新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及细胞适应性研究

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作者 孔冬妮 邓永 +7 位作者 陈孟姣 薛麒 王嘉 杨飞 毛娅卿 刘丹 黄小洁 周明旭 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期48-52,共5页

对广西某鸭场临床疑似由新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)感染的雏鸭进行RT-PCR鉴定、NDRV分离、毒株细胞培养特性、雏鸭致病性、S1基因序列测定和遗传进化分析等研究。结果显示,RT-PCR检测组织病料为NDRV阳性,组织样品处理... 对广西某鸭场临床疑似由新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)感染的雏鸭进行RT-PCR鉴定、NDRV分离、毒株细胞培养特性、雏鸭致病性、S1基因序列测定和遗传进化分析等研究。结果显示,RT-PCR检测组织病料为NDRV阳性,组织样品处理后接种SPF鸭胚,鸭胚出现发育迟缓、死亡,胚体全身及多脏器出血等症状;用鸭胚尿囊液接种雏鸭后出现脾脏坏死的特异性病变。S1基因的同源性与进化树分析结果显示,GX2022株与公布的部分NDRV毒株核苷酸序列相似性为93.7%~98.9%,而与鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)GX2010株、GX110058株、S1133株,与禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)815株、ZJM2000M株同源性很低,在21.8%~28.4%之间。进化树分析显示,该毒株与我国流行的NDRV处在同一个分支上,与MDRV和ARV的距离较远,说明分离到的毒株是新型鸭呼肠孤病毒。毒株接种LMH、CEF、Vero细胞后均产生空泡和细胞崩解等细胞病变。该新型鸭呼肠孤病毒临床感染的致病特征研究,有助于新型鸭呼肠病毒病的防控及疫苗的研发。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(ndrv) 分离鉴定 S1基因 遗传进化

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鸭IFN-α昆虫杆状病毒表达系统的建立及其抗新型鸭呼肠孤病毒活性研究

2

作者 孔雨心 柳美玲 +4 位作者 于鲁娜 鹿益豪 张兆鹏 傅绩 李宁 《中国动物检疫》 2025年第3期119-126,共8页

为利用昆虫杆状病毒表达系统表达鸭干扰素α(inteferon-α,IFN-α),并研究其对新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的抗病毒活性,针对鸭IFN-α序列构建重组质粒PFastBac-DuIFN-α,转化DH10Bac细胞后提取重组杆粒B acmid-DuIFN-... 为利用昆虫杆状病毒表达系统表达鸭干扰素α(inteferon-α,IFN-α),并研究其对新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的抗病毒活性,针对鸭IFN-α序列构建重组质粒PFastBac-DuIFN-α,转化DH10Bac细胞后提取重组杆粒B acmid-DuIFN-α,然后将其转染Sf9昆虫细胞并收集上清,盲传3代后收集病变细胞,经超声纯化获得重组鸭IFN-α蛋白。Western blot鉴定结果显示,鸭IFN-α在细胞质中表达,大小约为23 kDa。经测定,重组鸭IFN-α蛋白效价为2.14×10^(5)U/mL,以其处理鸭胚成纤维细胞(DEF)后,可极显著刺激蛋白激酶R(protein kinase R,PKR)、抗黏病毒蛋白(myxovirus resistant,Mx)和寡腺苷酸合成酶(oligadenylate syntase,OAS)编码基因的表达(P<0.01)。进一步将鸭IFN-α蛋白接种5日龄樱桃谷鸭(2.14×10^(3) U/mL,0.2mL/只),2 d后再进行NDRV攻毒试验(1000 TCID_(50)/0.1 mL,0.2 mL/只),同时设置阴性对照组和仅NDRV攻毒组。组织病理学检测显示,仅肌注NDRV的攻毒组雏鸭脾出现大量淋巴细胞崩解坏死,数量减少;而先肌注鸭IFN-α蛋白后攻毒NDRV的试验组雏鸭病变较轻,仅有少量淋巴细胞坏死。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测发现,试验组雏鸭的排毒量极显著低于攻毒组(P<0.01),且其肝和脾中NDRV载量也极显著低于攻毒组(P<0.01),同时试验组Mx和OAS表达量极显著升高(P<0.01)。结果表明,本研究通过昆虫杆状病毒系统成功表达出了重组鸭IFN-α蛋白,其具有较好的抗NDRV活性。本研究为进一步探索鸭IFN-α对NDRV感染等鸭病毒性疾病的防治机制提供了技术支持。 展开更多

关键词 干扰素Α 鸭 昆虫杆状病毒表达系统 新型鸭呼肠孤病毒 抗病毒活性

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一例鸭新型呼肠孤病毒感染的病原分离鉴定与致病性研究 被引量：1

3

作者 孔桂慧 赵艳 唐德宏 《山东畜牧兽医》 2024年第6期19-21,共3页

为了确诊山东济宁某养鸭场14日龄樱桃谷商品肉鸭死亡发病原因,本试验无菌采取病死鸭的肝脏、脾脏和脑等组织,采用病毒分离鉴定、细菌分离纯化并结合特异PCR鉴定等方法确诊病原。结果显示,从樱桃谷肉鸭脾脏组织中分离到1株鸭呼肠孤病毒(D... 为了确诊山东济宁某养鸭场14日龄樱桃谷商品肉鸭死亡发病原因,本试验无菌采取病死鸭的肝脏、脾脏和脑等组织,采用病毒分离鉴定、细菌分离纯化并结合特异PCR鉴定等方法确诊病原。结果显示,从樱桃谷肉鸭脾脏组织中分离到1株鸭呼肠孤病毒(DRV),命名为JNDRV19株;JNDRV19株Sigma C(σC)基因核苷酸序列与其他9株参考毒株存在96%~99%同源,属于鸭新型呼肠孤病毒(NDRV);JNDRV19株可导致雏鸭减重,80%雏鸭出现典型剖检病变。本研究证实该批樱桃谷商品肉鸭的大量死亡是由NDRV感染与某种细菌混合感染导致,对樱桃谷肉鸭科学防控NDRV,保障肉鸭养殖业的健康发展具有一定的指导意义。 展开更多

关键词 鸭新型呼肠孤病毒(ndrv) 分离鉴定 致病性

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福建省新型鸭呼肠孤病毒生物学特性及基因序列分析 被引量：1

4

作者 董慧 陈小丽 +2 位作者 朱小丽 王劭 林锋强 《中国动物检疫》 CAS 2024年第7期17-21,共5页

为了解福建省新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)生物学特性和遗传变异状况,从福建省番鸭主要饲养区采集了8份临床发病样品进行病原学检测、病原分离、攻毒试验及S1基因序列分析。结果显示:8份临床样品均为NDRV阳性,接种番鸭胚后均成功分离到病毒;... 为了解福建省新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)生物学特性和遗传变异状况,从福建省番鸭主要饲养区采集了8份临床发病样品进行病原学检测、病原分离、攻毒试验及S1基因序列分析。结果显示:8份临床样品均为NDRV阳性,接种番鸭胚后均成功分离到病毒;将NDRV尿囊液毒感染番鸭后3~10 d发病,发病率为20%~40%,死亡率为0~20%,剖检可见肝脏有出血斑及大量白色坏死灶,脾脏肿大坏死,与参考毒株NDRV-NP03相比,部分分离毒株毒力有所下降。S1基因序列分析发现:NDRV分离毒株与省内毒株亲缘关系较近,与省外毒株亲缘关系相对较远;在系统进化树上,8株NDRV分离毒株聚为同一分支,而福建省外毒株聚为另一分支,说明NDRV呈区域性流行特征;σC蛋白氨基酸序列与NP03株相比,存在12个差异位点,可能会导致NDRV感染能力发生改变。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 分离鉴定 生物学特性 基因序列 福建

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新型鸭呼肠孤病毒分离鉴定及其σC基因序列分析 被引量：8

5

作者 张薇 武华 +2 位作者 阴雅洁 李松励 侯绍华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第9期3520-3529,共10页

【目的】了解并掌握新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus, NDRV)流行特点及生物学特性,为NDRV的防治提供理论基础和技术支持。【方法】采集河北某鸭场疑似发生鸭呼肠孤病毒感染的组织,无菌处理后接种SPF鸡胚分离病毒,收获第3代尿囊液... 【目的】了解并掌握新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus, NDRV)流行特点及生物学特性,为NDRV的防治提供理论基础和技术支持。【方法】采集河北某鸭场疑似发生鸭呼肠孤病毒感染的组织,无菌处理后接种SPF鸡胚分离病毒,收获第3代尿囊液进行血凝试验,通过PCR、透射电镜观察、间接免疫荧光法(IFA)鉴定病毒,对分离得到的病毒进行体外细胞培养和动物回归试验,并采用Mega 7.0对其σC基因进行遗传进化分析。【结果】分离得到的病毒不能凝集鸡红细胞,可致死鸡胚,死亡鸡胚出血、充血严重;经PCR鉴定,病毒呈NDRV阳性,其他病原(禽呼肠孤病毒、鸭病毒性肝炎、鸭坦布苏病毒、鸭瘟病毒、禽腺病毒血清4型)均呈阴性,将分离得到的病毒命名为BD/CHN/2020株;病毒纯化后,经电镜观察可见直径为60~80 nm、无囊膜的球形病毒粒子,该毒株可在BHK和LMH细胞上稳定增殖并产生细胞融合的细胞病变效应(CPE);IFA结果显示,BD/CHN/2020株接种BHK细胞后在激光共聚焦显微镜下观察可见特异性绿色荧光;BD/CHN/2020株经皮下接种后,发病鸭出现精神沉郁、排白色稀粪等临床症状,剖检可见脾脏出血、肿大、有白色坏死灶等病理变化;序列比对发现,BD/CHN/2020株与NDRV毒株(TH11、091等毒株)在同一分支,与NDRV SY株核苷酸和氨基酸序列相似性最高,均为99.7%,属于NDRV。与灭活疫苗TH11株(KC493571.1)和弱毒疫苗JS01-105P株(V202168)相比,BD/CHN/2020株第93、120、132、158、253、298位氨基酸处发生了位点突变。【结论】成功分离得到1株NDRV BD/CHN/2020株,分离毒株对北京鸭有较强的致病性,与国内疫苗株相比,BD/CHN/2020株的σC蛋白已经发生了氨基酸位点的突变,结果可为新型鸭呼肠孤病毒病的流行病学及疫苗研发奠定基础。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(ndrv) 分离鉴定 σC基因

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新型鸭呼肠孤病毒在DF-1细胞系中的增殖特性 被引量：1

6

作者 云涛 华炯钢 +3 位作者 叶伟成 倪征 陈柳 张存 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期716-721,共6页

为了研究新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)在鸡胚成纤维细胞DF-1中的增殖特性,将NDRV JDM10毒株接种到DF-1细胞,连续传代后,通过观察病毒对细胞的致病变效应,测定半数组织感染量(TCID_(50))、RT-PCR检测、间接免疫荧光(I... 为了研究新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)在鸡胚成纤维细胞DF-1中的增殖特性,将NDRV JDM10毒株接种到DF-1细胞,连续传代后,通过观察病毒对细胞的致病变效应,测定半数组织感染量(TCID_(50))、RT-PCR检测、间接免疫荧光(IFA)及Western-blot免疫学检测,探索NDRV对DF-1细胞的作用效果。结果表明,NDRV JDM10毒株在DF-1细胞中能有效增殖,产生明显的致病变效应;RT-PCR检测成功扩增出1条大小为1 001 bp的条带;病毒蛋白在细胞中获得了良好的表达,并与抗NDRVσC单克隆抗体发生特异性反应;NDRV JDM10毒株在感染DF-1细胞后会经历潜伏期、快速增长期、稳定期3个时期,并在72 h病毒效价达到峰值,TCID_(50)为1×10^(-7.90)·(0.1mL)^(-1)。本研究为进一步研究NDRV的致病机理和研制细胞疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(ndrv) 鸡胚成纤维(DF-1)细胞 增殖特性

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新型鸭呼肠孤病毒QY株σB蛋白基因特征、二级结构预测及其细胞抗原表位分析 被引量：4

7

作者 吴阳开 范文胜 +4 位作者 张雪莲 李智丽 郭锦玥 李文锋 黄淑坚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期2851-2859,共9页

本研究旨在对新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)QY株σB蛋白的遗传变异规律和结构及功能进行分析。从GenBank数据库中获取QY株和25株参考株的σB蛋白编码序列,通过Mega 6.0软件进行序列比对分析和系统进化树构建;使用Datamonkey软件进行选择压力分... 本研究旨在对新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)QY株σB蛋白的遗传变异规律和结构及功能进行分析。从GenBank数据库中获取QY株和25株参考株的σB蛋白编码序列,通过Mega 6.0软件进行序列比对分析和系统进化树构建;使用Datamonkey软件进行选择压力分析;运用生物信息学软件预测QY株σB蛋白二级结构功能及B细胞和T细胞抗原表位。相似性分析结果显示,NDRV QY株与国内其他地区分离的鸭呼肠孤病毒(DRV)氨基酸相似性达到94.9%~98.9%,与禽呼肠孤病毒(ARV)及番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的相似性仅为66.5%~68.4%和67.6%~68.4%;选择压力分析显示,σB蛋白承受净化选择压力,但存在一个正向选择位点;σB蛋白属于亲水蛋白,不具有信号肽和跨膜区,含有潜在的O-糖基化位点;结构预测分析显示,σB蛋白具有α-螺旋、β-折叠、β-转角及无规则卷曲等丰富的二级结构;表位分析显示,σB蛋白含有潜在的B细胞和T细胞抗原表位。本研究成功进行了QY株σB蛋白的基因特征和结构功能预测及其细胞表位分析,为深入了解该蛋白的免疫学特性及研发NDRV新型疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(ndrv) σB蛋白 基因特征 二级结构 抗原表位

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新型鸭呼肠孤病毒病研究进展 被引量：19

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作者 谢碧林 林志敏 +2 位作者 林彬彬 翁汉东 王秀祯 《福建畜牧兽医》 2021年第1期23-26,30,共5页

本文针对近年来新型鸭呼肠孤病毒病的研究报道,对该病的病原学、流行病学、病原学诊断、血清学诊断、防治措施及致病机制等方面进行总结,较全面地阐述该病的研究进展,为该病的深入研究和预防治疗提供参考。

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus ndrv) 研究进展

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新型鸭呼肠孤病毒、新型鹅细小病毒和鸭坦布苏病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：12

9

作者 李海琴 傅光华 +6 位作者 康昭风 韦启鹏 谭美芳 黄江南 季华员 黄瑜 杨群 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期1-6,共6页

【目的】建立能同时检测新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)、新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)的方法。【方法】根据NDRV、NGPV和DTMUV基因组的保守区域设计3对特异... 【目的】建立能同时检测新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)、新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)的方法。【方法】根据NDRV、NGPV和DTMUV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增NDRV、NGPV和DTMUV的片段大小分别为594、467、328 bp,建立可同时检测NDRV、NGPV和DTMUV的多重PCR检测方法,对其进行特异性、敏感性及重复性检验,并在临床上进行初步应用。【结果】特异性检测结果表明,该多重PCR方法可同时扩增NDRV、NGPV、DTMUV的目的片段,且未扩增出其他鸭常见病原;敏感性结果显示NDRV、NGPV和DTMUV的检测下限分别为8.80×10^(4)、4.03×10^(4)、2.15×10^(4)copies·μL^(−1);重复性试验表明该方法具有良好的重复性。采用建立的多重PCR方法对167份临床样品进行检测结果显示,其检测结果与该3种病毒的常规单一PCR检测结果符合率为100%。【结论】建立的多重PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,适用于临床样品中存在以上3种病原感染的检测和流行病学调查。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 新型鹅细小病毒 鸭坦布苏病毒 多重PCR

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新型鸭呼肠孤病毒分离鉴定及σC基因进化分析 被引量：3

10

作者 申翰钦 黄建飞 +3 位作者 苏莲娇 王京兰 严专强 周庆丰 《家禽科学》 2020年第11期19-22,共4页

新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck orthoreovirus,NDRV)在番鸭和北京鸭上流行,引起番鸭的肝斑状出血和北京鸭的脾坏死。本研究从广东云浮某养殖场发生以肝脏出血为病变的番鸭中分离到一株NDRV,命名为GD-YF-202001。对GD-YF-202001株的σC基... 新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck orthoreovirus,NDRV)在番鸭和北京鸭上流行,引起番鸭的肝斑状出血和北京鸭的脾坏死。本研究从广东云浮某养殖场发生以肝脏出血为病变的番鸭中分离到一株NDRV,命名为GD-YF-202001。对GD-YF-202001株的σC基因进行RT-PCR扩增、克隆测序与序列分析。结果显示,分离株σC基因与NDRV SDJN18毒株同源性最高,遗传距离较近;分离株σC氨基酸序出现多个氨基酸位点突变,发生了较大的变异。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 ndrv 分离鉴定 σC基因 进化分析

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新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白基因密码子的优化及原核表达 被引量：10

11

作者 李文锋 梅敏敏 +5 位作者 黄兴国 黄雯晶 李晓文 Saeed El-Ashram 黄淑坚 李智丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第10期2700-2706,共7页

试验旨在优化新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)XX株σB蛋白的原核表达系统,并评价sσB蛋白的免疫原性。根据已测得的NDRV-XX的σB蛋白基因序列,在不改变氨基酸序列的前提下,按照大肠杆菌密码子偏好性对σB蛋白全基因进行... 试验旨在优化新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)XX株σB蛋白的原核表达系统,并评价sσB蛋白的免疫原性。根据已测得的NDRV-XX的σB蛋白基因序列,在不改变氨基酸序列的前提下,按照大肠杆菌密码子偏好性对σB蛋白全基因进行优化、合成并连接至pET-32a(+)质粒中,构建原核表达重组质粒pET-32a(+)-sσB,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达并优化表达条件。SDS-PAGE结果显示,最佳诱导表达时间、温度及IPTG浓度分别为3h、32℃和0.25mmol/L;可溶性分析结果表明,重组蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中。表达菌经超声破碎、变性、复性和Ni 2+柱亲和层析后,得到纯度高于90%的sσB可溶性蛋白,sσB重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株上的表达量较σB蛋白提升了14.6%,前者占细菌总蛋白量的32.3%。Western blotting结果显示,sσB重组蛋白具备NDRV抗原免疫反应原性。本试验成功构建并优化了NDRV-XX株σB蛋白的原核表达系统,提高了σB蛋白的表达量,并获得具有良好NDRV抗原免疫反应原性的σB重组蛋白,为后续NDRVσB蛋白功能及其应用的深入研究、基因工程疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(ndrv) σB蛋白 密码子优化 原核表达 纯化

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广西新型鸭呼肠孤病毒流行毒株GX01-2020全基因组分子特征分析 被引量：3

12

作者 谢守玉 刘惠心 +9 位作者 周媛 熊陈勇 施开创 屈素洁 苏文广 温新瑞 李媛 李春英 邓桂潮 尹彦文 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期643-650,661,共9页

为了解广西新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)流行毒株的分子遗传特征,采用RT-PCR分段进行全基因组序列扩增,经克隆、测序、拼接后,获得1株NDRV全基因组序列(命名为GX01-2020株)。结果显示,GX01-2020株基因组全长23353 bp,分... 为了解广西新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)流行毒株的分子遗传特征,采用RT-PCR分段进行全基因组序列扩增,经克隆、测序、拼接后,获得1株NDRV全基因组序列(命名为GX01-2020株)。结果显示,GX01-2020株基因组全长23353 bp,分为10个片段,大小从1194 bp(S4)至3958 bp(L1)不等。同源性分析显示,GX01-2020株10个片段核苷酸同源性与NDRV代表毒株最高,为86.2%~99.4%,其中μB片段核苷酸同源性最低的毒株为番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV),其他片段则为鸡源禽呼肠孤病毒(chicken-origin reovirus,CRV),说明不同片段来源祖先不完全相同。遗传进化分析显示,10个片段遗传进化树中,L2、L3片段中MDRV参考毒株及σA片段中NDRV参考毒株均形成两个进化分支,与其他片段不同,说明不同片段与参考毒株的遗传关系不尽相同。重组分析显示,GX01-2020株的L1片段存在重组信号,重组亲本毒株分别为北京MDRV_J18株和福建DRV_NP03株。本研究丰富了NDRV基因库相关信息,同时为广西地区NDRV的分子流行病学研究和有效防制措施制订提供了一定的参考。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(ndrv) 全基因组测序 遗传进化

原文传递

新型鸭呼肠孤病毒DH13株结构蛋白σB的原核表达及免疫原性分析 被引量：2

13

作者 杨惠湖 黄惠兰 +6 位作者 袁生 李文俊 姚鑫炎 张玉倩 梁昭平 黄淑坚 张雪莲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期4204-4212,共9页

本研究旨在利用原核表达系统表达新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)DH13株重组σB蛋白,并检测其免疫原性,为NDRV基因工程疫苗研制等提供物质材料。采用RT-PCR方法扩增获得NDRVσB基因,构建原核表达重组质粒pET-30a-σB和pET-32a-σB,将2个重组质... 本研究旨在利用原核表达系统表达新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)DH13株重组σB蛋白,并检测其免疫原性,为NDRV基因工程疫苗研制等提供物质材料。采用RT-PCR方法扩增获得NDRVσB基因,构建原核表达重组质粒pET-30a-σB和pET-32a-σB,将2个重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导获得相应的重组蛋白,通过SDS-PAGE分析重组蛋白的表达形式。纯化无His的σB蛋白,并以此蛋白作为免疫原免疫新西兰白兔,制备兔源多克隆抗体。利用Ni2+柱亲和层析法纯化含His的σB蛋白,以此蛋白作为检测原,通过间接ELISA方法测定兔源多克隆抗体效价;Western blotting鉴定多克隆抗体与重组蛋白的特异性识别能力。结果显示,PCR扩增获得大小约为1100 bp的σB基因片段。SDS-PAGE结果显示,高效表达出了2种重组σB蛋白,大小分别约为41和46 ku,均以包涵体形式存在。间接ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价达1∶204800,能特异性地识别原核表达的重组蛋白,表明重组无His的σB蛋白具有良好的免疫原性。Western blotting特异性鉴定结果显示,含His的σB蛋白和无His的σB蛋白均与制备的兔源多克隆抗体发生特异性反应,表明原核表达得到的重组σB蛋白具备良好的反应原性。本试验利用原核表达系统成功地表达出了重组σB蛋白,并证实了重组NDRVσB蛋白具有良好的免疫原性及反应原性,该结果将有助于后续对NDRVσB蛋白生物学功能的鉴定、NDRV诊断用抗原的制备及NDRV新型疫苗的研制。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(ndrv) σB蛋白 原核表达 免疫原性分析

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新型鸭呼肠孤病毒SY株的分离鉴定及培养特性 被引量：8

14

作者 晁锦 卢凤英 +6 位作者 潘群兴 孙华伟 张敬峰 董永毅 徐正军 祁克宗 张小飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第3期48-54,共7页

本研究以肝脏出血和脾脏坏死为特征的病死鸭肝脏和脾脏组织接种SPF鸡胚进行病毒分离,并利用PCR方法进行病原鉴定,对分离病毒进行了回归雏鸭试验和S1基因测序分析。结果显示:该分离病毒为新型鸭呼肠孤病毒,并命名为NDRV SY株;将该分离病... 本研究以肝脏出血和脾脏坏死为特征的病死鸭肝脏和脾脏组织接种SPF鸡胚进行病毒分离,并利用PCR方法进行病原鉴定,对分离病毒进行了回归雏鸭试验和S1基因测序分析。结果显示:该分离病毒为新型鸭呼肠孤病毒,并命名为NDRV SY株;将该分离病毒接种SPF鸡胚、BHK-21和Vero细胞进行传代培养,结果表明其能稳定适应鸡胚增殖和致鸡胚死亡,在BHK-21和Vero细胞两种传代细胞上也能良好增殖,并产生明显细胞病变。本研究为NDRV的疫苗和致病机制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 分离 鉴定 培养特性

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新型鸭呼肠孤病毒弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律 被引量：1

15

作者 胥焯然 程晓霞 +7 位作者 郑敏 朱小丽 董慧 肖世峰 刘鸿威 曾显成 陈少莺 陈仕龙 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1011-1016,共6页

【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)弱毒S株C30在雏番鸭血液中的病毒血症,口咽、泄殖腔的排毒规律及靶器官的带毒时间,了解弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律和致弱机理。【方法】设计特异性引物,建立检测NDRV核酸的R... 【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)弱毒S株C30在雏番鸭血液中的病毒血症,口咽、泄殖腔的排毒规律及靶器官的带毒时间,了解弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律和致弱机理。【方法】设计特异性引物,建立检测NDRV核酸的RT-qPCR方法;新型鸭呼肠孤病毒弱毒S株第30代(NDRV-S-C30)腿部肌肉注射2日龄雏番鸭,在免疫后1、2、3、4、6、8、10、12、14 d(Days post vaccination,dpv)采集其血液、肝脏、脾脏、泄殖腔分泌液和口咽液,用RT-qPCR方法检测NDRV在血液、口咽、泄殖腔及靶器官的增殖能力及带毒时间。【结果】建立了检测NDRV核酸的特异性RT-qPCR方法,使用该方法检测NDRV弱毒攻毒雏鸭的口咽和泄殖腔排毒时间分别为2~8 d和2~10 d,排毒高峰期为4~6 d;病毒血症时间为1~4 d,其中1~2 d为病毒血症高峰期;弱毒在肝脏的带毒时间为3~6 d,在脾脏的带毒时间为1~8 d。【结论】NDRV-S-C30弱毒株免疫雏番鸭后可通过口腔和泄殖腔向外界排毒,仅能引起较弱的病毒血症反应,且在肝脏中的增殖能力弱,丧失了对易感靶器官造成病理损伤的能力。明确了NDRV弱毒S株的排毒规律及病毒血症时间,为建立弱毒免疫效力评价方法奠定了基础。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 弱毒株 RT-qPCR 排毒规律 病毒血症

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