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人源NOVA1蛋白的真核表达及其抗低氧活性鉴定
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作者 李华玲 吕贝 +2 位作者 孔玲 陈欣虹 朱素娟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期507-517,共11页
构建人NOVA1基因的真核表达载体pCMV-Myc-NOVA1,转染PC12细胞后筛选最佳转染条件,进而结合细胞免疫组织化学研究NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达分布,并探究其抗低氧活性。根据NCBI数据库NOVA1基因序列设计上下游引物,以pCR4-TOPO-NOVA1载... 构建人NOVA1基因的真核表达载体pCMV-Myc-NOVA1,转染PC12细胞后筛选最佳转染条件,进而结合细胞免疫组织化学研究NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达分布,并探究其抗低氧活性。根据NCBI数据库NOVA1基因序列设计上下游引物,以pCR4-TOPO-NOVA1载体为模板采用聚合酶链式反应扩增获得NOVA1基因的全长c DNA编码序列,限制性内切酶SalⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pCMV-Myc真核表达载体,酶切及直接测序验证后采用脂质体转染法转染入PC12细胞,针对转染比例和转染时间进行优化,进而采用实时定量PCR和Western blotting检测NOVA1蛋白的表达,最后采用细胞免疫组织化学检测NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达定位及其抗低氧活性。通过酶切和直接测序验证,成功构建了真核表达载体pCMV-Myc-NOVA1;质粒和Lipo2000最佳转染比例为1:2.5,最佳转染时间为72 h;最佳转染条件下NOVA1基因和蛋白的表达水平显著增加,转染pCMV-Myc-NOVA1质粒后,NOVA1蛋白主要分布于细胞核和细胞质;过表达NOVA1的PC12细胞增殖活性明显增加。本文采用分子克隆的方法成功构建了NOVA1基因的真核表达载体,通过条件优化实现了高效表达并测定过表达NOVA1蛋白具有明显的抗低氧活性,不仅为深入揭示NOVA1蛋白的作用机理提供了重要参考,而且为NOVA1蛋白潜在的药物开发提供了重要技术支撑。 展开更多
关键词 人源nova1蛋白 真核表达载体 转染 分布 抗低氧
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Nova1的两种抗体的免疫印迹实验的比较
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作者 李华玲 陈文飞 +1 位作者 焦红梅 申丽 《昆明医科大学学报》 CAS 2012年第12期33-35,共3页
目的探讨两个不同公司的同一种抗体神经-肿瘤腹侧抗原(Nova1)在大鼠脑组织中的表达,比较其异同.方法采用免疫组织化学法(IHC)和Western-blot(WB)进行检测.结果 IHC显示Nova1在大脑中分布广泛,在神经细胞的轴突或树突中都有表达;WB显示在... 目的探讨两个不同公司的同一种抗体神经-肿瘤腹侧抗原(Nova1)在大鼠脑组织中的表达,比较其异同.方法采用免疫组织化学法(IHC)和Western-blot(WB)进行检测.结果 IHC显示Nova1在大脑中分布广泛,在神经细胞的轴突或树突中都有表达;WB显示在55 kDa处都有很清晰的条带.结论这两种抗体的表达清晰,既可以用于IHC,也可以用于WB实验. 展开更多
关键词 大鼠脑组织 nova1 不同抗体 免疫印迹实验
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miR-128通过调控NOVA1的表达抑制肾透明细胞癌发展的进程
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作者 徐冰 毛晓娟 +4 位作者 付晓亮 舒涛 杨增悦 王东 郭金刚 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第1期25-34,共10页
目的研究mi R-128通过调控NOVA1在肾透明细胞癌细胞中的表达对癌细胞发展的影响和分子机制。方法RT-qPCR检测Caki-1、Caki-2和HK-2细胞中mi R-128和NOVA1的表达;利用mi R-128 mimic、mi R-128 inhibitor、pc DNA3. 1/NOVA1、si NOVA1或... 目的研究mi R-128通过调控NOVA1在肾透明细胞癌细胞中的表达对癌细胞发展的影响和分子机制。方法RT-qPCR检测Caki-1、Caki-2和HK-2细胞中mi R-128和NOVA1的表达;利用mi R-128 mimic、mi R-128 inhibitor、pc DNA3. 1/NOVA1、si NOVA1或对照mi RNA-NC、pc DNA3. 1、control si RNA分别转染Caki-1和Caki-2细胞; MTT法检测Caki-1和Caki-2细胞增殖,Transwell法检测Caki-1和Caki-2细胞侵袭,流式细胞术检测Caki-1和Caki-2细胞凋亡,双荧光素酶活性法检测mi R-128的靶基因,Western blot法检测NOVA1在Caki-1和Caki-2细胞中的蛋白表达。结果 mi R-128在Caki-1和Caki-2细胞中的表达水平明显高于对照组细胞HK-2(P <0. 05)。与转染mi RNA-NC相比,mi R-128 mimic转染后,Caki-1和Caki-2细胞增殖率和侵袭能力降低(P <0. 01),细胞凋亡率上升(P <0. 05); mi R-128 inhibitor转染后,细胞增殖率和侵袭能力升高(P <0. 05),细胞凋亡率降低(P <0. 01)。双荧光素酶报告实验表明NOVA1为mi R-128的靶基因。与转染pc DNA3. 1空质粒相比,转染pc DNA3. 1/NOVA1后,Caki-1和Caki-2细胞增殖率和侵袭能力显著上升(P <0. 01),细胞凋亡率显著下降(P <0. 05);与转染control si RNA相比,si NOVA1转染后,细胞增殖率和侵袭能力显著下降(P <0. 05; P <0. 01),细胞凋亡率显著上升(P <0. 01)。结论在肾透明细胞癌中mi R-128通过抑制靶基因NOVA1的表达抑制癌细胞发展。 展开更多
关键词 miR-128 nova1 肾透明细胞癌 细胞凋亡
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NOVA1在肿瘤发生、发展中作用的研究进展
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作者 杜利莉 吴刘成 《临床与实验病理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期311-313,共3页
神经-肿瘤腹侧抗原1(neuro-oncological ventral antigen 1,NOVA1)是神经特异性剪接因子,在神经系统发育、功能维持中具有重要作用。近年,多项研究发现,在肺癌、肝癌、结直肠癌等肿瘤中,NOVA1可促进癌细胞增殖、迁移、侵袭,与预后密切... 神经-肿瘤腹侧抗原1(neuro-oncological ventral antigen 1,NOVA1)是神经特异性剪接因子,在神经系统发育、功能维持中具有重要作用。近年,多项研究发现,在肺癌、肝癌、结直肠癌等肿瘤中,NOVA1可促进癌细胞增殖、迁移、侵袭,与预后密切相关。该文就NOVA1在肿瘤发生、发展中作用的最新研究进展进行综述,探讨其调控机制和临床价值。 展开更多
关键词 肿瘤 nova1 剪接 预后 文献综述
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NOVA1在神经母细胞瘤细胞缺氧情况下的信号通路调节作用
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作者 刘敬恒 龚家扬 +1 位作者 马铭婕 曲肖风 《中文科技期刊数据库(全文版)医药卫生》 2023年第12期025-030,共6页
神经母细胞瘤(NB)是一种儿童多发性恶性肿瘤,生存率低,预后较差。PI3K/Akt/mTOR是肿瘤细胞的经典通路,对于癌细胞正常生物学功能调控意义重大。MYCN/p53/MDM2通路作为肿瘤细胞生长凋亡中重要的调节因子已被证实与NB有着重要的联系,其表... 神经母细胞瘤(NB)是一种儿童多发性恶性肿瘤,生存率低,预后较差。PI3K/Akt/mTOR是肿瘤细胞的经典通路,对于癌细胞正常生物学功能调控意义重大。MYCN/p53/MDM2通路作为肿瘤细胞生长凋亡中重要的调节因子已被证实与NB有着重要的联系,其表达水平是NB细胞发生不同生物学行为的重要原因。本文尝试探究神经母细胞瘤(NB)中的多个信号通路,特别是Akt/PI3K/mTOR、MYCN/P53/MDM2以及这些通路与肿瘤进程和缺氧状态的关系。Akt/PI3K/mTOR信号通路在NB中起到关键作用,参与了肿瘤的增殖和生存。Akt / PI3K /mTOR信号通路被抑制时,可能会降低MYCN的表达,进而影响肿瘤细胞的生长。在缺氧状态下,MYCN与下游基因NDRG1的表达互相拮抗,可能导致抗药性增加。p53在缺氧复氧的情况下可以抑制肿瘤细胞。研究表明,缺氧引起NOVA1表达增加,与细胞凋亡有关。但NOVA1 在缺氧期间的功能仍然知之甚少。其具体机制有待研究,我们通过缺氧处理的神经母细胞瘤细胞探索抑制凋亡的机制,旨在研究试图结合经典通路,探索新的神经母细胞瘤的治疗靶点。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤(NB) 缺氧 nova1 MYCN/p53/MDM2 PI3K/AKT/MTOR
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1RXS J232953.9+062814: a New SU UMa Dwarf Nova below the Period Minimum
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作者 Jian-Yan Wei, Xiao-Jun Jiang, Da-Wei Xu, Ai-Ying Zhou and Jing-Yao Hu National Astronomical Observatories, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100012 《Chinese Journal of Astronomy and Astrophysics》 CSCD 北大核心 2001年第6期483-486,共4页
RXS 1232953.9+062814 was identified as a cataclysmic variable by Wei et al. (1999). Four low-resolution spectra of 1RXS J232953.9+062814 were obtained with the 2.16-rn telescope of the National Astronomical Observator... RXS 1232953.9+062814 was identified as a cataclysmic variable by Wei et al. (1999). Four low-resolution spectra of 1RXS J232953.9+062814 were obtained with the 2.16-rn telescope of the National Astronomical Observatories, of which two were at outburst, and two were at quiescence. The system is about 16.8 B and 16.5 V at quiescence, and 12.6 B and 12.6 V at outburst. The quiescent spectra were dominated by double-peaked Balmer emissions, which indicates a hydrogen-rich system with a high-inclination accretion disc. MgH and TiO absorption bands appeared in the quiescent spectrum which implies a companion with a spectral type of early M dwarf. If we take it as a MO dwarf, then the system is located at a distance of 350 pc with a proper motion velocity 150 km s-1. The superhump period of 0.046311 days was confirmed by our V photometry. The short period and the hydrogen-rich nature reveal that this system is another SU Ursae Majoris-type dwarf nova below the period minimum after V485 Centauri. 1RXS J23 2953.9+062814 is one of the most important systems for studying the evolutionary scenario of cataclysmic variables since it is much brighter than V485 Cen. 展开更多
关键词 stars: dwarf novae - stars: cataclysmic variables: individual: 1RXS J232953.9 +062814
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