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nodD基因的克隆及其导入大豆根瘤菌工程菌株的构建 被引量:2
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作者 刘金玲 张喜波 +2 位作者 贾珊珊 平原 李海英 《黑龙江大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2012年第1期121-123,129,共4页
以快生型大豆根瘤菌(Sinorhizobium fredii)15067的基因组DNA作为模板,采用PCR技术,克隆结瘤基因nodD编码区序列;利用DNA重组技术,将nodD基因连到lac启动子的下游,通过luxAB基因标记的质粒载体pTR102构建表达载体pTR102-Plac-nodD,采用... 以快生型大豆根瘤菌(Sinorhizobium fredii)15067的基因组DNA作为模板,采用PCR技术,克隆结瘤基因nodD编码区序列;利用DNA重组技术,将nodD基因连到lac启动子的下游,通过luxAB基因标记的质粒载体pTR102构建表达载体pTR102-Plac-nodD,采用三亲本杂交的方式,将构建的表达载体转化土著大豆根瘤菌,构建转基因工程菌株,为研究转基因工程菌株对大豆结瘤能力的影响提供依据。 展开更多
关键词 大豆根瘤菌 nodd基因 工程菌株 三亲本杂交
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中慢生华癸根瘤菌nodD-突变株的筛选及其对紫云英的促生作用 被引量:1
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作者 杜寒春 高轶静 +2 位作者 郑会明 钟增涛 朱军 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期529-532,共4页
通过二亲接合的方式,将含有sacB基因和nodD基因部分片段的质粒与中慢生华癸根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)93(Mh93)菌株进行同源重组,在含10%蔗糖的TY平板上成功地筛选到了nodD基因突变株Mh93-27。利用温室盆栽试验研究了紫云英单作及... 通过二亲接合的方式,将含有sacB基因和nodD基因部分片段的质粒与中慢生华癸根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)93(Mh93)菌株进行同源重组,在含10%蔗糖的TY平板上成功地筛选到了nodD基因突变株Mh93-27。利用温室盆栽试验研究了紫云英单作及紫云英-小麦间作体系Mh93-27对紫云英的促生作用,结果表明,接种Mh93-27后,紫云英的地上部生物量和全氮含量以及根部生长得到了不同程度的提高,但只有在小麦孕穗期和收获期时,根瘤菌才表现出显著的促生作用。 展开更多
关键词 中慢生华癸根瘤菌 sacB nodd 紫云英 促生 氮素
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苜蓿中华根瘤菌042B nodD基因的克隆、序列分析及其表达
3
作者 杨兴洪 杨苏声 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期416-425,共10页
苜蓿中华根瘤菌( Sinorhizobium melioti) 042B 是一株能在苜蓿和大豆上结瘤的菌株。将042B 的nodD 基因克隆到载体pBBR1 MCS5 ,并在豌豆根瘤菌( Rhizobiu m legumi... 苜蓿中华根瘤菌( Sinorhizobium melioti) 042B 是一株能在苜蓿和大豆上结瘤的菌株。将042B 的nodD 基因克隆到载体pBBR1 MCS5 ,并在豌豆根瘤菌( Rhizobiu m leguminosaru m bv .viciae)LRR5045 系统中进行功能分析,发现042B 的NodD 蛋白能与大豆的类黄酮化合物genistein 结合,也能与苜蓿的类黄酮化合物luteolin 反应。表明042B nodD 基因很可能是其能够在两类寄主植物上结瘤的寄主专一性决定因子。将nodD 基因片段分别克隆到表达载体pThioHis A、B和C,得到了3 个重组质粒pXDA、pXDB和pXDC。通过序列分析发现,pXDC 中的nodD 基因与pThioHis C 中的trxA 基因阅读框吻合。将大肠杆菌( E.coli)Top10(pXDC) 经IPTG 诱导后用SDSPAGE 分析,发现融合蛋白表达成功,其分子量恰为TrxA 与NodD 之和。利用Western 印迹法证明E.coli Top10(pXDC) 所表达的蛋白质是由目的基因编码的。 展开更多
关键词 苜蓿 中华根瘤菌 nodd基因 融合蛋白 序列分析
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导入nodD-lba串联基因的根瘤菌工程菌株的构建 被引量:2
4
作者 李珊珊 李海英 于冰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期119-123,共5页
旨在利用同源序列克隆法,克隆出结瘤相关基因nodD和大豆血红蛋白基因lba。以串联的方式将nodD和lba基因连接到lac启动子的下游,通过DNA重组技术构建出带有发光酶基因luxAB的重组载体pTR-Plac-nodD-lba。通过三亲本杂交方法构建转基因费... 旨在利用同源序列克隆法,克隆出结瘤相关基因nodD和大豆血红蛋白基因lba。以串联的方式将nodD和lba基因连接到lac启动子的下游,通过DNA重组技术构建出带有发光酶基因luxAB的重组载体pTR-Plac-nodD-lba。通过三亲本杂交方法构建转基因费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii),Western blot试验证明导入基因能够进行表达。将初始菌株和基因工程菌株侵染大豆幼苗后进行固氮酶活的测定。测定结果表明,转基因工程菌株均能够提高固氮酶效率,导入串联基因的工程菌株在提高固氮酶活性上比导入lba和nodD基因的工程菌株高出4%和15.1%。 展开更多
关键词 结瘤基因nodd 大豆血红蛋白基因lba 费氏中华根瘤菌 三亲本杂交
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紫云英根瘤菌159中两个结构和功能不同的nodD基因 被引量:2
5
作者 宫澜 金润之 《植物生理学报(0257-4829)》 CSCD 1998年第1期43-48,共6页
紫云英根瘤菌159含2个拷贝的nodD基因。核苷酸序列测定表明由nodD1和nodD2基因所推定编码的nodD1和nodD2蛋白其氨基酸顺序同源性为69%。功能分析显示,在紫云英根瘤菌中nodD1和nodD2基因均能自主表达。由nodD1推定的nodD1能与紫云英种... 紫云英根瘤菌159含2个拷贝的nodD基因。核苷酸序列测定表明由nodD1和nodD2基因所推定编码的nodD1和nodD2蛋白其氨基酸顺序同源性为69%。功能分析显示,在紫云英根瘤菌中nodD1和nodD2基因均能自主表达。由nodD1推定的nodD1能与紫云英种子浸出液(诱导物)共同激活nod基因的表达,而由nodD2推定的nodD2则无此功能。 展开更多
关键词 紫云英根瘤菌 nodd基因 核苷酸序列 功能分析
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费氏中华根瘤菌NodD2蛋白与植物类黄酮互作的生化机制研究 被引量:1
6
作者 陈敏 朱辉 曹扬荣 《生命的化学》 CAS 2022年第7期1396-1404,共9页
为研究大豆根瘤菌Sinorhizobium fredii HH103 NodD2蛋白与豆科植物分泌的多种类黄酮(包括柚皮素、染料木素、大豆苷元和木犀草素)的体外相互作用,并解析NodD2蛋白与不同类黄酮结合的关键氨基酸位点,在NodD2蛋白C端选择4段氨基酸序列进... 为研究大豆根瘤菌Sinorhizobium fredii HH103 NodD2蛋白与豆科植物分泌的多种类黄酮(包括柚皮素、染料木素、大豆苷元和木犀草素)的体外相互作用,并解析NodD2蛋白与不同类黄酮结合的关键氨基酸位点,在NodD2蛋白C端选择4段氨基酸序列进行截短,利用等温滴定量热法(ITC)在体外分别测定多种截短NodD2蛋白与类黄酮小分子互作产生的热量变化,根据计算机绘制的热量图谱得到两者反应的计量系数比、平衡常数和焓变化,以此分析NodD2蛋白与类黄酮小分子互作的强弱。使用三亲本杂交技术得到敲除突变体菌株S. fredii HH103ΩnodD2基因,并将不同突变形式的NodD2进行回补,基于大豆接种并观测根瘤固氮表型。结果显示,全长NodD2蛋白与柚皮素、染料木素和大豆苷元都有较强的结合能力,与木犀草素的结合能力很弱。4个截短NodD2蛋白对不同的类黄酮的敏感性不同,截短NodD2蛋白与类黄酮结合产生的热量变化相较于全长NodD2蛋白与类黄酮结合产生的热量变化较低。以上结果表明,NodD2蛋白作为直接受体结合类黄酮化合物,其C端氨基酸序列128F-132P、146V-152P、192S-198P和246P-249L在与类黄酮的结合中起关键作用。 展开更多
关键词 共生固氮 类黄酮 等温滴定量热法 nodd蛋白
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黄烷酮、NODD和nod-启动子分子间专一性作用的证明 被引量:1
7
作者 洪国藩 曹慧敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第2期113-116,共4页
采用亲和层析的方法纯化了NODD蛋白——根瘤菌中结瘤基因D(nodD)的产物。用这纯化的NODD研究黄烷酮(Naringenin,以下简称NAR)、NODD和nod-启动子间的相互作用。当NAR浓度低于0.4mmol/L时,实验没显示NAR对NODD阳nod-启动子之间专一性结... 采用亲和层析的方法纯化了NODD蛋白——根瘤菌中结瘤基因D(nodD)的产物。用这纯化的NODD研究黄烷酮(Naringenin,以下简称NAR)、NODD和nod-启动子间的相互作用。当NAR浓度低于0.4mmol/L时,实验没显示NAR对NODD阳nod-启动子之间专一性结合的影响,然而当浓度达到4.0mmol/L时,NAR能明显解离NODD和nod-启动子间的结合,这表明NAR、NODD和nod-启动子之间的相互作用是存在的。 展开更多
关键词 黄烷酮 结瘤基因 启动子
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结瘤调控蛋白NodD以八聚体形式结合靶DNA
8
作者 刘嵩涛 吕华峰 洪国藩 《中国科学(C辑)》 CSCD 1999年第1期24-30,共7页
从根瘤菌Rhizobiumleguminosarum 840 1( pIJ15 18)中部分纯化了结瘤调控蛋白NodD ,利用DNaseⅠ足迹法确定了它在R .l.bv .viciae的nodF启动子上的保护区 ,并运用基于凝胶延滞的一系列方法研究了NodD与靶DNA的相互作用 ,发现它以同聚的... 从根瘤菌Rhizobiumleguminosarum 840 1( pIJ15 18)中部分纯化了结瘤调控蛋白NodD ,利用DNaseⅠ足迹法确定了它在R .l.bv .viciae的nodF启动子上的保护区 ,并运用基于凝胶延滞的一系列方法研究了NodD与靶DNA的相互作用 ,发现它以同聚的八聚体形式与DNA结合 . 展开更多
关键词 nodd 八聚体 根瘤菌 DNA 相互作用 结瘤调控蛋白
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苜蓿根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)nodD3P1启动子下游序列的缺失和互补分析 被引量:1
9
作者 陈迪 刘彦杰 +2 位作者 朱家璧 沈善炯 俞冠翘 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2002年第6期512-518,共7页
在苜蓿根瘤菌中,nodD3基因的转录由两个彼此分离的启动子P1和P2控制.在P1下游是一段由660 bp组成的序列,接着是nodD3的编码区.由P1下游序列3’末端开始缺失得到的一系列缺失突变体的遗传分析指出,P1下游+1~+125 nt序列对P1的表达是必须... 在苜蓿根瘤菌中,nodD3基因的转录由两个彼此分离的启动子P1和P2控制.在P1下游是一段由660 bp组成的序列,接着是nodD3的编码区.由P1下游序列3’末端开始缺失得到的一系列缺失突变体的遗传分析指出,P1下游+1~+125 nt序列对P1的表达是必须的.互补分析和结瘤试验指出,ORF2自我抑制P1的表达,而+1~+125nt序列可对抗ORF2对P1的抑制作用. 展开更多
关键词 启动子 缺失 互补 芷蓿根瘤菌 nodd3基因 下游序列 自我调节作用 编码区 质粒构建
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Frankia菌株At4的类nodD基因的克隆与研究 被引量:4
10
作者 柏学亮 陈丽梅 邹铧 《广西农业大学学报》 CSCD 1993年第2期45-50,共6页
通过功能互补法从Frankia菌株At4的基因文库中筛选到可互补豌豆根瘤菌nodD基因功能的pAt2GX和pAt3GX,把pAt2GX和pAt3GX重新导入tmdD突变体中,接种豌豆苗,可观察到nodD突变体恢复了结瘤功能。扫描电镜观察、根瘤内生菌抗性标记检测及内... 通过功能互补法从Frankia菌株At4的基因文库中筛选到可互补豌豆根瘤菌nodD基因功能的pAt2GX和pAt3GX,把pAt2GX和pAt3GX重新导入tmdD突变体中,接种豌豆苗,可观察到nodD突变体恢复了结瘤功能。扫描电镜观察、根瘤内生菌抗性标记检测及内生菌重组质粒的酶切分析均表明nadD突变体恢复结瘤功能是山于带有外源质粒pAt2GX和pAt3GX所致,这就证明了pAt2GX和pAt3GX带有类nodD基因功能的DNA片段。酶切分析及DNA-DNA杂交实验结果说明pAt2GX和pAt3GX不属于同—克隆,但这两个质粒的DNA之间有同源区。 展开更多
关键词 弗兰克氏菌 结瘤 nidD基因
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Regulatory role of the sequences downstream from nodD3 P1 promoter of Rhizobium meliloti 被引量:2
11
作者 Bing Zhu Xiaomi Dai +2 位作者 Jiabi Zhu Guanqiao Yu Shanjiong Shen 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2000年第1期60-64,共5页
The 660 bp region between nodD3 P1 promoter and the following coding region of Rnizopium meliloti has been studied. This region is designated 'downstream sequences' . it consists of two potential open reading ... The 660 bp region between nodD3 P1 promoter and the following coding region of Rnizopium meliloti has been studied. This region is designated 'downstream sequences' . it consists of two potential open reading frames, ORF1 and ORF2. Studies on the role of the downstream sequences on the activity of nooD3 P1 with nod D3(P1)-/acZ fusion show that deletion of the seguences containing ORF2 causes the increase of the activity of the fusion; on the contrary, addition of extra copies of ORF2 markedly decreases the activity of the fusion. These results indicate that the product of ORF2 plays a negative role in the expression of nod D3. 展开更多
关键词 RHIZOBIUM MELILOTI nodd3P1 gene regulation DOWNSTREAM sequences.
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苜蓿根瘤菌的正调节蛋白SyrM与nodD3基因P1上游区结合的位点及特性
12
作者 肖晖 沈善炯 朱家璧 《中国科学(C辑)》 CSCD 1998年第3期244-250,共7页
在苜蓿根瘤菌中 ,nodD3分别由 2个启动子P1和P2在不同条件下介导表达 .通过凝胶滞后技术进一步研究与nodD3基因P1介导表达有关的反式作用因子 ,证明SyrM能与P1上游区结合 ,而NodD3则不能 ,因而排除了NodD3直接自身激活的可能性 .利用DN... 在苜蓿根瘤菌中 ,nodD3分别由 2个启动子P1和P2在不同条件下介导表达 .通过凝胶滞后技术进一步研究与nodD3基因P1介导表达有关的反式作用因子 ,证明SyrM能与P1上游区结合 ,而NodD3则不能 ,因而排除了NodD3直接自身激活的可能性 .利用DNA酶Ⅰ足印分析确定了SyrM结合于nodD3基因P1上游区的顺式因子序列 ,在该序列中含有 2个顺向重复的反转重复结构 .通过合成的只含有 1个反转重复结构的 3种寡核苷酸片段与SyrM进行结合分析 ,结果表明SyrM不能与它们结合 。 展开更多
关键词 SyrM nodd3 根瘤菌 苜蓿根瘤菌 正调节蛋白
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Analysis of the downstream region of nodD3 P1 promoter by deletion and complementation tests in Sinorhizobium meliloti 被引量:1
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作者 陈迪 刘彦杰 +2 位作者 朱家璧 沈善炯 俞冠翘 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2003年第2期165-173,共9页
In Sinorhizobium meliloti, the nodD3 gene is transcriptionally controlled by two promot-ers, P1 and P2. Under P1, there is a 660 bp sequence including a small open reading frame, ORF2, followed by the nodD3 coding reg... In Sinorhizobium meliloti, the nodD3 gene is transcriptionally controlled by two promot-ers, P1 and P2. Under P1, there is a 660 bp sequence including a small open reading frame, ORF2, followed by the nodD3 coding region. Genetic analysis using the different deletions on the 3′ends of P1 downstream sequence showed that the downstream sequence +1—+125nt is es-sential for P1 expression. Complementation, mutations and nodulation tests demonstrated that the ORF2 auto-represses P1 expression, while the P1 downstream sequence +1—+125nt counteracts it. 展开更多
关键词 SINORHIZOBIUM meliloti nodd3 gene DOWNSTREAM sequence autoregulation.
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nodD GENE PRODUCT AND THE nodA-D INTERGENIC REGION CAN FORM AS MANY AS SEVEN COMPLEXES
14
作者 曹慧敏 洪国藩 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1992年第11期951-953,共3页
Nodulation is crucial for the symbiosis between Rhizobia and plants, and 13 nod genes have been identified in Rhizobium leguminosarum biovar (bv.) viciae, which are responsible for the formation of nodules on plant ro... Nodulation is crucial for the symbiosis between Rhizobia and plants, and 13 nod genes have been identified in Rhizobium leguminosarum biovar (bv.) viciae, which are responsible for the formation of nodules on plant roots. The nodD, one of those nod genes, is an autoregulatory gene, which controls the expressions of all the rest nod genes in the 展开更多
关键词 DNA-protein COMPLEXES nodd gene product nodA-D intergemc region
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NodD binds to target DNA in isologous octamer
15
作者 刘嵩涛 吕华峰 洪国藩 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 1998年第6期592-599,共8页
NodD, the major regulatory protein of nodulation, was partially purified from Rhizobium leguminosarum 8401(pIJ1518), and its binding sequences within nodF promoter of R.l. bv. viciae were determined by DNase I footpri... NodD, the major regulatory protein of nodulation, was partially purified from Rhizobium leguminosarum 8401(pIJ1518), and its binding sequences within nodF promoter of R.l. bv. viciae were determined by DNase I footprinting. A series of techniques based on gel retardation were used to analyze the NodD_target DNA interaction, showing that NodD binds to target DNA in isologous octamer. 展开更多
关键词 nodd DNase I FOOTPRINTING gel retardation OCTAMER RHIZOBIUM LEGUMINOSARUM bv. viciae .
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Further Studies on Structure of nodD3 Gene in Rhizobium meliloti——Analysis of 5'Non-Coding Region of nodD3 and Its Evolutionary Implications
16
作者 俞冠翘 朱家璧 +1 位作者 高云峰 沈善炯 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1994年第8期975-983,共9页
R.meliloti nodD3 gene is transcriptionally controlled by two promoters.Gel retardationexperiments show that SyrM and NodD3 are binding to the first promoter region of nodD3,while no proteinfactor is found to bind to t... R.meliloti nodD3 gene is transcriptionally controlled by two promoters.Gel retardationexperiments show that SyrM and NodD3 are binding to the first promoter region of nodD3,while no proteinfactor is found to bind to the second promoter region of the gene.Comparison has been made between 5′ non-coding region of nodD3 and the corresponding region upstream of nodD1.The presence of nod-box andnodA-like sequences in the 5′ noncoding region of nodD3 supports the hypothesis that nodD3 evolves withthe duplication of the nodD1-nodA fragment during the speciation of R.meliloti. 展开更多
关键词 RHIZOBIUM MELILOTI nodd3 REGULATION EVOLUTION
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Determination of DNA Sequences Protected by NodD Proteins
17
作者 吕幼仪 徐有成 洪国藩 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1994年第21期1843-1845,共3页
In Rhizobium leguminosarum (R.1.) biovar viciae, the nodulation (nod) gene D encodes a transcriptional activator (NodD). It also represses nodD transcription,and this autoregulation occurs at the divergent and overlap... In Rhizobium leguminosarum (R.1.) biovar viciae, the nodulation (nod) gene D encodes a transcriptional activator (NodD). It also represses nodD transcription,and this autoregulation occurs at the divergent and overlapping nodA-nodD promoters. 展开更多
关键词 nodd-protected DNA SEQUENCES NODULATION genes.
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紫云英-小麦混作体系中氮素转移对小麦生长的促进作用 被引量:13
18
作者 杜寒春 郑会明 +4 位作者 周晶 曹慧 沈标 娄无忌 钟增涛 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1043-1046,共4页
关键词 中慢生华癸根瘤菌 nodd基因缺失菌株 小麦 氮素 PGPR
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根瘤菌结瘤基因的表达调控研究概况 被引量:6
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作者 樊妙姬 李正文 韦莉莉 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 1999年第3期225-228,共4页
根瘤菌结瘤基因的表达调控在根瘤菌与植物的共生结瘤过程中起着十分重要的作用。随着研究的深入,已经发现根瘤菌的结瘤过程不仅与根瘤菌结瘤基因表达调控有关,而且与寄主植物的信号分子如黄酮类物质有关。根瘤菌结瘤基因的表达调控是... 根瘤菌结瘤基因的表达调控在根瘤菌与植物的共生结瘤过程中起着十分重要的作用。随着研究的深入,已经发现根瘤菌的结瘤过程不仅与根瘤菌结瘤基因表达调控有关,而且与寄主植物的信号分子如黄酮类物质有关。根瘤菌结瘤基因的表达调控是一个复杂的过程,本文将简要地介绍这方面的研究成果。 展开更多
关键词 根瘤菌 结瘤因子 结瘤基因 nodd基因 基因的表达调控
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结瘤基因群调控蛋白Nod D在DNA分子上的结合位点的测定
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作者 吕幼仪 徐有成 洪国藩 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1993年第21期1998-2000,共3页
豆科植物和根瘤菌协同进行共生固氮,是自然界将游离的N_2转化成有机NH_3的主要途径之一。共生固氮只有在根瘤内环境中才能进行。通过转座突变、重组克隆和转化等一系列实验后发现,共生固氮菌中存在着一群特定的基因——结瘤nod基因,它... 豆科植物和根瘤菌协同进行共生固氮,是自然界将游离的N_2转化成有机NH_3的主要途径之一。共生固氮只有在根瘤内环境中才能进行。通过转座突变、重组克隆和转化等一系列实验后发现,共生固氮菌中存在着一群特定的基因——结瘤nod基因,它们引起植物根部结瘤,并决定寄主的专一性。不同根瘤菌内的nod基因数量虽然不同,但一般不超过十多个。 展开更多
关键词 结瘤基因群 nodd基因 作用位点 DNA
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