动物病毒感染过程中转录组m^(6)A甲基化修饰变化及功能研究进展

1

作者 杨锡龙 邱祥琦 +5 位作者 田佳静 李梦杰 龚乐乐 王乐乐 孙爱军 庄国庆 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第1期163-169,174,共8页

动物病毒感染引起的疫病严重制约养殖业健康发展,深入研究病毒的复制和致病分子机制,将为筛选疫苗和药物靶点提供理论依据。N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m^(6)A)修饰广泛存在于病毒和宿主转录组,参与调控基因表达而影响病毒复制和... 动物病毒感染引起的疫病严重制约养殖业健康发展,深入研究病毒的复制和致病分子机制,将为筛选疫苗和药物靶点提供理论依据。N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m^(6)A)修饰广泛存在于病毒和宿主转录组,参与调控基因表达而影响病毒复制和致病性,是继DNA和蛋白质修饰外的一种新的基因表达调控方式。深度解析m^(6)A甲基化修饰在病毒感染过程中的调控分子机制是生命科学领域研究热点和前沿。近几年,已有相关病毒感染过程中病毒和宿主转录组发生m^(6)A甲基化修饰变化以及相关功能研究的报道。基于此,现综述了非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、马立克病病毒(MDV)、新城疫病毒(NDV)、禽白血病病毒(ALV)和鸭甲肝病毒(DHAV)感染细胞或宿主过程中引起转录组m^(6)A甲基化修饰的变化,以及对病毒复制和致病性的影响,探讨m^(6)A甲基化修饰在动物病毒复制和致病作用的机制,以期助力动物疫病防控。 展开更多

关键词 m^(6)A甲基化修饰 非洲猪瘟病毒(ASFV) 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 马立克氏病病毒(MDV) 新城疫病毒(NDV)

原文传递

新城疫病毒F_(48)E_9株M NP F和HN基因的真核表达 被引量：11

2

作者 闻晓波 闫丽辉 +3 位作者 曹殿军 刘培欣 刘春国 步志高 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期429-433,共5页

将新城疫病毒(NDV)F48E9株的M、NP、F和HN基因克隆到真核细胞表达载体 pCAGG上,经酶切、PCR鉴定和序列分析,分别筛选出了含有M、NP、F和HN基因的重组质粒, 命名为pCAGG-M、pCAGG-NP、pCAGG-F和pCAGG-HN。纯化后的重组质粒通过脂质体单... 将新城疫病毒(NDV)F48E9株的M、NP、F和HN基因克隆到真核细胞表达载体 pCAGG上,经酶切、PCR鉴定和序列分析,分别筛选出了含有M、NP、F和HN基因的重组质粒, 命名为pCAGG-M、pCAGG-NP、pCAGG-F和pCAGG-HN。纯化后的重组质粒通过脂质体单独转染HeLa细胞,经间接免疫荧光试验检测到了M、NP、F和HN蛋白的表达。pCAGG-M、 pCAGG-NP、pCAGG-F和pCAGG-HN重组质粒组合共转染HeLa细胞48 h后,可以观察到明显的细胞融合现象。试验结果表明,NDV F48E9株的M、NP、F和HN蛋白均在HeLa细胞内得到了成功表达,同时证明在该表达系统中F蛋白不足以诱导细胞融合。 展开更多

关键词 新城疫病毒 M基因 NP基因 F基因 HN基因 真核细胞表达 病毒样颗粒

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸭新城疫病毒M基因的原核表达与多抗制备 被引量：2

3

作者 王安平 朱善元 +3 位作者 吴双 王永娟 左伟勇 洪伟鸣 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2016年第1期124-126,共3页

为制备鸭源新城疫病毒M蛋白的多克隆抗体,根据鸭新城疫病毒M基因序列设计1对特异性引物,RT-PCR方法扩增出M基因,克隆入原核表达载体p ET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下成功表达重组蛋白,SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白分... 为制备鸭源新城疫病毒M蛋白的多克隆抗体,根据鸭新城疫病毒M基因序列设计1对特异性引物,RT-PCR方法扩增出M基因,克隆入原核表达载体p ET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下成功表达重组蛋白,SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白分子质量约为39 ku。将目的蛋白切胶免疫ICR小鼠,制备重组蛋白的多抗血清,Western blot分析显示,制备的多抗血清能与鸭新城疫病毒感染的SPF鸡胚尿囊液总蛋白发生特异反应。以上结果表明,M基因在大肠杆菌中获得了成功表达,且制备的鼠多抗血清可以用于M蛋白的检测。 展开更多

关键词 鸭新城疫病毒 M基因 原核表达 多抗

在线阅读 下载PDF 职称材料

新城疫病毒M蛋白通过自身核定位信号介导进入宿主细胞核 被引量：4

4

作者 段云兵 汪军卿 +3 位作者 仇旭升 谭磊 丁铲 张源淑 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期105-110,共6页

通过生物信息学方法预测了新城疫病毒(NDV)基质蛋白(M)的细胞核定位信号(NLS),用Overlap-PCR方法缺失NLS基因,分别构建M和M-ΔNLS EGFP重组质粒,转染单层鸡胚成纤维细胞(DF-1),激光共聚焦观察了M蛋白亚细胞定位。结果表明:M蛋白能进入... 通过生物信息学方法预测了新城疫病毒(NDV)基质蛋白(M)的细胞核定位信号(NLS),用Overlap-PCR方法缺失NLS基因,分别构建M和M-ΔNLS EGFP重组质粒,转染单层鸡胚成纤维细胞(DF-1),激光共聚焦观察了M蛋白亚细胞定位。结果表明:M蛋白能进入宿主细胞核中,缺失NLS基因序列之后M蛋白只分布于细胞质中。结论:新城疫病毒M蛋白可以通过其核定位信号进入宿主细胞核。 展开更多

关键词 新城疫病毒 M蛋白 亚细胞定位 核定位信号

在线阅读 下载PDF 职称材料

体外单核巨噬细胞诱生IFN-α的因素分析

5

作者 孙路虹 姚 +2 位作者 季晓辉 丁如宁 李焕娣 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期110-112,共3页

观察了Ｍ－ＣＳＦ预处理、ＩＦＮ－γ预处理、长程培养及新城疫病毒（ｎｅｗ－ｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ，ＮＤＶ）刺激４个因素对正常人外周血单核细胞体外产生ＩＦＮ－α水平的影响，采用生物活性法检测ＩＦＮ－α。结果... 观察了Ｍ－ＣＳＦ预处理、ＩＦＮ－γ预处理、长程培养及新城疫病毒（ｎｅｗ－ｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ，ＮＤＶ）刺激４个因素对正常人外周血单核细胞体外产生ＩＦＮ－α水平的影响，采用生物活性法检测ＩＦＮ－α。结果表明：单独使用Ｍ－ＣＳＦ不能诱生ＩＦＮ－α；单独使用ＩＦＮ－γ或单独使用ＮＤＶ均只诱生较低水平ＩＦＮ－α，只有Ｍ－ＣＳＦ＋ＩＦＮ－γ＋ＮＤＶ或ＩＦＮ－γ＋ＮＤＶ联合使用方可诱生较高水平的ＩＦＮ－α，并且发现Ｍο、－Ｍφ长程培养也是向高产发展的一个重要因素。结论：人血Ｍο、－Ｍφ在适当体外培养条件下。 展开更多

关键词 单核细胞 巨噬细胞 肿瘤坏死因子Α 体外诱生

暂未订购

新城疫病毒长春株NP、P、M蛋白基因的克隆与序列分析

6

作者 王承宇 金宁一 +5 位作者 丁壮 王兴龙 金扩世 米志强 李太原 宣华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期213-215,共3页

参考新城疫病毒 (NDV)相关毒株基因组核苷酸序列 ,设计了 3对特异性引物 ,应用 RT- PCR一次性扩增出NDV长春株 NP、P、M基因的氨基酸编码区 (ORF)。将 NP、P、M基因插入质粒 p Bluescript KS(- )后测序。序列分析表明 ,长春株 NP、P、M... 参考新城疫病毒 (NDV)相关毒株基因组核苷酸序列 ,设计了 3对特异性引物 ,应用 RT- PCR一次性扩增出NDV长春株 NP、P、M基因的氨基酸编码区 (ORF)。将 NP、P、M基因插入质粒 p Bluescript KS(- )后测序。序列分析表明 ,长春株 NP、P、M基因的 ORF长度分别为 1470、1188、10 95 bp,分别编码 490、396、36 5个氨基酸 ,与发表的13株 NDV毒株相关基因相比较 ,核苷酸序列同源性分别为 85 .7%～ 99.1%、82 .8%～ 96 .9%、84.3%～ 99.7% ,推导的氨基酸序列同源性分别为 92 .5 %～ 99.3%、84.3%～ 95 .9%、88.9%～ 99.1%。对 NP、P、M基因同源性比较和进化树分析结果表明 ,长春株与 L a Sota、B1等弱毒株之间具有很近的亲缘关系 。 展开更多

关键词 新城疫病毒 NP蛋白基础 P蛋白基因 M蛋白基因 克隆 序列分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

新城疫病毒出芽机制的研究进展

7

作者 葛鑫 《现代农业科学》 2008年第10期40-41,共2页

新城疫病毒(Newcastle disease virus,virus,NDV)是引起禽类急性、高度接触性传染病-新城疫(Newcastle disease,ND)的病原,给养禽业造成了严重经济损失,虽然有疫苗可用于该病的预防,但由于对病原的致病机理、免疫机理了解不充分,一直没... 新城疫病毒(Newcastle disease virus,virus,NDV)是引起禽类急性、高度接触性传染病-新城疫(Newcastle disease,ND)的病原,给养禽业造成了严重经济损失,虽然有疫苗可用于该病的预防,但由于对病原的致病机理、免疫机理了解不充分,一直没能从根本上控制该病。近些年来,VLPs(Virus-like Particles,VLPs)技术在病毒的组装和出芽机制的研究以及某些传染病的疫苗开发上应用广泛,以VLPs技术阐述了NDV出芽的机制。 展开更多

关键词 NDV M基因 VLPS 出芽

在线阅读 下载PDF 职称材料

新城疫中发型毒株疫苗的效力检验及大规模田间试验

8

作者 Sulo.,S. 骆志祥 《国外兽医学（畜禽传染病）》 1989年第2期25-25,共1页

关键词 ndv-m 毒株疫苗 效力检验 田间试验

在线阅读 下载PDF 职称材料

NDV感染促进hnRNPA1进入细胞质帮助病毒增殖 被引量：1

9

作者 姜维雨 丁铲 廖瑛 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第5期7-12,共6页

新城疫病毒(NDV)属于单股负链病毒目(Mononegavirales)副粘病毒科(Paramyxoviridae)禽副粘病毒属(Avulavirus)。核不均一核糖体蛋白A1(hnRNPA1)在细胞核结合并影响前体mRNA的剪切和成熟mRNA的转运。为研究hnRNPA1是否调控NDV感染,本研... 新城疫病毒(NDV)属于单股负链病毒目(Mononegavirales)副粘病毒科(Paramyxoviridae)禽副粘病毒属(Avulavirus)。核不均一核糖体蛋白A1(hnRNPA1)在细胞核结合并影响前体mRNA的剪切和成熟mRNA的转运。为研究hnRNPA1是否调控NDV感染,本研究通过间接免疫荧光实验检测了hnRNAP1在病毒感染过程中的亚细胞定位。结果显示,NDV感染促进hnRNPA1蛋白出核,并与病毒核衣壳蛋白NP共定位;免疫共沉淀实验证实,hnRNPA1分别与病毒核衣壳蛋白NP和病毒膜蛋白M相互作用;以siRNA干扰hnRNPA1的表达,NDV增殖受到抑制,过表达hnRNPA1则促进NDV增殖。上述结果表明,NDV感染促进部分hnRNPA1进入细胞质,与病毒NP蛋白相互作用并促进病毒增殖。该研究结果为hnRNPA1参与副粘病毒复制的研究奠定了理论基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 核不均一核糖体蛋白A1 核输出 M蛋白 NP蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

新城疫病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

10

作者 曾建宇 董振远 +2 位作者 贾文凤 张国中 薛佳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第9期3423-3431,共9页

为获得新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)M蛋白单克隆抗体,本研究将编码该蛋白的基因克隆、表达并纯化重组蛋白,作为免疫原免疫小鼠,同时建立ELISA筛选方法对小鼠血清效价进行测定,筛选出血清抗体效价最高的小鼠脾细胞与SP2/0细... 为获得新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)M蛋白单克隆抗体,本研究将编码该蛋白的基因克隆、表达并纯化重组蛋白,作为免疫原免疫小鼠,同时建立ELISA筛选方法对小鼠血清效价进行测定,筛选出血清抗体效价最高的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,最终获得能稳定产生NDV M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并进行了抗体的免疫荧光、Western blotting、亚类的鉴定、杂交瘤细胞染色体计数、小鼠腹水制备及腹水内单克隆抗体效价测定。结果显示,PCR、重组质粒测序及双酶切鉴定正确,M基因大小约为1095 bp。SDS-PAGE和Western blotting检测显示,试验成功表达了重组M蛋白,分子质量约为60 ku,且可与NDV阳性血清反应。建立的ELISA筛选方法中,重组M蛋白、His标签蛋白和抗体的最佳工作浓度分别为0.5μg/mL、0.5μg/mL和1∶256000。抗体的免疫荧光、Western blotting、亚类的鉴定显示,杂交瘤细胞产生的抗体可与NDV SG10株及重组M蛋白特异性结合,其轻链为κ,重链为IgG2A。C9-G2、D3-F2杂交瘤细胞染色体计数结果分别为97和101条;杂交瘤细胞上清的ELISA检测效价均为1∶6400,腹水的ELISA检测效价分别为1∶409600和1∶102400。本研究成功制备了NDV M蛋白的单克隆抗体,可为进一步研究M蛋白的功能提供工具。 展开更多

关键词 新城疫病毒(NDV) M蛋白 单克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

兰州地区NDV的分离鉴定及M蛋白的原核表达

11

作者 何智博 刘俊 胡永浩 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期314-318,共5页

为了分离出兰州地区鸡群新城疫病毒(NDV,Newcastle disease virus)并将M蛋白进行原核表达。通过鸡胚尿囊腔接种培养分离得到的兰州地区NDV,采用血凝及血凝抑制实验和Western bolt对病毒进行鉴定。利用分子克隆方法将NDV M蛋白进行原核表... 为了分离出兰州地区鸡群新城疫病毒(NDV,Newcastle disease virus)并将M蛋白进行原核表达。通过鸡胚尿囊腔接种培养分离得到的兰州地区NDV,采用血凝及血凝抑制实验和Western bolt对病毒进行鉴定。利用分子克隆方法将NDV M蛋白进行原核表达,用Western blot技术分析其反应原性。根据NCBI发表的NDV M基因构建进化树。结果表明,成功分离的NDV悬液经RT-PCR技术扩增出M基因片段,重组菌p ET-M经SDS-PAGE分析,在约42 k Da处有一明显的蛋白条带,Western blot技术证明其具有良好的反应原性。M基因进化树分析,分离毒株与La-Sota具有极高同源性。本研究成功分离出兰州地区NDV并将M蛋白进行原核表达,同时确定分离毒株与La-Sota毒株的同源性极高。为后续针对兰州地区新城疫流行病学调查和综合防控技术提供实验依据。 展开更多

关键词 NDV 血凝及血凝抑制 M蛋白 克隆 WESTERN BLOT

原文传递

人血单核细胞和U937细胞产生IFN-α的比较 被引量：2

12

作者 孙路虹 季晓辉 +2 位作者 姚堃 李焕娣 丁如宁 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1998年第5期287-288,294,共3页

一般认为人体单核-巨噬细胞(Mo-Mφ)系在体外诱生IFN-α较为困难,本文试图找到适合的培养条件,使Mo-M(?)系能在体外诱生IFN-α.结果显示:经M-CSF长期预处理和IFN-γ的短期预处理或单用IFN-γ短期预处理后,NDV刺激均能使人外周血Mo-M(?)... 一般认为人体单核-巨噬细胞(Mo-Mφ)系在体外诱生IFN-α较为困难,本文试图找到适合的培养条件,使Mo-M(?)系能在体外诱生IFN-α.结果显示:经M-CSF长期预处理和IFN-γ的短期预处理或单用IFN-γ短期预处理后,NDV刺激均能使人外周血Mo-M(?)产生较高水平的IFN-α;U937细胞只能产生低水平的IFN-α. 展开更多

关键词 单核细胞 U937细胞 干扰素Α

原文传递