抑制NKCC1/AQP4通路对改善高原脑水肿大鼠神经损伤的作用

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作者 耿华丽 李百川 +4 位作者 宋旭 夏逸林 周向阳 高静 陈蕾 《四川大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期156-165,共10页

目的探究高原脑水肿(high-altitude cerebral edema,HACE)的发病机制,开发新型治疗策略。方法选取6周龄SD雄性大鼠,置于低压舱内,并选定7000 m海拔处理3 d为造模条件,通过测量脑含水量、血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)破坏程度、脑... 目的探究高原脑水肿(high-altitude cerebral edema,HACE)的发病机制,开发新型治疗策略。方法选取6周龄SD雄性大鼠,置于低压舱内,并选定7000 m海拔处理3 d为造模条件,通过测量脑含水量、血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)破坏程度、脑组织尼式染色,评估高原脑水肿大鼠模型的建立是否成功。将实验动物分为4组,每组28只。空白对照组于常压常氧模拟500 m海拔3 d;模型组(HACE组)、布美他尼组(阳性对照组)、XH-6003药物组置于7000 m海拔,于尾静脉分别注射生理盐水、布美他尼和新型钠钾氯协同转运蛋白-1(Na-K-2Cl cotransporter 1,NKCC1)抑制剂XH-6003,每日2次,共3 d。3 d后出舱检测。主要结局指标为脑含水量、血脑屏障通透性、脑组织形态学变化、水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)和NKCC1表达量;次要结局指标为行为学、凋亡和氧化应激指标。结果成功建立HACE大鼠模型。与对照组相比,模型组脑含水量增加(P<0.0001),血脑屏障破坏(P<0.0001),出现学习记忆下降(P<0.001)和焦虑抑郁情绪(P<0.01);qPCR结果显示模型组大鼠脑组织NKCC1和AQP4表达明显增加(P<0.01),病理结果显示模型组大鼠海马出现神经元和神经胶质细胞损伤(P<0.01)。予以NKCC1抑制剂XH-6003后,脑含水量、BBB损伤、神经元和胶质细胞损伤均有逆转(P<0.05),大鼠脑组织NKCC1和AQP4表达下降(P<0.01),凋亡相关蛋白被抑制,氧化应激指标中仅还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)有改善(P<0.001)。XH-6003治疗后的大鼠仅在新物体探索时间上有一定的功能改善,其他行为学结果均呈现阴性。结论HACE伴有NKCC1/AQP4通路的激活,抑制该通路可减轻脑水肿和BBB破坏,改善神经元和神经胶质细胞损伤。XH-6003在细胞分子层面具有治疗脑水肿的潜力,但其对HACE相关行为障碍的改善效果尚需进一步探究。 展开更多

关键词 高原脑水肿 神经损伤 XH-6003 nkcc1

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癫痫持续状态NKCC1、GABA_ARα 1蛋白在大鼠海马的表达及脑源性神经营养因子对其的影响 被引量：10

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作者 刘昕 胡崇宇 +4 位作者 高小平 梁辉 肖波 李蜀渝 龙小艳 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第18期1-7,共7页

目的观察大鼠癫痫持续状态（SE）后72 h内海马组织中NKCC1及GABAARαl表达的动态变化,以及使用anti-BDNF干预后其表达的变化,探讨NKCC1与GABAARαl在SE中的可能机制及其之间的关系,以及BDNF在SE发生过程中对NKCC1和GABAARαl表达的影响... 目的观察大鼠癫痫持续状态（SE）后72 h内海马组织中NKCC1及GABAARαl表达的动态变化,以及使用anti-BDNF干预后其表达的变化,探讨NKCC1与GABAARαl在SE中的可能机制及其之间的关系,以及BDNF在SE发生过程中对NKCC1和GABAARαl表达的影响。方法健康成年雄性SD大鼠90只,随机分为生理盐水对照组（10只）、SE组（40只）和干预组（40只）。制作Li Cl-PILO癫痫模型（SE组）和造模前3~4 h侧脑室注射anti-BDNF（干预组）,选取SE后2、6、24和72 h为时间点。观察大鼠在SE诱发过程中的行为学差异、海马NKCC1及GABAARαl蛋白的表达改变、海马各区NKCC1及GABAARαl蛋白的时空分布等特点。结果干预组SE诱发成功率较SE组低,SE诱发成功后生存状态好、死亡率低。SE组NKCC1蛋白在SE后均高于对照组,干预组NKCC1蛋白表达在2 h显著增加,6 h达最高,24 h后开始明显恢复,72 h时接近正常。两组在海马不同亚区,SE后2 h开始,NKCC1在CΑ1及CΑ3区均显著增高。SE组GABAARαl蛋白在SE后2~6 h表达显著下调,24 h降至最低,至72 h突然增高。干预组GΑBAARαl蛋白表达在SE后2 h达最低值,6 h后上调,72 h达最高值,SE组与干预组GABAARαl在CA1、CA3区的表达呈进行性下调,但干预组变化幅度较小。结论 NKCC1蛋白表达在SE后的上调可能是SE后GABAAR介导的兴奋性作用产生的重要机制之一;Αnti-BDNF干预可通过抑制BDNF的表达,延缓癫痫发生并减弱癫痫发作的严重程度。 展开更多

关键词 癫痫持续状态 nkcc1 GABAARα1 BDNF

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ABR和DPOAE检测研究NKCC1在不同基因型小鼠耳蜗听觉中的作用 被引量：5

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作者 褚汉启 周良强 +4 位作者 王春芳 黄孝文 黄红彦 崔永华 孔维佳 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期645-647,664,共4页

目的应用听性脑干反应(ABR)和畸变产物耳声发射(DPOAE)技术检测不同基因型NKCC1小鼠的听觉功能,研究NKCC1在耳蜗听觉功能中的作用。方法利用ABR和DPOAE实验检测不同基因型NKCC1小鼠的听觉功能。结果NKCC1+/+野生型小鼠听力正常,ABR检测... 目的应用听性脑干反应(ABR)和畸变产物耳声发射(DPOAE)技术检测不同基因型NKCC1小鼠的听觉功能,研究NKCC1在耳蜗听觉功能中的作用。方法利用ABR和DPOAE实验检测不同基因型NKCC1小鼠的听觉功能。结果NKCC1+/+野生型小鼠听力正常,ABR检测的短声(click)阈值为(23.13±3.78)dBSPL;NKCC1+/-杂合子小鼠听力低于NKCC1+/+野生型小鼠,其短声阈值为(38.49±12.29)dBSPL。NKCC1+/+和NKCC1+/-小鼠ABR的阈值均值在各个频率的差异有极显著性意义(均P<0.01);NKCC1-/-突变纯合子鼠的ABR的各个频率在100dB均无反应,呈现全聋。与NKCC1+/+小鼠比较,NKCC1-/-小鼠没有DPOAE的检出。结论耳蜗NKCC1在小鼠的听觉生理中有重要作用,NKCC1缺失或是功能受限均可影响耳蜗的听觉功能。 展开更多

关键词 nkcc1 耳蜗 听力 听性脑干反应 畸变产物耳声发射

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基于水协同转运蛋白KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na^+ -K^+ -ATP酶活性变化研究湿阻中焦证的水液代谢机制 被引量：10

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作者 杨旭 王琦越 +3 位作者 黄秀深 张凯文 陈芳 岳仁宋 《辽宁中医杂志》 CAS 2018年第3期627-630,I0005,共5页

目的：以前期研究的水通道蛋白为平台,通过观察并分析水协同转运蛋白KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~＋-K~＋-ATP酶活性变化,揭示湿阻中焦致水液代谢紊乱及平胃散对其修复作用机制的科学内涵,为中医临床治疗本证型疾病提供实验参考;... 目的：以前期研究的水通道蛋白为平台,通过观察并分析水协同转运蛋白KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~＋-K~＋-ATP酶活性变化,揭示湿阻中焦致水液代谢紊乱及平胃散对其修复作用机制的科学内涵,为中医临床治疗本证型疾病提供实验参考;同时搭建中药复方水通道调节剂的研究平台。方法：模拟＂外湿过盛,困阻脾胃、饮食不节,湿从内生、情志不遂,气机受阻、水湿不运三大致湿病因,建立湿阻中焦证模型。用蛋白定量法测定Na~＋-K~＋-ATP酶活性,用酶联免疫法（ELISA）测定肾脏组织KCC1,KCC3,KCC4,NKCC1的含量。结果：与空白组比较,模型组肾脏KCC1、KCC4含量升高,KCC3、NKCC1、Na~＋-K~＋-ATP酶活力降低,与模型组比较,自然恢复组肾脏KCC1、KCC3、NKCC1含量降低,Na~＋-K~＋-ATP酶活力明显升高（P〈0.01）,KCC4含量有上升趋势,经药物干预后,各给药组KCC1含量均明显降低（P〈0.01）,平胃散中剂量组KCC3、KCC4含量明显升高（P〈0.01）,平胃散低剂量组NKCC1含量明显降低（P〈0.01）;平胃散低剂量组肾脏Na~＋-K~＋-ATP酶活力明显升高（P〈0.01）;呋塞米组和平胃散加泽泻组KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~＋-K~＋-ATP酶活性均明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01）;与自然恢复组比较,平胃散中剂量组肾脏KCC1、KCC3、KCC4含量及Na~＋-K~＋-ATP酶活力有上升趋势,平胃散低剂量组NKCC1含量下降明显（P〈0.01）,呋塞米组和平胃散加泽泻组KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~＋-K~＋-ATP酶活性均明显降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：（1）湿阻中焦证模型不仅能够影响体内能量代谢,还能够影响KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量表达,这可能是湿阻中焦导致水代谢输布障碍的机制之一;（2）平胃散能够调整Na~＋-K~＋-ATP酶活性和KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量分布参与能量代谢和水液代谢调控,这可能是平胃散燥湿运脾、行气导滞、散中焦之湿阻治疗湿阻中焦证的分子机理之一;（3）水协同转运蛋白之间可能存在互补代偿机制。 展开更多

关键词 湿阻中焦 水协同转运蛋白 KCC1、KCC3、KCC4、nkcc1 平胃散 NA^+ -K^+ -ATP酶

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布美他尼可通过下调NKCC1和AQP4表达减轻缺血性脑水肿及神经损伤 被引量：5

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作者 王桥生 蔡鸣 +6 位作者 符晖 阮中繁 高祚芝 汤石林 苏华 罗琼 武衡 《中风与神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2015年第6期514-517,共4页

目的探索电中性共同转运体(Na+-K+-2Cl-共同转运体-1,NKCC1)抑制剂布美他尼对大鼠大脑局灶脑缺血再灌注损伤所致脑水肿及神经功能的影响及机制。方法将SD大鼠按随机数字法分成假手术组、脑缺血组和布美他尼组。观察干预不同时间点患侧... 目的探索电中性共同转运体(Na+-K+-2Cl-共同转运体-1,NKCC1)抑制剂布美他尼对大鼠大脑局灶脑缺血再灌注损伤所致脑水肿及神经功能的影响及机制。方法将SD大鼠按随机数字法分成假手术组、脑缺血组和布美他尼组。观察干预不同时间点患侧大脑半球脑含水量(brain water content,BWC)、梗死灶周围NKCC1和水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)的表达变化;并于再灌注24 h检测神经行为学评分及梗死灶周围细胞凋亡情况。结果在脑缺血2 h,再灌注6 h、12 h和24 h时,NKCC1和AQP4表达进行性增高,患侧大脑半球BWC进行性增高;予布美他尼干预后,两者表达均显著下降(P<0.05),患侧大脑半球BWC亦下降(P<0.05)。同脑缺血组再灌注24 h相比,布美他尼组神经行为学评分改善(P<0.05),梗死灶周围细胞凋亡显著减少(P<0.05)。结论布美他尼可通过下调NKCC1和AQP4表达,减轻缺血性脑水肿,并改善神经功能。 展开更多

关键词 缺血性脑水肿 布美他尼 nkcc1 AQP4 凋亡

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不同盐度下“吉丽”罗非鱼(尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂)NKCC1a mRNA的组织特异性表达 被引量：8

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作者 王兵 范武江 李思发 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期515-522,共8页

应用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR),以"吉丽"罗非鱼[尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,♀)×萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanotheron,♂)]为材料,研究NKCC1a基因表达的盐度组织特异性。研究结果表明:(1)NKCC1a基因mRNA表... 应用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR),以"吉丽"罗非鱼[尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,♀)×萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanotheron,♂)]为材料,研究NKCC1a基因表达的盐度组织特异性。研究结果表明:(1)NKCC1a基因mRNA表达量存在显著的组织特异性,在低于25盐度环境中,NKCC1a mRNA在鳃、肝、肾及肠中均有表达;当盐度从0提高到48时,表达量在鳃中与盐度变化呈高度正相关(R>0.9,P<0.01),在肠和肾中与盐度变化呈负相关(R≈0.7,P<0.05),但在肝中则不受盐度变化的影响。(2)当盐度提高到64,NKCC1a基因mRNA表达量在鳃和肠3 h后达最高值,5 h后下降,前后变化差异显著(P<0.05);表达量在肝中则是在5 h后达最高值,变化差异也显著(P<0.05);表达量在肾中持续下降,但差异不显著。以上结果揭示,在盐度高于25的环境中,"吉丽"罗非鱼主要由鳃组织的NKCC1a排出多余的离子以维持鱼体的水盐平衡,由此认为鳃组织在"吉丽"罗非鱼高渗透压调节中起最主要作用。 展开更多

关键词 罗非鱼 nkcc1a基因 mRNA表达 组织特异性 盐度

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安神补脑液对失眠大鼠模型海马组织内GABA_ARα1、GABA_ARγ2、NKCC1表达的影响 被引量：5

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作者 于智莘 吕宏亮 +3 位作者 李晶 宋琳琳 粟栗 于江波 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2020年第16期3508-3511,共4页

目的观察安神补脑液(ASBN)对失眠大鼠海马体γ-氨基丁酸受体(GABA)、钠-钾-氯协同转运蛋白表达的影响及其催眠作用机制。方法采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制大鼠失眠模型,将复制成功的失眠模型大鼠随机分为氟西汀(Fluoxetine)组,... 目的观察安神补脑液(ASBN)对失眠大鼠海马体γ-氨基丁酸受体(GABA)、钠-钾-氯协同转运蛋白表达的影响及其催眠作用机制。方法采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制大鼠失眠模型,将复制成功的失眠模型大鼠随机分为氟西汀(Fluoxetine)组,模型组,ASBN高、中、低剂量(ASBN-H、M、L)组,另取15只正常大鼠作为正常组。各给药组连续7 d给予相应药物口服灌胃,模型组和正常组连续灌胃7 d 0.9%生理盐水,观察各组大鼠的一般活动状态。采用qPCR检测海马体中GABA_ARγ2和Na+-K+-Cl-协同转运蛋白(NKCC1)的表达,采用免疫组化染色(IHC)-P检测大鼠海马体中GABA_ARα1的表达。结果ASBN可提高海马体中GABA_ARα1、GABA_ARγ2表达,降低NKCC1表达。结论ASBN可以通过调节失眠大鼠海马体中GABA_ARα1、GABA_ARγ2和NKCC1表达量来改善大鼠的睡眠状态。 展开更多

关键词 安神补脑液 失眠 GABA_ARα1 GABA_ARγ2 nkcc1

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萨罗罗非鱼NKCC1α基因cDNA克隆及mRNA组织表达差异 被引量：4

8

作者 范武江 李思发 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期601-609,共9页

在鱼类适应盐度变化的过程中,鱼鳃是进行渗透调节的主要器官,NKCC1α基因是保持鳃丝氯细胞渗透平衡的关键离子转运器,以1Na+:1K+:2Cl–的比例进行电中性转运。萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanothern)是耐盐强的广盐性鱼类之一。该文通过... 在鱼类适应盐度变化的过程中,鱼鳃是进行渗透调节的主要器官,NKCC1α基因是保持鳃丝氯细胞渗透平衡的关键离子转运器,以1Na+:1K+:2Cl–的比例进行电中性转运。萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanothern)是耐盐强的广盐性鱼类之一。该文通过快速扩增cDNA末端的方法,首次从萨罗罗非鱼鳃丝组织中分离出NKCC1α基因cDNA全长序列,其开放阅读框(ORF)包含1151个氨基酸残基。多重比对和聚类分析结果表明,该试验获得的基因序列与莫桑比克罗非鱼、鲑及鳗鲡的NKCC1α最为相似,其中萨罗罗非鱼与莫桑比克罗非鱼相似性最高(99%)。预测萨罗罗非鱼NKCC1α蛋白质二级结构包含10个跨膜螺旋,这些跨膜螺旋的氨基酸序列及其布局都非常保守;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测鳃、肝、肠、肾NKCC1α mRNA相对含量,这4种组织间差异显著;盐度显著影响NKCC1α在鳃组织中的表达,在136盐度下NKCC1α mRNA相对表达水平为0盐度下的4.9倍,差异极显著(P<0.001),显示NKCC1α基因与萨罗罗非鱼的耐盐性能密切相关。 展开更多

关键词 萨罗罗非鱼 nkcc1α 耐盐 渗透调节 QRT-PCR

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NKCC1和KCC2在致痫性局灶性脑皮质发育不良中表达差异性研究 被引量：1

9

作者 米吉提.沙克 徐波涛 +3 位作者 吕超 阿吉木.库尔班 库尔班江.努尔 沙力江.艾尔肯 《新疆医科大学学报》 CAS 2018年第2期216-220,224,共6页

目的探讨钠-钾-氯离子共同转运体1(bumetanide-sensitive sodium-potassium-1-chloride transporter,NKCC1)和钾-氯离子共同转运体2(K+-C1-cotransporter 2,KCC2)在致痫性局灶性脑皮质发育不良中表达差异性情况及其意义。方法依据新疆... 目的探讨钠-钾-氯离子共同转运体1(bumetanide-sensitive sodium-potassium-1-chloride transporter,NKCC1)和钾-氯离子共同转运体2(K+-C1-cotransporter 2,KCC2)在致痫性局灶性脑皮质发育不良中表达差异性情况及其意义。方法依据新疆喀什地区第一人民医院及南方医科大学南方医院病理科的术后病理诊断,参考局灶性脑皮质发育不良(focal cortical dysplasia,FCD)Palmini分型标准,将采集实验标本分为FCDⅠa、Ⅰb、Ⅱa和Ⅱb 4组。实验设置实验组和自身对照组,实验组标本取材于手术中皮层脑电监测提示的癫痫责任灶皮质,自身对照组标本取材于皮层脑电监测提示的非癫痫责任病灶皮质,用实时荧光定量核酸扩增(RT-QPCR)和蛋白质印迹(WB)分别在mRNA水平和蛋白水平分析NKCC1和KCC2在FCD不同亚型间的表达及其差异性。结果 49例病例共分为4组,包括FCDⅠa(10例),FCDⅠb(20例),FCDⅡa(9例),FCDⅡb(10例)4组。WB研究中共纳入47例,RT-QPCR研究中49例病例全部纳入。FCDⅠa亚型中NKCC1和NKCC1mRNA表达与自身对照组比较均未见明显变化,而KCC2表达下调,KCC2mRNA表达上调;FCDⅠb亚型中NKCC1和NKCC1mRNA表达与自身对照组比较均未见明显变化,而KCC2和KCC2mRNA表达均下调;FCDⅡa亚型中NKCC1和NKCC1mRNA表达均上调,而KCC2和KCC2mRNA表达均未见明显变化;FCDⅡb亚型中NKCC1和NKCC1mRNA表达均上调,而KCC2表达下调,KCC2mRNA表达上调。结论只有FCDⅡb亚型同时涉及了NKCC1和KCC2 2种蛋白的表达异常,而其他3种亚型中仅单一涉及NKCC1或KCC2的表达异常;在蛋白表达调节层面,转录层面的调节在NKCC1的表达异常中较为重要,而转录层面和转录后层面的调控在KCC2的表达异常中同时发挥了重要作用。 展开更多

关键词 钠-钾-氯离子共同转运体1(nkcc1) 钾-氯离子共同转运体2(KCC2) 癫痫 局灶性脑皮质发育不良

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NKCC1和KCC2在成年大鼠大脑皮质神经元的胞体和树突的不同表达(英文) 被引量：3

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作者 王德广 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期452-457,共6页

γ-氨基丁酸(GABA)是成年哺乳动物脑内主要的抑制性神经递质,但电生理的研究表明,GABA在成熟皮质神经元的树突部位可以产生兴奋性作用,但该现象的形态学基础,目前尚不清楚。GABA产生兴奋性作用的关键主要依赖于神经元胞内的氯离子浓度,... γ-氨基丁酸(GABA)是成年哺乳动物脑内主要的抑制性神经递质,但电生理的研究表明,GABA在成熟皮质神经元的树突部位可以产生兴奋性作用,但该现象的形态学基础,目前尚不清楚。GABA产生兴奋性作用的关键主要依赖于神经元胞内的氯离子浓度,其中Na+-K+-Cl-共转运体1(NKCC1)促进细胞内Cl-堆积,而K+-Cl-共转运体2(KCC2)则外排胞内的Cl-,降低胞内的Cl-浓度。本研究应用免疫荧光组织化学双重标记结合荧光强度分析,检测NKCC1和KCC2在成年大鼠脑皮质和培养的大鼠脑皮质神经元树突和胞体的表达和分布情况。结果显示:成年大鼠皮质神经元的胞浆和细胞膜均有NKCC1的表达,而KCC2主要表达在神经元胞体和树突膜上,其中NKCC1在神经元树突上的表达水平比胞体高,而KCC2的表达水平在树突和胞体膜上没有明显差异。皮质神经元经培养20d后,NKCC1和KCC2在树突和胞体的表达模式与在体的分布相类似。本研究结果提示,NKCC1在大鼠皮质神经元树突的表达较多,可能是GABA兴奋神经元树突的原因。 展开更多

关键词 nkcc1 KCC2 树突 胞体 大脑皮质 大鼠

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局部亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型NKCC1 mRNA水平的影响 被引量：1

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作者 孙伟 苏志强 +1 位作者 刘建丰 盛利 《中国医学物理学杂志》 CSCD 2008年第5期825-827,共3页

目的:观察局部亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型NKCC1 mRNA表达水平的影响,探索局部亚低温的脑保护机制。方法:雄性Wistar大鼠50只,随机分成常温组和亚低温组。应用"线栓法"实现大鼠右侧大脑中动脉阻塞,2 h后拔出线栓进... 目的:观察局部亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型NKCC1 mRNA表达水平的影响,探索局部亚低温的脑保护机制。方法:雄性Wistar大鼠50只,随机分成常温组和亚低温组。应用"线栓法"实现大鼠右侧大脑中动脉阻塞,2 h后拔出线栓进行再灌注,于再灌注3 h、12 h、24 h和72 h处死大鼠。应用RT-PCR方法观察NKCC1 mRNA水平的变化。结果:与假手术亚组相比,缺血-再灌注亚组大鼠缺血区皮质NKCC1 mRNA水平明显升高,开始于再灌注3 h,12 h～24 h达到高峰,72 h开始下降,亚低温组各再灌注时间点NKCC1 mRNA水平均低于常温组中相应亚组的水平。结论:局部亚低温通过抑制缺血-再灌注过程中NKCC1 mRNA水平的上调发挥脑保护作用。 展开更多

关键词 局部亚低温 脑缺血-再灌注 nkcc1

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NKCC1和Na-K-ATPase通道蛋白与老年性耳聋的关系及其在老年性耳聋不同阶段中的作用 被引量：4

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作者 陈秋坚 杨海弟 代天星 《中国听力语言康复科学杂志》 2014年第6期424-428,共5页

目的：通过对C57BL/6J小鼠耳蜗中NKCC1和Na-K-ATPase的年龄相关性表达的研究，分析其与老年性耳聋的关系并进一步探讨其在老年性耳聋发生发展不同阶段中的作用。方法通过听性脑干反应（ABR）分别检测C57BL/6J小鼠在4、24和48周年龄段的... 目的：通过对C57BL/6J小鼠耳蜗中NKCC1和Na-K-ATPase的年龄相关性表达的研究，分析其与老年性耳聋的关系并进一步探讨其在老年性耳聋发生发展不同阶段中的作用。方法通过听性脑干反应（ABR）分别检测C57BL/6J小鼠在4、24和48周年龄段的听力水平。采用实时免疫荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法分别检测NKCC1和Na-K-ATPase mRNA在各年龄段小鼠耳蜗中的表达水平。结果随着C57BL/6J鼠龄的增加，其ABR反应阈值逐渐升高（P〈0.05）。RT-PCR显示NKCC1和Na-K-ATPase mRNA在耳蜗的表达水平存在随鼠龄增加逐渐下降的趋势（P＜0.01）。结论 C57BL/6J小鼠的ABR反应阈值随鼠龄增加逐渐增高，具有老年性耳聋的特征；NKCC1和Na-K-ATPase两种通道蛋白随鼠龄的增加逐渐下降，与C57BL/6J小鼠的年龄相关性听力下降密切相关，可能与老年性耳聋后期发展及恶化有关。 展开更多

关键词 C57BL/6J小鼠 老年性耳聋 nkcc1 NA-K-ATPASE 听性脑干反应 实时免疫荧光定量逆转录聚合酶链反应

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GAD67-GFP基因敲入小鼠黑质网状部神经元GABA与氯离子转运体KCC2和NKCC1的共存

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作者 李俊杰 魏燕燕 +5 位作者 千年松 季茹 武胜昔 李云庆 王亚云 窦科峰 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期147-152,共6页

为了观察谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白(GAD67-GFP)基因敲入小鼠黑质网状部(SNr)内,表达GFP的GABA能神经元与一对功能相反的Cl-共转运体(K+-Cl-cotransporter2,KCC2;Na+-K+-Cl-cotransporter1,NKCC1)的共存情况,本研究分别运用原位分子... 为了观察谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白(GAD67-GFP)基因敲入小鼠黑质网状部(SNr)内,表达GFP的GABA能神经元与一对功能相反的Cl-共转运体(K+-Cl-cotransporter2,KCC2;Na+-K+-Cl-cotransporter1,NKCC1)的共存情况,本研究分别运用原位分子杂交与免疫组织化学相结合以及GFP与KCC2或NKCC1免疫荧光染色相结合的双重标记方法,在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下同时进行观察。结果显示:(1)SNr内95%以上的GFP阳性神经元同时表达KCC2 mRNA,而50%表达KCC2 mRNA的阳性神经元呈GFP阳性;(2)SNr内80%以上的GFP阳性神经元同时表达NKCC1 mRNA,约35%表达NKCC1 mRNA的阳性神经元呈GFP阳性;(3)SNr内90%以上的GFP阳性神经元同时表达KCC2,双标神经元约占KCC2阳性神经元的50.5%;(4)SNr内80.5%以上的GFP阳性神经元同时表达NKCC1,双标神经元约占NKCC1阳性神经元的42.5%。以上结果表明,SNr内表达GFP的GABA能神经元大部分与KCC2和NKCC1共存,提示氯离子共转运体可能对SNr内GABA能神经元起重要的调控作用。 展开更多

关键词 黑质网状部 GABA能神经元 KCC2 nkcc1 原位分子杂交 免疫荧光组织化学 GAD67-GFP基因敲入小鼠

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急性低盐胁迫下红鳍东方鲀幼鱼IgM、NKCC1和Hsp70基因的表达 被引量：9

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作者 孙梦蕾 吕绘倩 +4 位作者 暴宁 司滨 陈飞 王莉苹 蒋洁兰 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期65-72,共8页

为探讨红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)耐低盐的分子机制,以自然海水组为对照,利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术,分析红鳍东方鲀幼鱼在盐度16、12、8和4胁迫下,鳃和肾中免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、钠钾氯协同转运蛋白1(Na-K-C... 为探讨红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)耐低盐的分子机制,以自然海水组为对照,利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术,分析红鳍东方鲀幼鱼在盐度16、12、8和4胁迫下,鳃和肾中免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、钠钾氯协同转运蛋白1(Na-K-Cl cotransporter 1,NKCC1)和热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)3个基因的表达情况。结果表明,3个基因在鳃和肾中均有表达,IgM和Hsp70基因在鳃和肾中的表达量均无显著性差异(P>0.05),而NKCC1基因在鳃中的表达量显著高于肾(P<0.05)。同一盐度下,随着时间的增加,鳃中IgM基因的表达量大致呈现先降低后升高的趋势,肾中则呈现先降低后升高再趋于平稳的趋势;同一时间内,鳃中低盐度组与对照组的IgM基因表达量差异比肾中差异更为明显。在鳃中,相同时间内NKCC1基因在各低盐度组的表达量低于对照组,尤其在6h和72h两个时间点时显著低于对照组(P<0.05);肾中各时间点的表达量基本都高于0h表达量。在相同时间内,3h、6h、24h、72h的各低盐度组,在鳃中,Hsp70基因的表达量均与同一时间对照组之间差异明显(P<0.05);在肾中,从6h开始,各低盐组与对照组之间差异性显著(P<0.05)。以上结果表明,红鳍东方鲀幼鱼IgM、NKCC1、Hsp70 3个基因的表达量在不同盐度不同时间下存在差异,由此推测这3个基因对红鳍东方鲀幼鱼的渗透压调节起重要作用。 展开更多

关键词 红鳍东方鲀 实时荧光定量PCR IGM nkcc1 HSP70 急性低盐胁迫

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急性盐度胁迫下黄鳍棘鲷NKCC1a分子特征及其表达 被引量：2

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作者 李亚玲 朱克诚 +6 位作者 刘宝锁 郭华阳 郭梁 张楠 杨静文 江世贵 张殿昌 《广东海洋大学学报》 CAS 北大核心 2022年第2期20-28,共9页

【目的】研究NKCC1a基因在急性盐度胁迫下对黄鳍棘鲷(Acanthopagrus latus)的渗透压调控机理。【方法】用生物信息学软件分析NKCC1a的序列特征,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测其在黄鳍棘鲷各组织内的表达情况及其在盐度0、8、16、... 【目的】研究NKCC1a基因在急性盐度胁迫下对黄鳍棘鲷(Acanthopagrus latus)的渗透压调控机理。【方法】用生物信息学软件分析NKCC1a的序列特征,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测其在黄鳍棘鲷各组织内的表达情况及其在盐度0、8、16、24(对照)和32条件下的表达模式。【结果】NKCC1a开放阅读框(ORF)大小为3435 bp,共编码1144个氨基酸,存在一个经典的Na+-K+-Cl-协同转运蛋白SLC12A结构域,且在不同物种中有高保守性。NKCC1a在13个组织中均有表达,在脑中表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05);其次为鳃,在性腺和肝脏中表达量则显著低于其他组织(P<0.05)。盐度胁迫6 h时,在淡水组(盐度0)中NKCC1a表达量显著上升(P<0.05);在盐度为8和16处理组中,NKCC1a表达量先降低后逐渐升高,随后趋于平稳;在盐度32处理组,表达量呈先升高后降低最后又升高趋势,在24 h时最大。【结论】NKCC1a基因在黄鳍棘鲷盐度适应中发挥重要作用。 展开更多

关键词 黄鳍棘鲷 nkcc1a 基因表达 急性盐度胁迫

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NKCC1抑制剂布美他尼对大鼠脊髓原代少突胶质前体细胞增殖的影响 被引量：1

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作者 付佩彩 叶盛 +2 位作者 李志军 骆翔 喻志源 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期413-417,共5页

目的研究钠-钾-氯共转运体1(NKCC1)抑制剂布美他尼(Bumetanide)对脊髓原代少突胶质前体细胞(OPCs)增殖的影响及其机制。方法振摇及差速贴壁法培养大鼠脊髓原代OPCs,使用NKCC1抑制剂布美他尼干预。免疫荧光法鉴定细胞及其NKCC1表达;EdU... 目的研究钠-钾-氯共转运体1(NKCC1)抑制剂布美他尼(Bumetanide)对脊髓原代少突胶质前体细胞(OPCs)增殖的影响及其机制。方法振摇及差速贴壁法培养大鼠脊髓原代OPCs,使用NKCC1抑制剂布美他尼干预。免疫荧光法鉴定细胞及其NKCC1表达;EdU细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路蛋白p-p38,p-ERK,p-JNK表达。结果免疫荧光实验显示纯化培养的OPCs 95%以上表达NG2+A2B5,且能分化为少突胶质细胞;OPCs 100%表达NKCC1。EdU结果显示,与对照组相比,布美他尼干预6、12和24 h时,OPCs EdU阳性率增高[6 h:(9.00±0.39)%vs.(20.50±0.47)%,12 h:(10.33±0.33)%vs.(20.66±0.48)%,24 h:(11.30±0.34)%vs.(20.87±0.46)%,n=4,均P<0.01];流式细胞术结果显示,与对照组相比,布美他尼干预6、12和24 h时,S期细胞比例增多[6 h:(10.57±0.48)%vs.(19.75±0.32)%,12 h:(10.38±0.54)%vs.(20.12±0.58)%,24 h:(10.53±0.55)%vs.(20.35±0.43)%,n=4,均P<0.01]。Western blot检测显示,与对照组相比,布美他尼干预6、12和24 h时,p-p38表达上升,p-ERK表达下降(均P<0.01),p-JNK无明显差异。结论 NKCC1抑制剂布美他尼促进脊髓原代OPCs增殖,其机制可能是通过上调p38/MAPKs信号通路,下调ERK/MAPKs信号通路来实现。 展开更多

关键词 nkcc1 布美他尼 少突胶质前体细胞 细胞增殖 MAPKS

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四逆酸枣仁汤合方对失眠大鼠海马GABAARα1、γ2及NKCC1的影响 被引量：12

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作者 林炳岐 马捷 +8 位作者 刘燕 于雪 范盎然 张炜悦 戴宁 张蔚 刘梦 温佳雨 李峰 《中医药学报》 CAS 2018年第3期49-53,共5页

目的:观察四逆酸枣仁汤合方对失眠大鼠海马GABAARα1、γ2及NKCC1的影响。方法:采用SD大鼠腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制失眠模型,将复制成功的模型大鼠随机分为模型组、西药组、四逆散组、酸枣仁汤组、合方组,并设置空白对照组,各组... 目的:观察四逆酸枣仁汤合方对失眠大鼠海马GABAARα1、γ2及NKCC1的影响。方法:采用SD大鼠腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制失眠模型,将复制成功的模型大鼠随机分为模型组、西药组、四逆散组、酸枣仁汤组、合方组,并设置空白对照组,各组给予相应药物连续7 d,模型组和正常组生理盐水连续灌胃7 d,并观察各组大鼠的一般活动状态和体质量增量。采用实时荧光定量PCR检测海马中GABAARα1、γ2和NKCC1mRNA的表达;采用Western Blot的方法检测海马中GABAARα1、γ2和NKCC1蛋白的表达。结果:四逆酸枣仁汤合方可以提高海马中GABAARα1、γ2mRNA和蛋白的表达,降低海马中NKCC1mRNA和蛋白的表达。结论:四逆酸枣仁汤合方可以通过调节失眠大鼠海马中GABAARα1、γ2和NKCC1mRNA和蛋白的表达量来改善大鼠的睡眠节律。 展开更多

关键词 失眠 四逆酸枣仁汤合方 GABAARα1 GABAARγ2 nkcc1

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NKCC1基因敲除小鼠的饲养繁殖及其鉴定 被引量：1

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作者 吴振恭 褚汉启 +3 位作者 熊浩 韩芳 黄孝文 崔永华 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2006年第5期379-380,390,i0004,共4页

目的繁殖和鉴定NKCC1基因敲除小鼠,建立实验动物模型。方法将引进的NKCC1基因敲除小鼠饲养于相对无噪声的隔离环境中,依照遗传学规则进行繁殖及培育,提取小鼠尾部组织全基因组DNA进行聚合酶链式反应(PCR)检测各种系小鼠的基因型。结果... 目的繁殖和鉴定NKCC1基因敲除小鼠,建立实验动物模型。方法将引进的NKCC1基因敲除小鼠饲养于相对无噪声的隔离环境中,依照遗传学规则进行繁殖及培育,提取小鼠尾部组织全基因组DNA进行聚合酶链式反应(PCR)检测各种系小鼠的基因型。结果共繁殖出220只子代小鼠,经鉴定,NKCC1+/+小鼠占32%,NKCC+/-小鼠占50%,NKCC-/-小鼠占18%,其中,NKCC-/-小鼠生长较另外二型小鼠明显缓慢。结论采用Jack-on Laboratry提供的聚合酶链式反应法(PCR)可以成功地鉴别出不同基因表型的NKCC1基因敲除鼠,为研究NKCC1基因敲除小鼠相关课题提供了实验基础。 展开更多

关键词 Na-K-2C1联合转运子1 基因敲除 小鼠

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Elevated NKCC1 transporter expression facilitates early post-traumatic brain injury seizures 被引量：4

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作者 Buqing Liang Jason H.Huang 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2017年第3期401-402,共2页

As a leading cause for morbidity and mortality in young adults,traumatic brain injury（TBI）,along with the poorly understood TBI-related seizures inducing their predispositions,pose a major health and socioeconomic p... As a leading cause for morbidity and mortality in young adults,traumatic brain injury（TBI）,along with the poorly understood TBI-related seizures inducing their predispositions,pose a major health and socioeconomic problem in the world（Huang,2013）. 展开更多

关键词 TBI Elevated nkcc1 transporter expression facilitates early post-traumatic brain injury seizures Cl TGF

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氯离子转运体KCC2/NKCC1参与病理性疼痛的研究进展 被引量：3

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作者 马彦巧 余德芊 +2 位作者 韦邦聪 曾俊伟 刘晓红 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期638-642,共5页

阳离子氯离子联合转运蛋白（cation-Cl-cotransporter,CCC）是一组转运Na＋、K＋、Cl-进出细胞的膜蛋白。其中,钾氯联合转运蛋白2（K＋-Cl- cotransporter 2,KCC2）和钠钾氯联合转运蛋白1（Na＋-K＋-Cl- cotransporter 1,NKCC1）是调节... 阳离子氯离子联合转运蛋白（cation-Cl-cotransporter,CCC）是一组转运Na＋、K＋、Cl-进出细胞的膜蛋白。其中,钾氯联合转运蛋白2（K＋-Cl- cotransporter 2,KCC2）和钠钾氯联合转运蛋白1（Na＋-K＋-Cl- cotransporter 1,NKCC1）是调节神经系统氯离子稳态的主要CCC,NKCC1将Cl-转运入胞内,KCC2将Cl-转运至胞外. 展开更多

关键词 KCC2 nkcc1 GABA 病理性疼痛

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