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基于Taq-Man探针的多重qPCR检测DuCV·DEV·NGPV方法的建立与应用 被引量：1
1
作者 杨孟豪 李丽湲 +3 位作者 肖雅清 刘霞 刘永夏 孟凯 《安徽农业科学》 CAS 2024年第22期178-182,共5页
[目的]建立一种快速、特异的鸭圆环病毒(DuCV)、鸭肠炎病毒(DEV)、新型鹅细小病毒(NGPV)的多重荧光定量PCR方法。[方法]针对DuCV、DEV、NGPV的基因保守区域序列,设计合成3对特异性引物及3种荧光基团标记的Taq-Man探针。构建重组质粒标准... [目的]建立一种快速、特异的鸭圆环病毒(DuCV)、鸭肠炎病毒(DEV)、新型鹅细小病毒(NGPV)的多重荧光定量PCR方法。[方法]针对DuCV、DEV、NGPV的基因保守区域序列,设计合成3对特异性引物及3种荧光基团标记的Taq-Man探针。构建重组质粒标准品,优化反应条件。建立针对DuCV、DEV、NGPV的多重荧光定量PCR检测方法。[结果]该方法能同时鉴别检测DuCV、DEV、NGPV,并且与其他常见鸭病毒病不发生交叉反应。对DuCV、DEV、NGPV最低检出限均为2.5×10^(1)copies/μL。该方法重复性好,组间和组内试验变异系数低于1.0%。用该方法检测150份临床样本,结果显示,DuCV、DEV、NGPV的阳性率分别为32.0%(48份)、23.3%(35份)和18.7%(28份),DuCV和DEV混合感染率为4.6%(7份),DuCV和NGPV混合感染率为8.6%(13份),总阳性率为87.3%(131份),未检出DEV和NGPV混合感染的结果。与常规PCR检测方法比较,阳性符合率为100%。[结论]该研究建立的基于Taq-Man探针的多重荧光定量PCR方法能够同时、快速、定量检测DuCV、DEV、NGPV。较普通PCR更敏感,实用性更强,有效避免了多次检测耗时长、费用高的问题,为DuCV、DEV、NGPV的监测和防控提供了有效可靠的检测技术。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 鸭肠炎病毒 新型鹅细小病毒 Taq-Man探针 荧光定量PCR
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新型鹅细小病毒GDZQ297株对雏番鸭的致病性研究
2
作者 魏无缺 黄惠兰 +6 位作者 陆泳锟 刘梦凡 陈作鑫 赵梓桥 许芬芬 梅堃 黄淑坚 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期1-10,共10页
广东肇庆某养殖场22日龄樱桃谷鸭表现短嘴、腹泻和生长停滞,为进一步明确病因,将病鸭的肝脏和脾脏组织经无菌处理后,接种9日龄樱桃谷鸭胚连续传代培养,分离获得1株病毒,命名为GDZQ297,第5代次病毒滴度达10^(2) ELD_(50)/0.2mL。经PCR鉴... 广东肇庆某养殖场22日龄樱桃谷鸭表现短嘴、腹泻和生长停滞,为进一步明确病因,将病鸭的肝脏和脾脏组织经无菌处理后,接种9日龄樱桃谷鸭胚连续传代培养,分离获得1株病毒,命名为GDZQ297,第5代次病毒滴度达10^(2) ELD_(50)/0.2mL。经PCR鉴定和基因遗传演化分析,发现GDZQ297株与HN1P株(MK737642)同属一个分支,为新型鹅细小病毒(NGPV)。为探究新型鹅细小病毒对雏番鸭的易感性和致病力,本研究以GDZQ297分离株(2.7 lgELD_(50)/只)人工感染1日龄雏番鸭(MDPV、GPV抗体检测为阴性),攻毒后观察20天,重点关注雏鸭感染后发病情况、排毒动态以及多个组织脏器病毒载量变化。结果显示,20天攻毒期内感染GDZQ297株雏番鸭,临床症状主要表现为发育迟缓、腹泻、喙萎缩、舌外伸和腿骨变短,耐过鸭的体重约为正常鸭的74%,攻毒期间内未出现死亡(30/30)。病理解剖主要呈现出感染鸭的口腔、泄殖腔以及多个组织脏器可检测出的病毒载量均为10^(3)拷贝/μL以上,心脏和脾脏在感染后14 d达到10^(7)拷贝/μL以上。本研究为新型鹅细小病毒诊断和检测提供参考。 展开更多
关键词 新型鹅细小病毒 雏番鸭 致病性
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鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定及VP2蛋白的原核表达 被引量：2
3
作者 魏玲 熊荣园 +3 位作者 王思怡 梁洪 龙冬梅 杨国淋 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第12期59-63,68,125,共7页
为了获得鸭源新型鹅细小病毒(NGPV)流行毒株并表达VP2蛋白,试验采集患短喙侏儒综合征的死亡鸭肝脏组织病料样本,首先通过鸭胚传代培养分离病毒,然后对分离毒株进行血凝试验、PCR检测、鸭胚半数致死量(ELD_(50))测定及致病性试验,最后对... 为了获得鸭源新型鹅细小病毒(NGPV)流行毒株并表达VP2蛋白,试验采集患短喙侏儒综合征的死亡鸭肝脏组织病料样本,首先通过鸭胚传代培养分离病毒,然后对分离毒株进行血凝试验、PCR检测、鸭胚半数致死量(ELD_(50))测定及致病性试验,最后对VP2蛋白进行诱导表达、可溶性分析、纯化及Western-blot鉴定。结果表明:从临床病料样本中分离到1株病毒,将该毒株接种鸭胚,鸭胚的死亡时间均集中在接种后的第48~72小时之间,死亡鸭胚出现绒毛尿囊膜增厚、胚体有大量出血点、鸭喙短小等短喙侏儒综合征的典型病变特征,将分离毒株命名为SCNC01株。SCNC01株不能凝集1%鸡红细胞,在其基因组DNA中可扩增出NGPV NS1基因序列,该序列与GenBank中的NGPV NS1基因序列相似性在90.6%~98.3%之间,SCNC01株与MK000549、MN415966、JF333590、KC996729、KT598506、MW929338等NGPV毒株处于同一分支,确定该毒株为NGPV。SCNC01株的ELD_(50)为1×10^(-4.5)/0.2 mL,可引起雏鸭出现运动障碍、食欲下降、精神萎靡、喙萎缩、舌头外翻、排白色稀便等临床症状甚至死亡。经IPTG诱导NGPV VP2蛋白获得了表达,且表达形式为包涵体,经His-Tag蛋白纯化柱纯化后,出现与目的蛋白大小一致的单一条带,该蛋白能与NGPV阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。说明试验成功分离到1株鸭源NGPV,并获得了具有良好反应原性的VP2蛋白。 展开更多
关键词 鸭 新型鹅细小病毒(ngpv) 病毒分离 病毒鉴定 短喙侏儒综合征 VP2蛋白 原核表达
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新型鸭呼肠孤病毒、新型鹅细小病毒和鸭坦布苏病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：12
4
作者 李海琴 傅光华 +6 位作者 康昭风 韦启鹏 谭美芳 黄江南 季华员 黄瑜 杨群 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期1-6,共6页
【目的】建立能同时检测新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)、新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)的方法。【方法】根据NDRV、NGPV和DTMUV基因组的保守区域设计3对特异... 【目的】建立能同时检测新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)、新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)的方法。【方法】根据NDRV、NGPV和DTMUV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增NDRV、NGPV和DTMUV的片段大小分别为594、467、328 bp,建立可同时检测NDRV、NGPV和DTMUV的多重PCR检测方法,对其进行特异性、敏感性及重复性检验,并在临床上进行初步应用。【结果】特异性检测结果表明,该多重PCR方法可同时扩增NDRV、NGPV、DTMUV的目的片段,且未扩增出其他鸭常见病原;敏感性结果显示NDRV、NGPV和DTMUV的检测下限分别为8.80×10^(4)、4.03×10^(4)、2.15×10^(4)copies·μL^(−1);重复性试验表明该方法具有良好的重复性。采用建立的多重PCR方法对167份临床样品进行检测结果显示,其检测结果与该3种病毒的常规单一PCR检测结果符合率为100%。【结论】建立的多重PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,适用于临床样品中存在以上3种病原感染的检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒 新型鹅细小病毒 鸭坦布苏病毒 多重PCR
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