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题名siRNA沉默NLK基因促进神经化组织工程骨再生
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作者
李梦迪
雷蕾
刘中宁
李健
姜婷
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机构
北京大学口腔医学院·口腔医院修复科
首都医科大学附属北京友谊医院口腔科
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出处
《北京大学学报(医学版)》
北大核心
2025年第2期227-236,共10页
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基金
国家自然科学基金(81771045、82170928)
北京市科技新星计划项目(Z191100001119096)。
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文摘
目的:探讨沉默及过表达Nemo样激酶(Nemo-like kinase,NLK)基因对人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hBMSCs)神经向分化的作用,并探究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默NLK基因表达对促进神经化组织工程骨再生的影响。方法:在hBMSCs中分别转染siRNA沉默NLK基因(实验组转染沉默NLK基因的siRNA,对照组转染对照siRNA并记为阴性对照组)或慢病毒过表达NLK基因(实验组感染过表达NLK基因的慢病毒,对照组感染空载体慢病毒并记为空载体组),之后通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)、蛋白质印迹实验(Western blot)、免疫荧光实验检测敲低、过表达NLK基因对hBMSCs神经向分化的影响。采用6周龄雄性BALB/C nu/nu裸鼠构建皮下异位成骨模型,分为以下4组:①β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)组,②β-TCP+hBMSCs成骨诱导组,③β-TCP+siRNA-阴性对照(negative control,NC)转染的hBMSCs成骨诱导组,④β-TCP+siRNA-NLK转染的hBMSCs成骨诱导组。术后4周获取标本,通过组织形态学染色检测裸鼠体内成骨成神经情况,使用独立样本t检验进行统计学分析。结果:siRNA沉默hBMSCs的NLK基因后,神经相关基因βⅢ微管蛋白(classⅢβ-tubulin,TUBB3)、微管相关蛋白2(microtubule association protein-2,MAP2)、可溶性蛋白-100(soluble protein-100,S100)、巢蛋白(nestin,NES)、NG2蛋白聚糖(NG2 proteoglycan,NG2)及降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达较阴性对照组显著升高(P<0.05),TUBB3、MAP2等蛋白表达也升高。慢病毒过表达NLK基因后,与空载体组相比,神经相关基因TUBB3、MAP2、S100及NG2表达水平均显著下降(P<0.05),TUBB3蛋白表达降低。构建裸鼠皮下异位成骨模型术后4周发现β-TCP+siRNA-NLK转染的hBMSCs成骨诱导组较其他3组形成更多矿化组织,并且成骨相关标记物BMP2及成神经相关标记物S100显著高表达。结论:siRNA沉默NLK基因可以促进hBMSCs体外神经向分化,并在裸鼠体内异位成骨模型中能够促进神经化组织工程骨的形成。
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关键词
小干扰RNA
nlk基因
神经向分化
骨组织工程
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Keywords
Small interfering RNA
nlk gene
Neural-differentiation
Bone tissue engineering
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分类号
R783.3
[医药卫生—口腔医学]
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