为了研究注射外源性神经介素B(NMB)对小鼠睾丸中NMB及其受体和睾酮合成关键酶(St AR、CYP11A1和3β-HSD)表达及血清中睾酮浓度的影响,试验将40只雄性ICR小鼠随机分成12 h对照组(12 h Control组)、12 h试验组(12 h NMB组)、24 h对照组(24...为了研究注射外源性神经介素B(NMB)对小鼠睾丸中NMB及其受体和睾酮合成关键酶(St AR、CYP11A1和3β-HSD)表达及血清中睾酮浓度的影响,试验将40只雄性ICR小鼠随机分成12 h对照组(12 h Control组)、12 h试验组(12 h NMB组)、24 h对照组(24 h Control组)和24 h试验组(24 h NMB组),每组10只,2个对照组和2个试验组分别按体重10μL/g腹腔注射生理盐水和10 nmol/L NMB溶液;称量注射前后小鼠体重,计算饲料用量,并观察小鼠行为特征;各组小鼠分别于注射后12小时、24小时摘眼球采血并处死取睾丸,通过ELISA法检测小鼠血清中睾酮的浓度;通过实时荧光定量PCR(q PCR)和蛋白印迹法(Western-blot)检测小鼠睾丸中NMB、NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA和蛋白表达量。结果表明:与12 h Control组相比,12 h NMB组小鼠行为无明显异常,体重增量、总摄食量略有减少,料重比略有增高,但差异不显著(P>0.05);NMB、NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA及蛋白表达量均差异不显著(P>0.05);血清中睾酮浓度差异不显著(P>0.05)。与24 h Control组相比,24 h NMB组小鼠被毛粗乱、脾气暴躁,体重增量显著减少(P<0.05);总摄食量减少,料重比略有增高,但均差异不显著(P>0.05);NMB m RNA和蛋白表达量极显著降低(P<0.01),NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA及蛋白表达量均差异不显著(P>0.05);血清中睾酮浓度差异不显著(P>0.05)。与12 h NMB组相比,24 h NMB组NMBR m RNA表达量极显著降低(P<0.01),24 h NMB组NMBR蛋白表达量显著增加(P<0.05)。说明小鼠腹腔注射NMB能够抑制小鼠摄食,但对小鼠睾丸中睾酮的合成和分泌影响不大。展开更多
目的构建小鼠神经介素B(neuromedin B,NMB)及其受体(neuromedin B receptor,NMBR)基因慢病毒过表达质粒,并于RAW264.7细胞中表达,以期为小鼠NMB和NMBR基因过表达对RAW264.7细胞增殖及凋亡影响的深入研究奠定基础。方法经RT-PCR法扩增获...目的构建小鼠神经介素B(neuromedin B,NMB)及其受体(neuromedin B receptor,NMBR)基因慢病毒过表达质粒,并于RAW264.7细胞中表达,以期为小鼠NMB和NMBR基因过表达对RAW264.7细胞增殖及凋亡影响的深入研究奠定基础。方法经RT-PCR法扩增获得小鼠NMB和NMBR基因的编码序列(coding sequence,CDS),插入载体pCD513B-1,构建重组质粒pCD513B-1-NMB和pCD513B-1-NMBR;于HEK-293T细胞包装获得小鼠NMB和NMBR基因过表达慢病毒,通过倍比稀释法检测病毒效价。用慢病毒感染RAW264.7细胞48 h后,qPCR法检测小鼠NMB和NMBR基因mRNA的表达情况,以未感染细胞为对照。结果经双酶切鉴定证明重组质粒构建正确。小鼠NMB和NMBR基因过表达慢病毒滴度分别为6×10~6和8×10~6TU/mL。2种慢病毒转染RAW264.7细胞中小鼠NMB和NMBR基因mRNA表达量显著高于对照组(t分别为24.158和14.958,P均<0.01)。结论成功构建了小鼠NMB和NMBR基因过表达质粒,能够显著提高RAW264.7细胞NMB和NMBR基因的表达量。展开更多
文摘为了研究注射外源性神经介素B(NMB)对小鼠睾丸中NMB及其受体和睾酮合成关键酶(St AR、CYP11A1和3β-HSD)表达及血清中睾酮浓度的影响,试验将40只雄性ICR小鼠随机分成12 h对照组(12 h Control组)、12 h试验组(12 h NMB组)、24 h对照组(24 h Control组)和24 h试验组(24 h NMB组),每组10只,2个对照组和2个试验组分别按体重10μL/g腹腔注射生理盐水和10 nmol/L NMB溶液;称量注射前后小鼠体重,计算饲料用量,并观察小鼠行为特征;各组小鼠分别于注射后12小时、24小时摘眼球采血并处死取睾丸,通过ELISA法检测小鼠血清中睾酮的浓度;通过实时荧光定量PCR(q PCR)和蛋白印迹法(Western-blot)检测小鼠睾丸中NMB、NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA和蛋白表达量。结果表明:与12 h Control组相比,12 h NMB组小鼠行为无明显异常,体重增量、总摄食量略有减少,料重比略有增高,但差异不显著(P>0.05);NMB、NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA及蛋白表达量均差异不显著(P>0.05);血清中睾酮浓度差异不显著(P>0.05)。与24 h Control组相比,24 h NMB组小鼠被毛粗乱、脾气暴躁,体重增量显著减少(P<0.05);总摄食量减少,料重比略有增高,但均差异不显著(P>0.05);NMB m RNA和蛋白表达量极显著降低(P<0.01),NMBR、St AR、CYP11A1和3β-HSD m RNA及蛋白表达量均差异不显著(P>0.05);血清中睾酮浓度差异不显著(P>0.05)。与12 h NMB组相比,24 h NMB组NMBR m RNA表达量极显著降低(P<0.01),24 h NMB组NMBR蛋白表达量显著增加(P<0.05)。说明小鼠腹腔注射NMB能够抑制小鼠摄食,但对小鼠睾丸中睾酮的合成和分泌影响不大。
