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tiRNA-Met/HNRNPF/NECAB1信号轴在三阴性乳腺癌生长与转移中的作用及其机制研究
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作者 陆晶晶 王雪 +1 位作者 李晓红 周平 《中国癌症杂志》 北大核心 2026年第2期141-153,共13页
背景与目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌治疗中最棘手的一种特殊亚型,易转移,患者预后差。tRNA衍生片段(tRNA-derived fragment,tRF)作为一类新型非编码小RNA分子,参与多种病理生理学的过程。前期通过tRF... 背景与目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌治疗中最棘手的一种特殊亚型,易转移,患者预后差。tRNA衍生片段(tRNA-derived fragment,tRF)作为一类新型非编码小RNA分子,参与多种病理生理学的过程。前期通过tRF及tiRNA高通量测序技术从TNBC组织中筛选出抑癌tiRNA-Met。本研究旨在深入探讨tiRNA-Met在TNBC生长和转移中的作用及其机制。方法:利用RNA Pull-Down、液相色谱-质谱联用技术(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)和RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)筛选鉴定tiRNA-Met特异性结合蛋白。利用细胞免疫荧光实验检测tiRNA-Met与特异性结合蛋白HNRNPF的共定位情况,并通过实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测tiRNA-Met对HNRNPF mRNA表达及其蛋白水平的影响。利用转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)检测过表达tiRNA-Met对MDA-MB-231细胞的转录谱的影响,探究tiRNA-Met调控的信号转导通路和靶基因;采用qRT-PCR验证靶基因NECAB1的转录水平;敲低HNRNPF表达检测其对NECAB1表达的影响。利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和GEPIA数据库分析TNBC组织中HNRNPF和NECAB1的mRNA表达水平,利用UALCAN数据库分析HNRNPF蛋白水平;基于Kaplan-Meier Plotter数据库对NECAB1基因和HNRNPF进行生存分析。通过质粒转染法在MDA-MB-231和BT-549细胞中过表达NECAB1,分别采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验和Transwell实验评估细胞的增殖和侵袭能力。分别在转染tiRNA-Met抑制剂敲低tiRNA-Met表达的基础上过表达NECAB1或抑制HNRNPF,通过CCK-8实验和Transwell实验检测细胞的增殖和侵袭能力。结果:tiRNA-Met与HNRNPF特异性结合,并主要定位于细胞质中;过表达或敲低tiRNA-Met均不影响HNRNPF mRN表达及其蛋白水平。tiRNA-Met的过表达和HNRNPF的敲低均显著促进NECAB1的表达。TCGA、GEPIA和UALCAN数据库分析结果显示,与癌旁组织相比,TNBC组织中HNRNPF mRNA及其蛋白的表达显著升高,而NECAB1的表达显著降低(P<0.05)。Kaplan-Meier Plotter数据库分析结果显示,NECAB1 mRNA表达水平与患者的生存期呈正相关(P<0.05),而HNRNPF蛋白表达水平与患者的生存期呈负相关(P<0.05)。与对照细胞相比,过表达NECAB1的MDA-MB-231和BT-549细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),细胞侵袭能力显著降低(P<0.05);在敲低tiRNA-Met的基础上再过表达NECAB1或敲低HNRNPF,可逆转因敲低tiRNA-Met而引起的细胞增殖和侵袭增强。结论:tiRNA-Met通过靶向结合HNRNPF增强NECAB1表达,从而抑制TNBC恶性进程。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 tRNA衍生片段 tiRNA-Met HNRNPF necab1
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