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Identification of novel serological agents for porcine deltacoronavirus infection based on the immunogenic accessory protein NS6
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作者 Yali Li Fangshu Shi +4 位作者 Lingxiang Cao Qiankun Zheng Yaoyu Feng Bin Wang Yaowei Huang 《Animal Diseases》 2025年第2期192-204,共13页
Porcine deltacoronavirus(PDCoV)is a swine enteropathogenic CoV that causes severe vomiting,diarrhea and dehydration in suckling piglets,leading to economic losses in the swine industry.There is a great need for a conv... Porcine deltacoronavirus(PDCoV)is a swine enteropathogenic CoV that causes severe vomiting,diarrhea and dehydration in suckling piglets,leading to economic losses in the swine industry.There is a great need for a convenient method to detect circulating antibodies and help in accurate diagnosis and disease control.Previously,we demonstrated that a unique PDCoV accessory protein,NS6,is expressed during PDCoV infection in pigs and is incorporated into PDCoV virions;thus,we deduced that NS6 is likely an immunogenic target that can be used for the diagnosis of PDCoV infection.In this study,we first confirmed that NS6 is immunogenic in PDCoV-infected pigs by perform-ing a serum western blot.Furthermore,we developed a novel NS6-based indirect enzyme-linked immunosorbent assay(iELISA)method and compared it to an established S1-based iELISA for the survey of anti-PDCoV IgG or IgA in pigs of different ages in China.The NS6-iELISA has high specificity for the detection of IgG antibodies and no cross-reactivity with other porcine enteric CoVs(transmissible gastroenteritis coronavirus,porcine epidemic diarrhea virus,or swine acute diarrhea syndrome coronavirus).This NS6 serology-based method has great sensitivity and good repeatability,making it a new and cost-saving option for the rapid diagnosis and immunosurveillance of PDCoV,which may also be important for the prevention and control of deltacoronavirus-related infection in pigs and other animals. 展开更多
关键词 CORONAVIRUS Porcine deltacoronavirus(PDCoV) ns6 ELISA SEROLOGY IgG
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农杆菌介导的水稻草矮病毒NS6基因的转化 被引量:4
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作者 林丽明 张春嵋 +2 位作者 谢荔岩 吴祖建 谢联辉 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2003年第3期288-291,共4页
水稻草矮病毒(Ricegrassystuntvirus,RGSV)RNA6片段毒义链编码的非结构蛋白NS6,与病害症状密切相关,被称为病害特异蛋白.因此,应用农杆菌介导法,选取对RGSV表现不同抗性的台农67、中花6号、中花12号、中花15号、台中1号、合系28和06381... 水稻草矮病毒(Ricegrassystuntvirus,RGSV)RNA6片段毒义链编码的非结构蛋白NS6,与病害症状密切相关,被称为病害特异蛋白.因此,应用农杆菌介导法,选取对RGSV表现不同抗性的台农67、中花6号、中花12号、中花15号、台中1号、合系28和063817个水稻品种,以其未成熟胚或成熟胚预培养4d后,诱导生长旺盛的愈伤组织为外植体,将NS6基因导入其中,对影响水稻再生及农杆菌转化的主要因素进行了比较研究,并获得了转NS6基因工程植株.结果表明,以未成熟胚为受体,获得的抗性愈伤组织转化率明显高于成熟胚;水稻不同品种对农杆菌转化反应不同;添加一定浓度乙酰丁香酮和葡萄糖,可提高抗性愈伤组织形成率;选用G418进行抗性筛选能获得转NS6基因再生植株,用卡那霉素筛选产生的愈伤组织则未能获得再生植株. 展开更多
关键词 农杆菌介导 水稻 草矮病毒 ns6基因 基因转化 病害特异蛋白 抗性 致病性
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水稻草矮病毒NS6基因在大肠杆菌中的表达及植物表达载体的构建 被引量:1
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作者 张春嵋 谢荔岩 +1 位作者 林奇英 谢联辉 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期90-92,共3页
Large amount of disease-specific protein(SP) accumulated in the rice plant cells infected by rice grassy stunt virus(RGSV). It was deduced that the protein was encoded by NS6 gene on genomic vRNA6 and thus referred to... Large amount of disease-specific protein(SP) accumulated in the rice plant cells infected by rice grassy stunt virus(RGSV). It was deduced that the protein was encoded by NS6 gene on genomic vRNA6 and thus referred to as NS6 protein.But its function is unknown. In an effort to prove the above deduction and to elucidate the function of NS6 protein of RGSV, we constructed a bacterial expression plasmid pGTNS6 producing a fusion protein of glutathione S-transferase (GST) and NS6 protein, and a plant expression vector pCBTNSv6 containing NS6 gene. A recombinant plasmid pTNSv 6 containing the coding region of NS6 gene and the non-coding region at its 5’ terminus, cloned by RT-PCR from purified RNAs of Shaxian isolate of RGSV, was used as the start point. Western blot analysis showed that the fusion protein reacted strongly with antisera raised against RGSV-SP, which served as evidence of the deduction.EHA105 of Agrobacterium tumefasciens containing pCBTNSv6 has been obtained and the transformation of rice is underway. 展开更多
关键词 水稻草矮病毒 ns6基因 植物表达载体 大肠杆菌 表达
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人诺如病毒NS6蛋白的表达、纯化及活性验证
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作者 袁越 新燕 +1 位作者 庞立丽 段招军 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期646-649,共4页
目的 在大肠埃希菌中表达人诺如病毒(norovirus,NoV)NS6非结构蛋白,为了获得高纯度且具有酶活性的人诺如病毒NS6蛋白。方法 将NoV NS6蛋白基因克隆至原核表达载体pDE1中,转化至E.coli BL21感受态细胞中进行表达,产物经亲和及分子筛层析... 目的 在大肠埃希菌中表达人诺如病毒(norovirus,NoV)NS6非结构蛋白,为了获得高纯度且具有酶活性的人诺如病毒NS6蛋白。方法 将NoV NS6蛋白基因克隆至原核表达载体pDE1中,转化至E.coli BL21感受态细胞中进行表达,产物经亲和及分子筛层析纯化。NS6蛋白在37 ℃条件下,酶切融合蛋白15VP1-6P,检测其酶切活性。结果 NS6蛋白在大肠埃希菌中获得了稳定、高效表达,纯化后纯度可达95%以上。NS6蛋白能够切割含3C酶切位点的融合蛋白。结论 在大肠埃希菌中成功表达了具有酶切活性的NoV非结构蛋白NS6,为进一步研究NoV的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 人诺如病毒 非结构蛋白ns6 亲和层析 分子筛 酶切
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一株肝素降解菌的分离鉴定及基因组测序分析
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作者 李惠敏 宁真京 +2 位作者 越巳洋 谢明秀 周岐海 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期57-62,共6页
以白头叶猴粪便为材料分离到一株不形成芽孢、可产黄色色素的细菌,革兰氏染色为阴性,接触酶阳性,经形态学观察和分子生物学鉴定为Sphingobacterium daejeonense NS6-1。NS6-1不能水解淀粉,但能降解肝素,肝素酶酶活为46.60 U/mL,当添加10... 以白头叶猴粪便为材料分离到一株不形成芽孢、可产黄色色素的细菌,革兰氏染色为阴性,接触酶阳性,经形态学观察和分子生物学鉴定为Sphingobacterium daejeonense NS6-1。NS6-1不能水解淀粉,但能降解肝素,肝素酶酶活为46.60 U/mL,当添加100 mmol/L的Ca2+为辅助剂时肝素酶活性可达107.29 U/mL。通过K-B纸片琼脂扩散法检测菌株对几种常规药物的敏感性,发现NS6-1对卡那霉素和庆大霉素耐药,对利福平、四环素、多黏菌素B、氧氟沙星、头孢哌酮和万古霉素敏感。基于Illumina Hiseq 4000平台对NS6-1进行全基因组序列测定,结果显示其基因组大小为4 381 042 bp, GC含量为37.21%,预测到的蛋白质编码基因数为3 852个。功能基因注释结果显示,基因组中含1个编码肝素酶Ⅱ/Ⅲ基因,1个氨基糖苷类抗生素耐药功能基因以及1个与芳香烃化合物降解相关的邻苯二酚1,2-双加氧酶基因。利用antiSMASH预测到6个次级代谢产物生物合成基因簇,其中,2个为类胡萝卜素合成基因簇,1个为高分子表面活性剂emulsan合成基因簇。综上,NS6-1具有肝素类物质降解能力以及潜在的石油降解能力和类胡萝卜素合成能力。以上结果为该菌的后续研究及实际应用奠定了理论基础。 展开更多
关键词 肝素酶 鞘氨醇杆菌 ns6-1 白头叶猴
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丙型肝炎病毒NS5A蛋白上调NS3TP6基因启动子表达活性的研究 被引量:2
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作者 洪源 杨倩 +2 位作者 成军 刘妍 王建军 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第4期813-816,共4页
目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对NS3TP6启动子转录的激活作用. 方法:以我实验室前期研究中得到的HCV NS5A/NS3的基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定NS3TP6的启动子区域(NS3TP6-p),聚合酶链反应(RCR) 扩增... 目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对NS3TP6启动子转录的激活作用. 方法:以我实验室前期研究中得到的HCV NS5A/NS3的基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定NS3TP6的启动子区域(NS3TP6-p),聚合酶链反应(RCR) 扩增NS3TP6-P,克隆至真核报告载体pCAT3中,构建pCAT3-NS3TP6-P报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫黏附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与pcDNA3.1(-)-NS5A共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性. 结果:限制性内切酶消化和序列分析结果表明,构建的NS3TP6-p指导的报告基因表达载体pCAT3-NS3TP6-p正确无误.pCAT3-NS3TP6-p在HepG2细胞中能够启动CAT 的表达;共转染实验中pCAT3-NS3TP6-p+pcDNA3.1(-)- NS5A组CAT的表达活性是pCAT3-NS3TP6-P单独转染试验的1.87倍. 结论:我室克隆的NS3TP6启动子有指导下游基因转录表达的活性;HCV的NS5A蛋白具有对NS3TP6基因启动子的转录具有反式激活作用.本实验进一步验证了我室利用基因表达谱技术研究HCV NS5A蛋白反式激活作用的结果,为进一步阐明丙型肝炎病毒非结构蛋白5A的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS5A蛋白 NS3TP6基因 基因表达 免疫调节机制
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酵母双杂交筛选白细胞中新基因NS3TP6结合蛋白基因
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作者 邵清 成军 +6 位作者 白雪帆 王琳 张健 卢成哲 梁耀东 刘敏 李强 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第7期1717-1720,共4页
目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式调节靶基因编码产物NS3TP6 蛋白结合蛋白的基因. 方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV NS3TP6蛋白基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细... 目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式调节靶基因编码产物NS3TP6 蛋白结合蛋白的基因. 方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV NS3TP6蛋白基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提取质粒,转化入大肠杆菌,提取质粒并测序,进行生物信息学分析. 结果:成功克隆出HCV NS3TP6蛋白基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落共7个,其中3个人类白细胞CD14抗原,1个人类免疫球蛋白入轻链,3个人类推定蛋白基因(AC124014,AC097504,AC023785). 结论:成功克隆出NS3TP6蛋白的结合蛋白,为进一步研究HCV的作用提供了新线索. 展开更多
关键词 酵母双杂交筛选 白细胞 新基因 NS3TP6结合蛋白基因 丙型肝炎病毒
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新基因TAHCCP1编码蛋白对NS3TP6基因启动子转录活性的调节
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作者 白文林 刘妍 +3 位作者 徐东平 纪冬 邵清 楼敏 《传染病信息》 2008年第2期119-120,128,共3页
目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白反式激活基因TAHCCP1编码蛋白对NS3TP6启动子转录活性的调节。方法以我室前期克隆的TAHCCP1基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学方法确定NS3TP6基因的启动子区域(NS3TP6-p),聚合酶链反应(PCR)扩... 目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白反式激活基因TAHCCP1编码蛋白对NS3TP6启动子转录活性的调节。方法以我室前期克隆的TAHCCP1基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学方法确定NS3TP6基因的启动子区域(NS3TP6-p),聚合酶链反应(PCR)扩增并克隆至真核报告载体pCAT3-basic中,构建重组报告质粒pCAT3-NS3TP6-p;以该质粒单独或与pcDNA3.1(-)-TAHCCP1共转染肝癌细胞系HepG2细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;观察细胞中表达的TAHCCP1蛋白对NS3TP6启动子转录活性的调节。结果构建的重组表达载体pCAT3-NS3TP6-p在HepG2细胞中能够启动报告基因CAT表达,表明克隆的NS3TP6启动子有指导下游基因转录表达的活性;共转染实验中pCAT3-NS3TP6-p与pcDNA3.1(-)-TAHCCP1组CAT的表达活性是对照组的3.1倍,说明TAHCCP1蛋白能够在转录水平反式激活NS3TP6基因启动子活性。结论本实验验证了基因芯片的实验结果准确性,进一步完善了新基因TAHCCP1的生物学功能,为深入理解HCV核心蛋白的反式激活调节机制提供了新的依据。 展开更多
关键词 TAHCCP1 反式调节 NS3TP6 启动子 基因表达
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丙型肝炎NS5ATP6基因原核表达载体的构建和表达纯化及多克隆抗体的制备
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作者 郑铁龙 成军 洪源 《实用肝脏病杂志》 CAS 2008年第1期2-5,49,共5页
目的构建丙型肝炎病毒NS5A蛋白反式激活蛋白6基因的原核表达载体并进行表达、鉴定。方法从已构建的pGBKT7-NS5ATP6质粒上切取NS5ATP6基因,再克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP6表达重组体。结果以pET32a(+)-NS5ATP6重组体分别转... 目的构建丙型肝炎病毒NS5A蛋白反式激活蛋白6基因的原核表达载体并进行表达、鉴定。方法从已构建的pGBKT7-NS5ATP6质粒上切取NS5ATP6基因,再克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP6表达重组体。结果以pET32a(+)-NS5ATP6重组体分别转化DH5α和Rosseta大肠埃希菌后,经IPTG诱导,pET32a(+)-NS5ATP6表达出分子量为41KD左右的重组蛋白。免疫动物并经Westernblot检测证实其具有良好的抗原性。结论成功地构建了原核表达载体pET32a(+)-NS5ATP6,诱导表达和纯化了NS5ATP6融合蛋白,并制备了该蛋白的多克隆抗体,为下一步该基因功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS5ATP6基因 原核表达
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THE CLEAVAGE REACTION OF Mo≡Mo TRIPLE BOND.SYNTHESIS AND X-RAY CRYSTAL STRUCTURE OF[CpMo(CO)_2(N,S-C9H6NS)]·O=PPh3
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作者 You Mao SHI Shi Wei Lu He Fu GUO a.Delian Institute of Chemical Physics,Chinese Academy of Sciences,Delian 116023Ning Hai HU b.Changchun Institute of Applied Chemistry,Chinese Academy of Sciences,Changchun 130022 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 1992年第8期665-666,共2页
The reaction of[CpMo(CO)_2]_2 with 8,8'-diquinolyl disulphide C_9H_6NSSNC_9H_6 resulted in the cleavage of Mo≡Mo triple bond to give a new nononuclear complex CpMo(CO)_2(N,S-C_9H_6NS)which was refluxed with PPh_3... The reaction of[CpMo(CO)_2]_2 with 8,8'-diquinolyl disulphide C_9H_6NSSNC_9H_6 resulted in the cleavage of Mo≡Mo triple bond to give a new nononuclear complex CpMo(CO)_2(N,S-C_9H_6NS)which was refluxed with PPh_3 in THF to form the title complex.The crystal structure of the title complex was determined by X-ray diffraction. 展开更多
关键词 THE CLEAVAGE REACTION OF Mo O=PPh3 Ph N S-C9H6NS O CO
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