目的揭示NF2(neurofibromatosis type 2)蛋白518位丝氨酸的磷酸化如何对其结构与功能进行调节。方法解析野生型NF2WT(无模拟磷酸化突变)和突变型NF2S518D(模拟518位丝氨酸被磷酸化的突变体)蛋白的晶体结构,进一步利用体外Pull-down实验...目的揭示NF2(neurofibromatosis type 2)蛋白518位丝氨酸的磷酸化如何对其结构与功能进行调节。方法解析野生型NF2WT(无模拟磷酸化突变)和突变型NF2S518D(模拟518位丝氨酸被磷酸化的突变体)蛋白的晶体结构,进一步利用体外Pull-down实验及荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)实验检测了NF2的分子内相互作用。结果由于NF2的C-端在结晶过程中降解,未能观察到NF2WT和NF2S518D两种蛋白质构象的差异,结构分析发现NF2的N-端FERM(Four-point one,Ezrin,Radixin,Moesin)结构域与已有结构报道的FERM结构域具有相似的空间构象。体外Pull-down实验证明生化实验结果提示,相对NF2WTC-端蛋白质而言,NF2S518D的C-端蛋白质与NF2的N-端蛋白质结合更强。FRET实验在波长525 nm处,检测到全长NF2S518D比全长NF2WT产生更强的FRET信号。结论野生型NF2WT处于"开放"状态而模拟磷酸化的突变型NF2S518D处于"闭合"状态。展开更多
文摘目的揭示NF2(neurofibromatosis type 2)蛋白518位丝氨酸的磷酸化如何对其结构与功能进行调节。方法解析野生型NF2WT(无模拟磷酸化突变)和突变型NF2S518D(模拟518位丝氨酸被磷酸化的突变体)蛋白的晶体结构,进一步利用体外Pull-down实验及荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)实验检测了NF2的分子内相互作用。结果由于NF2的C-端在结晶过程中降解,未能观察到NF2WT和NF2S518D两种蛋白质构象的差异,结构分析发现NF2的N-端FERM(Four-point one,Ezrin,Radixin,Moesin)结构域与已有结构报道的FERM结构域具有相似的空间构象。体外Pull-down实验证明生化实验结果提示,相对NF2WTC-端蛋白质而言,NF2S518D的C-端蛋白质与NF2的N-端蛋白质结合更强。FRET实验在波长525 nm处,检测到全长NF2S518D比全长NF2WT产生更强的FRET信号。结论野生型NF2WT处于"开放"状态而模拟磷酸化的突变型NF2S518D处于"闭合"状态。
