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蒙古牛皮肤Qa-1b/NKG2A的表达及Qa-1b纳米抗体的制备和功能鉴定
1
作者 金聪俐 贾琼 +5 位作者 任泓睿 迟志端 白瑞 郭湘 范瑞文 Herrid Muren 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期404-416,共13页
本研究旨在通过检测蒙古牛皮肤Qa-1b/NKG2A的表达特征,分析其参与皮肤免疫的功能,及Qa-1b在抗黑素瘤发展中可能发挥的作用。通过实时定量PCR、Western blot、免疫组织化学方法以及免疫共沉淀法对Qa-1b/NKG2A在皮肤中的表达进行相对定量... 本研究旨在通过检测蒙古牛皮肤Qa-1b/NKG2A的表达特征,分析其参与皮肤免疫的功能,及Qa-1b在抗黑素瘤发展中可能发挥的作用。通过实时定量PCR、Western blot、免疫组织化学方法以及免疫共沉淀法对Qa-1b/NKG2A在皮肤中的表达进行相对定量和定位以及互作关系分析;以Qa-1b多肽为抗原,使用噬菌体展示技术,从羊驼黑色素瘤细胞纳米抗体文库中进行淘筛,获得结合性较强的纳米抗体(Qa-1b-VHH)序列;构建pET28a-Qa-1b-VHH原核表达重组质粒,通过IPTG诱导表达和镍柱纯化,获得Qa-1b纳米抗体。经ELISA检测Qa-1b纳米抗体与抗原的特异性后,将Qa-1b纳米抗体应用于Western blot和免疫组织化学方法检测组织中Qa-1b的表达,以及添加到B16黑素瘤细胞培养基中,通过CCK8法、细胞划痕法和Western blot法检测其对B16细胞增殖及迁移的影响以及与增殖和迁移相关蛋白表达情况。结果显示:Qa-1b和NKG2A在蒙古牛皮肤组织的毛囊外根鞘和血管内皮中表达,在犊牛皮肤中的表达量显著高于成年牛(P<0.01或P<0.001)。且Qa-1b和NKG2A在皮肤中存在互作关系。所获得的Qa-1b纳米抗体特异性较强,可用作Western blot和免疫组织化学中的一抗检测其他组织中Qa-1b的表达;Qa-1b纳米抗体添加到B16细胞培养基中,应用CCK 8法和细胞划痕法检测该Qa-1b纳米抗体对B16细胞增殖和迁移有明显的抑制效果,细胞增殖过程中Ras、MEK1、CyclinD1、CDK4蛋白的表达显著下调(P<0.01或P<0.001)。本试验揭示了Qa-1b/NKG2A参与皮肤免疫以保证毛囊正常生长,尤其是犊牛;Qa-1b纳米抗体可抑制B16细胞增殖和迁移,为增强皮肤免疫及抗黑素瘤发展的抗体药物提供理论依据。 展开更多
关键词 Qa-1b nkg2a 纳米抗体 皮肤免疫 黑素瘤 B16细胞 蒙古牛
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基因工程化iNK^(NKG2A KO)细胞具有HLA-E特异的抗肿瘤活性
2
作者 乔雯华 许依 +3 位作者 董鹏 何维 陈慧 张建民 《基础医学与临床》 2025年第5期599-607,共9页
目的针对NKG2A-HLA-E负调控通路,构建诱导多能干细胞(iPSC)来源的基因工程NKG2A敲除的NK细胞(NKG2A KO-iNK),在体外初步评价其肿瘤杀伤功能。方法利用基因编辑技术在iPSC中敲除NKG2A,将其在体外诱导分化为NKG2A KO-iNK细胞,并在不同分... 目的针对NKG2A-HLA-E负调控通路,构建诱导多能干细胞(iPSC)来源的基因工程NKG2A敲除的NK细胞(NKG2A KO-iNK),在体外初步评价其肿瘤杀伤功能。方法利用基因编辑技术在iPSC中敲除NKG2A,将其在体外诱导分化为NKG2A KO-iNK细胞,并在不同分化阶段利用流式细胞测量术检测特异性的表面标志物;利用Western blot验证NKG2A KO-iNK细胞NKG2A的敲除情况,并用流式细胞测量术检测NKG2A KO-iNK细胞常见的NK细胞活化性受体及天然细胞毒性受体的表达水平;乳酸脱氢酶检测法(LDH)检测NKG2A KO-iNK细胞对不同人白细胞抗原E(HLA-E)表达水平肿瘤细胞的体外细胞毒活性。结果将Cas9蛋白和靶向编码NKG2A的KLRC1基因第1、2外显子的3条向导RNA(sgRNA)共转染iPSC对其进行基因敲除,测序结果显示成功获得在第1外显子插入1个T碱基的单克隆NKG2A敲除的iPSC(NKG2A KO-iPSC)。iPSC向NK细胞诱导分化的过程中,第8天类胚体(EBs)阶段检测CD34表达水平在30%~50%;第28天NK诱导分化阶段CD56和CD16的表达均达80%以上。Western blot结果显示,NKG2A KO-iNK细胞NKG2A被成功敲除;流式结果显示NKG2A KO-iNK细胞活化性受体NKG2D及细胞毒性受体NKp30、NKp44、NKp46的表达水平和野生型iNK(WT-iNK)细胞基本一致。LDH实验结果显示,NKG2A KO-iNK细胞对HLA-E高表达的B细胞前体白血病细胞系Nalm6的细胞毒活性显著高于WT-iNK细胞,而对HLA-E低表达的人骨髓瘤细胞系H929和HLA-E几乎不表达的人肝癌细胞系HepG2,NKH2A KO-iNK细胞和WT-iNK细胞两者之间的细胞毒活性差异无统计学意义;γ干扰素(IFN-γ)处理能显著上调Nalm6细胞的HLA-E表达水平,进而进一步增强NKG2A KO-iNK细胞对Nalm6细胞的细胞毒活性。结论由于阻断了NKG2A-HLA-E负调控通路,基因工程NKG2A KO-iNK细胞对HLA-E高表达的肿瘤细胞系在体外显示出明显增强的细胞毒活性,提示其作为一种新型细胞治疗的可能性,为肿瘤的细胞过继免疫治疗提供一种新的思路。 展开更多
关键词 诱导多能干细胞(iPSCs) nkg2a 自然杀伤(NK)细胞 免疫治疗
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慢性乙型肝炎患者外周血NKG2A+NK细胞与Treg的关系研究 被引量：6
3
作者 郑美娟 秦义组 +2 位作者 张敏 张振华 徐元宏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1342-1345,1349,共5页
目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(CHB)患者外周血NKG2A+NK细胞与调节性T细胞(Treg)的关系及临床意义。方法:收集46例CHB患者和17例健康对照者外周血,采用实时荧光定量PCR法检测血清HBV DNA;采用流式细胞术检测NKG2A+NK细胞及Treg的比例。结果... 目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(CHB)患者外周血NKG2A+NK细胞与调节性T细胞(Treg)的关系及临床意义。方法:收集46例CHB患者和17例健康对照者外周血,采用实时荧光定量PCR法检测血清HBV DNA;采用流式细胞术检测NKG2A+NK细胞及Treg的比例。结果:将CHB患者分为Low HBV DNA组(300~10~4U/ml)及High HBV DNA组(10~5~10~8U/ml)。我们发现High HBV DNA组ALT明显高于Low HBV DNA组(P<0.05)。High HBV DNA组CD56^(dim)NK细胞及NKG2A+CD56^(dim)NK细胞的比例均分别明显高于Low HBV DNA组(P<0.05)。且High HBV DNA组Treg明显高于Low HBV DNA组和对照组(P<0.05)。此外,NKG2A+CD56^(dim)NK细胞的比例与High HBV DNA载量及Treg水平均呈正相关性(r=0.59,P<0.05;r=0.53,P<0.05)。结论:CHB患者的NKG2A+CD56^(dim) NK细胞的水平与HBV的免疫逃逸及疾病的进展相关。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎 HBV DNA NK细胞 nkg2a 调节性T细胞
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NKG2A、NKG2C受体及其配体HLA-E在子痫前期患者蜕膜中的表达 被引量：5
4
作者 罗方媛 刘兴会 +2 位作者 杨悦 何国琳 陈锰 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期582-586,共5页
目的研究杀伤细胞C型凝集素样受体-1(KLC1或NKG2A)和受体-2(KLC2或NKG2C)及其配体人类白细胞抗原(HLA)-E在子痫前期患者蜕膜中的表达水平,探讨其与子痫前期发病的关系。方法收集46例正常足月妊娠孕妇、30例轻度子痫前期和42例重度子痫... 目的研究杀伤细胞C型凝集素样受体-1(KLC1或NKG2A)和受体-2(KLC2或NKG2C)及其配体人类白细胞抗原(HLA)-E在子痫前期患者蜕膜中的表达水平,探讨其与子痫前期发病的关系。方法收集46例正常足月妊娠孕妇、30例轻度子痫前期和42例重度子痫前期患者的蜕膜标本,采用逆转录-聚合酶链反应法(RTPCR)和免疫组化法检测蜕膜中NKG2A、NKG2CmRNA和受体蛋白的表达,以及HLA-E mRNA的表达。结果HLA-E mRNA的表达水平在子痫前期患者,特别是重度子痫前期患者蜕膜中降低(P<0.05)。重度子痫前期患者NKG2A、NKG2CmRNA和受体蛋白表达水平较正常足月妊娠孕妇增加(P<0.05),重度子痫前期患者NKG2A和NKG2C表达水平之比较正常足月妊娠孕妇低(P<0.05),且重度子痫前期组中NKG2C mRNA和受体蛋白表达水平较NKG2A高(P<0.05)。HLA-E和NKG2A、NKG2C mRNA表达水平均与孕晚期血压、24h尿蛋白等临床及实验室指标相关。结论 HLA-E表达降低和NKG2A、NKG2C不均衡地表达增加可能参与了子痫前期发病机制。 展开更多
关键词 子痫前期 蜕膜 nkg2a NKG2C HLA-E
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肿瘤患者自然杀伤细胞受体NKG2A和NKG2D的表达 被引量：9
5
作者 沈亚娟 张建 田志刚 《检验医学》 CAS 北大核心 2008年第4期384-387,共4页
目的通过研究肿瘤患者外周血自然杀伤(NK)细胞表面NKG2A和NKG2D的表达情况,探讨二者表达失衡与肿瘤免疫逃逸的关系。方法采用流式细胞术检测40例肿瘤患者和10名正常对照者外周血NK细胞表面NKG2A和NKG2D的表达情况。用全自动五分类血液... 目的通过研究肿瘤患者外周血自然杀伤(NK)细胞表面NKG2A和NKG2D的表达情况,探讨二者表达失衡与肿瘤免疫逃逸的关系。方法采用流式细胞术检测40例肿瘤患者和10名正常对照者外周血NK细胞表面NKG2A和NKG2D的表达情况。用全自动五分类血液分析仪测定各病例的血常规。结果肿瘤患者和正常对照组白细胞数值差异无统计学意义;肿瘤患者淋巴细胞比率低于对照组,而NK细胞明显高于对照组;肿瘤患者NK细胞表面抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D均明显高于对照组,但肿瘤患者NKG2D荧光强度呈降低趋势。结论肿瘤患者NK细胞表面NKG2A/NKG2D表达失衡,可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。 展开更多
关键词 nkg2a NKG2D 自然杀伤细胞 肿瘤 免疫逃逸
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服用扶正抗癌方后非小细胞肺癌晚期患者CD8^+T细胞表达NKG2D和NKG2A受体的变化 被引量：3
6
作者 吴姗姗 王柏山 +3 位作者 严峰 张宁 张程 李志静 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第20期2470-2476,共7页
目的:探索服用扶正抗癌方后非小细胞肺癌(NSCLC)晚期患者CD8^+T细胞表达NKG2D和NKG2A受体的变化。方法:NSCLC晚期患者共31例,根据不同的临床因素(服用扶正抗癌方前后、病理类型、TNM分期和性别)进行分组,流式细胞术检测外周血CD4^+T、CD... 目的:探索服用扶正抗癌方后非小细胞肺癌(NSCLC)晚期患者CD8^+T细胞表达NKG2D和NKG2A受体的变化。方法:NSCLC晚期患者共31例,根据不同的临床因素(服用扶正抗癌方前后、病理类型、TNM分期和性别)进行分组,流式细胞术检测外周血CD4^+T、CD8^+T细胞绝对值以及CD8^+T细胞表达NKG2D和NKG2A受体的变化。结果:Ⅲ期患者NKG2D^+NKG2A^-CD8^+T细胞占百分比显著高于Ⅳ期,Ⅲ期患者NKG2D^-NKG2A^+CD8^+T细胞占百分比显著低于Ⅳ期。服用扶正抗癌方后下列指标的变化:NKG2D^+NKG2A^-CD8^+T细胞占百分比显著升高,而NKG2D^-NKG2A^+CD8^+T细胞所占百分比显著降低,而且上述两群细胞所占百分比呈负相关;伴随着CD8^+T细胞表达NKG2D的升高和NKG2A的下降,大部分患者的生存质量稳中有升;鳞癌的NKG2D^+NKG2A^+CD8^+T细胞所占百分比显著低于腺癌;CD8^+T细胞NKG2D和NKG2A的表达无男女差别。结论:服用扶正抗癌方后NSCLC晚期患者CD8^+T细胞表达NKG2D升高NKG2A下降,有助于改善患者的生存质量和预后。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 扶正抗癌方 CD8^+T细胞 NKG2D nkg2a
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卵巢肿瘤患者外周血NK细胞受体NKG2A、NKG2D及NK活性检测的临床意义 被引量：8
7
作者 刘敏 孔北华 曲迅 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期239-241,共3页
通过研究卵巢癌及良性卵巢肿瘤患者外周血NK细胞表面受体的表达情况及NK活性的变化,分析探讨宿主NK细胞受体与肿瘤免疫逃逸的关系及其临床价值。分离受检者外周血单个核细胞,应用MTT法检测NK细胞的细胞毒活性,流式细胞术检测NK细胞受体N... 通过研究卵巢癌及良性卵巢肿瘤患者外周血NK细胞表面受体的表达情况及NK活性的变化,分析探讨宿主NK细胞受体与肿瘤免疫逃逸的关系及其临床价值。分离受检者外周血单个核细胞,应用MTT法检测NK细胞的细胞毒活性,流式细胞术检测NK细胞受体NKG2D和NKG2A的表达,并结合临床病理因素作比较分析。结果显示,与良性卵巢肿瘤组和正常组相比,卵巢癌患者外周血NK细胞的细胞毒活性降低,NK细胞表面NKG2D的表达水平降低,而NKG2A的表达水平明显升高,其变化与卵巢癌的病情进展有关。此结果表明,卵巢癌患者机体NK细胞杀伤活性下降,NKG2D与NKG2A二者之间的平衡表达可能对NK细胞的功能状态起着重要的调节作用。 展开更多
关键词 卵巢癌 NK细胞 NKG2D nkg2a
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妊娠期uNK、pNK细胞NKG2A与NKG2D的表达及其生物学意义的研究 被引量：3
8
作者 赵丽丽 曲迅 +4 位作者 孔北华 董白桦 杨美香 吕晓梅 张友忠 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期518-520,523,共4页
目的:研究妊娠期妇女子宫NK细胞(uNK细胞)与外周血NK细胞(pNK细胞)表面NKG2A和NKG2D及其相应配体的表达,探讨uNK细胞表面NKG2A和NKG2D的不平衡表达与母胎界面所形成的免疫耐受关系。方法:采用流式细胞术检测30例孕6～9周的正常妊娠妇女... 目的:研究妊娠期妇女子宫NK细胞(uNK细胞)与外周血NK细胞(pNK细胞)表面NKG2A和NKG2D及其相应配体的表达,探讨uNK细胞表面NKG2A和NKG2D的不平衡表达与母胎界面所形成的免疫耐受关系。方法:采用流式细胞术检测30例孕6～9周的正常妊娠妇女uNK细胞和pNK细胞NKG2A、NKG2D的表达状况;RTPCR技术检测绒毛膜组织HLAE、MICA的表达。结果:子宫NK细胞NKG2A的表达显著高于外周血NK细胞,二者分别为(97.86±1.75)%与(33.35±10.92)%;子宫NK细胞NKG2D的表达水平与外周血NK细胞相近,分别为(93.21±4.52)%与(97.80±1.72)%,滋养层组织仅检测到HLAEmRNA的表达。结论:妊娠期子宫NK细胞表面高表达抑制性受体NKG2A,同时滋养层组织表达相应的配体HLAE,这可能是维持母胎界面免疫耐受的重要因素。 展开更多
关键词 nkg2a NKG2D 蜕膜NK细胞 外周血NK细胞
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NKG2D和NKG2A及相应配体MHC-IA/B和HLA-E在急性白血病的表达及意义 被引量：2
9
作者 葛淑静 段连宁 +3 位作者 罗渊 索塔林 陆承荣 唐捷 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期312-316,共5页
本研究旨在初步探讨NK细胞受体NKG2D和NKG2A在初发ALL和AML患者NK细胞、CD3+T细胞的表达其及相应配体MHC-I A/B和HLA-E在白血病细胞表达差异性和免疫学意义。用流式细胞术检测NK92细胞对8种白血病细胞系的杀伤效率,并检测60例初发急性... 本研究旨在初步探讨NK细胞受体NKG2D和NKG2A在初发ALL和AML患者NK细胞、CD3+T细胞的表达其及相应配体MHC-I A/B和HLA-E在白血病细胞表达差异性和免疫学意义。用流式细胞术检测NK92细胞对8种白血病细胞系的杀伤效率,并检测60例初发急性白血病患者(ALL和AML各30例)骨髓中NKG2D和NKG2A在NK和CD3+T细胞的表达及其相应配体MHC-I A/B和HLA-E在白血病细胞的表达。结果表明,NK92对不同白血病细胞系的杀伤效率存在差异。ALL患者NK细胞和CD3+T细胞的NKG2D及NKG2A阳性表达率与AML患者相比均无显著差异(p>0.05),但是ALL患者白血病细胞MHC-I A/B和HLA-E阳性表达率均明显高于AML患者(p<0.05)。结论:ALL与AML患者免疫细胞功能的差异性可能与白血病细胞配体表达的不同有关,而与本身NK及T细胞表达的杀伤和抑制性受体无关。 展开更多
关键词 急性白血病 NKG2D nkg2a MHC-IA/B HLA-E
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食管癌患者外周血NKG2A NKG2D sMICA的表达 被引量：2
10
作者 刘晓玲 杨牡丹 +2 位作者 高峻 张素珍 王艳峰 《中国药物与临床》 CAS 2011年第10期1203-1205,共3页
我们采用流式细胞术和酶联免疫吸附法（ELISA）分别测定食管癌患者NKG2A、NKG2D及NKG2D可溶性配体sMICA的表达,为食管癌的免疫治疗提供实验依据。
关键词 NKG2D nkg2a SMICA 食管癌 癌患者 外周血 酶联免疫吸附法 流式细胞术
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阻断NKG2A共抑制分子在抗肿瘤免疫效应中的研究进展 被引量：5
11
作者 阿依努尔·艾尔肯 阿卜杜艾尼·啊卜力孜 +1 位作者 塔来提·吐尔干 吐尔干艾力·阿吉 《中国医药科学》 2022年第4期29-33,共5页
自然杀伤(NK)细胞在对病毒的先天防御以及控制肿瘤生长和转移中发挥着重要作用,NK细胞的免疫效应是由其表面的激活性和抑制性受体所调控的。NKG2A是一种在NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CD8+T)表面均表达的抑制性受体。在多种肿瘤研究中均... 自然杀伤(NK)细胞在对病毒的先天防御以及控制肿瘤生长和转移中发挥着重要作用,NK细胞的免疫效应是由其表面的激活性和抑制性受体所调控的。NKG2A是一种在NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CD8+T)表面均表达的抑制性受体。在多种肿瘤研究中均发现肿瘤浸润淋巴细胞表面NKG2A表达上调及肿瘤细胞表面其配体人类白细胞抗原E(HLA-E)表达上调。NKG2A与其配体HLA-E的表达上调与肿瘤的免疫逃逸、不良预后有关,且阻断NKG2A可有效缓解NK、CD8^(+)T细胞的免疫学效应,为阻断NKGA/HLA-E轴的单克隆抗体作为新的抗肿瘤免疫治疗的药物研究奠定基础。 展开更多
关键词 nkg2a 自然杀伤细胞 CD8^(+)T细胞 抗nkg2a抗体
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慢性乙肝患者外周血NK细胞NKp46和NKG2A的表达 被引量：2
12
作者 范荣 章树业 +5 位作者 姜天俊 秦恩强 张政 张晖 赵敏 王福生 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第5期688-689,694,共3页
目的检测免疫清除期和免疫耐受期慢性乙肝患者外周血中NK细胞频率和NK受体NKp46和NKG2A表达情况。方法分离患者和健康对照者外周血单个核细胞,流式细胞仪检测各组NK细胞频率和受体表达。结果慢性乙肝免疫清除期患者外周血NK细胞占淋巴... 目的检测免疫清除期和免疫耐受期慢性乙肝患者外周血中NK细胞频率和NK受体NKp46和NKG2A表达情况。方法分离患者和健康对照者外周血单个核细胞,流式细胞仪检测各组NK细胞频率和受体表达。结果慢性乙肝免疫清除期患者外周血NK细胞占淋巴细胞比例(10.91%±3.93%,n=21)较免疫耐受期患者(15.65%±5.58%,n=15,P=0.024)和健康者(14.23%±7.37%,n=25,P=0.011)下降,免疫清除期患者NK细胞的NKp46表达(45.45%±14.00%,n=19)较免疫耐受期患者(23.35%±6.56%,n=8,P<0.001)和健康者(31.69%±13.07%,n=20,P=0.001)明显上升,NKG2A表达(35.62%±13.20%,n=19)较免疫耐受期患者(25.57%±5.56%,n=8,P=0.038)和健康者(26.80%±10.49%,n=20,P=0.047)上升。结论慢性乙肝患者外周血NK细胞频率下降,NKp46和NKG2A表达上调,这些改变与免疫清除病毒有关。 展开更多
关键词 NKp46 nkg2a NK细胞 肝炎 乙型 慢性
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老年肺结核患者外周血NKG2A、NKG2D表达及相关分析 被引量：1
13
作者 魏兰 李辉 《西南国防医药》 CAS 2014年第12期1289-1291,共3页
目的了解老年肺结核患者NKG2A、NKG2D表达水平的变化情况,为肺结核免疫治疗提供新思路和理论依据。方法应用流式细胞术分析100例老年初治肺结核患者和89例老年健康体检者外周血中NK细胞表面受体NKG2A、NKG2D表达水平。结果结核组与体检... 目的了解老年肺结核患者NKG2A、NKG2D表达水平的变化情况,为肺结核免疫治疗提供新思路和理论依据。方法应用流式细胞术分析100例老年初治肺结核患者和89例老年健康体检者外周血中NK细胞表面受体NKG2A、NKG2D表达水平。结果结核组与体检组相比,NKG2D表达明显降低,NKG2A表达明显上调;单纯肺结核患者与肺结核合并肺外结核患者相比,后者NKG2A表达更高(P<0.05);在结核组中,NKG2D表达率随着病灶受累范围增加而明显下降(P<0.05);在菌阴肺结核组与菌阳肺结核组、空洞组与无空洞组之间,NKG2A、NKG2D表达率的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论测定老年初治肺结核患者外周血NKG2A、NKG2D,对于了解其机体免疫功能状态、估计病情具有一定临床价值,为免疫治疗提供重要理论依据。 展开更多
关键词 老年肺结核 NK细胞 nkg2a NKG2D
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人NKG2A、CD94的基因克隆和真核共表达载体的构建
14
作者 焦玉莲 王来城 +3 位作者 张捷 崔彬 马春燕 赵跃然 《检验医学》 CAS 北大核心 2007年第2期159-162,共4页
目的构建真核共表达载体pNKG2A-IRES-CD94。方法提取人外周血淋巴细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增NKG2A、CD94基因,分别克隆pMD-NKG2A、pMD-CD94,对克隆基因进行DNA序列分析。pMD-CD94经XbaⅠ和SalⅠ酶切,插入相应酶切的真... 目的构建真核共表达载体pNKG2A-IRES-CD94。方法提取人外周血淋巴细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增NKG2A、CD94基因,分别克隆pMD-NKG2A、pMD-CD94,对克隆基因进行DNA序列分析。pMD-CD94经XbaⅠ和SalⅠ酶切,插入相应酶切的真核表达载体pIRES(多克隆位点B),NKG2A经XhoⅠ和MluⅠ酶切,插入相应酶切的pIRES-CD94(多克隆位点A)。结果扩增的DNA片段和预期的人NKG2A和CD94大小一致;DNA序列分析显示,克隆的基因序列和GenBank数据库中人NKG2A和CD94基因序列一致。酶谱分析显示,NKG2A和CD94正向插入表达载体pIRES。结论成功构建了含人NKG2A和CD94的真核共表达质粒pNKG2A-IRES-CD94,为研究NKG2A和CD94基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 nkg2a CD94 共表达质粒 内部核糖体进入位点
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MS患者CD94/NKG2A-bright和CD94/NKG2A-dim NK细胞亚群对IFN-β的差异性反应
15
作者 李力 邓艳春 赵钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期533-535,共3页
目的:分析多发性硬化(MS)进展型患者不同表型NK细胞亚群对临床主要治疗方法的反应性差异。方法:分离患者外周血中的NK细胞,以流式细胞术根据表面抑制性受体CD94/NKG2A表达情况分为两个亚群CD94/NKG2A-bright和CD94/NKG2A-dim。分别加入I... 目的:分析多发性硬化(MS)进展型患者不同表型NK细胞亚群对临床主要治疗方法的反应性差异。方法:分离患者外周血中的NK细胞,以流式细胞术根据表面抑制性受体CD94/NKG2A表达情况分为两个亚群CD94/NKG2A-bright和CD94/NKG2A-dim。分别加入IFN-β,测定两个亚群表面CD94/NKG2A变化及细胞增殖,同时检测两种亚群分泌IL-10和TGF-β情况。结果:CD94/NKG2A阳性表达的NK细胞占25.5%,其中CD94/NKG2A-bright和CD94/NKG2A-dim分别占其中的23.6%和76.4%。加入IFN-β,CD94/NKG2A-bright组增殖率明显低于CD94/NKG2A-dim组,CD94/NKG2A表达峰度变化不大。CD94/NKG2A-dim组中CD94/NKG2A表达显著增加。两个亚群分泌的IL-10和TGF-β与未刺激组相比,均有明显差异。CD94/NKG2A-bright和CD94/NKG2A-dim组间亦有明显差异。结论:IFN-β通过诱导NK细胞CD94/NKG2A表达在非特异免疫系统中抑制NK细胞;同时刺激IL-10和TGF-β分泌进一步发挥对免疫系统的抑制。CD94/NKG2A-bright和CD94/NKG2A-dim对IFN-β反应有差异性。 展开更多
关键词 多发性硬化 NK细胞 抑制性受体 CD94/nkg2a IFN-Β
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乳腺癌患者外周血NKG2A、NKG2D检测的临床意义
16
作者 魏兰 杨超 刘运江 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期852-856,共5页
背景与目的:机体自身免疫功能与肿瘤的发生、发展有密切的关系。自然杀伤(naturalkiller,NK)细胞在天然免疫和获得性免疫中均发挥重要作用。目前己发现多种NK细胞表面受体,根据功能可分为抑制性受体和活化性受体二大类。抑制性受体NKG2... 背景与目的:机体自身免疫功能与肿瘤的发生、发展有密切的关系。自然杀伤(naturalkiller,NK)细胞在天然免疫和获得性免疫中均发挥重要作用。目前己发现多种NK细胞表面受体,根据功能可分为抑制性受体和活化性受体二大类。抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D对NK细胞的杀瘤功能发挥着相反的调节作用,在发生肿瘤的情况下,二者是如何表达以及与肿瘤免疫逃逸的关系尚不明确。本研究旨在探讨乳腺癌与乳腺良性疾病患者外周血NK细胞表面受体NKG2A与NKG2D的平衡状态,分析宿主NK细胞受体与肿瘤免疫逃逸的关系。方法:应用流式细胞术对37例乳腺癌患者和30例乳腺良性疾病患者血样标本行NKG2A、NKG2D检测,同时检测患者细胞免疫功能。结果:乳腺癌患者与乳腺良性疾病患者相比,NKG2A明显上调,NKG2D表达降低;CD3^+、CD4^+、CD56^+细胞百分比更低(P<0.05)。在乳腺癌患者中,细胞免疫功能低下组及腋淋巴结转移数≥4枚组中,NKG2D表达更低(P<0.05)。Ⅲ+ⅣV期及C-erbB2高表达乳腺癌患者,NKG2A表达更高(P<0.05)。NKG2A、NKG2D表达率在乳腺癌不同病理类型及组织学分级之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:外周血NKG2A、NKG2D的测定对于了解肿瘤患者机体免疫功能的状态、估计病情及判断预后具有一定的临床价值。 展开更多
关键词 乳腺癌 自然杀伤细胞 nkg2a NKG2D 细胞免疫功能
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加味寿胎丸联合黄体酮调节NKG2D、NKG2A表达治疗肾虚型URSA作用机制研究 被引量：13
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作者 曹卫平 师伟 +3 位作者 李霞 马青 吴美玲 王东梅 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期488-492,共5页
目的探讨NK细胞活性变化在不明原因复发性流产(URSA)发病中的机制;加味寿胎丸联合黄体酮通过调节NK细胞受体表达变化诱导母胎免疫耐受治疗URSA的作用机制。方法选取加味寿胎丸联合黄体酮治疗肾虚型URSA成功患者20例,并选取同期URSA妊娠... 目的探讨NK细胞活性变化在不明原因复发性流产(URSA)发病中的机制;加味寿胎丸联合黄体酮通过调节NK细胞受体表达变化诱导母胎免疫耐受治疗URSA的作用机制。方法选取加味寿胎丸联合黄体酮治疗肾虚型URSA成功患者20例,并选取同期URSA妊娠丢失组及健康早孕(HEP)组各15例,以流式细胞术检测各组外周血NKG2D、NKG2A的表达,并比较URSA妊娠组治疗后与健康早孕组血E2、P、β-HCG水平。结果 URSA妊娠丢失组pNK细胞NKG2D呈高表达及NKG2A呈低表达,与HEP组比较有显著统计学意义(P<0.01)。URSA妊娠组治疗后pNK细胞NKG2D表达水平明显低于治疗前,与HEP组比较有统计学意义(P<0.05),与URSA妊娠丢失组比较有显著统计学意义(P<0.01);NKG2A表达水平明显高于治疗前(P<0.01),与HEP组比较无统计学意义,与URSA妊娠丢失组比较有显著统计学意义(P<0.01)。经加味寿胎丸联合黄体酮治疗后,URSA妊娠组血清E2、P、β-HCG水平与HEP组分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论NK细胞受体NKG2D、NKG2A的表达参与了URSA的发病;加味寿胎丸联合黄体酮能通过下调URSA患者NKG2D的表达水平,上调NKG2A的表达水平介导母胎免疫耐受治疗URSA;固肾安胎法是治疗肾虚型URSA的有效方法,加味寿胎丸是治疗肾虚型URSA的有效方剂。 展开更多
关键词 加味寿胎丸 黄体酮 URSA NKG2D nkg2a NK细胞 肾虚
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益艾康含药血清对人NK-92MI细胞凋亡及其受体NKG2A、NKG2D、细胞因子IFN-γ表达的影响 被引量：9
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作者 钱洁玉 桑锋 +4 位作者 刘真 李杰 沈俊岭 张清燕 李强 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期6756-6759,共4页
目的:探讨益艾康含药血清对NK-92MI细胞凋亡及其受体NKG2A、NKG2D,细胞因子γ干扰素(IFN-γ)表达的影响。方法:利用细胞系NK-92MI为研究对象,设4%、8%、15%、25%含药血清及空白对照组,培养48h后分别加入空白鼠血清及不同浓度的益艾康含... 目的:探讨益艾康含药血清对NK-92MI细胞凋亡及其受体NKG2A、NKG2D,细胞因子γ干扰素(IFN-γ)表达的影响。方法:利用细胞系NK-92MI为研究对象,设4%、8%、15%、25%含药血清及空白对照组,培养48h后分别加入空白鼠血清及不同浓度的益艾康含药血清,再培养6h后收集细胞。流式细胞术检测细胞凋亡率及NKG2A、NKG2D膜抗体的表达;ELISA检测NK-92MI细胞IFN-γ分泌的改变;Real-Time PCR检测细胞NKG2A、NKG2D、IFN-γ mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,8%益艾康含药血清组能显著下调NK-92MI细胞NKG2A mRNA的表达(P<0.05);也能显著促进其细胞因子IFN-γ的分泌(P<0.05),8%含药血清组能显著抑制NK-92MI细胞早期凋亡率(P<0.05),15%含药血清组能显著抑制NK-92MI细胞晚期凋亡率(P<0.05)。结论:益艾康含药血清增强NK-92MI细胞毒功能的机制可能与抑制NK细胞凋亡,下调其抑制性受体NKG2A表达,促进IFN-γ分泌有关。 展开更多
关键词 益艾康 NK-92MI 凋亡率 nkg2a NKG2D Γ干扰素
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肺癌患者外周血NKG2A和NKG2D表达及其临床意义的研究 被引量：7
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作者 远丽芳 苏文 +3 位作者 王艳峰 宋东 田志华 韩福才 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2011年第24期1924-1928,共5页
目的:通过研究肺癌患者外周血中自然杀伤细胞(NK)表面抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D表达,分析探讨NKG2A与NKG2D表达失衡与肿瘤免疫逃逸的关系及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测101例肺癌患者(肺癌组)和81例健康对照者(对照组)... 目的:通过研究肺癌患者外周血中自然杀伤细胞(NK)表面抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D表达,分析探讨NKG2A与NKG2D表达失衡与肿瘤免疫逃逸的关系及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测101例肺癌患者(肺癌组)和81例健康对照者(对照组)外周血中NK细胞含量及其表面受体NKG2A、NKG2D表达情况,分析NKG2A、NKG2D的表达与肺癌临床生物学特征之间的关系。结果:肺癌组外周血中NK细胞含量高于对照组,差异有统计学意义,t=2.25,P=0.025;肺癌组外周血中NKG2A表达高于对照组,差异有统计学意义,t=-3.66,P=0.001;肺癌组中NKG2A/NKG2D比值高于对照组,差异有统计学意义,t=-3.98,P=0.001;在肺癌组中随着TNM分期(F=4.99,P=0.009)和PS评分(t=-2.01,P=0.041)的增加,NKG2A表达也表现逐渐增加,差异有统计学意义,t=-2.01,P=0.041。结论:肺癌患者外周血中NK细胞表面受体NKG2A、NKG2D表达失衡,可能是肺癌发生免疫逃逸的机制之一。 展开更多
关键词 肺肿瘤 NK细胞 nkg2a NKG2D 免疫逃逸
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结核杆菌耐热抗原对人外周血淋巴细胞NKG2A/NKG2D的影响 被引量：5
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作者 李军 魏海明 +2 位作者 张瑞军 李柏青 田志刚 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期571-574,共4页
目的:以结核杆菌耐热抗原为刺激剂,观察人外周血淋巴细胞NKG2A受体和NKG2D受体表达量的变化情况。方法:用结核杆菌耐热抗原刺激人外周血淋巴细胞,用流式细胞技术检测NKG2A受体和NKG2D受体的变化。使用RT-PCR和ELISA检测PBMCs中IFN-γ的... 目的:以结核杆菌耐热抗原为刺激剂,观察人外周血淋巴细胞NKG2A受体和NKG2D受体表达量的变化情况。方法:用结核杆菌耐热抗原刺激人外周血淋巴细胞,用流式细胞技术检测NKG2A受体和NKG2D受体的变化。使用RT-PCR和ELISA检测PBMCs中IFN-γ的表达情况。结果:在IL-2和抗原联合刺激下,NKG2A受体的表达量在第12天大幅度上升,NKG2D受体的表达量始终变化不大。NKG2A受体的表达在T细胞、NK细胞、αβT细胞和γδT细胞表面都有不同程度的增加。结论:NKG2A/NKG2D比例的上升有可能会对免疫系统造成一些影响,其中IFN-γ起着不可忽视的作用。 展开更多
关键词 结核杆菌耐热抗原 人外周血淋巴细胞 nkg2a NKG2D IFN-Γ
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