鱼体节期前,Nspc1在全身表达;从体节期开始,其表达逐渐表现出特异性,主要在头部的神经系统中表达。结论Nspc1在模式生物斑马鱼的早期发育、尤其是神经系统发育的过程中可能扮演重要角色。 展开更多
关键词 POLYCOMB nspc1 斑马鱼 神经系统发育
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人NSPc1慢病毒过表达系统的建立与鉴定
2
作者 李辉 龚燕华 +1 位作者 胡光宇 阴彬 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第4期440-444,共5页
目的建立并鉴定人NSPc1慢病毒过表达系统,以便应用过表达技术进一步研究NSPc1功能。方法设计针对人NSPc1cDNA序列的带酶切位点引物,PCR扩增获得双链DNA后,与酶切后的pLenti6-TO-EGFP-TRIP载体片段进行连接、转化,酶切及DNA测序鉴定重组... 目的建立并鉴定人NSPc1慢病毒过表达系统,以便应用过表达技术进一步研究NSPc1功能。方法设计针对人NSPc1cDNA序列的带酶切位点引物,PCR扩增获得双链DNA后,与酶切后的pLenti6-TO-EGFP-TRIP载体片段进行连接、转化,酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒,转染293T细胞并用Western blot检测质粒过表达效果。用293T细胞制备慢病毒颗粒,感染293T细胞后收集细胞全蛋白,用Western blot检测慢病毒系统过表达效果。结果证实人NSPc1正确插入慢病毒载体,人NSPc1慢病毒过表达质粒及相应病毒颗粒能有效过表达NSPc1。结论人NSPc1慢病毒表达系统的成功建立,为应用过表达技术研究人NSPc1功能打下了基础。 展开更多
关键词 过表达 nspc1 慢病毒载体 多梳家族
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NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定
3
作者 李辉 龚燕华 +1 位作者 胡光宇 阴彬 《山西医科大学学报》 CAS 2010年第9期775-779,共5页
目的构建并鉴定NSPc1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统进一步研究NSPc1的功能。方法设计针对NSPc1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的... 目的构建并鉴定NSPc1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统进一步研究NSPc1的功能。方法设计针对NSPc1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的pLentiLox3.7载体片段进行连接、转化。用双酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒并转染293T细胞,收集细胞全蛋白用Western检测RNAi效果。结果重组克隆经酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,Western检测证实设计的三条RNA干扰序列有效敲低了293T细胞中的内源性NSPc1。结论 3个NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的成功构建为应用基于慢病毒系统的RNAi技术来研究NSPc1基因的功能打下了基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 nspc1 小发夹状RNA 慢病毒载体 多梳家族
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神经干细胞增殖与分化过程中Bmi1与NSPc1的作用
4
作者 李辉 胡光宇 龚燕华 《医学综述》 2012年第13期1971-1973,共3页
多梳蛋白(PcG)家族是非常保守的表观遗传调节因子。近年来对其成员的功能研究发现,PcG家族对干细胞的自我更新及增殖与分化都有很重要的作用。哺乳动物PRC1成员Bmi1和NSPc1在神经系统发育早期高表达。最近的研究提示它们不仅在细胞增殖... 多梳蛋白(PcG)家族是非常保守的表观遗传调节因子。近年来对其成员的功能研究发现,PcG家族对干细胞的自我更新及增殖与分化都有很重要的作用。哺乳动物PRC1成员Bmi1和NSPc1在神经系统发育早期高表达。最近的研究提示它们不仅在细胞增殖分化相关基因转录调控中发挥重要作用,而且在神经干细胞自我更新及分化过程中同样有重要作用。 展开更多
关键词 神经干细胞 多梳蛋白 增殖分化 BMI1 nspc1
暂未订购
NSPc1是维持HeLa细胞正常增殖的必要因子 被引量：2
5
作者 胡光宇 吴旭东 +1 位作者 彭小忠 龚燕华 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2009年第5期453-458,共6页
目的研究多梳蛋白家族成员NSPc1对HeLa细胞增殖的影响。方法运用生物信息学设计并合成敲低NSPc1表达的siRNA序列,用半定量RT-PCR、Real-time PCR及Western blot等检测siRNA序列在HeLa细胞中敲低NSPc1的有效性;将相应有效序列构建到pSUPE... 目的研究多梳蛋白家族成员NSPc1对HeLa细胞增殖的影响。方法运用生物信息学设计并合成敲低NSPc1表达的siRNA序列,用半定量RT-PCR、Real-time PCR及Western blot等检测siRNA序列在HeLa细胞中敲低NSPc1的有效性;将相应有效序列构建到pSUPER载体中,观察其瞬时转染对HeLa细胞BrdU掺入的影响;用G418筛选并建立稳定敲低NSPc1的HeLa细胞系,观察敲低NSPc1对HeLa细胞体外增殖能力的影响。结果(1)设计的siRNA序列可显著敲低NSPc1的表达;(2)瞬时敲低NSPc1阻碍了HeLa细胞BrdU的掺入;(3)成功构建稳定敲低NSPc1的HeLa细胞系,其增殖速度较对照组明显变慢。结论NSPc1的正常表达是维持HeLa细胞正常增殖能力所必需的,稳定敲低NSPc1的HeLa细胞群可作为进一步研究NSPc1相关信号通路的有效模型。 展开更多
关键词 POLYCOMB nspc1 HELA细胞 稳定细胞系 增殖
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胶质瘤细胞H4中与多梳蛋白NSPc1相互作用的长链非编码RNA的鉴定 被引量：1
6
作者 王玉梁 梁之孔 +3 位作者 李辉 林彦琛 正午 龚燕华 《武警后勤学院学报（医学版）》 CAS 2017年第2期113-117,130,共6页
【目的】鉴定胶质瘤H4细胞系中与多梳家族(polycomb group)蛋白NSPc1可能相互作用的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)。【方法】在胶质瘤H4细胞系中,利用RNA结合蛋白免疫共沉淀RIP(RNA binding protein immunoprecipitation,... 【目的】鉴定胶质瘤H4细胞系中与多梳家族(polycomb group)蛋白NSPc1可能相互作用的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)。【方法】在胶质瘤H4细胞系中,利用RNA结合蛋白免疫共沉淀RIP(RNA binding protein immunoprecipitation,IP)技术联合实时定量PCR技术在生物信息学预测与NSPc1蛋白结合评分较高的候选lnc RNAs中验证相互作用的lnc RNAs。【结果】鉴定出MALAT1、MEG3和SOX2OT可能与NSPc1蛋白相互作用。【结论】胶质瘤细胞中多梳蛋白NSPc1可能通过与lnc RNAs相互作用参与着肿瘤的发生发展、迁移、侵袭甚至肿瘤干细胞干性的维持。 展开更多
关键词 胶质瘤 nspc1 长链非编码RNA
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NSPc1-siRNA重组慢病毒的构建及其对U87细胞NSPc1基因的沉默效应
7
作者 樊嵘 李辉 +1 位作者 沈静 龚燕华 《武警后勤学院学报（医学版）》 CAS 2014年第12期981-984,F0002,共5页
【目的】构建包装NSPc1-si RNA慢病毒颗粒,并在U87胶质瘤细胞中鉴定其感染及基因沉默效果。【方法】根据Gen Bank中基因信息,采用干扰序列设计软件设计靶点,制备合成GV118-si RNA目的质粒,转化感受态细胞,对于长出的克隆应用菌落PCR鉴定... 【目的】构建包装NSPc1-si RNA慢病毒颗粒,并在U87胶质瘤细胞中鉴定其感染及基因沉默效果。【方法】根据Gen Bank中基因信息,采用干扰序列设计软件设计靶点,制备合成GV118-si RNA目的质粒,转化感受态细胞,对于长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和对比分析,重组病毒质粒与另外2种辅助包装载体质粒通过Lipofectamine TM2 000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度;并检测病毒颗粒在目的细胞U87胶质瘤细胞中的感染效率,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blotting方法检测NSPc1 si RNA慢病毒对U87中NSPc1的干扰作用。【结果】成功构建NSPc1 si RNA慢病毒载体GV118-si RNA,重组病毒滴度为4×108TU/ml;用该病毒体外感染U87胶质瘤细胞,当感染复数(MOI)为10时,感染效率大于90%;RT-PCR和Western blotting方法检测NSPc1基因沉默的效率分别为66.4%、60.0%。【结论】成功构建了NSPc1 si RNA慢病毒载体GV118-si RNA,该重组病毒包装后在体外感染U87胶质瘤细胞的效率较高,且具有显著的基因沉默效果。 展开更多
关键词 nspc1 SIRNA 慢病毒载体 基因沉默 U87细胞
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维甲酸诱导的神经管缺陷小鼠模型中神经系统相关基因的表达
8
作者 周斌 张靖 +2 位作者 潘艳芳 阴彬 彭小忠 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第7期814-818,共5页
目的研究在全反式维甲酸诱导小鼠神经管畸形模型中神经系统相关基因(ASH2L、HDAC4、NSPC1与DOK5)的表达变化。方法取8只E8.5的C57/BL6孕鼠随机均分为对照组和模型组。给对照组腹腔注射橄榄油,给模型组腹腔注射全反式维甲酸;E13.5取胚胎... 目的研究在全反式维甲酸诱导小鼠神经管畸形模型中神经系统相关基因(ASH2L、HDAC4、NSPC1与DOK5)的表达变化。方法取8只E8.5的C57/BL6孕鼠随机均分为对照组和模型组。给对照组腹腔注射橄榄油,给模型组腹腔注射全反式维甲酸;E13.5取胚胎。用real-time PCR检测两组小鼠脑和脊髓中ASH2L、HDAC4、NSPC1与DOK5的mRNA表达;用Western blot检测蛋白表达。结果全反式维甲酸可诱导小鼠出现典型神经管畸形;与对照组相比,致畸胚胎脑和脊髓中,ASH2L、HDAC4、NSPC1和DOK5的mRNA和蛋白水平显著下降(P<0.05)。结论ASH2L、HDAC4、NSPC1和DOK5可能是抑制全反式维甲酸致神经管畸形的潜在基因。 展开更多
关键词 全反式维甲酸 ASH2L HDAC4 nspc1 DOK5 神经管畸形
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