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基于NKX2.2/LMX1B/5-HT通路探讨藤黄健骨胶囊治疗绝经后骨质疏松症大鼠的作用机制 被引量：1
1
作者 王霞霞 安方玉 +10 位作者 颜春鲁 孙柏 汪春梅 柳颖 常伟荣 宋佳眙 王玉洁 马海珍 张蕊 陈振东 席永斌 《中国现代应用药学》 北大核心 2025年第4期511-520,共10页
目的探讨同源结构域蛋白NK2同源盒2(homeodomain protein NK2 homeobox 2,NKX2.2)/LIM同源盒转录因子1B(LIM homeobox transcription factor 1B,LMX1B)/5-羟色胺(5-hydro xytryptamine,5-HT)信号通路对绝经后骨质疏松症(postmenopausal ... 目的探讨同源结构域蛋白NK2同源盒2(homeodomain protein NK2 homeobox 2,NKX2.2)/LIM同源盒转录因子1B(LIM homeobox transcription factor 1B,LMX1B)/5-羟色胺(5-hydro xytryptamine,5-HT)信号通路对绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)大鼠脑神经递质变化的影响,并揭示藤黄健骨胶囊可能的干预机制。方法60只SPF级SD雌性大鼠,随机分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组(0.09 mg·kg^(−1)),藤黄健骨胶囊高、中、低剂量组(0.36、0.18、0.09 g·kg^(−1)),每组10只。除假手术组外,其余各组均采用摘除双侧卵巢法来建立PMOP模型。模型制备成功后,假手术组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃,戊酸雌二醇组和藤黄健骨胶囊各干预组分别给予相应剂量药物灌胃。干预8周后,股动脉采血并处死各组大鼠,收集脑和股骨组织备用。观察各组大鼠的一般状况和体质量;HE染色观察各组大鼠股骨组织病理形态学改变;免疫荧光染色检测各组大鼠脑组织NKX2.2、LMX1B和5-HT荧光表达强度;RT-PCR法检测各组大鼠脑组织NKX2.2、LMX1B、色氨酸羟化酶2(tryptophan hydroxylase 2,TPH2)、五羟色胺2C受体(5-hydro xytryptamine 2C receptor,5-HT2CR)和股骨组织β2AR基因表达,Western blotting检测各组大鼠脑组织NKX2.2、LMX1B、TPH2、5-HT2CR和股骨组织β2AR蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组和藤黄健骨胶囊各剂量组大鼠造模8周后体质量均明显增加,模型组大鼠股骨组织骨小梁稀疏断裂、数目明显减少,有较多空隙、不能连接成网,梁髓比显著降低,骨髓脂肪组织(bone marrow adipose tissue,BMAT)相对面积显著升高(P<0.01);股骨组织中β2AR基因表达则明显增加(P<0.01);脑组织中NKX2.2、LMX1B、5-HT平均荧光强度、NKX2.2、LMX1B、TPH2和5-HT2CR基因表达和NKX2.2、LMX1B、TPH2和5-HT2CR蛋白表达及蛋白表达灰度值均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,藤黄健骨胶囊高剂量组大鼠干预8周后体质量明显降低,股骨组织骨小梁数量、排列及连接接近于假手术组,梁髓比显著升高(P<0.01);藤黄健骨胶囊中、高剂量组大鼠股骨组织BMAT相对面积显著降低(P<0.01);脑组织NKX2.2平均荧光强度和NKX2.2、LMX1B、TPH2基因及LMX1B、TPH2、5-HT2CR蛋白表达及蛋白表达灰度值均明显升高(P<0.05或P<0.01);藤黄健骨胶囊各剂量组大鼠脑组织LMX1B和5-HT平均荧光强度、5-HT2CR基因表达、NKX2.2蛋白表达及蛋白表达灰度值均明显升高,而股骨组织β2AR基因和β2AR蛋白表达及蛋白表达灰度值均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论藤黄健骨胶囊通过激活PMOP大鼠脑组织中NKX2.2/LMX1B/5-HT信号通路来改善其股骨病理形态损伤,从而发挥治疗PMOP的作用。 展开更多
关键词 藤黄健骨胶囊 绝经后骨质疏松症 nkx2.2/LMX1B/5-HT信号通路
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转录因子NKX2.1促进诱导多能干细胞向肺干细胞的分化
2
作者 邓丽 刘洋 +2 位作者 王慧 杨秋 董明清 《中国组织工程研究》 北大核心 2025年第36期7790-7796,共7页
目的:探究NKX2.1对诱导多能干细胞向肺干细胞方向分化的影响。方法:体外培养人诱导多能干细胞,采用实时荧光定量PCR和免疫荧光检测多能干细胞特异基因的表达;通过瞬时转染向人诱导多能干细胞中过表达NKX2.1,再诱导其向肺干细胞方向分化... 目的:探究NKX2.1对诱导多能干细胞向肺干细胞方向分化的影响。方法:体外培养人诱导多能干细胞,采用实时荧光定量PCR和免疫荧光检测多能干细胞特异基因的表达;通过瞬时转染向人诱导多能干细胞中过表达NKX2.1,再诱导其向肺干细胞方向分化,诱导分化7 d采用实时荧光定量PCR、免疫荧光检测FoxA2、SOX9和P63的表达,诱导分化13 d采用免疫荧光检测肺泡细胞标记分子SPB和SPC的表达。结果与结论:(1)诱导多能干细胞紧密集结呈典型克隆样生长,显著高表达干细胞特异表达基因OCT-4、SOX2和NANOG;(2)与未转染对照组相比,过表达NKX2.1组人诱导多能干细胞中NKX2.1表达显著升高(P<0.000 1);(3)诱导分化7 d,与未转染对照组相比,过表达NKX2.1组肺干细胞相关标记物FoxA2、SOX9和P63的表达显著升高(P<0.000 1);(4)诱导分化13 d,与未转染对照组相比,过表达NKX2.1组肺泡细胞标记分子SPB和SPC荧光强度显著增加。结果表明NKX2.1可以促进诱导多能干细胞向肺干细胞方向分化。 展开更多
关键词 诱导多能干细胞 肺干细胞 nkx2.1 定型内胚层 前肠内胚层 肺损伤 工程化干细胞
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NKX3.1特殊表达模式:6例宫颈腺样基底癌临床病理分析
3
作者 康份红 张永俊 《中国医药指南》 2025年第22期31-34,共4页
目的本研究旨在对宫颈腺样基底细胞癌(ABC)的临床病理特征进行深入探讨,并着重分析NKX3.1在肿瘤细胞内呈现的分层表达模式,挖掘其对肿瘤起源方面所蕴含的提示价值。方法对2020年1月至2024年9月厦门大学附属中山医收治的6例宫颈ABC患者... 目的本研究旨在对宫颈腺样基底细胞癌(ABC)的临床病理特征进行深入探讨,并着重分析NKX3.1在肿瘤细胞内呈现的分层表达模式,挖掘其对肿瘤起源方面所蕴含的提示价值。方法对2020年1月至2024年9月厦门大学附属中山医收治的6例宫颈ABC患者的临床病理资料展开回顾性分析。借助组织学评估手段,联合免疫组化检测(涵盖P16、P63、P40、NKX3.1、CK5/6、Ki-67等指标)以及分子检测技术(涉及高危型HPV分型、MYB荧光原位杂交检测),综合文献进行梳理,进而剖析肿瘤存在的双向分化特征。结果在纳入研究的6例患者当中,有5例为绝经后女性,仅1例为育龄期女性,且整体中位年龄为61岁。经检测发现,所有患者HPV均呈阳性反应,具体为HPV16、18型。术前影像学检查结果均为阴性;肿瘤标志物筛查中,1例鳞状细胞癌抗原检测(SCC)呈阳性,其余结果均为阴性。从病理层面观察,肿瘤结构主要由基底样细胞巢构成,其外周细胞呈现出栅栏状的排列方式,而在中央区域,则形成了具有腺样分化的结构;免疫组化显示P16弥漫强阳性(6/6),基底标志物P63、P40、CK5/6均阳性(6/6),NKX3.1核阳性局限于腺腔内层细胞,外层基底样细胞阴性,Ki-67指数≤10%,MYB基因无重排。中位随访20个月无复发或转移。结论NKX3.1的腔缘特异性表达(内层+,外层-)提示宫颈ABC可能起源于具有多向分化潜能的宫颈储备细胞,其内层细胞向腺腔表型(NKX3.1+)分化,外层保留基底/鳞状特征(P63+)。该分子表达模式为ABC的诊断及组织起源研究提供了关键依据,联合HPV检测可避免过度治疗。 展开更多
关键词 nkx3.1 人乳头瘤病毒 免疫组化 肿瘤起源
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大鼠胰腺不同发育时期转录因子Nkx2.2和Nkx6.1mRNA的表达调控研究 被引量：1
4
作者 张春举 袁栎 +3 位作者 王林涛 周锦勇 钟燕 德伟 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期17-19,共3页
目的:研究大鼠胚胎胰腺发育后期、新生期及成年期对转录因子Nkx2.2和Nkx6.1的mRNA表达调控。方法:利用显微分离等方法分离胚胎18.5天、新生和成年大鼠胰腺,对胰腺标本提取总RNA,利用胰腺内外分泌细胞分子标志———胰岛素和淀粉酶来鉴... 目的:研究大鼠胚胎胰腺发育后期、新生期及成年期对转录因子Nkx2.2和Nkx6.1的mRNA表达调控。方法:利用显微分离等方法分离胚胎18.5天、新生和成年大鼠胰腺,对胰腺标本提取总RNA,利用胰腺内外分泌细胞分子标志———胰岛素和淀粉酶来鉴定胰腺标本,再用RT鄄PCR分析Nkx2.2或Nkx6.1在大鼠胰腺几个不同发育时期的mRNA表达情况。结果:Nkx6.1在胚胎18.5天胰腺中有表达,出生时表达量有增加,到了成年显著下降。Nkx2.2的mRNA在胚胎期、新生期和成年期均有表达,新生期表达量较其他两个时期有显著性增加。从以上两个转录因子在胰腺不同发育时期的表达情况来看,它们的共同点是胚胎期有表达,新生期表达量较胚胎后期和成年期高,成年期表达量呈下降趋势。结论:不同生长发育时期对转录因子Nkx2.2和Nkx6.1的mRNA具有调节作用,新生期细胞增生分化加速,这与Nkx2.2、Nkx6.1等转录因子表达量增高有关。 展开更多
关键词 nkx2.2 nkx6.1 Β细胞 转录因子 胚胎胰腺
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81例单纯性先天性心脏病患者NKx 2.5基因突变筛查及关联研究 被引量：11
5
作者 韩增强 唐胤 +1 位作者 陈彧 胡大一 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2011年第6期461-464,共4页
目的:探讨NKx 2.5基因突变和单核苷酸多态性(SNP)与人类单纯性先天性心脏病(CHD)的关系。方法:应用聚合酶链反应结合脱氧核糖核酸(DNA)测序技术,对81例单纯性CHD患者(包括室间隔缺损组37例,房间隔缺损组17例,圆锥动脉干畸形组18例,动脉... 目的:探讨NKx 2.5基因突变和单核苷酸多态性(SNP)与人类单纯性先天性心脏病(CHD)的关系。方法:应用聚合酶链反应结合脱氧核糖核酸(DNA)测序技术,对81例单纯性CHD患者(包括室间隔缺损组37例,房间隔缺损组17例,圆锥动脉干畸形组18例,动脉导管未闭组5例,主动脉瓣二叶畸形组4例),74例患者一级亲属(一级亲属组)以及52例正常非CHD对照者(正常对照组)的NKx 2.5基因的所有外显子及其侧翼序列进行突变检测,并对SNP位点进行基因分型,分析单个位点的基因型和等位基因频率是否与CHD相关。结果:所有CHD患者、患者一级亲属基因编码均未发现突变,而在NKx 2.5基因外显子1区域内发现1个SNP位点,这个SNP位点位于上游63位碱基63A>G,导致第21位密码子由GAA转变为GAG,碱基替换后仍编码谷氨酸(Glu),属于同义突变(Glu21Glu)。基因型频率和等位基因频率的分布,在房间隔缺损组和正常对照组之间差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:NKx 2.5基因突变与我国单纯性CHD之间无明显相关,该基因上的63A>G SNP位点与先天性房间隔缺损之间可能存在相关性。 展开更多
关键词 先天性心脏病 转录因子 nkx 2.5基因 基因突变 单核苷酸多态性
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转录因子Nkx2.5和GATA4的相互作用 被引量：9
6
作者 丁建东 方翔 +4 位作者 李开如 姚玉宇 陶绍玉 王点 马根山 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第11期1933-1936,共4页
背景:心脏发育过程是复杂多种因子相互作用的结果,对转录因子Nkx2.5和GATA4在心脏发育过程中相互作用的研究将有助进一步了解心脏发育过程。目的:分析心脏转录因子Nkx2.5和GATA4在细胞内的相互作用。方法:在构建Nkx2.5和GATA4真核表达... 背景:心脏发育过程是复杂多种因子相互作用的结果,对转录因子Nkx2.5和GATA4在心脏发育过程中相互作用的研究将有助进一步了解心脏发育过程。目的:分析心脏转录因子Nkx2.5和GATA4在细胞内的相互作用。方法:在构建Nkx2.5和GATA4真核表达质粒以及脑钠肽启动子荧光表达质粒的基础上,将真核表达质粒经共转染或单转染COS7细胞,利用免疫共沉淀技术验证Nkx2.5和GATA4在细胞内是否有相互作用,并通过荧光素酶分析技术分析Nkx2.5和GATA4对脑钠肽启动子序列可能存在的协同激活作用。结果与结论:通过免疫共沉淀实验发现GATA4能将Nkx2.5沉淀下来,相应的Nkx2.5也能将GATA4沉淀下来,说明在COS7细胞中,GATA4能和Nkx2.5相互作用。脑钠肽启动子荧光表达质粒并与Nkx2.5和GATA4共转染COS7细胞,比起单转染Nkx2.5或GATA4质粒,两者共转染更能激活脑钠肽启动子的表达。Nkx2.5和GATA4不仅各自在心脏发育过程中发挥重要作用,两者之间的相互协调作用对于心脏的正常发育过程同样非常重要。 展开更多
关键词 转录因子 nkx2.5 GATA4 脑钠肽 先天性心脏病
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慢性鼻窦炎鼻息肉中转录因子NKX2-1调控嗜酸性炎症反应的作用 被引量：10
7
作者 黄远 巴罗 +3 位作者 李波 余文兴 杨芳丽 杜进涛 《山东大学耳鼻喉眼学报》 CAS 2018年第4期17-23,共7页
目的研究新型转录因子NKX2-1在慢性鼻窦炎伴鼻息肉发病中调控嗜酸性免疫炎症反应的作用。方法功能性鼻内镜手术获取鼻息肉及非变应性单纯鼻中隔偏曲患者鼻甲标本,通过酶联免疫、免疫组化及蛋白印迹检测细胞因子IL-5、IFN-γ、IL-17A,转... 目的研究新型转录因子NKX2-1在慢性鼻窦炎伴鼻息肉发病中调控嗜酸性免疫炎症反应的作用。方法功能性鼻内镜手术获取鼻息肉及非变应性单纯鼻中隔偏曲患者鼻甲标本,通过酶联免疫、免疫组化及蛋白印迹检测细胞因子IL-5、IFN-γ、IL-17A,转录因子NKX2-1及趋化因子CCL17在患者中的表达。结果鼻息肉患者中IL-5阳性表达率为24%,并伴有IL-4、IgE等炎症介质及酸性粒细胞浸润升高特征;40%鼻息肉患者关键细胞因子阴性表达并伴有IL-1β、IL-8等非嗜酸性炎症升高特征。单纯IL-5+鼻息肉患者NKX2-1表达低于非变应性单纯鼻中隔偏曲患者,单纯IL-5+鼻息肉患者中趋化因子CCL17高于非变应性单纯鼻中隔偏曲患者,且与趋化嗜酸性粒细胞相关。结论新型转录因子NKX2-1在不同内在型鼻息肉患者中具有表达差异,其在单纯IL-5+鼻息肉患者中表达下降且有负性调控嗜酸性炎症反应作用。 展开更多
关键词 鼻息肉 细胞因子 nkx2-1 内在型
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外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化 被引量：7
8
作者 张金平 张雷 +4 位作者 王惠娟 王多 赵昱 尹青 赵春芳 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期725-729,共5页
目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正... 目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正确。将重组质粒pEGFP-N1-Nkx2-5以脂质体法转染P19细胞,G418筛选2周,聚集4d,贴壁培养16d。以免疫细胞化学检测desmin、α-sarcomeric actin和cardiac Troponin T(cTnT)的表达。结果:将Nkx2-5基因正确插入pEGFP-N1载体,外源表达Nkx2-5基因可使P19细胞在无诱导剂、聚集条件下表达desmin、α-sarcomeric actin和cTnT蛋白。结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化。 展开更多
关键词 nkx2-5 质粒构建 P19细胞 基因转染 心肌分化
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间充质干细胞分化为心肌细胞过程中细胞形态变化与Nkx2.5表达相关性的初步研究 被引量：6
9
作者 刘玲珑 吴卓 +3 位作者 赵文婧 吴丽情 徐亦辰 陈维平 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期234-239,共6页
体外BMSCs分化为心肌细胞过程中,细胞在形态及相关基因的表达上发生明显的变化。本研究以心肌组织裂解液诱导BMSCs,观察分化过程中细胞形态变化,根据心肌细胞发生过程中细胞形态变化规律,选定5个检测点,行PCR检测细胞中Nkx2.5的表达,以... 体外BMSCs分化为心肌细胞过程中,细胞在形态及相关基因的表达上发生明显的变化。本研究以心肌组织裂解液诱导BMSCs,观察分化过程中细胞形态变化,根据心肌细胞发生过程中细胞形态变化规律,选定5个检测点,行PCR检测细胞中Nkx2.5的表达,以探究分化过程中细胞形态变化与相关基因表达规律及其之间的相关性。实验结果表明BMSCs分化为心肌细胞的过程中,细胞形态变化呈现明显规律:由单个大核,胞浆饱满,折光性好的纺锤形;逐渐演变为短杆状;形成突起并连接成网状结构;细胞端相接呈"竹节样"改变;最后形成肌管样结构;诱导前细胞不表达Nkx2.5,诱导过程中随着细胞形态的不断变化Nkx2.5持续表达并逐渐增强。说明间充质干细胞分化为心肌细胞的过程中,Nkx2.5表达相对量的变化与细胞的形态变化可能有一定的相关。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 心肌细胞 nkx2.5 细胞形态
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Nkx2-5基因诱导P19细胞分化中心肌标志物的表达 被引量：5
10
作者 张金平 王慧娟 +5 位作者 史玉兰 王立轩 赵昱 郭艳红 赵春芳 张雷 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2658-2662,共5页
目的研究同源框基因Nkx2-5在心肌发生中的作用。方法实验分转染组和未转染组,转染组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,未转染组细胞为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4、8、12、16d,免疫细胞化学检测α横... 目的研究同源框基因Nkx2-5在心肌发生中的作用。方法实验分转染组和未转染组,转染组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,未转染组细胞为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4、8、12、16d,免疫细胞化学检测α横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin,α-SA)和心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)的表达;RT-PCR检测GATA-4、α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)、心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)基因的表达。结果转染组α-SA和cTnT两种蛋白在聚集体贴壁的8、12、16d出现表达,表达量有增高趋势;16d与8d比有显著差异(P<0.01);RT-PCR结果显示:转染组GATA-4在贴壁培养的4d有表达,8、12d表达逐渐增多,16d时表达有所下降。α-MHC和ANF在贴壁培养的8d有表达,12d和16d时表达逐渐增多。统计结果表明GATA-4在8、12、16d的表达量与4d比有显著差异(P<0.05或P<0.01),α-MHC在12、16d的表达量与8d比有显著差异(P<0.05,P<0.01),ANF在16d的表达量与8d比有显著差异(P<0.01),16d表达量与12d比也有显著差异(P<0.01);未转染组结果均为阴性。结论外源表达Nkx2-5基因可诱导P19细胞逐渐表达心肌标志物。 展开更多
关键词 同源框基因 nkx2-5 P19细胞 心肌标志物
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骨髓间充质干细胞向心肌诱导过程中GATA-4和Nkx2-5基因的表达 被引量：6
11
作者 伍长学 张尔永 +3 位作者 杨思远 马建旸 安琪 石应康 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期882-885,共4页
目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌诱导分化过程中,心肌转录因子GATA-4和Nkx2.5基因表达的变化规律,探讨其分子生物学机理。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代以10μmol/L 5-氮杂胞苷(5-aza)诱导,分别于第1、2、3、4周收集... 目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌诱导分化过程中,心肌转录因子GATA-4和Nkx2.5基因表达的变化规律,探讨其分子生物学机理。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代以10μmol/L 5-氮杂胞苷(5-aza)诱导,分别于第1、2、3、4周收集细胞,免疫细胞化学法和Western blot法检测肌钙蛋白I(troponinI,TnI)表达,RT-PCR法分析GATA-4和Nkx2.5基因的表达。结果诱导后细胞停止生长,并倾向集落化,诱导第2周开始出现TnI阳性细胞,第1周开始即有GATA-4和Nkx2.5基因表达,逐渐增强,第3周达到高峰,持续到第4周。结论GATA-4和Nkx2.5基因表达在骨髓间充质干细胞向心肌样细胞诱导过程中逐渐增强,可能参与调控心肌细胞的分化过程。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 GATA-4基因 nkx2.5基因 心肌细胞
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人同源盒基因NKX3·1对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用 被引量：6
12
作者 刘闻闻 于春晓 +5 位作者 崔福爱 张鹏举 陈蔚文 胡晓燕 姜安丽 张建业 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期996-1002,共7页
构建人同源盒基因NKX3·1cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP中的表达及对细胞的促凋亡作用.以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3·1基因全长编码片段,将NKX3·1cDNA重组到真核表达载... 构建人同源盒基因NKX3·1cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP中的表达及对细胞的促凋亡作用.以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3·1基因全长编码片段,将NKX3·1cDNA重组到真核表达载体pcDNA3·1(+)中;将pcDNA3·1-NKX3·1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP细胞,用RT-PCR和Western印迹检测NKX3·1cDNA在转录水平和蛋白水平的表达;绘制细胞生长曲线,观察NKX3·1对前列腺癌细胞增殖的抑制作用;用DNA/ladder和流式细胞术检测NKX3·1对前列腺癌细胞凋亡的影响,进一步用RT-PCR检测凋亡相关基因caspase3、caspase8、caspase9、Apaf1、survivin和Bcl2表达的变化.人同源盒基因NKX3·1cDNA真核表达载体pcDNA3·1-NKX3·1经酶切及测序鉴定正确.pcDNA3·1-NKX3·1转染PC-3和LNCaP细胞后,经RT-PCR和Western印迹证明能有效表达NKX3·1.生长曲线显示,前列腺癌细胞转染NKX3·1cDNA后细胞增殖受到抑制;前列腺癌细胞转染NKX3·1cDNA48h后,DNA电泳呈现具有凋亡特征的DNAladder;流式细胞术检测出现明显凋亡峰;RT-PCR检测凋亡相关基因.结果显示,caspase3、caspase8、caspase9基因表达明显增加,Bcl2基因表达明显减少.本研究成功构建了真核表达载体pcDNA3·1-NKX3·1,转染PC-3和LNCaP细胞后能有效表达,并对细胞具有诱导凋亡作用. 展开更多
关键词 同源盒基因nkx3.1 真核表达载体 前列腺癌细胞 细胞凋亡
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法乐四联症患儿NKX2.5、TBX5、GATA4基因的表达研究 被引量：5
13
作者 石琳 李晓峰 +5 位作者 申阿东 陆进 柏松 袁峰 高国庆 李仲智 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2009年第5期375-378,共4页
目的:探讨NKX2.5、TBX5、GATA4基因与法乐四联症的发病关系及法乐四联症形成的分子机制。方法:10例法乐四联症患儿(法乐四联症组),为我院2005-06至2005-12心脏中心住院患儿。年龄4个月～8岁,平均3.5岁。6例非先天性心脏病(先心病)意外... 目的:探讨NKX2.5、TBX5、GATA4基因与法乐四联症的发病关系及法乐四联症形成的分子机制。方法:10例法乐四联症患儿(法乐四联症组),为我院2005-06至2005-12心脏中心住院患儿。年龄4个月～8岁,平均3.5岁。6例非先天性心脏病(先心病)意外死亡患儿作为对照(对照组),均没有先心病病史和遗传病家族史。年龄4个月～9岁,平均年龄3.8岁。留取各病例右心室流出道心肌组织,提取心肌组织总RNA,逆转录为与RNA链互补的单链DNA(cDNA)。按照引物设计原则进行引物设计,用来扩增心肌组织NKX2.5、TBX5、GATA4、GAPDH mRNA目的片段。引物长度18bp～22bp,扩增片段长度163bp、206bp、237bp、203bp。应用双标准曲线、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法比较NKX2.5、TBX5、GATA4基因的mRNA含量在对照组和法乐四联症组之间的统计学差异。结果:法乐四联症组的NKX2.5mRNA含量较对照组显著降低,差异有统计学意义。TBX5mRNA和GATA4mRNA含量在法乐四联症组与对照组的差异无统计学意义。结论:人心肌组织中有心脏发育相关基因NKX2.5、TBX5和GATA4mRNA的表达;法乐四联症可能与心肌组织中NKX2.5mRNA含量降低相关。 展开更多
关键词 nkx2.5基因 TBX5基因 GATA4基因 mRNA 法乐四联症
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NKx2.5基因在孕鼠肥胖致胚胎心脏畸形中的表达及意义 被引量：3
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作者 刘伟 陶芳标 +2 位作者 汪思应 黄德武 王晓红 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第1期16-20,共5页
目的探讨NKx2.5基因mRNA及其蛋白在肥胖孕鼠胚胎畸形心脏中的表达水平及相关意义。方法 3周龄SPF级SD雌鼠100只,随机分为两组:正常组(40只)给予基础饲料;高脂组(60只)给予高脂饲料。8周后,以高脂组体重超过正常组平均体重的20%且血清总... 目的探讨NKx2.5基因mRNA及其蛋白在肥胖孕鼠胚胎畸形心脏中的表达水平及相关意义。方法 3周龄SPF级SD雌鼠100只,随机分为两组:正常组(40只)给予基础饲料;高脂组(60只)给予高脂饲料。8周后,以高脂组体重超过正常组平均体重的20%且血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量显著高于正常组的作为肥胖雌鼠,随机抽取20只肥胖雌鼠和正常雌鼠分别与雄鼠交配获取肥胖组孕鼠和对照组孕鼠。取孕13、15、17、19 d胚胎鼠心脏,通过切片进行组织学观察以确定心脏畸形情况,采用RT-PCR法检测NKx2.5基因的mRNA表达,采用Western blot方法检测NKx2.5蛋白表达。结果肥胖组孕鼠胚胎心脏畸形率显著高于对照组孕鼠(P<0.01);肥胖组孕鼠各孕龄胚胎畸形心脏NKx2.5基因mRNA及其蛋白表达比对照组孕鼠正常胚胎显著降低(P<0.05)。结论孕鼠肥胖导致胚胎心脏畸形率升高;孕鼠肥胖抑制胚胎心脏NKx2.5基因和蛋白表达,可能导致心脏发生发育缺陷从而造成先天性心脏畸形。 展开更多
关键词 nkx2 5 孕鼠肥胖 胚胎 心脏畸形
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叶酸缺乏对孕鼠子代心脏中NKx2.5基因表达的影响 被引量：3
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作者 李静 刘石 +2 位作者 彭宇竹 陈吉庆 郭锡熔 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期20-22,共3页
目的探讨叶酸缺乏孕鼠子代心脏发育过程中NKx2.5基因和蛋白表达改变。方法成熟雌性36只SD大鼠随机分为实验组和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5 d、孕17.5 d胚胎鼠及新生... 目的探讨叶酸缺乏孕鼠子代心脏发育过程中NKx2.5基因和蛋白表达改变。方法成熟雌性36只SD大鼠随机分为实验组和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5 d、孕17.5 d胚胎鼠及新生鼠心脏。用RT-PCR检测NKx2.5基因mRNA表达。Western-blotting测GATA-4蛋白表达水平。结果NKx2.5基因mRNA及其蛋白在孕13.5 d、孕17.5 d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组(P均<0.05)。结论叶酸缺乏影响NKx2.5基因和蛋白表达水平,可能导致心脏发生发育中形态改变,从而造成心脏功能缺陷。 展开更多
关键词 叶酸 心脏 胚胎 新生鼠 nkx2.5基因
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转录因子Nkx2.5、ISL-1表达与小鼠胚胎心的早期发育 被引量：4
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作者 冯先玲 景雅 +3 位作者 李海荣 杨艳萍 乔从进 张涛 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期577-580,594,F0002,共6页
目的：探讨转录因子Nkx2.5和ISL-1的表达与小鼠胚胎早期心发育的关系.方法：胚龄7.5～13d小鼠胚胎连续石蜡切片,用抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、抗心肌肌球蛋白重链（MHC）、抗转录因子ISL-1、抗Nkx2.5抗体,进行免疫组织化学显色.结... 目的：探讨转录因子Nkx2.5和ISL-1的表达与小鼠胚胎早期心发育的关系.方法：胚龄7.5～13d小鼠胚胎连续石蜡切片,用抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、抗心肌肌球蛋白重链（MHC）、抗转录因子ISL-1、抗Nkx2.5抗体,进行免疫组织化学显色.结果：转录因子Nkx2.5在胚龄7.5d生心板表达早于心肌特异性蛋白MHC及SMA.随心外形建立,Nkx2.5在心各部表达逐渐增强.胚龄9d, Nkx2.5阳性表达从原始心管动脉端延伸至心包腔背侧脏壁中胚层及咽周围轴旁中胚层.Isl-1开始表达于胚龄8d原始心管心背系膜及前肠腹侧脏壁中胚层间充质,阳性细胞数量在11～12d达顶峰,形成前肠腹侧连接流出道远端和心房背侧壁的ISL-1阳性细胞带.11～12d,流出道远端出现Nkx2.5和MHC阴性,ISL-1、SMA阳性表达区.胚龄13d后,Nkx2.5和ISL-1在心和前肠腹侧间充质的表达强度下降.结论：Nkx2.5是原始生心区心肌前体细胞早期分化的标记蛋白,在第2生心区表达限于胚龄9d、咽周脏壁和轴旁中胚层心肌前体细胞亚群.第2生心区标记蛋白ISL-1主要表达在胚龄8～12d前肠腹侧脏壁中胚层心肌前体细胞,并向心管添加心肌细胞,参与流出道发育及心管成襻.11d后,第2生心区间充质细胞开始分化为升主动脉和肺动脉干平滑肌. 展开更多
关键词 转录因子nkx2.5 转录因子ISL-1 第2生心区 胚胎心 小鼠
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低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因Nkx-6．1和Nkx-6．2 mRNA表达的影响 被引量：3
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作者 张瑞 戈海泽 +2 位作者 赵秀娟 李媛 郭刚 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期488-492,共5页
目的研究低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因Nkx-6．1、Nkx-6．2 mRNA表达的影响，探讨低碘导致脑发育迟滞的可能分子作用机制。方法20只雌性Wistar大鼠按体质量随机分为2组：低碘组和对照组，均饲以低碘饲料（含碘量为13．66μg／kg），... 目的研究低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因Nkx-6．1、Nkx-6．2 mRNA表达的影响，探讨低碘导致脑发育迟滞的可能分子作用机制。方法20只雌性Wistar大鼠按体质量随机分为2组：低碘组和对照组，均饲以低碘饲料（含碘量为13．66μg／kg），分别饮用去离子水和含碘200μg／L的碘酸钾溶液，3个月时采用化学发光免疫分析法检测大鼠血清甲状腺激素水平，然后将雌鼠与正常饲养的Wistar雄鼠进行交配，分别取孕16d、新生期及生后20日龄仔鼠脑组织，采用实时荧光定量PCR检测Nkx-6．1、Nkx-6．2 mRNA的表达。结果①低碘组大鼠血清TT3、TT4、FT3、FT4水平[（0．89±0．20）、（0．32±0．16）nmol／L，（3．33±0．61）、（3．28±0．80）pmol／L]均明显低于对照组[（1．04±0．06）、（39．42±14．68）nmol/L，（4．83±0．33）、（26．99±4．48）pmol，t=2．71、6．52、5．70、12．89，P〈0．05或〈0．01]。②对照组孕16d、新生期及20日龄仔鼠脑组织Nkx-6．1 mRNA表达水平分别为（1．90±0．23）×10^-3、（1．86±0．40）×10^-4、（1．11±0．27）×10^-4，各日龄间比较差异有统计学意义（F=827．58．P〈0．01），随着日龄增加Nkx-6．1mRNA表达水平明显下降．两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．01）；低碘组各日龄仔鼠脑组织Nkx-6．1mRNA表达水平分别为（1．16±0．16）×10^-3、（3．44±0．49）×10^-4、（3．58±0．64）×10^-4，差异有统计学意义（F=297．25，P〈0．01），但变化趋势与对照组不同，孕16d表达水平最高，与新生期及20日龄比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；低碘组与对照组比较，孕16d明显降低（t=10．14，P〈0．01），而新生期及20日龄则明显增高（t值分别为9．69、13．81，P均〈0．01）。③对照组和低碘组各日龄仔鼠脑组织Nkx-6．2 mRNA表达水平分别为（1．03±0．19）×10^-2、（1．33±0.10）×10^-3、（8．79±0.87）×10^-2和（0.31±0．03）×10^-2、（1．53±0．13）×10^-3、（7．51±0．86）×10^-2，组间比较差异有统计学意义（F值分别为1293．02、1065．83，P均〈0．01），随着日龄增加，两组表达趋势一致，20日龄最高，孕16d次之，新生期最低；低碘组20日龄仔鼠与新生期及孕16d比较，差异有统计学意义（P均〈0．01），对照组新生期仔鼠与孕16d比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；低碘组与对照组比较，孕16d及20日龄明显降低（t值分别为14．35、4．05，P均〈0．01），而新生期仔鼠则明显增高（t=4．78，P〈0．01）。结论同源盒基因Nkx-6．1、Nkx-6．2 mRNA表达水平改变可能与低碘导致脑发育迟滞有关。 展开更多
关键词 基因 同源盒nkx 聚合酶链反应 发育障碍 脑
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先天性心脏病患者转录因子Nkx2.5基因突变观察 被引量：2
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作者 李开如 丁建东 +3 位作者 张晓黎 姚玉宇 任利群 马根山 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第33期83-84,共2页
采用聚合酶链反应结合DNA测序技术,对99例先天性心脏病(CHD)患者及90例正常对照者的Nkx2.5基因外显子1进行序列检测。结果显示,3例室间隔缺损、7例房间隔缺损、1例肺动脉瓣狭窄、1例动脉导管未闭患者和3例对照者的Nkx2.5外显子1第239位... 采用聚合酶链反应结合DNA测序技术,对99例先天性心脏病(CHD)患者及90例正常对照者的Nkx2.5基因外显子1进行序列检测。结果显示,3例室间隔缺损、7例房间隔缺损、1例肺动脉瓣狭窄、1例动脉导管未闭患者和3例对照者的Nkx2.5外显子1第239位发生了A-G的突变。认为转录因子Nkx2.5基因突变与中国CHD的发生有一定的关系。 展开更多
关键词 nkx2.5基因 先天性心脏病 基因突变
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胃肠胰食管神经内分泌肿瘤中NKX2.2蛋白的表达 被引量：2
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作者 彭李博 吴楠 +2 位作者 王璇 周晓军 吴波 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期368-371,共4页
目的检测NKX2.2蛋白在胃肠胰食管神经内分泌肿瘤中的表达,探讨其表达与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测41例胃肠胰食管神经内分泌肿瘤中NKX2.2、Syn及Cg A的表达,并复习相关文献。结果 NKX2.2蛋白阳性定位于细胞核,在7个原... 目的检测NKX2.2蛋白在胃肠胰食管神经内分泌肿瘤中的表达,探讨其表达与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测41例胃肠胰食管神经内分泌肿瘤中NKX2.2、Syn及Cg A的表达,并复习相关文献。结果 NKX2.2蛋白阳性定位于细胞核,在7个原发部位的神经内分泌肿瘤中均有不同程度的表达,在4例正常胰腺胰岛细胞中弥漫强阳性表达,NKX2.2、Syn及CgA在小肠、直肠及胰腺神经内分泌肿瘤中的总阳性率分别为100%、100%、46.7%;NKX2.2在前肠、中后肠的阳性率分别为30%和87%,差异有统计学意义(χ2=11.09,P=0.001)。NKX2.2蛋白表达与患者性别、年龄、分级、肿瘤最大径及淋巴结转移无明显相关性。结论 NKX2.2作为一种新型的神经内分泌标志物,在诊断小肠、直肠及胰腺神经内分泌肿瘤上明显优于Cg A,联合检测NKX2.2、Syn、CgA可提高小肠、直肠及胰腺神经内分泌肿瘤诊断的准确性。 展开更多
关键词 神经内分泌肿瘤 nkx2.2 免疫组织化学
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心脏转录因子Nkx2.5真核表达质粒的构建 被引量：2
20
作者 方翔 丁建东 +4 位作者 李开如 姚玉宇 陶绍玉 王点 马根山 《实用临床医药杂志》 CAS 2010年第4期20-22,共3页
目的构建人类心脏特殊转录因子Nkx2.5的真核表达质粒,为进一步探讨Nkx2.5在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法以质粒pCMV6-XL5-Nkx2.5为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2.5编码区序列,将真核表达载体pCMV-HA和Nkx2.5... 目的构建人类心脏特殊转录因子Nkx2.5的真核表达质粒,为进一步探讨Nkx2.5在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法以质粒pCMV6-XL5-Nkx2.5为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2.5编码区序列,将真核表达载体pCMV-HA和Nkx2.5的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-HA-Nkx2.5,转化至大肠杆菌,提取质粒后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果成功设计引物扩增出Nkx2.5基因编码区约1 000 bp的目的片段,PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2.5基因序列。结论成功构建了含有Nkx2.5的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础。 展开更多
关键词 转录因子 nkx2.5 重组质粒 真核表达载体
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